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Title
口腔扁平上皮癌におけるCRISP3 遺伝子のコピー数異常
Author(s)
菅原, 圭亮; 柯, 文昌
Journal
歯科学報, 112(6): 714-717
URL
http://hdl.handle.net/10130/2984
Right
はじめに
口腔扁平上皮癌は全世界で一年間に約３０万人が罹
患する悪性腫瘍である
１）。肉眼で観察可能であるに
も関わらず未だ進行した病態で発見されることが少
なくない。一旦進行すると咀嚼機能，構音機能を失
うこととなり，審美的，肉体的，精神的障害を生じ
る。口腔扁平上皮癌のリスクファクターとして不良
補綴物や飲酒，喫煙，HPV 感染などが知られてい
る
２−４）。近年，CT，MRI，PET などの画像により診
断は向上し，また，外科療法を中心とした治療法は
確立されてきているが，死亡率の改善には至ってい
ない
５）。そこで，現行の画像診断に加えてより診
断・治療成績の向上のために分子生物学的アプロー
チが必要と考えられる。
悪性腫瘍と癌抑制遺伝子についての研究は活発に
なされている研究テーマの１つであり，様々な悪性
腫瘍において癌抑制遺伝子は多数報告されている。
口腔扁平上皮癌においても
FHIT などの癌抑制遺伝
子の報告がある
６）。今回我々は，マイクロアレイ法
とリアルタイム定量 PCR（QPCR）法を用い，口腔扁
平上皮癌患者の新規癌抑制遺伝子を全ゲノム網羅的
に探索し同定するための実験を行った。その結果，
いくつかの候補遺伝子を同定した。今回は新規癌抑
制遺伝子候補の１つである
CRISP3 に関して，特異
的 PCR プライマーを作成し QPCR 法を用いてヒト
正常口腔粘膜上皮由来細胞株をコントロールとして
５つの口腔扁平上皮癌由来細胞株（SAS，Ca9-22，
KON，HSC2，HSC4）の DNA コピー数，および東
京歯科大学口腔外科，台湾奇美病院口腔外科を受診
した口腔扁平上皮癌患者６０症例で DNA コピー数変
動解析を行い，
CRISP3 が新規癌抑制遺伝子となり
うるか否か検討した。なお，本研究は東京歯科大学
倫理委員会（承認番号：２０５）および奇美病院の倫理
委員会の承認を得て行った。
方法と結果および考察
全ゲノム網羅的解析のために口腔扁平上皮癌患者
解説（学位論文 解説）
口腔扁平上皮癌における
CRISP3 遺伝子のコピー数異常
Copy number changes of
CRISP3 in oral squamous
cell carcinoma
菅原 圭亮
東京歯科大学口腔健康臨床科学講座口腔外科学分野 助教 略歴 ２００４年東京歯科大学卒業，２００８年東京歯科大学大学院歯学研究科（口腔外科学 専攻）修了（博士（歯学）），同年東京歯科大学口腔外科レジデント，２００９年東京歯科大 学口腔外科助教，２０１２年より現職。研究テーマ：口腔扁平上皮癌における頸部リンパ 節転移予測分子マーカーの同定 趣味：サッカー，ロードバイク 台北市齒科醫師會理事 略歴 1991 年台北醫學大學齒學部卒業，２０１１年東京歯科大学大学院歯学研究科（口腔 外科学専攻）修了（博士（歯学）） 研究テーマ：口腔扁平上皮癌における新規癌抑制遺 伝子の同定Keisuke Sugahara
柯 文昌
Ko Wen-chang
キーワード：口腔扁平上皮癌，
CRISP3，新規癌抑制遺伝子，DNA コピー数
Key words：oral squamous cell carcinoma,
CRISP3, novel tumor suppresser gene, DNA copy number
（２０１２年５月２８日受付，２０１２年７月３日受理，歯科学報
１１２：７１４∼７１７，２０１２．）
７１４
３症例の腫瘍組織 cDNA を用い，マイクロアレイ
法を行った。今回は Roche 社製 Homo sapiens 4 x
72 k gene expression array を使用した。マイクロ
アレイ法において全３症例で発現低下を示したのは
CRISP3，SCGB3A1，AGR2，PIP，C20orf114，
TFF1，STATH，AZGP1，MUC7，DMBT1，LOC
389429 の１１遺伝子であった。また，過剰発現を示
したのは
MMP1，MMP3 の２遺伝子であった（表
１）。今回，発現低下を示した１１遺伝子の中で口腔
扁平上皮癌との関連の報告がない
CRISP3 に着目
し詳細な解析を行った。Primer 3
software（White-head Institute for Biomedical Research）を用いて
CRISP3 に特異的な PCR プライマーを作製した。
また内部標準として
GAPDH にも特異的 PCR プラ
イマーを作製し，SYBR-Green を用いた定量 PCR
を行った。
CRISP3 のQPCR 法による解析で２つの正常角化
口腔粘膜由来細胞では各相同染色体に１コピーずつ
に相当する DNA コピー数を認めたのに対し，５つ
の口腔扁平上皮癌由来細胞株の中で２つの細胞株
（SAS，HSC2）で DNA コ ピ ー 数 欠 失 を 認 め た（図
１）。また口腔扁平上皮癌患者腫瘍組織においては
６０例 中２４例（４０％）で DNA コ ピ ー 数 の 欠 失 を 認 め
た。臨床指標においては，性差および原発腫瘍の大
きさが T1，T2 で統計学的有意な
CRISP3 の欠失
を認めた（ｐ＜０．
０５）
（表２）。以上より
CRISP3 の欠
失は口腔扁平上皮癌の初期段階の発現に関与してい
ることが考えられた。
CRISP3 は cysteine-rich
se-cretory protein family に属 し 6p12.3 に 存 在 し，唾
液腺，膵臓，前立腺で発現が認められ，前立腺癌に
おいて過剰発現がバイオマーカーになりうるとの報
告がある。一方で我々の研究と同様に，頭頸部扁平
上皮癌のマイクロアレイ解析では発現低下が報告さ
れている。しかしながら口腔扁平上皮癌において
CRISP3 を詳細に解析した報告はない。また，C20
orf114，STATH，LOC389429，SCGB3A1 は肺，前立
腺，唾液腺において癌抑制遺伝子であることが報告
されている。
AGR2 は発現低下が胃癌で報告されて
いる
７）。我々の実験結果では，過剰発現を示したの
表１ 発現異常を示した遺伝子リスト Gene symbol 遺伝子名 遺伝子座 過剰発現遺伝子 MMP1 matrix metallopeptidase 1 11q22 MMP3 matrix metallopeptidase 3 11q22 発現低下遺伝子 STATH statherin 4q11-q13 MUC7 mucin 7 4q13-q21SCGB3A1 secretoglobin, family 3A, member 1 5q35-qter
CRISP3 cysteine-rich secretory protein 3 6p12.3
LOC389429 hypothetical LOC389429 6q21
AGR2 anterior gradient homolog 2 7p21.3
AZGP1 alpha-2-glycoprotein 1, zinc-binding 7q22.1
PIP prolactin-induced protein 7q34
DMBT1 deleted in malignant brain tumors 1 10q26.13
C20orf114 Chr. 20 open reading frame 114 20q11.21
TFF1 trefoil factor 1 21q22.3
図１
歯科学報 Vol．１１２，No．６（２０１２） ７１５
は
MMP1 と MMP3 の２遺 伝 子 で あ っ た。MMP
は１１番染色体長腕に座位し，
MMP1 は癌細胞の分
化，アポトーシス，浸潤，転移への関与が報告され
ている
８−１１）。今回の結果から，
CRISP3 は口腔扁平
上皮癌において新規癌抑制遺伝子である可能性があ
り，その他の候補遺伝子も含め，今後更に検討を加
えて行きたい。
まとめ
癌の予防と制御には分子生物学的マーカーやター
ゲットの同定が必要である
１２，１３）。本研究では，マイ
クロアレイを用い全ゲノム網羅的 に 解 析 を 行 い
CRISP3，SCGB3A1，AGR2，PIP，C20orf114，
TFF1，STATH，AZGP1，MUC7，DMBT1，LOC
389429 の１１遺 伝 子 の 発 現 低 下，お よ び MMP1，
MMP3 の発現亢進を同定した。そこで口腔扁平上
皮癌との関連が知られていない
CRIPS3 を選択し
詳細な解析を行った。
今回の結果から，
CRISP3 のコピー数欠失は口腔
扁平上皮癌の癌化に関与し，新規癌抑制遺伝子であ
る可能性が示唆された。今後は，検体数を増やし
CRISP3 の機能解析を行い，本結果の検証をし臨床
応用を考えている。
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本論文は，下記学位論文の内容を解説した。
Copy number changes ofCRISP3 in oral squamous cell
carcinoma. Ko Wen-chang, Keisuke Sugahara, Takumi Sakuma, Ching-Yu Yen, Shyun-Yeu Liu, Gwo-An Liaw, Takahiko Shibahara., ONCOLOGY LETTERS, ３；７５∼ ８１：２０１２． 別刷請求先：〒１０１‐００６１ 東京都千代田区三崎町２−９−１８ 東京歯科大学口腔健康臨床科学講座口腔外科学分野 菅原圭亮 歯科学報 Vol．１１２，No．６（２０１２） ７１７ ― ３３ ―
