器具 ( 注 1) メスシリンダー メスフラスコ KD 目盛付受器コンセントレーター 窒素ガス乾燥機 (3) 分析法 試料の採取及び保存 環境省 化学物質環境調査における試料採取にあたっての留意事項 に従う 但し 試料に皮膚が触れないように注意する ( 注 2) 試料の前処理及び試料液の調製 ( 注

HO

O

O

Me

和歌山県環境衛生研究センター

4-ヒドロキシ安息香酸 メチル

Methyl 4-Hydroxybenzoate

（別名：メチルパラベン）

【対象物質の構造】

CAS 番号：99-76-3 分子式：C8H8O3

【物理化学的性状】

分子量

沸点

蒸気圧

水溶解度

log Pow

152.15

280 ℃ (分解)

9.33 Pa/25 °C

2.5 mg/mL (25 ℃)

1.96

独立行政法人 製品評価技術基盤機構 化学物質総合検索システムを参考にした。

【毒性、用途】

毒性：orl-mus LD50:>8 g/kg、orl-rbt LD50:6 g/kg、

scu-mus LD50:1200 mg/kg、ipr-mus LD50:960 mg/kg

用途：保存料、防腐剤

Physical&Theoretical Chemistry Lab.の MSDS Datebase を参考にした。

§

1 分析法

（１）分析法の概要

水質試料

200 mL に酢酸を加えて酸性として固相カートリッジに通水し 4-ヒドロ

キシ安息香酸メチル

(p-MP)を濃縮し、これをメタノールで溶出し LC/MS/MS (ESI-,

SRM)法で定量をする。

（２）試薬・器具

【試薬】

4-ヒドロキシ安息香酸メチル(p-MP)：

ビスフェノール

-A-d16(BPA-d16)：CIL 社製

メタノール(LC/MS 用)：和光純薬

固相カートリッジ：

Waters 社製 Oasis HLB Plus LP Extraction Cartridge

酢酸

：和光純薬

LC/MS グレード

手袋

：表面に

p-MP が付着していないもの

【器具】（注１）

メスシリンダー、メスフラスコ、

KD 目盛付受器

コンセントレーター、窒素ガス乾燥機

（３）分析法

【試料の採取及び保存】

環境省「化学物質環境調査における試料採取にあたっての留意事項」に従う。

但し、試料に皮膚が触れないように注意する。（注

2）

【試料の前処理及び試料液の調製】（注

3）

試料水

200 mL に酢酸 120 mg を加えて 10 mM に調製し、コンディショニングした

固相カートリッジ（注

4）をコンセントレーターにセットし、試料を 10 mL/min で通

水し抽出する。通水終了後の固相カートリッジに精製水

5 mL を通して洗浄した後、

N2

ガスを

5 分間通気して乾燥する。次いで 5 mL のメタノールで溶出し 20 mL 容なす

型フラスコに受ける。ロータリーエバポレーター（

Water Bath 30 ℃）にて乾固直前

まで濃縮（注

5）し、メタノール：精製水＝1：9 で 1 mL に転溶後、内標準として BPA-d14

を添加して、試料液とする。

【空試験液の調製】

試料と同じ量の精製水を用い、

【試料の前処理及び試料液の調製】の項に従って操

作し、得られた試料液を空試験液とする。

【標準液の調製】

p-MP10.0 mg を正確に秤取り（有効数字 3 桁）、10 mL 全量フラスコに入れ、メタ

ノールを用いて溶解し

1.00 mg/mL の標準原液とする。

BPA-d

1610.0mg を正確に秤取り（有効数字 3 桁）、10 mL 全量フラスコに入れ、メタ

ノールを用いて溶解し

1.00 mg/mL の内標準原液とする。

【測定】

〔

LC/MS 条件〕(注 6)

LC/MS 機種名：Agilent 1100/API 3200

LC 機種： Agilent 1100

カラム：

Ascentis

TM

RP-Amide(Supelco 社製)(10 cm×2.1 mm、3 µm)

カラム温度：

30 ℃

注入量：

10 µL

移動相：

A：精製水 B：メタノール

0→ 25 min

A：90→5

B：10→95 linear gradient

25→34 min

A：B=5：95

34→35 min

A：5→90

B：90→10 linear gradient

35→45 min

A：B=90：10

(MS)

機種：

API 3200™ LC/MS/MS システム

イオンスプレー電圧：

-4500 V

ネブライザーガス：

N2

ターボガス温度：

700 ℃

イオン化法：

ESI(-)-SRM

モニターイオン：

p-MP

151→92

BPA-d14

241→223

〔検量線〕

検量線用標準溶液は、濃度の有効数字が

2 桁以上かつ許容差±15%以下である事

を基本とする、メタノール：精製水＝

1：9 の溶液とし、0.1～100 ng/mL の範囲に

亘る

4 種類以上の濃度で作成する。各濃度の標準溶液には 100 ng/mL の濃度となる

ように内標準物質（

BPA-d14

）を添加する。

内標準物質のみを添加した溶媒ブランクを含めて、

5 種類以上の検量線用標準溶

液

10 µL を LC/MS/MS に導入して分析する。溶媒ブランク試料からは被検物質のピ

ークが検出されない事を確認する。得られる各クロマトグラムにおいて、標準物質

のピーク面積を内標準物質のピーク面積で割って得られる比を計算し、検量線の縦

軸とする。分析した検量線用標準溶液に含まれる標準物質の濃度を内標準物質の濃

度で割って得られる比を計算し、検量線の横軸とする。重み付けなしで、最小二乗

法により、原点を通過する一次の検量線を作成し、関係式及び寄与率（

r

2

）を計算

する。寄与率が

0.995 以上であることを確認する。各測定点における濃度比の残さ

を計算し、測定誤差が

±15%以下であることを確認する。

検量線用標準溶液調製の手順例：

（用意するもの）

器具：

1 mL 全量ピペット（6 本）、5 mL 全量ピペット（1 本）、10 mL 全量ピペッ

ト（

3 本）、50 mL 全量ピペット（1 本）、100 mL 全量フラスコ（11 本）、p-MP 標準

原液（

1.00 mg/mL、1 mL 以上）、BPA-d14

標準原液（

1.00 mg/mL、1 mL 以上）

（内標準母液の調製）

内標準（

BPA-d14

）の標準原液（

1.00 mg/mL メタノール溶液）を、1 mL 全量ピペ

ットと

100 mL の全量フラスコを用いて、メタノールで希釈し、10.0 µg/mL の内標

準母液を作成する。

（標準溶液の調製例）

p-MP 標準原液（1.00 mg/mL）を、1 mL 全量ピペットと 100 mL の全量フラスコ

を用いて、メタノールで希釈し、

10.0 µg/mL の標準母液-1 とする。標準母液-1 を、

1 mL 全量ピペットと 100 mL の全量フラスコを用いて、メタノールで希釈し、100.

ng/mL の標準母液-2 とする。標準母液-2 を、1 mL 全量ピペットと 100 mL の全量フ

ラスコを用いて、メタノールで希釈し、

1.00 ng/mL の標準母液-3 とする。

標準母液

-1 を、1 mL の全量ピペットで、100 mL 全量フラスコに量り取る。標準

母液

-2 を、それぞれ 1、5、10、50 mL の全量ピペットで、100 mL 全量フラスコに

量り取る。標準母液

-3 を、10 mL の全量ピペットで、100 mL 全量フラスコに量り

取る。続いて、

10.0 µg/mL の内標準母液を、10 mL の全量ピペットを用いて、標準

母液

-1、2、3 を入れた 100 mL 全量フラスコ（計 7 本）、及びブランク用 100 mL 全

量フラスコに、それぞれ加える（総計

8 本）。メタノール：精製水＝1：9 を、各 100

mL 全量フラスコの標線まで加え、それぞれ 0.100 ng/mL、0.500 ng/mL、1.00 ng/mL、

5.00 ng/mL、10.0 ng/mL、50.0 ng/mL 及び 100. ng/mL の検量線用標準液とする。こ

の標準液中の内標準（

BPA-d14

）濃度は

100. ng/mL である。

〔定量〕

試料液

10 µL を LC/MS/MS に導入して分析する。得られた被検物質のピーク面積

を内標準物質のピーク面積で割った比から、検量線を基にして、被検物質濃度を内

標準物質濃度で割った比（

R）を求める。

〔濃度の算出〕

試料水中濃度

C (ng/L)は次式により算出する。

C ＝R・Q/V

R : 検量線から求めた被検物質濃度を内標物質濃度で割った比

Q : 試料中に添加した内標準の量(ng)（＝添加する内標準の濃度（ng/µL）× 添

加する内標準の容量（

µL））

V : 試料水量(L)

本分析法に従った場合、以下の数値を使用する。

Q = 100. (ng) (=添加する内標準の濃度(10.0 ng/µL)×添加した内標準の容量

(10.0 µL)）

V = 0.200 (L)

即ち、

C = R×500. (ng/L)

である。

〔装置検出下限

(IDL)〕

本分析に用いた

LC/MS(Agilent1100 /API3200)の IDL を下表に示す(注 7)。

物質

IDL(ng/mL)

試料量(mL)

最終液量(mL) IDL 試料換算値(ng/L)

p-MP 0.029

200

1.0

0.15

〔測定方法の検出下限

(MDL)、定量下限(MQL)〕(注 8)

物質

試料量(mL)

最終液量(mL)

検出下限値(ng/L)

定量下限値(ng/L)

p-MP 200

1.0

0.25

0.64

（４）注解

(分析上の注意点等)

（注

1）ガラス器具等は、理化学用洗剤で洗浄・水洗・乾燥後、メタノールで洗浄

すること。

（注

2）試料に皮膚が触れると皮膚表面に付着していた p-MP が溶出し、コンタミ

ネーションの原因になる。本物質は、市販化粧品（主にスキンケア用品な

ど）に使用されているおそれがあるため、コンタミネーションには充分に

注意が必要である。今回の分析にあたって開封後５年経過した化粧品中（パ

ラベン含有を表示）からパーセントオーダーのメチルパラベンを検出した。

（注

3）手が触れたガラス器具等は p-MP に汚染されている可能性が高いので、試

料液が触れる部位は充分メタノールで洗浄する必要がある。表面に

p-MP が

付着していない手袋を使用すると、突発的な操作ブランクの上昇を抑える

ことができる。

（注

4）固相カートリッジは 20 mL の LC/MS 用メタノールと 5 mL の精製水でコ

ンディショニングしたものを使用する。

（注

5）溶出液を KD 濃縮管に取り、N2

パージにて

1 mL へとメスアップを行った

後に内標準を加えて測定しても良い。

（注

6）LC/MS の条件は、本測定に使用した機種（Agilent1100/API3200）特有のも

のである。

（注

7）装置検出下限(IDL)は、｢化学物質環境実態調査実施の手引き｣（平成 17 年

3 月）に従って、表 1 のとおり算出した。

表１

装置検出下限(IDL)の算出(Agilent1100/API3200)

物質名

試料量(mL)

最終液量(mL)

注入量濃度(ng/mL)

装置注入量（µL)

結果1(ng/mL)

結果2(ng/mL)

結果3(ng/mL)

結果4(ng/mL)

結果5(ng/mL)

結果6(ng/mL)

結果7(ng/mL)

平均値(ng/mL)

標準偏差(ng/mL)

IDL(ng/mL)

IDL試料換算値(ng/L)

S/N

CV（％）

※IDL=t(n-1,0.05)×D

n-1

×2

1.0

15

9.3

0.08113

0.0075

0.029

0.15

0.0800

0.0875

0.0799

0.0720

0.10

10

0.0815

0.0735

0.0935

p-MP

200

XIC of -MRM (2 pairs): 151.0/92.0 amu from Sample 8 (idl0.1ppb) of 080228.wiff (Turbo Spray) Max. 413.3 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 100 200 300 400 In te n si ty ,c ps 19.21 19.26 37.73 35.51 32.80 19.5120.84 23.33 26.63 27.0130.39 32.19 39.1941.61 11.30 14.25 15.32 18.75 9.31 43.12 6.07 6.41 0.271.273.904.16

XIC of -MRM (2 pairs): 241.2/223.0 amu from Sample 8 (idl0.1ppb) of 080228.wiff (Turbo Spray) Max. 8750.0 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 2000 4000 6000 8000 In te ns ity ,c ps 23.93 24.03 24.28

図

1 IDL（0.10 ng/mL）測定時のクロマトグラム

p-

MP

BPA-

d14

（

注

8）測定方法の検出下限(MDL)及び定量下限(MQL)は、｢化学物質環境実態調査

実施の手引き｣（平成

17 年 3 月）により、次のとおり算出した。

表

2 測定方法の検出下限(MDL)及び定量下限(MQL)の算出（精製水）

物質名

試料量(mL)

標準添加量(ng)

試料換算濃度(ng/L)

最終液量(mL)

注入量濃度(ng/mL)

装置注入量（µL)

操作ブランク平均（ng/L)

①

無添加平均(ng/L)

②

結果1(ng/L)

結果2(ng/L)

結果3(ng/L)

結果4(ng/L)

結果5(ng/L)

結果6(ng/L)

結果7(ng/L)

平均値(ng/L)

標準偏差(ng/L)

MDL(ng/L)

MQL(ng/L)

S/N

CV(%）

※MQL=D

n-1

×10

①操作ブランク平均：

試料マトリクスのみがない状態で他は同様の操作を

行い測定した値の平均値

②無添加平均：

MDL算出用試料に標準を添加していない状態で含

まれる濃度の平均値

10

0.8556

0.064

0.828

0.933

0.917

p-MP

200

1.0

0.15

7.5

※MDL=t(n-1,0.05)×Dn-1×2

0.798

0.903

0.761

0.849

0.25

0.64

30

0.15

0.75

0.268

0.268

XIC of -MRM (2 pairs): 151.0/92.0 amu from Sample 12 (mdl(0.15ng)) of 080229.wiff (Turbo Spray) Max. 806.7 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 200 400 600 800 In te ns ity ,c ps 19.17 14.14 19.36 37.48 38.48 33.33 14.26 17.71 22.96 25.5326.90 30.4831.00 34.36 13.97 40.30 42.36 5.07 8.41 0.32 3.04

XIC of -MRM (2 pairs): 241.2/223.0 amu from Sample 12 (mdl(0.15ng)) of 080229.wiff (Turbo Spray) Max. 1.3e4 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0.0 5000.0 1.0e4 1.3e4 In te ns ity ,c ps 23.92 23.98 24.32 _{26.34 29.38 31.47} 37.82 23.50

図

2 MDL 測定時(精製水 200 mL に 0.15 ng 添加)のクロマトグラム

p-

MP

BPA-

d

1

4

§

_{2 解説}

【分析法】

〔フローチャート〕

試料水 →

Oasis HLB → 洗浄 → 乾燥 → 溶出 → 濃縮 → 内標添加 → LC/MS

200 mL,酸性 10 mL/min

精製水

N2

MeOH

エバポレーター

ESI(-)-SRM

〔検量線及びマススペクトル〕

検量線及びマススペクトル等を次に示す。

〔検量線〕

検量線(0.1~10 ng/mL)

y = 38.855x

R

2

_{= 0.9997}

0.0

1.0

2.0

3.0

4.0

5.0

0

0.05

0.1

濃度比（対象物質／内標準物質）

面

積

比

（

対

象

物

質

／

内

標

準

物

質

）

検量線(1~100 ng/mL)

y = 36.616x

R

2

_{= 0.9999}

0

10

20

30

40

0

0.5

1

濃度比（対象物質／内標準物質）

面

積

比

（

対

象

物

質

／

内

標

準

物

質

）

図

3 検量線(内標準物質 100 ng/mL、対象物質 0.1～10 ng/mL 及び 1～100 ng/mL)

〔マススペクトル〕

-Q1: 0.134 to 2.195 min from Sample 1 (TuneSampleID) of MT20080522145206.wiff (Turbo Spray), Centroided Max. 1.3e6 cps.

100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 170 175 180 185 190 195 200 m/z, amu 5.00e4 1.00e5 1.50e5 2.00e5 2.50e5 3.00e5 3.50e5 4.00e5 4.50e5 5.00e5 5.50e5 6.00e5 6.50e5 7.00e5 7.50e5 8.00e5 8.50e5 9.00e5 9.50e5 1.00e6 1.05e6 1.10e6 1.15e6 1.20e6 1.25e6 1.30e6 1.33e6 In te ns ity ,c p s 151.0 111.0 112.9 101.1 _151.9 116.9 120.9 _{126.9 129.0} 157.0 143.0 112.0 166.9 170.9 137.9 149.0 162.9 125.0 180.9 108.0 131.0 136.9 152.9 179.0 199.1 103.0 110.0 114.0121.9 126.1 147.0 159.0 183.0 191.0

図

4 p-MP MS スペクトル

151.0

-MS2 (151.00): 0.268 to 3.467 min from Sample 1 (TuneSampleID) of MT20080522145611.wiff (Turbo Spray), Centroided Max. 4.2e5 cps. 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 m/z, amu 2.0e4 4.0e4 6.0e4 8.0e4 1.0e5 1.2e5 1.4e5 1.6e5 1.8e5 2.0e5 2.2e5 2.4e5 2.6e5 2.8e5 3.0e5 3.2e5 3.4e5 3.6e5 3.8e5 4.0e5 4.2e5 In te ns ity ,c p s 91.9 135.9 150.9 121.0 119.1 107.9 93.0 94.9

図

5 p-MP MS/MS スペクトル

-Q1: 0.067 to 1.273 min from Sample 1 (TuneSampleID) of MT20080522142712.wiff (Turbo Spray), Centroided Max. 2.7e6 cps.

100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 m/z, amu 2.0e5 4.0e5 6.0e5 8.0e5 1.0e6 1.2e6 1.4e6 1.6e6 1.8e6 2.0e6 2.2e6 2.4e6 2.6e6 2.7e6 In te ns ity ,c p s 241.2 240.2 242.2 255.1 227.2 111.0 212.1 219.1 239.1 253.1 257.1 285.1 126.9 157.1 222.1 265.1 283.1 113.0115.0 134.9 171.0 199.1201.0 237.0 267.1 297.1 108.0 142.0 149.0 169.0 177.0 185.0

図

6 内標準物質（BPA-d14

）

MS スペクトル

91.9

241.2

-MS2 (241.20): 2.563 to 4.456 min from Sample 1 (TuneSampleID) of MT20080522143157.wiff (Turbo Spray), Centroided Max. 1.7e5 cps. 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 m/z, amu 1.0e4 2.0e4 3.0e4 4.0e4 5.0e4 6.0e4 7.0e4 8.0e4 9.0e4 1.0e5 1.1e5 1.2e5 1.3e5 1.4e5 1.5e5 1.6e5 1.7e5 In te n si ty ,c ps 241.0 222.9 142.0 221.9 96.9

図

7 内標準物質（BPA-d14

）

MS/MS スペクトル

〔代表的なクロマトグラム〕

XIC of -MRM (2 pairs): 151.0/92.0 amu from Sample 17 (std10ppb) of 080228.wiff (Turbo Spray) Max. 3.1e4 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0.0 1.0e4 2.0e4 3.0e4 In te n si ty ,c ps 19.20 19.50 31.5632.19 38.6239.05

XIC of -MRM (2 pairs): 241.2/223.0 amu from Sample 17 (std10ppb) of 080228.wiff (Turbo Spray) Max. 1.1e4 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0.00 2000.00 4000.00 6000.00 8000.00 1.00e4 1.15e4 In te n si ty ,c p s 23.92 24.00 26.99 24.26 31.24 10.79 20.66 27.37

図

8 検量線(p-MP：10 ng/mL / BPA-d14

：

100 ng/mL)のクロマトグラム

XIC of -MRM (2 pairs): 151.0/92.0 amu from Sample 3 (sBLK) of 080229.wiff (Turbo Spray) Max. 466.7 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 100 200 300 400 467 In te n si ty ,c ps 19.17 14.12 19.10 19.36 38.20 14.04 22.42 25.97 29.1730.5832.14 33.34 36.68 39.12 2.78 5.305.78 7.39 9.099.70 14.43 18.85 24.73 42.3444.75

XIC of -MRM (2 pairs): 241.2/223.0 amu from Sample 3 (sBLK) of 080229.wiff (Turbo Spray) Max. 9500.0 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 2000 4000 6000 8000 9500 In te n si ty ,c p s 23.88 23.99 24.23 3.11 17.82 19.55 29.4431.0631.49 32.02 35.55 37.8238.21

図

9 操作ブランクのクロマトグラム

わずかに検出

p

-MP

BPA-

d14

p

-MP

BPA-

d14

222.9

〔構造異性体の分離〕

XIC of -MRM (13 pairs): 151.0/92.0 amu from Sample 4 (Std3-MP,EP100ppb&4-MP,EP40ppb260) of SepaMRM0105.wiff (Turbo Spray) Max. 4.4e4 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0.0 2.0e4 4.0e4 In te ns ity ,c ps 18.40 18.84

XIC of -MRM (13 pairs): 165.0/91.9 amu from Sample 4 (Std3-MP,EP100ppb&4-MP,EP40ppb260) of SepaMRM0105.wiff (Turbo Spray) Max. 4.5e4 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0.0 2.0e4 4.0e4 In te ns ity ,c ps 20.79 21.16

XIC of -MRM (13 pairs): 241.2/223.0 amu from Sample 4 (Std3-MP,EP100ppb&4-MP,EP40ppb260) of SepaMRM0105.wiff (Turbo Spray) Max. 1.1e4 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0.00 5000.00 1.00e4 In te ns ity ,c ps 23.42 25.62 10.19 0.53 18.22 22.12 33.79 36.76 43.64

図

10 構造異性体の分離（SRM）（m-MP、m-EP100 ng/mL／p-MP、p-EP 40 ng/mL）

メタ体はパラ体に比べ

3～5 倍感度が悪い。

〔抽出、クリーンアップ等の検討〕

【試料の前処理及び試料液の調製】の項に従って操作し、固相カートリッジによる

回収率の比較を行った

(n=3、添加量 5 ng)。

但し、

MP：メチルパラベン、EP：エチルパラベン、n-ProP：プロピルパラベン

i-ProP：イソプロピルパラベン、n-BP：ブチルパラベン、i-BP：イソブチルパラベ

ン、

sec-BP：sec-ブチルパラベン、n-PenP：ペンチルパラベン、i-PenP：イソペンチ

ルパラベン、

Hex-P：ヘキシルパラベン、HepP：へプチルパラベン、OP：オクチル

パラベン、

NP：ノニルパラベン、DP：デカニルパラベン、PheP：フェニルパラベ

ン、

BenP：ベンジルパラベンの略とする。

固相抽出検討

0

20

40

60

80

100

120

140

160

M

P

EP

n-

Pr

oP

i-

Pr

oP

n-

BP

i-

BP

_se

c-

Bp

n-

Pe

nP

i-

Pe

nP

He

xP

He

pP

O

P

_NP

_DP

Ph

eP

Be

nP

試験項目

回収率(%)

AutoPrep

EDS-1

Sep-Pak

C18

Sep-Pak

tC18

Bond Elute

NEXUS

Sep-Pak

PS-2

GL Pak

PLS-3

Oasis HLB

Sep-Pak

NH2

図

11 固相カートリッジによる回収率の違い

m-M

P →

←

p

-MP

BPA-

d

14

→

m

-EP →

←

p

-EP

表３

固相からの回収率(%)

Auto Prep

EDS-1

Sep-Pak

C18

Sep-Pak

tC18

Bond Elute

Nexus

Sep-Pak

PS-2

GL Pak

PLS-3

Waters

Oasis

Sep-Pak

NH2

MP 79 80 92 99 93 91 86 9

EP 75 101 98 110 103 108 98 13

n-ProP

55 52 82 58 54 55 51 5

i-ProP

81 88 48 100 97 93 88 6

n-BP 147 136 134 147 139 143 129 8

i-BP 110 113 105 133 114 129 117 7

sec-bp

81 90 82 101 99 98 92 6

n-PenP

121 90 82 114 109 102 105 5

i-PenP

92 84 67 96 102

108 89 3

HexP

93 62 60 92 104 96 92 32

HepP

70 32 40 66 84 80 73 14

OP 61 32 44 57 81 77 76 47

NP 28 10 16 21 22 36 25 20

DP 50 44 47 50 45 57 46 46

PheP

98 92 82 101 95 99 80 8

BenP

97 85 75 96 91 92 70 8

〔低濃度添加回収試験〕

精製水、河川水（紀の川）及び海水（紀の川河口）への標準物質添加回収実験結果

を表

4 に示す。

表

4 添加回収実験結果

試料名

試料量

添加量

測定回数

検出濃度

回収率

変動係数

(mL)

(ng)

(ng/L)

(%)

(%)

精製水

200

無添加

5

0.268

---

---200

0.15

7

0.856

78

7.5

200

1.0

5

5.04

95

5.5

河川水

200

無添加

3

0.571

---

---200

1.0

3

5.61

101

6.0

海水

200

無添加

3

3.25

---

---200

1.0

3

7.95

94

4.4

〔分解性スクリーニング試験結果〕

分解性スクリーニング試験結果を表

5 に示す。

表

5

分解性スクリーニング試験結果

暗所(%)

明所(%)

5

1.0

100

100

7

1.0

98

100

99

9

1.0

100

100

1時間後の残存率(%)

初期濃度（ng/mL）

pH

5日後の残存率

〔環境試料分析例〕

XIC of -MRM (13 pairs): 151.0/92.0 amu from Sample 18 (SampleKinokawaUpX200-2) of SampleMRM0222.wiff (Turbo Spray) Max. 540.0 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 100 200 300 400 500 In te ns ity ,c ps 19.75 14.97 37.48 13.90 13.17 35.65 39.21 6.57 11.21 31.16 33.25 5.09 15.25 3.64 9.07 19.31 20.9823.5424.09 26.50 27.46 41.70 43.42 2.00 0.06

XIC of -MRM (13 pairs): 241.2/223.0 amu from Sample 18 (SampleKinokawaUpX200-2) of SampleMRM0222.wiff (Turbo Spray) Max. 3050.0 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 1000 2000 3000 In te ns ity ,c ps 24.28 10.83 7.40 7.90 11.77 21.75 3.97 3.63 5.69 13.74 15.59 18.44 20.16 26.58 27.77 31.28 2.19 33.17 34.04 38.65 41.1241.59 44.46

図

12 河川水（紀の川にて 0.571 ng/L 検出時）のクロマトグラム

XIC of -MRM (13 pairs): 151.0/92.0 amu from Sample 21 (SampleKinokawaDownX200-1238) of SampleMRM0222.wiff (Turbo Spray) Max. 1940.0 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 500 1000 1500 1940 In te ns ity ,c ps 19.79 14.99 13.92 7.35 3.02 4.946.80 8.209.5211.51 15.42 19.30 20.22 24.41 25.4726.89 30.66 32.6434.0535.51 37.5138.19 39.27 40.98 42.42

XIC of -MRM (13 pairs): 241.2/223.0 amu from Sample 21 (SampleKinokawaDownX200-1238) of SampleMRM0222.wiff (Turbo Spray) Max. 3150.0 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 1000 2000 3000 In te ns ity ,c ps 24.26 19.11 2.02 5.21 7.718.33 10.14 13.42 15.85 22.0422.52 24.50 26.55

図

13．海水（紀の川河口部にて 3.25 ng/L 検出時）のクロマトグラム

河川水（紀の川）

、海水（紀の川河口）から検出した。

〔添加回収試験のクロマトグラム〕

XIC of -MRM (13 pairs): 151.0/92.0 amu from Sample 1 (Rec0.1ppm10uL/200mlX200-1) of RecMRM0222.wiff (Turbo Spray) Max. 5813.3 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 1000 2000 3000 4000 5000 5813 In te ns ity ,c ps 19.80 15.06_{16.57 19.21 25.21 31.1832.85 33.73 34.41 37.54 38.55}

XIC of -MRM (13 pairs): 241.2/223.0 amu from Sample 1 (Rec0.1ppm10uL/200mlX200-1) of RecMRM0222.wiff (Turbo Spray) Max. 6900.0 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 2000 4000 6000 6900 In te ns ity ,c ps 24.28 2.16 2.59 20.00

図

14 精製水 200 mL に p-MP 1.0 ng 添加したクロマトグラム

BPA-

d14

BPA-

d14

p

-MP

p

-MP

p

-MP

BPA-

d14

XIC of -MRM (13 pairs): 151.0/92.0 amu from Sample 10 (SampleKinokawaUp+0.1ppm10uLX200-1) of RecMRM0222.wiff (Turbo Spray) Max. 2966.7 cps. 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 500 1000 1500 2000 2500 2967 In te ns ity ,c ps 19.78 15.02 38.65 34.97 38.16 6.59 7.60 11.21 11.97 15.76 26.85 30.06 30.82 33.87 39.33 41.17 5.78 3.64 17.49 22.5325.0325.46 43.21 2.07

XIC of -MRM (13 pairs): 241.2/223.0 amu from Sample 10 (SampleKinokawaUp+0.1ppm10uLX200-1) of RecMRM0222.wiff (Turbo Spray) Max. 4100.0 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 1000 2000 3000 4000 In te ns ity ,c ps 24.25 23.41 22.72 9.78 14.14 8.61 7.87 12.20 14.8316.38 19.51 4.35

図

15 河川水（紀の川）200 mL に p-MP1.0 ng 添加したクロマトグラム

XIC of -MRM (13 pairs): 151.0/92.0 amu from Sample 13 (SampleKinokawaDown+0.1ppm10uLX200-1237) of RecMRM0222.wiff (Turbo Spray) Max. 4546.7 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 1000 2000 3000 4000 4547 In te ns ity ,c ps 19.75 15.01 13.82 6.797.8610.8011.40

XIC of -MRM (13 pairs): 241.2/223.0 amu from Sample 13 (SampleKinokawaDown+0.1ppm10uLX200-1237) of RecMRM0222.wiff (Turbo Spray) Max. 4000.0 cps.

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 Time, min 0 1000 2000 3000 4000 In te ns ity ,c ps 24.27 19.05 9.91 10.61 23.43 6.55 4.89 9.44 12.43 15.98 17.83 4.12 22.00 27.04 37.78

図

16 海水（紀の川）200 mL に p-MP 1.0 ng 添加したクロマトグラム

【評価】

本法により、水試料中

p-MP の 0.25 ng/L レベルの検出（0.64 ng/L レベルで定量）

が可能である。

【参考文献】

環境省環境安全課

：

LC/MS を用いた化学物質分析法開発マニュアル

【担当者氏名・連絡先】

担当

和歌山県環境衛生研究センター

住所

〒

640-8272 和歌山市砂山南 3-3-45

TEL：073-423-9570 FAX：073-423-8798

担当者

高良

浩司 、 麓

岳文

E-mail：

[email protected]

[email protected]

BPA-

d14

BPA-

d14

p

-MP

p

-MP

Methyl 4-Hydroxybenzoate

This method provides procedures for the determination of methyl 4-hydroxybenzoate in water

samples by liquid chromatography/tandem quadrupole mass spectrometry (LC/MS/MS). This

analysis will need to be careful about contamination. Two hundred milliliters of water sample

is adjusted at 10 mM with 120 mg of acetic acid, and applied to Oasis HLB plus cartridge at

the flow rate of 10mL/min or less. Methyl 4-hydroxybenzoate is eluted with 5 mL of

methanol. The eluate is dried up by evaporator, and exchanged to 1.0 mL of 10%

methanol-water solution. Bisphenol A-d

14

100 ng is added to the sample solution as a internal

standard. The analytes are determined in the multiple-reaction-monitoring(MRM) mode as

the precursor/product ion pair of m/z 151/92 for methyl 4-hydroxybenzoate and m/z 241/223

for the internal standard bisphenol A-d

14

. The method detection limit (MDL) and the method

quantification limit (MQL) is 0.25 and 0.64 ng/L, respectively. The average of recoveries

(N=3) from 1.0 ng methyl 4-hydroxybenzoate added surface water from the sea and the river

are 94% and 101%, and the relative standard deviation are 4.4% and 6.0%, respectively.

Using this method, the concentrations of methyl 4-hydroxybenzoate in sea and river water

sampled in Wakayama city were determined. The concentrations were 3.25 and 0.57 ng/L,

respectively.

Water 200 mL

Acetic acid

Solid Phase Extraction

Cartridge Oasis HLB

Elution

Methanol

LC/MS/MS-MRM

ESI-Negative

物質名

分析法フローチャート

備考

4- ヒ ド ロ キ シ

安 息 香 酸メ チ

ル

酸性

固相カートリッジ

精製水

Oasis HLB

N

ガス

メタノール

5 mL エバポレーター

BPA-d

ESI, 負イオンモード

LC/MS/MS-SRM

負イオン

カラム

Ascentis RP-amide

長さ

100 mm

内径

2.1 mm

粒径

3 µm

検出下限

〈水質〉

0.25 ng/L

水試料

200 mL

抽出

洗浄

乾燥

溶出

濃縮

LC/MS/MS-SRM

内標添加