国営 武蔵丘陵森林公園における植物病害相

国営 武蔵丘陵森林公園における植物病害相

著者 笹井 裕里

著者別名 SASAI Yuri

ページ 1‑132

発行年 2015‑03‑24

学位授与年月日 2015‑03‑24

学位名 修士(生命科学)

学位授与機関 法政大学 (Hosei University)

URL http://hdl.handle.net/10114/11742

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2 0 1 4 年 度 法 政 大 学 修 士 論 文

国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お け る 植 物 病 害 相

理 工 学 研 究 科 生 命 機 能 学 専 攻 植 物 医 科 学 領 域 学 籍 番 号 1 3 R 7 2 0 1

笹 井 裕 里

指 導 教 員 石 川 成 寿 教 授

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目 次

第 1 章 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お け る 植 物 病 害 相

1．1 緒 言

1．2 材 料 と 方 法

1．3 結 果

1．3 . 1 調 査 園 全 体 に お け る 病 害 発 生 状 況

1．3 . 2 病 害 ご と の 病 原 菌 の 特 定 お よ び 発 生 状 況

（1） C e rc o s p o r a 関 連 属 群

・ ピ ラ カ ン サ 褐 斑 病

・ ハ コ ネ ウ ツ ギ 灰 斑 病

（2） う ど ん こ 病 菌 群

・ ヤ グ ル マ ハ ッ カ 類 う ど ん こ 病

・ ハ グ マ ノ キ う ど ん こ 病

（3） さ び 病 菌 群

・ ハ マ ナ ス さ び 病

（4） そ の 他 の 病 害

・ モ チ ノ キ 黒 紋 病

・ イ チ ョ ウ す す 斑 病

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第 2 章 白 絹 病 新 病 害 に つ い て

2．1 緒 言

2．2 材 料 と 方 法

2．2 . 1 発 生 症 状 お よ び 病 徴

2．2 . 2 病 原 菌 の 分 離

2．2 . 3 病 原 性 の 確 認

2．2 . 4 形 態 的 特 徴

2．2 . 5 温 度 別 菌 叢 生 育 試 験

2．2 . 6 遺 伝 子 解 析

2．3 結 果

2．3 . 1 発 生 症 状 お よ び 病 徴

2．3 . 2 病 原 菌 の 分 離

2．3 . 3 病 原 性 の 確 認

2．3 . 4 形 態 的 特 徴

2．3 . 5 温 度 別 菌 叢 生 育 試 験

2．3 . 6 遺 伝 子 解 析

2．4 考 察

2．4 . 1 同 定 の 根 拠

2．4 . 2 植 物 病 名 目 録 の 所 属 に つ い て

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引 用 文 献 参 考 文 献

修 士 研 究 発 表 会 講 演 内 容 1 . 講 演 要 旨

2 . 講 演 原 稿 3 . 発 表 ス ラ イ ド

公 表 謝 辞

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第 1 章 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お け る 植 物 病 害 相

1．1 諸 言

植 物 は 私 た ち に 様 々 な 恩 恵 を 与 え て い る 。食 料 と し て は 毎 日 生 産 さ れ ， 生 き る 上 で は な く て は な ら な い も の で あ る 。

ま た ，近 年 で は 環 境 問 題 が 深 刻 化 し 環 境 保 護 が 見 直 さ れ て い る 。 温 室 効 果 ガ ス の 削 減 の た め 街 の 緑 化 活 動 が 国 や 県 な ど の 公 共 団 体 に よ っ て 推 進 さ れ て い る （ 環 境 省 ，2 0 1 4）。

さ ら に ，日 本 で は ス ト レ ス 社 会 化 が 問 題 と な り ，鬱 病 な ど の 精 神 疾 患 患 者 が 2 0 11 年 度 に は 3 2 0 万 人 を 上 っ た（ 厚 生 労 働 省 ，2 0 11）。

内 閣 府 が 行 っ た ス ト レ ス 調 査 で は 日 々 の 生 活 で ス ト レ ス を 感 じ て い る 人 は 半 数 を 占 め る と 言 う 結 果 と な っ た （ 内 閣 府 ，2 0 0 8）。

こ の よ う な 環 境 の 中 趣 味 と し て の 園 芸 に 留 ま ら ず ，園 芸 療 法 と い っ た 癒 し の 効 果 が 植 物 に あ る と 期 待 さ れ て い る （ 国 土 交 通 省 ，

2 0 1 4）。 植 物 は 私 た ち と 密 接 に 関 わ り よ り 多 面 的 な 価 値 を 持 っ た

と 言 え る で あ ろ う 。し か し な が ら ，植 物 病 の 調 査 研 究 は 農 作 物 が 中 心 で 緑 化・観 賞 用 植 物 の 病 害 の 調 査 研 究 は 農 作 物 等 に 比 較 す る と 非 常 に 遅 れ て お り ，一 般 に 知 ら れ て い る 病 害 で あ っ て も ，そ の 発 生 生 態 や 病 原 菌 の 動 態 の 詳 細 が 解 明 さ れ て い る 種 類 は 多 く な い （ 堀 江 ，1 9 8 9）。

こ の よ う な 背 景 か ら 関 東 地 域 に お け る 主 要 な 緑 化・観 賞 用 植 物 を 植 栽 す る 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 を 調 査 地 と し て 植 物 病 害 研 究

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を 行 っ た 。

国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 は 埼 玉 県 北 部 の 滑 川 町 に 位 置 し ，明 治 百 年 の 記 念 行 事 の 一 環 と し て 1 9 7 4 年 に 全 国 初 の 国 営 公 園 の ひ と つ と し て 設 立 さ れ ，武 蔵 野 自 然 林 を 内 包 し て 広 さ 3 0 4 h a と 日 本 に あ る 国 営 公 園 の 中 で 最 も 広 い 面 積 を 誇 る 。こ の 中 の 都 市 緑 化 植 物 園 で は 4 5 ㎡ あ り ， 紅 黄 葉 樹 見 本 園 ， 公 園 ・ 庭 園 樹 園 ， 花 木 園 ， 生 垣 園 ，ハ ー ブ ガ ー デ ン ，ボ ー ダ ー 花 壇 お よ び 地 性 植 物 園 の エ リ ア で 構 成 さ れ て い る 。 公 園 ・ 庭 園 で 使 用 さ れ る 木 々 ， 生 垣 に 使 用 さ れ る 木 々 ，ガ ー デ ニ ン グ や 食 用 と し て 使 用 さ れ る ハ ー ブ や 花 卉 等 。 ま た ，ヤ マ ユ リ や ヤ マ ツ ツ ジ な ど こ の 地 に 自 生 す る 希 少 種 も 多 い 。 こ こ で の 病 害 の 種 類 と そ の 病 原 菌 を 診 断 ・ 同 定 し ，植 物 病 害 の 発 生 生 態 を 把 握 す る 。 そ し て ， 緑 地 管 理 お よ び ， 緑 化 ・ 観 賞 用 植 物 の 安 定 生 産 の 基 礎 知 見 と す る こ と を 目 的 と し て 行 っ た 。

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第 1 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 園 内 図（ 出 典 ： 森 林 公 園 ホ ー ム ペ ー ジ

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第 2 図 都 市 緑 化 植 物 園 園 内 図（ 出 典：森 林 公 園 ホ ー ム ペ ー ジ ），

園 内 風 景

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1．2 材 料 と 方 法

国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 月 に 1 回 調 査 を 行 っ た 。調 査 は

2 0 1 2 年 4 月 か ら 2 0 1 4 年 11 月 の 計 2 2 回 実 施 し た 。 罹 病 植 物 は 樹

木 で 主 に 葉 に 病 害 の 見 ら れ る も の ，草 本 は 主 に 土 壌 病 害 を 中 心 に 調 査 し た 。

園 内 に 植 栽 さ れ て い る 各 種 植 物 に つ い て ，病 害 と 推 定 さ れ た 個 体 の 被 害 部 を ，ま ず 肉 眼 ま た は ル ー ペ を 用 い て 観 察 し ，病 斑 上 に 標 徴 と し て の 菌 体 が 確 認 さ れ た ，標 準 的 な 罹 病 個 体 に つ い て 発 生 程 度 と 場 所 ，写 真 撮 影 等 の 記 録 を 行 い ，罹 病 サ ン プ ル を 採 取 し た 。 発 生 程 度 は 指 数 1～5 で 表 し ， 以 下 の 基 準 に よ っ て 達 観 調 査 を 行 っ た 。

指 数 1： ご く 一 部 の 葉 に 軽 度 の 発 病 が 見 ら れ る 。 指 数 2： 一 部 の 葉 に 中 程 度 の 発 病 が 見 ら れ る 。

指 数 3： 全 体 の 半 分 程 度 の 葉 に 中 程 度 の 発 病 が 見 ら れ る 。 指 数 4： ほ ぼ 全 体 の 葉 に 中 ～ 重 度 の 発 病 が 見 ら れ る 。

指 数 5： 全 体 の 葉 に 重 度 の 発 病 が あ り ， 激 し い 落 葉 や 枯 死 な ど が 見 ら れ る 。

採 集 し た サ ン プ ル は 研 究 室 に 持 ち 帰 り ，病 徴 写 真 を 撮 影 後 ，新 聞 紙 に は さ み ，さ く 葉 標 本 を 作 成 し た 。さ く 葉 サ ン プ ル は 1 ヶ 月 程 度 新 聞 紙 に は さ ん だ の ち ，B 4 の コ ピ ー 用 紙 を 追 っ て 作 成 し た ポ ケ ッ ト に 標 本 番 号 ， 植 物 名 ， 病 原 菌 名 ， 採 集 者 お よ び 採 集 場 所 を 記 入 し た ラ ベ ル を 添 付 し ，標 本 箱 に 入 れ て 標 本 室 で 保 存 し て お

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り ， 必 要 な 場 合 に 取 出 し ， 観 察 に 用 い た 。 同 時 に ， 採 集 し た 新 鮮 な 罹 病 サ ン プ ル は ，実 体 顕 微 鏡 を 用 い て 病 徴 の 特 徴 を と ら え た の ち ， 正 立 顕 微 鏡 使 用 し て ， 形 成 形 態 の 観 察 を 行 っ た 。 封 入 液 に は シ ェ ア ー 液 （ 第 1 表 ） も し く は 蒸 留 水 を 使 用 し た 。 葉 に 形 成 し た 標 徴 は 徒 手 切 片 法 を 用 い た 。標 徴 の 見 ら れ な い 罹 病 サ ン プ ル は 罹 病 部 と 健 全 部 の 境 目 か ら 切 り 出 し た 5 ㎜ 角 の 切 片 を 0 . 2 5 %次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム （2 0 %次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム 和 光 純 薬 工 業 株 式 会 社 製 1 m l，蒸 留 水 1 9 m l）に 2 0～4 0 秒 浸 漬 し ，WA 培 地（Wa t e r A g a r：

WA 1 8 g 和 光 純 薬 工 業 株 式 会 社 製 ， 蒸 留 水 1 l） に 置 床 し ， 単 菌 糸

分 離 を 行 い ，菌 株 を 得 た 。培 養 に は P D A 平 板 培 地（P o t a t o D e e x t r o s e A g a r：P D A 3 9 g B e c i o n，D i c k i n s o n a n d C o m p a n y 製 ， 蒸 留 水 1 l，）

を 使 用 し ，保 存 に は P S A 斜 面 培 地（P o t a t o S u c r o s e a A g a r： ジ ャ ガ

イ モ 2 0 0 g，寒 天 1 8 g，シ ョ 糖 2 0 g，水 1 l）を 使 用 し た 。そ し て ，

得 ら れ た 菌 株 を 観 察 し 同 定 し た 。

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第 1 表 シ ェ ア ー 液

酢 酸 ナ ト リ ウ ム 1 0 g グ リ セ リ ン 2 0 0 m l エ チ ル ア ル コ ー ル 3 0 0 m l

m i l l i Q 水 1 0 0 0 m l

第 2 表 コ ッ ト ン ブ ル ー

フ ェ ノ ー ル（ 結 晶 ） 2 0 g

乳 酸 2 0 g ( 1 6 m l )

グ リ セ リ ン 4 0 g ( 3 1 m l )

m i l l i Q 水 2 0 m l

第 3 表 1 . 8 % P D A

P D A 3 9 g

A g a r 3 g

m i l l i Q 水 1 0 0 0 m l

第 4 表 1 . 8 % P S A

P o t a t o 2 0 0 g

A g a r 1 8 g

S a c c a r o s e 2 0 g

m i l l i Q 水 1 0 0 0 m l

第 5 表 1 . 8 % WA

A g a r 1 8 g

m i l l i Q 水 1 0 0 0 m l

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1．3 結 果

1 . 3 . 1 調 査 園 全 体 に お け る 病 害 発 生 状 況

採 集 し た 罹 病 サ ン プ ル は 7 8 科 2 0 2 属 2 9 3 種 合 計 8 6 9 サ ン プ ル で あ り ，3 9 属 に 及 ん だ 。 主 要 な 発 生 病 害 は 1 0 科 1 3 属 1 5 種 の 植 物 に C e rc o s p o r a 属 関 連 菌（C e rc o s p o r a 属 ，P s e d o C e rc o s p o r a 属 ），1 6 科 1 7 属 2 5 種 の 植 物 に う ど ん こ 病 菌（C y s t o t h e c a 属 ，E r y s i p h e 属 ， M i c ro s p h a e r a 属 ，O i d i u m 属 ，P h y l l a c t i n i a 属 ，S a w a d a e a 属 ， S p h a e ro t h e c a 属 ，U n c i n u l a 属 ），1 5 科 2 6 属 3 1 種 の 植 物 に 白 絹 病

菌（S c l e ro t i u m 属 ），1 4 科 1 6 属 2 4 種 の 植 物 に さ び 病 菌（A e c i d i u m

属 ，C o l e o s p o r i u m 属 ，G y m n o s p o r a n g i u m 属 ，N y s s o p s o r a 属 ， M e l a m p s o r a 属 ，P h r a g m i d i u m 属 ，P u c c i n i a 属 ，U ro m y c e s 属 ）で あ っ た 。 そ の 他 の 病 原 菌 は B o t r y t i s 属 ，C l a d o s p o r i u m 属 ，

C o l l e t o t r i c h u m 属 ，C y s t o t h e c a 属 ，D i p l o c a r p o n 属 ，E n t o m o s p o r i u m 属 ，E x o b a s i d i u m 属 ，G l o m e re l l a 属 ，G o n a t o b o t r y u m 属 ，M o n o s t i c h e l l a 属 ，M y c o s p h a e re l l a 属 ，P e s t a l o t i a 属 ，P h y l l o s t i c t a 属 ，P y r i c u l a r i a 属 ，R h i z o c t o n i a 属 ，R h y t i s m a 属 ，S t i g m i n a 属 ，Tu b a k i a 属 で あ っ た 。特 に 病 害 の 多 発 し た 白 絹 病 は ボ ー ダ ー 花 壇 を 中 心 に 確 認 さ れ ， 感 染 が 拡 大 し て い る 傾 向 に あ っ た 。白 絹 病 に つ い て は 第 2 章 に 記 す 。

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1 . 3 . 2 病 害 ご と の 病 原 菌 の 特 定 お よ び 発 生 状 況

（1） C e rc o s p o r a 関 連 属 群 ピ ラ カ ン サ 褐 斑 病

宿 主 植 物 ： ト キ ワ サ ン ザ シ （P y r a c a n t h a c o c c i n e a M . R o e m .） 病 原 菌 ：P s e u d o c e rc o s p o r a p y r a c a n t h a e ( K a t s u k i ) C . N a k a s h i m a &

Ta k . K o b a ya s h i

7 月 に 葉 に 微 小 の 黒 点 が 見 ら れ ，9 月 に は 次 第 に 拡 大 し 肉 眼 で 明 瞭 に 観 察 で き る 程 と な り ，分 生 子 殻 を 形 成 し ル ー ペ で 観 察 で き る 。1 0 月 に は 広 が り 0 . 5 c m～1 c m 程 の 長 楕 円 形 病 斑 を 形 成 し 植 物 体 全 体 に 広 が っ た 。11 月 で は 抜 け た よ う な 病 斑 と な っ た 。症 状 は

2 0 1 2 年 か ら 2 0 1 4 年 に お い て も 症 状 を 確 認 し た 。

第 6 表 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お け る ピ ラ カ ン サ 褐 斑 病 の 発 生 消 長

2 0 1 2 年

4 . 2 1 5 . 1 9 6 . 3 0 7 . 2 1 9 . 8 1 0 . 6 11 . 2 3

2 2 0 1 3 年

4 . 2 7 5 . 2 5 6 . 1 5 6 . 2 9 7 . 2 0 9 . 1 4 1 0 . 1 9 11 . 2 3

0 1 3 3 3

2 0 1 4 年

4 . 2 0 5 . 1 7 6 . 2 8 7 . 1 6 9 . 2 7 1 0 . 2 5 11 . 2 2

1 3 2 4

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ハ コ ネ ウ ツ ギ 灰 斑 病

宿 主 植 物 ： ハ コ ネ ウ ツ ギ （ We i g e l a c o r a e e n s i s T h u n b .）

病 原 菌 ：P s e u d o c e rc o s p o r a w e i g e l i a e ( E l l i s & E v e r h a r t ) D e i g h t o n 初 期 発 生 は 7 月 。一 部 の 葉 に 白 色 ，不 整 形 の 斑 点 が 見 受 け ら れ た 。周 囲 は 黄 褐 色 。9 月 に は ほ と ん ど の 葉 に 1～2 個 の 病 斑 が 生 じ ， 7 月 よ り も 斑 点 の 大 き さ が 拡 大 し た 。1 0 月 で は 白 色 部 分 が 黒 色 へ と 変 化 し さ ら に 進 行 し た 。11 月 で は 1 0 月 か ら あ ま り 進 行 は 見 ら れ な か っ た が ，古 く な っ た 病 斑 は 抜 け 落 ち た 。毎 年 同 様 の 症 状 が 見 ら れ た 。

第 7 表 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お け る ハ コ ネ ウ ツ ギ 灰 斑 病 の 発 生 消 長

2 0 1 2 年

4 . 2 1 5 . 1 9 6 . 3 0 7 . 2 1 9 . 8 1 0 . 6 11 . 2 3

3 2 0 1 3 年

4 . 2 7 5 . 2 5 6 . 1 5 6 . 2 9 7 . 2 0 9 . 1 4 1 0 . 1 9 11 . 2 3

2 . 5 3 3

2 0 1 4 年

4 . 2 0 5 . 1 7 6 . 2 8 7 . 1 6 9 . 2 7 1 0 . 2 5 11 . 2 2

1 3 2

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（2） う ど ん こ 病 菌 群

ヤ グ ル マ ハ ッ カ 類 う ど ん こ 病

宿 主 植 物 ： タ イ マ ツ バ ナ （M o n a rd a d i d y m a L .）

病 原 菌：E r y s i p h e b i o c e l l a t a E h r e n b e r g v a r. m o n a rd a e ( G . S . N a g y ) U . B r a u n

初 発 生 は 5月 下 旬 。葉 に 薄 い 白 色 菌 叢 を ス ポ ッ ト 的 に 形 成 し た 。 6 月 に 進 行 し ， 葉 全 体 に 菌 叢 が 広 が り ， 植 物 体 の 萎 凋 症 状 が 見 ら れ た 。7 月 に は 病 徴 は お さ ま っ た が 1 0 月 に 濃 い 菌 叢 が 再 び 広 が っ た 。 菌 叢 は や や 黒 色 し た が 子 の う 殻 は 形 成 が 認 め ら れ な か っ た 。 第 8 表 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お け る ヤ グ ル マ ハ ッ カ 類 う ど ん こ 病 の 発 生 消 長

2 0 1 3 年

4 . 2 7 5 . 2 5 6 . 1 5 6 . 2 9 7 . 2 0 9 . 1 4 1 0 . 1 9 11 . 2 3

2 . 5 4 . 2 5 4 3 . 5

2 0 1 4 年

4 . 2 0 5 . 1 7 6 . 2 8 7 . 1 6 9 . 2 7 1 0 . 2 5 11 . 2 2

3 3 1

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ハ グ マ ノ キ う ど ん こ 病

宿 主 植 物 ： ス モ ー ク ツ リ ー‘グ レ ー ス’（C o t i n u s c o g g u g r i a S c o p .） 病 原 菌 ：U n c i n u l a v e n i c i f e r a e H e n n i n g s

7 月 に 一 部 の 樹 木 に 発 生 を 確 認 し ，9 月 に は 激 発 し た 。 葉 両 面 に 白 色 菌 叢 を 生 じ た 。菌 叢 部 分 の 葉 は や や 黄 色 み が か る 。そ の 後 さ ら に 進 行 し 11 月 に 完 全 世 代 を 形 成 し た 。

第 9 表 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お け る ハ グ マ ノ キ う ど ん こ 病 の 発 生 消 長

2 0 1 3 年

4 . 2 7 5 . 2 5 6 . 1 5 6 . 2 9 7 . 2 0 9 . 1 4 1 0 . 1 9 11 . 2 3

1 4 2 4

2 0 1 4 年

4 . 2 0 5 . 1 7 6 . 2 8 7 . 1 6 9 . 2 7 1 0 . 2 5 11 . 2 2

3 3

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（3） さ び 病 菌 群 ハ マ ナ ス さ び 病

宿 主 植 物 ： ハ マ ナ ス （R o s a r u g o s a T h u n b .） 病 原 菌 ：P h r a g m i d i u m m o n t i v a g u m A r t h u r

初 発 生 は 5 月 。 葉 の 一 部 に 黄 変 が 見 ら れ ，6 月 に は 葉 表 が 黄 色 に 盛 り 上 が り 夏 胞 子 堆 を 形 成 し た 。初 期 の 病 斑 は 葉 の 周 囲 に で き る こ と が 多 い 。 葉 の 裏 に は 夏 胞 子 を 生 じ た 。7 月 に は 葉 全 体 が や や 退 緑 し ，9 月 に は 薄 く 黄 色 が か っ た 。1 0 月 に は 葉 の 裏 面 に 夏 胞 子 と 冬 胞 子 が 混 在 し た 。11 月 に は 黄 褐 色 を 呈 し ，植 栽 全 体 に 被 害 を も た ら し た 。 葉 の 裏 面 に は 黒 色 の 冬 胞 子 が 密 生 し た 。

毎 年 同 様 の 症 状 が 確 認 さ れ ，冬 胞 子 形 成 時 期 は 1 0月 で あ っ た 。 第 1 0 表 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お け る ハ マ ナ ス さ び 病 の 発 生 消 長

2 0 1 2 年

4 . 2 1 5 . 1 9 6 . 3 0 7 . 2 1 9 . 8 1 0 . 6 11 . 2 3

2 1

2 0 1 3 年

4 . 2 7 5 . 2 5 6 . 1 5 6 . 2 9 7 . 2 0 9 . 1 4 1 0 . 1 9 11 . 2 3

2 2 2 2 2 4

2 0 1 4 年

4 . 2 0 5 . 1 7 6 . 2 8 7 . 1 6 9 . 2 7 1 0 . 2 5 11 . 2 2

1 3 1 4

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（4） そ の 他

イ チ ョ ウ す す 斑 病

宿 主 植 物 ： イ チ ョ ウ （ G i n k g o b i l o b a L .）

病 原 菌 ：G o n a t o b o t r y u m a p i c u l a t u m ( P e c k ) S . H u g h e s

7 月 に 初 発 生 を 確 認 し た 。0 . 5 m m 程 の 円 形 病 斑 を 生 じ 内 部 か ら 褐 色 ， 茶 褐 色 ， 黄 色 で あ り ， 植 栽 か ら は さ ほ ど 目 立 た な か っ た 。9 月 に は 激 発 し ，病 斑 同 士 が 融 合 し 不 整 形 病 斑 が 生 じ る 。こ の 時 か ら 落 葉 が 見 ら れ ，1 0 月 に は 約 半 分 の 葉 が 落 ち ，葉 の 病 斑 が 縮 れ た 。 11 月 に は ほ と ん ど の 葉 が 紅 葉 す る 前 に 落 葉 し た 。

毎 年 同 様 の 経 過 で 症 状 が 見 ら れ た 。春 の 新 芽 の 時 期 に は 症 状 は 認 め ら れ な い 。

第 11 表 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お け る イ チ ョ ウ す す 斑 病 の 発 生 消 長

2 0 1 2 年

4 . 2 1 5 . 1 9 6 . 3 0 7 . 2 1 9 . 8 1 0 . 6 11 . 2 3

2 0 1 3 年

4 . 2 7 5 . 2 5 6 . 1 5 6 . 2 9 7 . 2 0 9 . 1 4 1 0 . 1 9 11 . 2 3

2 0 1 4 年

4 . 2 0 5 . 1 7 6 . 2 8 7 . 1 6 9 . 2 7 1 0 . 2 5 11 . 2 2

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ア オ ハ ダ 黒 紋 病

宿 主 植 物 ： ア オ ハ ダ （I l e x m a c ro p o d a M i q .） 病 原 菌 ：R h y t i s m a p r i n i S c h w e i n i t z

6 月 葉 に 葉 脈 で 区 切 ら れ た 黒 色 病 斑 を 生 じ る 。 葉 裏 は 黄 色 で く ぼ む 。7 月 拡 大 し 葉 表 が 盛 り 上 が る 。9 月 周 囲 が 褐 変 し ，1 0 月 葉 の 落 葉 と と も に 消 失 し た 。2 0 1 2 年 で 発 生 が 顕 著 に 見 ら れ ，樹 木 全 体 に 同 様 の 症 状 が 多 数 見 ら れ た 。し か し ，2 0 1 3 年 で の 症 状 は 確 認 さ れ な か っ た 。2 0 1 4 年 9 月 に 同 様 の 症 状 を 確 認 し 徒 手 切 片 法 よ り 同 病 害 で あ る こ と を 確 認 し た 。だ が ，2 0 1 2 年 ほ ど の 発 病 に は 至 ら な か っ た 。 各 年 度 の 調 査 で の 発 生 消 長 は 第 1 2 表 に 示 す 。

第 1 2 表 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お け る ア オ ハ ダ 黒 紋 病 の 発 生 消 長

2 0 11 年

4 . 5 . 1 4 6 . 2 5 7 . 1 6 9 . 11 1 0 . 2 9 11 . 1 2

ー 2 3 3

2 0 1 2 年

4 . 2 1 5 . 1 9 6 . 3 0 7 . 2 1 9 . 8 1 0 . 6 11 . 2 3

3 4 4 4 ー

2 0 1 3 年

4 . 2 7 5 . 2 5 6 . 1 5 6 . 2 9 7 . 2 0 9 . 1 4 1 0 . 1 9 11 . 2 3

0 0 0 0 0 0 0 0

2 0 1 4 年

4 . 2 0 5 . 1 7 6 . 2 8 7 . 1 6 9 . 2 7 1 0 . 2 5 11 . 2 2

0 0 0 0 2 1 1

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第 3 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ピ ラ カ ン サ 褐 斑 病（ 宿 主 植 物：ト キ ワ サ ン ザ シ ，病 原 菌：P s e u d o c e rc o s p o r a p y r a c a n t h a e ( K a t s u k i ) C . N a k a s h i m a & Ta k . K o b a y a s h i）

①2 0 1 4 年 7 月 1 6 日 の 病 徴 ② 同 年 9 月 2 7 日 の 病 徴

③ 同 年 1 0 月 2 5 日 の 病 徴 ④ 同 年 11 月 2 2 日 の 病 徴

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第 4 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ハ コ ネ ウ ツ ギ 灰 斑 病（ 宿 主 植 物：ハ コ ネ ウ ツ ギ ，病 原 菌：P s e u d o c e rc o s p o r a w e i g e l i a e ( E l l i s & E v e r h a r t ) D e i g h t o n）

①2 0 1 4 年 7 月 1 6 日 の 病 徴 ② 同 年 9 月 2 7 日 の 病 徴

③ 同 年 1 0 月 2 5 日 の 病 徴 ④ 同 年 11 月 2 2 日 の 病 徴

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第 5 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ヤ グ ル マ ハ ッ カ 類 う ど ん こ 病（ 宿 主 植 物：タ イ マ ツ バ ナ ，病 原 菌：E r y s i p h e b i o c e l l a t a E h r e n b e r g v a r. m o n a rd a e ( G . S . N a g y ) U . B r a u n）

①2 0 1 3 年 5 月 2 5 日 の 病 徴 ② 同 年 6 月 1 5 日 の 病 徴

③ 同 年 7 月 2 0 日 の 病 徴 ④ 同 年 1 0 月 1 9 日 の 病 徴

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第 6 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ハ グ マ ノ キ う ど ん こ 病（ 宿 主 植 物：ス モ ー ク ツ リ ー‘グ レ ー ス’，病 原 菌 ： U n c i n u l a v e n i c i f e r a e H e n n i n g s）

①2 0 1 3 年 7 月 2 0 日 の 病 徴 ② 同 年 9 月 1 4 日 の 病 徴

③ 同 年 1 0 月 1 9 日 の 病 徴 ④ 同 年 11 月 2 3 日 の 病 徴

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第 7 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ハ マ ナ ス さ び 病（ 宿 主 植 物：ハ マ ナ ス ，病 原 菌：P h r a g m i d i u m m o n t i v a g u m A r t h u r）

①2 0 1 4 年 5 月 1 7 日 の 病 徴 ② 同 年 6 月 2 8 日 の 病 徴

③ 同 年 7 月 1 6 日 の 病 徴 ④ 同 年 9 月 2 3 日 の 病 徴

⑤ ⑥ 同 年 11 月 2 2 日 の 病 徴

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第 8 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た モ チ ノ キ 黒 紋 病（ 宿 主 植 物：ア オ ハ ダ ，病 原 菌：R h y t i s m a p r i n i S c h w e i n i t z）

① ②2 0 1 2 年 6 月 3 0 日 の 病 徴 ③ ④ 同 年 7 月 2 1 日 の 病 徴

⑤ 同 年 9 月 8 日 の 病 徴 ⑥ 同 年 1 0 月 6 日 の 病 徴

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第 9 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た イ チ ョ ウ す す 斑 病 （ 宿 主 植 物 ： イ チ ョ ウ ， 病 原 菌 ：G o n a t o b o t r y u m a p i c u l a t u m ( P e c k ) S . H u g h e s）

①2 0 1 4 年 7 月 1 6 日 の 病 徴 ② ③ 同 年 9 月 2 7 日 の 病 徴

④ ⑤ 同 年 1 0 月 2 4 日 の 病 徴 ⑥ ⑦ 同 年 9 月 2 3 日 の 病 徴

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第 2 章 白 絹 病 新 病 害 に つ い て

2．1 諸 言

2 0 1 2 年 7 月 か ら 2 0 1 3 年 9 月 ， 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 内 の ボ ー

ダ ー 花 壇・ハ ー ブ ガ ー デ ン に お い て 多 数 の 植 物 に 地 際 部 の 軟 化 腐 敗 や 褐 変 枯 死 が 認 め ら れ 株 枯 れ 症 状 が 発 生 し た 。2 年 間 で 同 様 の 症 状 が 見 ら れ た 植 物 は 3 1 種 で ， 植 物 病 名 目 録 に 記 載 の な い 植 物

は 2 0 1 2 年 に は 5 種 。2 0 1 3 年 に は 1 5 種 に 及 ん だ 。同 園 内 の ボ ー ダ

ー 花 壇 は 日 本 最 大 級 の 大 き さ を 誇 り ， 全 長 3 0 0 m， 園 路 を は さ み 両 側 に 面 積 2 , 3 2 0 ㎡ あ る 。 こ の 地 域 で 育 て ら れ て い る 宿 根 草 や 低 木 を 中 心 に 1 ~ 2 ㎡ 間 隔 で 植 え ら れ ，1 年 を 通 し て 楽 し む こ と が で き る 。 ハ ー ブ ガ ー デ ン は 広 さ 約 2 , 4 6 0 ㎡ あ り ， 用 途 ご と に 植 栽 さ れ ， 発 生 は 「 銀 色 の 庭 」 の 地 域 で 確 認 し た 。 罹 病 し た 花 卉 類 は 春 か ら 夏 に か け て 開 花 し ， 近 年 ， 花 壇 に お け る 植 栽 が 増 加 し ， 匍 匐 性 の 植 物 は グ ラ ン ド カ バ ー プ ラ ン ツ と し て も 利 用 さ れ て い る 。利 用 価 値 は 高 く ， こ こ で の 病 害 研 究 は 極 め て 重 要 と 考 え る 。

こ れ ら の 花 卉 類 に 発 生 し た 病 害 の 原 因 を 究 明 し ，植 物 ご と に 発 生 状 況 ， 病 徴 ・ 標 徴 ， 分 離 菌 の 接 種 に よ る 病 徴 再 現 ， 分 離 菌 の 所 属 等 を 検 討 し 今 後 の 緑 地 管 理 に 貢 献 す る こ と を 目 的 に 研 究 を 行 っ た 。

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2．2 材 料 と 方 法

2 . 2 . 1 発 生 症 状 お よ び 病 徴

2 0 種 花 卉 類 の 花 壇 植 栽 に お け る 被 害 の 発 生 状 況 ，病 徴 お よ び 標 徴 を 観 察 ， 記 録 し た 。

2 . 2 . 2 病 原 菌 の 分 離

各 植 物 の 罹 病 茎 葉 の 新 鮮 な 水 浸 状 病 斑 周 縁 の 組 織 片 を 約 5 m m 角 に 切 り 取 っ た 切 片 も し く は 植 物 体 上 の 菌 核 を ，次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム （ 塩 素 濃 度 5％ ） の 2 0 倍 希 釈 液 で 表 面 殺 菌 し た 。 そ の 後 ， た だ ち に 素 寒 天 平 板 培 地 に 置 床 し ，2 0℃ ， 暗 黒 下 で 培 養 し ，2～3 日 後 に 置 床 し た 組 織 片 か ら 伸 長 し た 菌 糸 の 先 端 部 を 単 菌 糸 分 離

し ，P D A 培 地 に 移 植 し て 供 試 菌 株 を 得 た 。 保 存 に は P S A 斜 面 培

地 を 用 い た 。

2 . 2 . 3 病 原 性 の 確 認

供 試 し た 2 0種 花 卉 類 か ら の 分 離 菌 の 病 原 性 を 確 認 す る た め に ， 各 分 離 源 植 物 の 健 全 株 に 対 す る 接 種 試 験 を 行 っ た 。パ イ ナ ッ プ ル リ リ ー （E u c o m i s a u t u m n a l i s ( M i l l . ) C h i t t） は 直 径 3 0 c m ， タ マ ノ カ ン ザ シ （H o s t a p l a n t a g i n e a ( L a m . ) A s c h .） は 直 径 1 5 c m の ポ リ ポ ッ ト に 滅 菌 土 壌 を 充 填 し ，1 株 植 え と し た 。他 の 1 8 種 植 物 は 直 径 1 0 c m の ポ リ ポ ッ ト を 供 し ，ヤ マ ヤ グ ル マ ギ ク（C e n t a u re a m o n t a n a L .），リ ュ ウ ノ ウ ギ ク（C h r y s a n t h e m u m m a k i n o i M a t s u m . & N a k a i），

コ ウ リ ン タ ン ポ ポ （H i e r a c i u m a u r a n t i a c u m L .）， ス イ セ ン ノ ウ

（ L y c h n i s c o ro n a r i a ( L . ) C l a i r v.）， コ ー カ サ ス マ ツ ム シ ソ ウ

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（ S c a b i o s a c a u c a s i c a M . B i e b .）， ゲ ン ノ シ ョ ウ コ （ G e r a n i u m t h u n b e rg i i S i e b o l d e x L i n d l . & P a x t .）， ア ケ ボ ノ フ ウ ロ （G e r a n i u m s a n g u i n e u m L .）， ド イ ツ ス ズ ラ ン （ C o n v a l l a r i a m a j a l i s L . v a r.

I i m a j a l i s）， ポ ピ ー マ ロ ー （C a l l i rh o e i n v o l u c r a t a ( To r r. & A . G r a y ) A . G r a y）， ク リ ー ピ ン グ フ ロ ッ ク ス （P h l o x s t o l o n i f e r a S i m s）， オ イ ラ ン ソ ウ （P h l o x p a n i c u l a t a L .）， ポ テ ン テ ィ ラ ・ ネ パ レ ン シ ス

（P o t e n t i l l a n e p a l e n s i s H o o k .）， ア ス チ ル ベ （A s t i l b e × a re n d s i i A r e n d s .），レ ー マ ニ ア エ ラ ー タ（R e h m a n n i a e l a t a N . E . B r. e x P r a i n），

ベ ロ ニ カ ・ プ ロ ス ト ラ ー タ （Ve ro n i c a p ro s t r a t a L .） お よ び バ ー ベ

ナ （Ve r b e n a × h y b r i d a Vo s s） は 1 株 植 え と し ， セ ル ピ ル ム ソ ウ

（T h y m u s s e r p y l l u m L .）お よ び ギ ン パ イ ソ ウ（N i e re m b e rg i a re p e n s

L . ） は 密 生 し た マ ッ ト 状 の 苗 を 5 c m 四 方 に 区 切 り ， そ の ま ま 植

え 付 け た 。各 分 離 菌 は 9 c m シ ャ ー レ に 分 注 し た P D A 培 地 で 2 0℃ ， 7 日 間 ， 暗 黒 条 件 で 培 養 し ， シ ャ ー レ の 全 面 に 生 育 し た 菌 叢 の 約 半 分 量 を ， ス パ チ ュ ラ を 用 い て 約 5 m m 角 に 切 り 刻 み ， 供 試 植 物 1 ポ ッ ト あ た り の 接 種 量 と し た 。 こ の 接 種 源 を ， パ イ ナ ッ プ ル リ リ ー ，タ マ ノ カ ン ザ シ で は 接 種 植 物 周 辺 直 径 約 1 5 c m の 範 囲 の 表 層 土 壌 （ 深 さ 約 2～3 c m） に ， そ の 他 の 植 物 で は ， ポ ッ ト の 表 層 土 壌 深 さ 約 1 c m に 土 壌 混 和 し た 。接 種 区 は パ イ ナ ッ プ ル リ リ ー ， ア ス チ ル ベ で は 1 ポ ッ ト ， 他 の 1 8 種 の 植 物 は 2 ポ ッ ト と し ， 同 様 に 無 菌 の P D A 培 地 の み を 土 壌 混 和 し た 1 ポ ッ ト を 対 照 区 と し た 。接 種 後 は パ イ ナ ッ プ ル リ リ ー を 除 く 4 種 植 物 に つ い て は ，乾 燥 を 防 ぐ た め ， ビ ニ ル 袋 で ポ ッ ト ご と 株 全 体 を 覆 い ， 2 7 . 5℃ ， 1 2 時 間 光 照 射 の イ ン キ ュ ベ ー タ ー に 入 れ 経 過 を 観 察 し た 。 な お ， コ ウ リ ン タ ン ポ ポ ， コ ー カ サ ス マ ツ ム シ ソ ウ ， ポ テ ン テ ィ ラ ・ ネ

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パ レ ン シ ス ， ア ス チ ル ベ ， ベ ロ ニ カ ・ プ ロ ス ト ラ ー タ ， パ イ ナ ッ プ ル リ リ ー ， タ マ ノ カ ン ザ シ は 自 然 条 件 下 で 経 過 観 察 を 行 っ た 。

2 . 2 . 4 形 態 的 特 徴

各 分 離 菌 を P D A 平 板 培 地 で 2 0℃ ，7 日 間 ， 暗 黒 条 件 下 で 培 養 し た の ち ， 菌 糸 3 0 本 に つ い て 菌 糸 幅 を 計 測 し ， 菌 糸 隔 壁 部 の か す が い 連 結 の 有 無 を コ ッ ト ン ブ ル ー 染 色 （ 第 2 表 ） に よ り 観 察 ， 記 録 し た 。 ま た ， 植 物 体 上 の 菌 核 ，P D A 平 板 培 地 に て 2 0℃ で 4 0 日 間 培 養 し た の ち ， 形 成 さ れ て い る 菌 核 の 大 き さ を 計 測 し た 。

2 . 2 . 5 温 度 別 菌 叢 生 育 試 験

菌 糸 生 育 と 温 度 の 関 係 を 明 ら か に す る た め ， 各 分 離 菌 を P D A 平 板 培 地 上 ， 暗 黒 条 件 下 ，5，1 0，1 5，2 0，2 5，2 7 . 5，3 0，3 2 . 5，3 5 お よ び 4 0℃ の 1 0 温 度 区 で 3日 間 培 養 し ，菌 叢 の 直 径 を 計 測 し た 。 1 温 度 区 3～5 シ ャ ー レ を 供 試 し た 。

2 . 2 . 6 遺 伝 子 解 析

D N A 抽 出

各 分 離 菌 を P D A 平 板 培 地 で 培 養 し ，P r e p M a n ® U l t r a S a m p l e P r e p a r a t i o n R e a g e n t（ ラ イ フ テ ク ノ ロ ジ ー ズ ジ ャ パ ン ） を 5 0 μ l と り ，エ ッ ペ ン チ ュ ー ブ に 入 れ た 。エ ッ ペ ン チ ュ ー ブ に 新 鮮 な 菌 糸 塊 を 適 量 入 れ ，ボ ル テ ッ ク ス ミ キ サ ー に よ り 3 0秒 程 度 混 合 し た 。

1 0 0℃ に 設 定 し た ヒ ー ト ブ ロ ッ ク で 1 0 分 加 熱 し た 後 ，室 温 で 2 分

間 ， 静 置 し た 。 こ れ を 1 6 , 0 0 0 × g ( 1 2 . 0 0 0 ~ 1 5 , 0 0 0 r p m )で 2 分 間 遠 心 し た の ち ， 上 清 を 3 0 μ l 程 度 ， 別 の チ ュ ー ブ に 移 し 取 っ た 。

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エ タ ノ ー ル 沈 殿

D N A 抽 出 液 に 対 し て 3 M 酢 酸 ナ ト リ ウ ム 1 0 分 の 1 量 ，9 9％ エ

タ ノ ー ル 2 . 5 倍 量 を エ ッ ペ ン チ ュ ー ブ に 入 れ 混 合 し ，- 8 0℃ で 1 時 間 静 置 し た 。1 5 , 0 0 0 r p m，4℃ で 3 0 分 遠 心 後 ， 上 清 を 捨 て 7 0 % エ タ ノ ー ル を 1 m l 加 え た 。 さ ら に 1 5 , 0 0 0 r p m，4℃ で 5 分 遠 心 後 ， 上 清 を 丁 寧 に 除 去 し ， 真 空 遠 心 機 で 3 0 分 風 乾 さ せ た 。 乾 燥 サ ン プ ル に 2 0 µ l の 1 × T E を 加 え 溶 出 し た 。そ の 後 n a n o d r o p（T h e r o m o

S C I E N T I F I C 製 ） を 行 い ， 抽 出 液 中 の D N A 濃 度 を 計 測 し た 。

P o l ym e r a s e c h a i n r e a c t i o n ( P C R )法 に よ る r D N A 内 の I T S 領 域 の 検 出

抽 出 し た D N A を 約 8 0 n g / µ l に な る よ う に 1 . 5 倍 ～5 倍 希 釈 し ， t e m p l a t e D N A と し て 使 用 し た 。I T S 1 お よ び I T S 4 の ユ ニ バ ー サ ル プ ラ イ マ ー セ ッ ト （W h i t e e t a l . , 1 9 9 0） を 用 い て 第 1 3 表 と の 分 量

で P C R チ ュ ー ブ に と り ， サ ー マ ル サ イ ク ラ ー を 以 下 の よ う に 設

定 し P C R 反 応 を 行 っ た 。

第 1 3 表 P C R 反 応 試 薬 組 成

D D W 1 8 . 7 μ l

2 . 5 m M d N T P m i x 2 . 5 μ l

1 0 × P C R B u f f e r 2 . 5 μ l

2 0 μ M I T S 1 p r i m e r 0 . 2 5 μ l

2 0 μ M I T S 4 p r i m e r 0 . 2 5 μ l

E x t a q 0 . 2 μ l

t e m p l a t e D N A 1 μ l

t o t a l 2 5 μ l（1 s a m p l e）

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9 6℃ 5 : 0 0 9 6℃ 0 : 4 0

5 2℃ 0 : 4 0 × 4 0～4 5 7 2℃ 1 : 0 0

7 2℃ 1 0 : 0 0 4℃ ∞ 電 気 泳 動 に よ る 増 幅 バ ン ド の 確 認

ア ガ ロ ー ス ゲ ル 電 気 泳 動 を 行 う に あ た り ，0 . 7 %ア ガ ロ ー ス ゲ ル

（ 第 2 1 表 ） を 作 製 し た 。 作 製 し た 0 . 7 %ア ガ ロ ー ス ゲ ル を 泳 動 槽 に セ ッ ト し て ， ゲ ル が 浸 る ま で 1 × TA E b u f f e r（ 第 2 0 表 ） を 注 い だ 。6 × L o a d i n g d y e を 2 μ l と P C R 反 応 産 物 1 0 μ l を 混 合 し て ， ウ ェ ル に ロ ー ド し た 。 マ ー カ ー と し て ，λ Hi n dⅢ( 0 . 5 µ g / µ l )を T E で 5 倍 希 釈 し 6 × l o a d i n g d y e を 2 倍 量 混 合 し た も の 8 µ l と 蒸 留 水 4 µ l を 混 合 し た も の を ロ ー ド し ，8 5 V で 3 0 分 間 泳 動 し た 。 泳 動 後 は

1 5 0 m l の 1 × TA E に エ チ ジ ウ ム ブ ロ マ イ ド 溶 液 を 1 0 μ l 加 え 混 ぜ た

も の を 染 色 バ ッ フ ァ ー と し ， こ れ に 1 0 分 間 浸 し て お き ， ゲ ル 撮 影 装 置（AT T O 製 品 ）で 抽 出 さ れ た D N A が 増 幅 さ れ て い る か を 確 認 し た 。

精 製 処 理

P C R 産 物 2 . 5 μ l，E x o - s t a r 1 . 0 μ l，m i l l i Q 水 0 . 5 μ l を 混 合 し ， サ ー マ ル サ イ ク ラ ー を 以 下 の よ う に 設 定 し 反 応 さ せ た 。

3 7℃ 1 5 : 0 0 8 0℃ 1 5 : 0 0 4℃ ∞

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シ ー ケ ン ス リ ア ク シ ョ ン

P C R チ ュ ー ブ に 以 下 の 通 り 混 合 し ，サ ー マ ル サ イ ク ラ ー で 反 応 さ

せ た 。

第 1 4 表 シ ー ケ ン ス リ ア ク シ ョ ン 反 応 試 薬 組 成

B i g D y e t e r m i n a t o r v 3 . 1 0 . 5 μ l

5 × s e q u e n c e b u f f e r 1 . 7 5 μ l

3 . 2 μ M I T S 1 p r i m e r o r I T S 4 p r i m e r 0 . 5 μ l

D D W 5 . 2 5 μ l

t e m p l a t e D N A 2 μ l

t o t a l 1 0 μ l（1 s a m p l e）

9 6℃ 3 : 0 0 9 6℃ 0 : 1 5

5 0℃ 0 : 0 5 × 2 5 6 0℃ 4 : 0 0

4℃ ∞

カ ラ ム 精 製 ， サ ン プ ル 溶 解 ， シ ー ケ ン ス

S e p h a d o x G - 5 0 S u p e r F i n e を 鋳 型 の ウ ェ ル に 入 れ ，D D W を 3 0 0 μ l 加 え ，室 温 で 2 時 間 静 置 し た 。そ の 後 9 1 0 x g，5 分 遠 心 機 に か け ， 排 水 を 行 っ た 。シ ー ケ ン ス リ ア ク シ ョ ン 後 の サ ン プ ル に D D W 1 0 μ l を 加 え ，全 量 カ ラ ム に 載 せ た 。P C R プ レ ー ト を カ ラ ム に セ ッ ト し

9 1 0 x g，5 分 遠 心 し ， 真 空 乾 燥 機 で 3 0 分 d r y u p し た 。 乾 燥 後 の ウ

ェ ル に 1 5 μ l ホ ル ム ア ミ ド を 入 れ て ボ ル テ ク ス で よ く 溶 解 し た 後 ， 9 5℃ 4 分 処 理 し 氷 水 で 急 冷 し た 。 3 1 3 0 x / G e n e t i c A n a yz e r（L i f e

Te c h n o l o g i e s 製 ） を 用 い て シ ー ケ ン ス 解 析 を 行 っ た 。 得 ら れ た 分

離 菌 の 塩 基 配 列 と 登 録 さ れ て い る 既 知 菌 株 の 相 同 性 を N C B I

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（N a t i o n a l C e n t e r f o r B i o t e c h n o l o g y I n f o r m a t i o n） の ホ モ ロ ジ ー 検 索 プ ロ グ ラ ム （B L A S T） に よ り 検 討 し た 。

切 断 産 物 の ゲ ル 精 製

目 的 と す る 断 片 の み を 得 る た め に 電 気 泳 動 し D N A 断 片 の サ イ ズ の 違 い に よ り 分 離 し 目 的 の D N A を 切 り 出 し て 精 製 し た 。（ ゲ ン ノ シ ョ ウ コ ，パ イ ナ ッ プ ル リ リ ー ，ポ ピ ー マ ロ ー ，ギ ン パ イ ソ ウ ， ク リ ー ピ ン グ フ ロ ッ ク ス 分 離 菌 で は 行 っ て い な い ）

太 い コ ー ム の ゲ ル で 電 気 泳 動 を 行 う 。 制 限 酵 素 切 断 産 物 1 0 μ l

に 2 μ l の 6 × l o a d i n g d ye を 加 え て 泳 動 サ ン プ ル と し た 。

M u p i d - S c o p e V D ( A D V A N C E 製)に て ゲ ル を 観 察 し ， ラ テ ッ ク ス 手 袋 を 着 用 し メ ス で ゲ ル を 切 り 出 し た 。1 . 5 m l チ ュ ー ブ に 入 れ ， 重 量 を 秤 量 し ， ゲ ル 重 量 の 3 倍 量 の U LT R A S A LT （ M O B I O L a b o r a t o r i e s , I n c .製 ） を 加 え ， よ く 混 合 し た 。5 5 ° C に 保 温 し た ヒ ー ト ブ ロ ッ ク に チ ュ ー ブ を 入 れ て 適 宜 攪 拌 し ゲ ル を 溶 解 さ せ ，

U LT R A B I N D を 6 μ l 加 え ， 手 で 攪 拌 し た 。5 分 間 室 温 で 静 置 。 遠

心 1 2 , 0 0 0 r p m，5 秒 ， 室 温 後 ， 上 清 を 除 き ，1 m l の U LT R A WA S H I に 再 懸 濁 し て 5〜1 0 s e c .ボ ル テ ク ス し た 。さ ら に ，遠 心 1 2 , 0 0 0 r p m， 5 秒 ， 室 温 の 後 ， 上 清 を 除 き ， 遠 心 1 2 , 0 0 0 r p m，5 秒 ， 室 温 の 後 ， 上 清 を ピ ペ ッ ト で 丁 寧 に 除 い た 。1 8 μ l の m i l l i Q 水 を 加 え ， ピ ペ ッ テ ィ ン グ で 再 懸 濁 し 5 分 間 室 温 で 静 置 し た 。遠 心 1 2 , 0 0 0 r p m，1 分 ， 室 温 の 後 ， 上 清 を 別 チ ュ ー ブ に 回 収 し 精 製 し た サ ン ブ ル を 電 気 泳 動 で 確 認 し ，t e m p l e D N A と し た 。

ク ロ ー ニ ン グ

D yn a E x p r e s s TA P C R C l o n i n g K i t（p TA C - 1）と p G E M - T a n d p G E M - T E a s y Ve c t o r S ys t e m s を 使 用 し た 。

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D yn a E x p r e s s TA P C R C l o n i n g K i t（p TA C - 1） ラ イ ゲ ー シ ョ ン 反 応

氷 上 に て 以 下 の 1 0 μ l ラ イ ゲ ー シ ョ ン 反 応 溶 液 を 調 整 し ，1 6℃ で 3 0 分 反 応 さ せ た 。 な お ， 溶 液 中 の P C R 断 片 が 5 0～1 0 0 n g に な る よ う 調 整 し た 。

第 1 5 表 ラ イ ゲ ー シ ョ ン 反 応 試 薬 組 成

p TA C - 1 v e c t o r ( 5 0 n g / μ l ) 1 μ l

P C R 産 物 Xμ l

2 × L i g a t i o n B u f f e r 5 μ l

L i g a s e M i x t u r e 1 μ l

D D W U p t o 1 0 μ l

To t a l 1 0 μ l（1 s a m p l e）

形 質 転 換

L B / a m p プ レ ー ト （ ア ン ピ シ リ ン 添 加 L y s o g e n y B r o t h： 溶 原 培 地 ， 第 2 3 表 ） に 2 5 μ l の X - G a l（5 -ブ ロ モ- 4 -ク ロ ロ- 3 -イ ン ド リ ル

- β - D -ガ ラ ク ト ピ ラ ノ シ ド ， 第 2 6 表 ） と I P T G（ イ ソ プ ロ ピ ル- β -

チ オ ガ ラ ク ト ピ ラ ノ シ ド ， 第 2 7 表 ） を そ れ ぞ れ 塗 布 し ， 十 分 吸 収 さ れ る ま で 置 い た 。J e t コ ン ピ テ ン ト セ ル を 5 0 μ l を 氷 上 で 溶 解 さ せ た 。1 0 μ l ラ イ ゲ ー シ ョ ン 反 応 液 を 直 接 J e t コ ン ピ テ ン ト セ ル に 混 和 し た 。 氷 上 で 2 0 分 ，4 2℃ で 1 分 ， 氷 上 で 3 分 イ ン キ ュ ベ ー ト し た 。そ の 後 あ ら か じ め 1 m l の S O C 培 地（S u p e r O p t i m a l b r o t h w i t h C a t a b o l i t e r e p r e s s i o n， 第 2 4 表 ） を 1 . 5 m l チ ュ ー ブ へ 分 注 し 室 温 に お い た も の に 全 量 を 加 え た 。3 7℃2 0 分 イ ン キ ュ ベ ー ト し L B / a m p プ レ ー ト に 1 0 0 μ l と 1 0 0 0 μ l ず つ 塗 布 ，3 7℃ 一 晩 お い た 。 ク ロ ー ン の 取 得

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コ ロ ニ ー を 滅 菌 爪 楊 枝 で ピ ッ ク ア ッ プ し ，1 0 0 μ g / m l ア ン ビ シ リ ン を 含 む 2 m l の L B 培 地 で 一 晩 培 養 後 ， D N A 自 動 分 離 装 置 P I - 8 0 X ( K U R A B O )で プ ラ ス ミ ド を 抽 出 し て ，1 × T E 5 0 μ l で 溶 解 し ク ロ ー ン 株 と し た 。制 限 酵 素 処 理 を 行 い ，形 質 転 換 さ れ た か 確 認 し た 。 そ の 後 ，n a n o d r o p を 用 い て D N A 濃 度 を 算 出 し ， シ ー ケ ン ス 反 応 産 物 1 0 μ l に 7 5～1 5 0 n g と な る よ う 調 整 し ， 上 述 の シ ー ケ ン ス リ ア ク シ ョ ン を 行 っ た 。 プ ラ イ マ ー は M 1 3 B D F w P r i m e r と M 1 3 B D R e v P r i m e r を 用 い た 。

M 1 3 B D F w P r i m e r ; 5 ' - C A G G G T T T T C C C A G T C A C G A C - 3 "

M 1 3 B D R e v P r i m e r ; 5 ' C G G ATA A C A AT T T C A C A C A G G - 3 "

p G E M - T a n d p G E M - T E a s y Ve c t o r S ys t e m s ラ イ ゲ ー シ ョ ン

氷 上 に て 以 下 の 1 0 μ l ラ イ ゲ ー シ ョ ン 反 応 溶 液 を 調 整 し ，4℃ で 一 晩 反 応 さ せ た 。 な お ， 溶 液 中 の P C R 断 片 が 3 . 8 8～3 5 n g に な る よ う 調 整 し た 。

第 1 6 表 ラ イ ゲ ー シ ョ ン 反 応 試 薬 組 成

2 × R a p i d L i g a t i o n B u f f e r, T 4 D N A L i g a s e 5 μ l

p G E M - T E a s y Ve c t e r 1 μ l

P C R 産 物 Xμ l

T 4 D N A L i g a s e ( 3 We i s s u n i t s / μ l 1 μ l

D D W U p t o 1 0 μ l

To t a l 1 0 μ l（1 s a m p l e）

形 質 転 換

L B / a m p プ レ ー ト（ 第 2 3 表 ）に 2 5 μ l の X - G a l と I P T G を そ れ ぞ

れ 塗 布 し ， 十 分 吸 収 さ れ る ま で 置 い た 。

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コ ン ピ テ ン ト セ ル J M 1 0 9 1 0 0 μ l を 氷 上 で 溶 解 さ せ ，1 0 μ l ラ イ ゲ ー シ ョ ン 反 応 液 を 直 接 混 和 し た 。 氷 上 で 3 0 分 ，4 2℃ で 1 分 ， 氷 上 で 3 分 イ ン キ ュ ベ ー ト し た 。 そ の 後 あ ら か じ め 1 m l の S O C 培 地

（ 第 2 4 表 ） を 1 . 5 m l チ ュ ー ブ へ 分 注 し 室 温 に お い た も の に 全 量 を 加 え た 。3 7℃3 0 分 イ ン キ ュ ベ ー ト し L B / a m p プ レ ー ト に 1 0 0 μ l

と 1 0 0 0 μ l ず つ 塗 布 ，3 7℃ 一 晩 お い た 。

コ ロ ニ ーP C R

ユ ニ バ ー サ ル プ ラ イ マ ー セ ッ ト （W h i t e e t a l . , 1 9 9 0） を 用 い て 第 1 7 表 の 分 量 で P C R チ ュ ー ブ に と り ， 滅 菌 爪 楊 枝 で ピ ッ ク ア ッ プ し た コ ロ ニ ー を 溶 液 に つ け た 。サ ー マ ル サ イ ク ラ ー を 以 下 の よ う に 設 定 し P C R 反 応 を 行 っ た 。

M 1 3 - M 4 P r i m e r ; 5 ' - G T T T T C C C A G T C A C G A C - 3 "

M 1 3 R e v P r i m e r ; 5 ' - C A G G A A A C A G C TAT G A C - 3 "

第 1 7 表 P C R 反 応 試 薬 組 成

D D W 1 9 . 3 μ l

2 . 5 m M d N T P m i x 2 . 5 μ l

1 0 × P C R B u f f e r 2 . 5 μ l

2 0 μ M M 1 3 - M 4 p r i m e r 0 . 2 5 μ l

2 0 μ M M 1 3 - R e v p r i m e r 0 . 2 5 μ l

E x t a q 0 . 2 μ l

t o t a l 2 5 μ l（1 s a m p l e）

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9 6℃ 0 : 5 0 9 6℃ 0 : 4 0

5 5℃ 0 : 4 0 × 3 0 7 2℃ 1 : 0 0

7 2℃ 7 : 0 0 4℃ ∞ シ ー ケ ン ス リ ア ク シ ョ ン

上 述 の シ ー ケ ン ス リ ア ク シ ョ ン を 行 っ た 。 プ ラ イ マ ー は M 1 3 - M 4 P r i m e r と M 1 3 R e v P r i m e r を 用 い た 。

39

第 1 8 表 0 . 5 M E D TA ( p H 8 . 0 )

N a O H 約 5 g

E D TA 4 8 . 5 g

m i l l i Q 水 U p t o 2 5 0 m l

第 1 9 表 5 0 × TA E

Tr i s 6 0 . 5 g

酢 酸 1 4 . 2 8 m l

0 . 5 M E D TA 2 5 m l

m i l l i Q 水 U p t o 2 5 0 m l

第 2 0 表 1 × TA E

1 M Tr i s 塩 酸 B u f f e r 5 m l

0 . 5 M E D TA 1 m l

m i l l i Q 水 U p t o 5 0 0 m l

第 2 1 表 0 . 7 %ア ガ ロ ー ス ゲ ル

A g a r o s e 0 . 1 4 g

1 × TA E 2 0 m l

第 2 2 表 ゲ ル 用 E t B r 染 色 液

1 0 μ g / m l E t B r 1 0 μ l

1 × TA E 1 5 0 m l

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第 2 3 表 L B / a m p

B a c t o Tr yt o n e 1 g

B a c t o Ye a s t e x t r a c t 0 . 5 g

N a C l 1 g

A g a r 1 . 6 7 g

m i l l i Q 水 9 0 m l

U p t o 1 0 0 m l 三 角 フ ラ ス コ に 下 記 の 分 量 で 入 れ ，オ ー ト ク レ ー ブ 滅 菌( 1 2 0℃2 0 分)を す る 。 冷 え て か ら ア ン ピ シ リ ン 溶 液( 1 0 0 ㎎/ m l ) 1 0 0 μ l 加 え て プ レ ー テ ィ ン グ し た 。

第 2 4 表 S O C 培 地

B a c t o Tr yt o n e 1 0 g

B a c t o Ye a s t e x t r a c t 2 . 5 g

5 M N a C l 1 m l

2 M K C l 6 2 5 μ l

m i l l i Q 水 4 9 0 m l

U p t o 5 0 0 m l 下 記 の 分 量 で 混 合 し オ ー ト ク レ ー ブ 滅 菌( 1 2 0℃2 0 分)す る 。 使 用 前 に 1 M M g S O 4 5 m l，1 M グ ル コ ー ス 1 0 m l を 加 え る 。

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第 2 5 表 Y T / a m p

B a c t o Tr yt o n e 1 . 6 g

B a c t o Ye a s t e x t r a c t 1 g

N a C l 0 . 5 g

m i l l i Q 水 9 0 m l

U p t o 1 0 0 m l 三 角 フ ラ ス コ に 下 記 の 分 量 で 入 れ ，オ ー ト ク レ ー ブ 滅 菌( 1 2 0℃2 0 分)を す る 。 冷 え て か ら ア ン ピ シ リ ン 溶 液( 1 0 0 ㎎/ m l ) 1 0 0 μ l 加 え て 使 用 し た 。

第 2 6 表 2％X - g a l 溶 液

X - g a l 0 . 2 g

m i l l i Q 水 1 0 m l

下 記 の 分 量 で 混 合 し 完 全 に 溶 解 し て か ら フ ァ ル コ ン チ ュ ー ブ に 入 れ 遮 光 し- 3 0℃ の フ リ ー ザ ー で 保 存 。

第 2 7 表 0 . 1 M I P T G 溶 液

I P T G 0 . 2 4 g

m i l l i Q 水 1 0 m l

下 記 の 分 量 で 混 合 し 完 全 に 溶 解 し て か ら ク リ ー ン ベ ン チ 内 で

0 . 2 2 μ m の フ ィ ル タ ー を 取 り 付 け た シ リ ン ジ を 用 い て フ ァ ル コ ン

チ ュ ー ブ に 保 存 。 保 存 に は- 3 0℃ の フ リ ー ザ ー を 使 用 。

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2．3 結 果

2 . 3 . 1 発 生 症 状 お よ び 病 徴

ヤ マ ヤ グ ル マ ギ ク （ 流 通 名 宿 根 ヤ グ ル マ ギ ク ， C e n t a u re a

m o n t a n a L .； キ ク 科 ）2 0 1 3 年 6 月 ， 植 栽 約 1 ㎡ で 立 枯 れ 症 状 を 初

確 認 し た （ 第 1 0 図 ）。 茎 の 地 際 部 に 水 浸 状 の 病 斑 が 生 じ ， 病 斑 よ り 上 部 の 茎 葉 は 萎 凋 し ，の ち 立 枯 れ 症 状 を 呈 し た 。罹 病 部 に は 白 色 ， 絹 糸 状 の 菌 糸 束 が 蔓 延 し ， 菌 叢 上 に は ナ タ ネ 種 子 状 ， は じ め 白 色 ， の ち 淡 褐 色 ～ 茶 褐 色 ，1 m m 大 の 菌 核 を 多 数 形 成 し た 。 リ ュ ウ ノ ウ ギ ク （C h r y s a n t h e m u m m a k i n o i M a t s u m . & N a k a i； キ ク 科 ）2 0 1 3 年 6 月 ， 植 栽 約 1 ㎡ に 立 枯 れ 症 状 を 初 確 認 し た （ 第 11 図 ）。 茎 の 地 際 部 に は 水 浸 状 の 病 斑 が 形 成 さ れ ， 茎 葉 が 萎 凋 枯 死 す る 症 状 が 発 生 し た 。罹 病 し た 茎 は 白 色 ，絹 糸 状 の 菌 糸 束 に 覆 わ れ ， 地 際 部 や 周 辺 の 土 壌 表 面 に ナ タ ネ 種 子 状 ， 白 色 ， 淡 褐 色 な い し 茶 褐 色 の 菌 核 を 多 数 形 成 し た 。

コ ウ リ ン タ ン ポ ポ （H i e r a c i u m a u r a n t i a c u m L .； キ ク 科 ）2 0 1 3 年 7 月 ，植 栽 約 2 ㎡ で 坪 枯 れ 症 状 を 初 確 認 し た 。症 状 は は じ め 葉 の 地 際 部 に 水 浸 状 ，不 整 形 の 病 斑 を 生 じ ，表 面 に は 白 色 絹 糸 状 の 菌 糸 が 拡 が っ た 。 や が て 植 物 体 を 褐 変 枯 死 さ せ た 。 の ち に ， 周 囲 の 別 株 に も 被 害 が 拡 が り ， 坪 枯 れ を 起 こ し た （ 第 1 2 図 ）。2 0 1 2 年 に 株 枯 れ 症 状 を 確 認 し た が 病 因 は 特 定 で き な か っ た 。

ス イ セ ン ノ ウ （ 別 名 フ ラ ン ネ ル ソ ウ ，L y c h n i s c o ro n a r i a ( L . )

C l a i r v.； ナ デ シ コ 科 ）2 0 1 3 年 6 月 ， 植 栽 約 5 0 ㎠ で 葉 枯 れ 症 状 を

初 確 認 し た 。茎 の 地 際 部 と 下 位 葉 に 水 浸 状 の 病 斑 が 生 じ ，白 色 の 菌 糸 束 が 薄 く 拡 が っ て い た 。の ち ，一 部 の 葉 で は 葉 身 の 先 端 が 褐

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変 し た が ，茎 が 萎 凋 枯 死 す る 症 状 は 認 め ら れ な か っ た 。比 較 的 発 生 が 著 し い 場 合 に は ，7 月 中 旬 に は 下 葉 は 灰 褐 色 に 枯 れ た が ， 上 位 葉 に は 目 立 っ た 症 状 は 観 察 さ れ ず ， 立 枯 れ に は 至 ら な か っ た 。 菌 叢 上 に は ナ タ ネ 種 子 状 ， 白 色 ， 淡 褐 色 な い し 茶 褐 色 ，1 m m 大 の 菌 核 が 形 成 さ れ た が ， 形 成 量 は 少 な か っ た （ 第 1 3 図 ）。

コ ー カ サ ス マ ツ ム シ ソ ウ（ 英 名 S c a b i o s a，ス カ ビ オ サ ，S c a b i o s a c a u c a s i c a M . B i e b .； マ ツ ム シ ソ ウ 科 ）2 0 1 3 年 6 月 ， 植 栽 約 0 . 5 ㎡ に 褐 変 枯 死 症 状 を 初 確 認 し た 。は じ め ，地 際 部 か ら 水 浸 状 の 病 斑 が 生 じ ，の ち に 腐 敗 し て 立 枯 れ 症 状 を 呈 し た 。地 際 部 に 菌 核 を 密 生 し た （ 第 1 4 図 ）。 翌 年 に も 同 様 の 症 状 を 確 認 し た 。

ゲ ン ノ シ ョ ウ コ （ G e r a n i u m t h u n b e rg i i S i e b o l d e x L i n d l . &

P a x t .； フ ウ ロ ソ ウ 科 ）2 0 1 2 年 6 月 ， 植 栽 約 1 ㎡ に 株 枯 れ 症 状 を

初 確 認 し た 。地 際 部 で 褐 変 腐 敗 症 状 を 呈 し た 。植 栽 で は 坪 枯 れ を 起 こ し た （ 第 1 5 図 ）。 翌 年 で は 草 勢 が 衰 え ， 発 生 も 顕 著 に 見 ら れ た 。

ア ケ ボ ノ フ ウ ロ（G e r a n i u m s a n g u i n e u m L .； フ ウ ロ ソ ウ 科 ）2 0 1 3 年 6 月 ， 植 栽 約 1 ㎡ で 腐 敗 症 状 を 初 確 認 し た （ 第 1 図 ⑧ ）。 は じ め 地 際 の 茎 葉 に 水 浸 状 の 病 斑 が 生 じ ，病 徴 の 進 展 が 速 く ，株 が 萎 凋 し て 腐 敗 枯 死 す る 症 状 を 呈 し ，落 葉 や 欠 株 が 顕 著 で あ っ た 。罹 病 部 に は 白 色 ，絹 糸 状 の 菌 糸 束 が 蔓 延 し て お り ，菌 叢 上 に は 白 色 ， 淡 褐 色 な い し 茶 褐 色 ， ナ タ ネ 種 子 状 ，1 m m 大 の 菌 核 を 多 数 形 成 し た （ 第 1 6 図 ）。

セ ル ピ ル ム ソ ウ（ 流 通 名 ク リ ー ピ ン グ タ イ ム ，T h y m u s s e r p y l l u m

L .； シ ソ 科 ）2 0 1 3 年 6 月 ，植 栽 約 1 ㎡ で 株 枯 れ 症 状 を 初 確 認 し た

（ 第 1 7 図 ）。 は じ め 地 際 部 の 茎 葉 に 水 浸 状 の 病 斑 が 生 じ ， 萎 凋 ，

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腐 敗 枯 死 す る 症 状 が 発 生 し た 。 被 害 植 栽 で は 株 枯 れ 症 状 に 加 え ， 下 位 葉 が 枯 死 し ，落 葉 が 顕 著 で あ っ た 。地 際 部 の 茎 に は 白 色 菌 叢 が 蔓 延 し ，菌 叢 上 に は ナ タ ネ 種 子 状 ，白 色 ，淡 褐 色 な い し 茶 褐 色 ，

1 m m 大 の 菌 核 を 多 数 形 成 し た 。

パ イ ナ ッ プ ル リ リ ー （ 英 名 E u c o m i s， ユ ー コ ミ ス ， E u c o m i s a u t u m n a l i s ( M i l l . ) C h i t t； ユ リ 科 ）2 0 1 2 年 9 月 下 旬 ， 植 栽 約 2 ㎡ に 萎 凋 ・ 倒 伏 症 状 を 確 認 し た 。 は じ め 葉 の 地 際 部 に 水 浸 状 ， 不 整 形 の 病 斑 を 生 じ ，表 面 に は 白 色 絹 糸 状 の 菌 糸 が 拡 が っ た 。や が て

4 0 c m 以 上 に な る 花 茎 が 根 元 か ら 倒 伏 し ， 外 側 の 葉 は 基 部 の 腐 敗

部 か ら 脱 離 し た（ 第 1 8 図 ）。罹 病 部 に は 白 色 絹 糸 状 の 菌 糸 束 と 淡 褐 色 ～ 茶 褐 色 ， 球 形 ～ 類 球 形 ，1 m m 大 ， ナ タ ネ 種 子 状 の 菌 核 が 多 数 形 成 さ れ て い た 。こ の 植 栽 で は ，2 0 1 3 年 に は 7 月 下 旬 ま で は 症 状 が 確 認 で き な か っ た が ，9 月 中 旬 の 調 査 で は 地 際 部 に 同 様 の 症 状 が 認 め ら れ ， 被 害 を 生 じ た 。

ド イ ツ ス ズ ラ ン（C o n v a l l a r i a m a j a l i s L . v a r. I i m a j a l i s； ユ リ 科 ）

2 0 1 3 年 6 月 ，植 栽 約 1 ㎡ で 株 枯 れ 症 状 を 確 認 し た 。茎 か ら 水 浸 状

の 病 斑 が 進 行 し ， 葉 が 黄 変 し 萎 凋 し た 。 の ち に 茎 は 褐 変 し ， 褐 色 の 菌 核 を 形 成 し た （ 第 1 9 図 ）。

タ マ ノ カ ン ザ シ （H o s t a p l a n t a g i n e a ( L a m . ) A s c h .； ユ リ 科 ）2 0 1 3 年 6 月 ，植 栽 約 1 ㎡ に 褐 変 腐 敗 症 状 を 初 確 認 し た 。症 状 は 外 側 の 葉 の 根 元 か ら 侵 さ れ 軟 化 腐 敗 し ，の ち に 葉 全 体 が 褐 変 し 倒 伏 し た 。 地 際 部 に は 褐 色 の 菌 核 を 多 数 形 成 し た （ 第 2 0 図 ）。

ポ ピ ー マ ロ ー（ 別 名 ケ シ バ ナ ア オ イ ，C a l l i r h o e i n v o l u c r a t a ( To r r.

& A . G r a y ) A . G r a y； ア オ イ 科 ）2 0 1 2 年 7 月 に 植 栽 約 2 ㎡ に お い て 開 花 が 始 ま っ た ポ ピ ー マ ロ ー に 激 し い 株 枯 れ 症 状 が 確 認 さ れ た 。

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花 や 葉・茎 が 腐 敗 し ，植 栽 は と こ ろ ど こ ろ に 集 団 で 褐 変 が 発 生 し ， 約 2 か 月 で 植 栽 全 体 が 枯 死 し た 。罹 病 株 の 地 際 部 の 茎 葉 に は 白 色 絹 糸 状 の 菌 糸 が 絡 み 付 き ，菌 叢 上 に は 白 色 ～ 褐 色 ，球 形 ～ 類 球 形 ，

1 m m 大 ，ナ タ ネ 種 子 状 の 菌 核 も 多 数 形 成 さ れ て い た（ 第 2 1 図 ）。

2 0 1 3 年 に 同 所 で 継 続 し て 観 察 し た と こ ろ ，茎 葉 が 発 生 し ，回 復

し た 植 栽 で は 開 花 が 認 め ら れ た が ， 5 月 下 旬 に は 植 栽 の 一 部 で 地 際 部 に 褐 変 が 確 認 さ れ た 。6 月 中 旬 に は 白 色 絹 糸 状 の 菌 糸 束 が 地 際 部 に 進 展 し て お り ，菌 叢 上 に は ナ タ ネ 種 子 状 の 菌 核 が 多 数 形 成 さ れ ，6 月 下 旬 に は 植 栽 全 体 が 株 枯 れ 症 状 お よ び 腐 敗 症 状 を 呈 し た 。

ク リ ー ピ ン グ フ ロ ッ ク ス （ 別 名 ツ ル ハ ナ シ ノ ブ ， P h l o x

s t o l o n i f e r a S i m s； ハ ナ シ ノ ブ 科 ）2 0 1 2 年 7 月 に 植 栽 約 2 . 5 ㎡ に お

い て 腐 敗 症 状 の 発 生 を 確 認 し た 。罹 病 株 の 葉 は 褐 変 し ，進 行 す る と 軟 化 ・ 腐 敗 し ， 地 際 部 に は 白 色 絹 糸 状 の 菌 糸 束 が 拡 が っ た （ 第 2 2 図 ）。 菌 叢 上 に は ， は じ め 白 色 ， の ち 淡 褐 色 ～ 茶 褐 色 ， 球 形 ～ 類 球 形 ，1 m m 大 の ナ タ ネ 種 子 状 の 菌 核 が 多 数 形 成 さ れ た 。2 0 1 3 年 に は 6 月 中 旬 か ら 地 際 部 の 茎 の 褐 変 と 葉 の 腐 敗 が 認 め ら れ ，7 月 下 旬 に は 植 栽 全 体 に 被 害 が 拡 が っ た 。

オ イ ラ ン ソ ウ（ 別 名 ク サ キ ョ ウ チ ク ト ウ ，P h l o x p a n i c u l a t a L .； ハ ナ シ ノ ブ 科 ）2 0 1 3 年 6 月 ，植 栽 約 5 ㎠ で 株 枯 れ 症 状 を 初 確 認 し た （ 第 2 3 図 ）。 地 際 の 茎 に 水 浸 状 の 病 斑 が 生 じ ， 病 斑 か ら 上 部 の 茎 葉 が 萎 凋 枯 死 し た 。罹 病 株 は や が て 株 全 体 が 黄 化 し ，株 枯 れ を 起 こ し た 。 茎 の 地 際 の 罹 病 部 に は 白 色 絹 糸 状 の 菌 糸 束 が 蔓 延 し ， 菌 叢 上 に は ナ タ ネ 種 子 状 ， 白 色 ， 淡 褐 色 な い し 茶 褐 色 ，1 m m 大 の 菌 核 が 多 数 形 成 さ れ た （ 第 2 4 図 ）。

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ポ テ ン テ ィ ラ ・ ネ パ レ ン シ ス（ 和 名 ベ ニ バ ナ ロ ウ ゲ ，P o t e n t i l l a

n e p a l e n s i s H o o k .； バ ラ 科 ）2 0 1 3 年 9 月 ， 植 栽 約 1 ㎡ に 株 枯 れ 症

状 を 呈 し た 。植 栽 全 体 で は と こ ろ ど こ ろ 欠 株 が 見 ら れ ，罹 病 植 物 は 褐 変 枯 死 し ， 菌 核 を 形 成 し た 。

ア ス チ ル ベ （ 別 名 ア ス チ ル ベ ・ ア レ ン ジ ー ，A s t i l b e × a re n d s i i

A r e n d s .； ユ キ ノ シ タ 科 ）2 0 1 3 年 6 月 ， 植 栽 約 2 ㎡ に 褐 変 腐 敗 症

状 を 初 確 認 し た 。は じ め 地 際 部 か ら 褐 変 を 起 こ し 症 状 が 進 行 し 株 全 体 が 枯 死 ， 菌 糸 塊 を 形 成 し た 後 倒 伏 し た （ 第 2 5 図 ）。 そ の 後 は 周 囲 へ 広 が る こ と は な か っ た 。

レ ー マ ニ ア エ ラ ー タ （R e h m a n n i a e l a t a N . E . B r. e x P r a i n； ゴ マ ノ ハ グ サ 科 ）2 0 1 3 年 7 月 ，植 栽 約 1 ㎡ で 腐 敗 症 状 を 初 確 認 し た（ 第 2 6 図 ）。 地 際 部 に 水 浸 状 の 病 斑 が 生 じ ， 茎 葉 が 萎 凋 ， 腐 敗 枯 死 す る 症 状 が 多 発 し た 。茎 の 地 際 部 や 茎 葉 の 腐 敗 部 に は 白 色 菌 叢 が 拡 が り ， 菌 叢 上 お よ び 土 壌 表 面 に は ナ タ ネ 種 子 状 ， 白 色 ， 淡 褐 色 な い し 茶 褐 色 ，1 m m 大 の 菌 核 を 多 数 形 成 し た 。

ベ ロ ニ カ ・ プ ロ ス ト ラ ー タ （Ve ro n i c a p ro s t r a t a L .； ゴ マ ノ ハ グ サ 科 ）2 0 1 3 年 7 月 ， 植 栽 約 1 ㎡ に お い て 坪 枯 れ 症 状 を 確 認 し た 。 罹 病 株 は 褐 変 腐 敗 し 菌 核 を 形 成 し ，周 囲 へ 拡 大 し て い っ た 。植 栽 に は 欠 株 や 立 ち 枯 れ が 見 ら れ た （ 第 2 7 図 ）。

ギ ン パ イ ソ ウ （N i e re m b e rg i a re p e n s L .； ナ ス 科 ）2 0 1 2 年 7 月 ， 植 栽 約 2 ㎡ に お い て ，茎 葉 の 腐 敗 症 状 が 発 生 し た 。 は じ め 茎 葉 に 水 浸 状 の 病 斑 が 拡 が り ， す ぐ に 萎 凋 腐 敗 ， 枯 死 し た （ 第 2 8 図 ）。

茎 の 地 際 部 や 匍 匐 茎 の 罹 病 部 に は 白 色 絹 糸 状 の 菌 糸 束 が 蔓 延 し ， 淡 褐 色 ～ 褐 色 ， 球 形 ～ 類 球 形 ，1 m m 大 ， ナ タ ネ 種 子 状 の 菌 核 が 多 数 形 成 さ れ た 。2 0 1 3 年 に 同 所 で 観 察 し た 結 果 ，5 月 中 旬 に は 葉

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や 匍 匐 茎 が 展 開 し ， 開 花 も 認 め ら れ た が ，6 月 中 旬 に は 葉 の 黄 化 や 軟 化 腐 敗 が 発 生 し は じ め ，6 月 下 旬 に は 前 年 同 様 に 集 団 的 な 腐 敗 症 状 が 植 栽 全 面 に 発 生 し た 。

バ ー ベ ナ （ 和 名 ビ ジ ョ ザ ク ラ ，Ve r b e n a × h y b r i d a Vo s s； ク マ ツ ヅ ラ 科 ）2 0 1 3 年 6 月 ， 植 栽 1 ㎡ で 腐 敗 症 状 を 初 確 認 し た （ 第 2 9 図 ）。 茎 の 地 際 部 に 水 浸 状 の 病 斑 が 生 じ ， 病 斑 部 よ り 上 部 の 茎 葉 は 萎 凋 し ，激 し い 場 合 に は 茎 葉 が 腐 敗 し ，植 栽 が 部 分 的 に 欠 株 と な っ た 。罹 病 し た 茎 や 腐 敗 株 全 体 に は 白 色 絹 糸 状 の 菌 糸 束 が 蔓 延 し ， 菌 叢 上 に は ナ タ ネ 種 子 状 ， 白 色 ， 淡 褐 色 な い し 茶 褐 色 ，1 m m 大 の 菌 核 を 多 数 形 成 し た 。

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第 1 0 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ヤ マ ヤ グ ル マ ギ ク の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 3 年 6 月 1 5 日 の 現 地 症 状

第 11 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た リ ュ ウ ノ ウ ギ ク の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 3 年 6 月 1 5 日 の 現 地 症 状

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第 1 2 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た コ ウ リ ン タ ン ポ ポ の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 3 年 7 月 2 0 日 の 現 地 症 状 ③ 茎 表 面 の 菌 叢

第 1 3 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ス イ セ ン ノ ウ の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 3 年 6 月 2 9 日 の 現 地 症 状

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第 1 4 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た コ ー カ サ ス マ ツ ム シ ソ ウ の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 3 年 6 月 2 0 日 の 現 地 症 状 ③ 茎 表 面 の 菌 叢

第 1 5 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ゲ ン ノ シ ョ ウ コ の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 2 年 7 月 2 1 日 の 現 地 症 状

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第 1 6 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ア ケ ボ ノ フ ウ ロ の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 3 年 6 月 1 5 日 の 現 地 症 状

第 1 7 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た セ ル ピ ル ム ソ ウ の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 3 年 6 月 2 9 日 の 現 地 症 状

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第 1 8 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た パ イ ナ ッ プ ル リ リ ー の 腐 敗 症 状

① 罹 病 前 （2 0 1 2 年 7 月 2 1 日 ） ② 同 年 9 月 8 日 の 現 地 症 状

③ 茎 表 面 の 菌 叢 ④ 植 物 体 上 の 菌 核

第 1 9 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ド イ ツ ス ズ ラ ン の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 3 年 6 月 2 9 日 の 現 地 症 状

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第 2 0 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た タ マ ノ カ ン ザ シ の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 3 年 6 月 1 5 日 の 現 地 症 状 ③ 茎 表 面 の 菌 叢

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第 2 1 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ポ ピ ー マ ロ ー の 腐 敗 症 状

① 罹 病 前 （2 0 1 2 年 5 月 1 9 日 ） ②2 0 1 2 年 6 月 3 0 日 の 現 地 症 状

③ 茎 表 面 の 菌 叢 （2 0 1 2 年 6 月 3 0 日 ）

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第 2 2 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ク リ ー ピ ン グ フ ロ ッ ク ス の 腐 敗 症 状

① 罹 病 前 （2 0 1 2 年 6 月 3 0 日 ） ② 同 年 7 月 2 1 日 の 現 地 症 状

③ 茎 表 面 の 菌 叢 （ 同 年 7 月 2 1 日 ） ④ 植 物 体 上 の 菌 核 （ 同 年 7 月 2 1 日 ）

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第 2 3 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た オ イ ラ ン ソ ウ の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 3 年 6 月 1 5 日 の 現 地 症 状

第 2 4 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ポ テ ン テ ィ ラ ・ ネ パ レ ン シ ス の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 3 年 6 月 1 5 日 の 現 地 症 状 ③ 茎 表 面 の 菌 叢

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第 2 5 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ア ス チ ル ベ の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 3 年 6 月 2 9 日 の 現 地 症 状 ③ 茎 表 面 の 菌 叢

第 2 6 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た レ ー マ ニ ア エ ラ ー タ の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 3 年 7 月 2 0 日 の 現 地 症 状 ③ 茎 表 面 の 菌 叢

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第 2 7 図 国 営 武 蔵 丘 陵 森 林 公 園 に お い て 発 生 が 観 察 さ れ た ベ ロ ニ カ ・ プ ロ ス ト ラ ー タ の 腐 敗 症 状

① ②2 0 1 3 年 6 月 2 9 日 の 現 地 症 状 ③ 茎 表 面 の 菌 叢