学会 第5回総会研究表要旨及び討論 -1

学

会

第5回

総 会 研 究 発 表 要 旨 及 び 討 議

開

会

の

辞

会 長

福

土

貞

吉

会 員各 位 の 御 協力 に よつ て こ こ に第5回 総 会 が 開 か れ ます る こ とは,私

の 深 く感 謝

る とこ ろ で

あ ります.独 乙 の あ る学 者 が最 近 科 学 の 領域 に おい て最 も人 々の注 意 を ひい て い る問題 は,原

子力

とウ イル ス で あ る とい つ て お ります.し

か るに わ が 国 に お い て は政 府 も国 民 も原 子 力 問題 に対 して

は非 常 なseas意

を示 す に か か わ らず,ウ

イル スの研 究 に は あ ま り関心 を もた ぬ よ うに 見 え るの は遺 憾

で あ り ます.

最 近 約20年 の間 に ウ イル ス学 が驚 嘆 す べ き進 歩 を遂 げ た こ とは,こ

こに 申上 げ る ま で も あ り ま

ん.御

存 じの如 く昔 不 可 視 と考 え られ た多 くの ウ イル スが電 子 顕 微 鏡 下 に そ の姿 を と ら え られ て

_,

そ の 形,大

き さな どが 稍 正 確 に知 られ,そ の構 造 に つ い て も,少

くも数 種 の ウ イル スは 蛋 白質 の殻

に 包 まれ た核 酸 が そ の本 体 で あ り,増 殖 に 際 して核 酸 が 重 要 な役 割 を演 ず る こ とが 確 認 され ま した.

煙 草 モザ イ ク病 ウ イル ス に おい て は蛋 白 と核 酸 と を分 離 した後,こ

の2つ の液 を混 合 す れ ば,再 び

活 性 ウ イル ス を生 ず る.即

ちウ イル ス の再 構 成 が可 能 な る こ とが認 め られ,し

か も新 生 ウ イル スの

性 格 を決 定 す る もの は核 酸 な る こ とが 報 告 され て お り ます.今

や 新 し き人 工 ウ イル ス を合 成 して,

感 染,増 殖,遺

伝 の機 転 の 研 究 を利 用 し,或 は これ を ワ クチ ン と し,或

は害 虫 等 の駆 除 に応 用 す る

日の来 る こ と を予想 して も痴 人 の 夢 と笑 うこ とが で きぬ で あ り ま し よ う.と

ころ で これ ら ウ イル ス

学 の進 歩 に わ が 国 の ウ イル ス学 者 が い か な る貢 献 を な し得 たか と考 え る時,た

とえ戦 争 の影 響 に わ

ざわ い され た に もせ よ,わ

れ わ れ の寄 与 す る と こ ろ極 め て少 か つ た こ とを省 み て 慚 愧 に堪 え な い の

で あ ります.こ れ は研 究 設 備 が劣 るた め で あ るか,独 創 的 頭 脳 を有 す る研 究 者 が少 い た め で あ るか

_.

或 は物 理 学 者 や 化 学 者 との提 携 に欠 け る と こ ろが あ るた め で あ るか,或

は 他 に原 因 が あ る のか,反

省 を要 す る と思 い ます.

ウ イ ル ス学 会 は従 来 東 京 及 び京 阪 を舞 台 と して催 され ま した が,今

度 は じめ て地 方 に進 出 して当

地 に おい て総 会 が 開 か れ,か

く多 数 の ウ イル ス学 者 が 一堂 に会 し ます るの は,札

幌 に おい て は誠 に

空 前 の こ とで あ り,私 ど も北 海 道 に在 住 す る者 の よろ こび に堪 え ぬ と ころ で あ ります .北 海道 にお

い て は大 正 の末 葉 か ら北 大 医 学 部 に お い てPockenvirusそ

の他 の研 究 が行 わ れ

_{,稍 遅 れ て農 学 部 に}

おい て稲 萎 縮 病 そ の他 の研 究 が行 わ れ ま した が,最 近 はBacteriophage, Teachoa-virus,馬

の伝 染 性

貧 血症 及 び ジ ャガ イ モ の ウ イ ル ス等 が 研 究 され て お り ます .し

か し ウ イル ス研 究 者 の数 は少 く,そ

の 研 究 は 盛 な り とい うこ とが で き ませ ぬ.私 はこの総会 を契機 として本道 の ウイル ス研究 が一大躍

進 の 気 運 に 向 うこ とを切 望 してや み ませ ん.

終 に の ぞ ん で,酷 暑 の 折 か ら津 軽 海 峡 を超 え て御 来 会 下 さい ま した会 員 各 位 をは じめ と し,道

内

及 び地 元 か ら参 加 され た 会 員諸 氏 の労 を謝 す る と共 に,準

備 不 行 届 で十 分 御 満 足 を与 え得 な い こ と

をお詑 び 申 します.ま

た この 会 の 準 備 に当 つ て献 身 的 に御 尽 力 下 さい ま した方 々 に心 か ら御 礼 申 し

上 げ ます 。 これ を以 て 開 会 の 御挨 拶 を終 ります .

1.イ ン フ ル エ ン ザ ・ウ イ ル ス の マ ウ ス感 染 症(そ の1)ウ イ ル ス接 種 部 位 を異 に し た 場 合 の 感 染 形 式 の 差 異 雪 野 博 吉,小 坂 康 美,水 野 秀 雄,本 間 守 男 川村 慶 二,池 田知 行,千 葉 昭,佐 々木 広 石 田 名香 雄(東 北 大 医細 菌)

Influenza virus PR8株 を経 鼻 脳 内(i. c.)及 び 腹 腔 内(i. p.)の3つ の 経 路 か ら平 均10gのdd系 マ ウ スに 与 え た場 合 のvirus分 布 及 び増 殖 の 差異 を 中心 に この 感 染 症 を と りあげ た.

第1の 命 題 は い わ ゆ るtropismの 機 作 で あ る. P32 labelled virusの マ ウ ス体 内 分 布 とEID50で 測 定 す る 各臓 器 に お け る増 殖 との比 較 か らi. c, i.p.で も肺 に よ く増 殖 す る とい う事 実 が,肺 に よ くvirusが 集 る た め で は な い とい うこ とが 判 明 した.い ず れ に して もvi-rusの 撒 布 は接 種 局 所 か らの解 剖 学 的 の 流 れ に従 い1 例 えばi. c. i. p.で は経 鼻 よ り遙 か に 肝 に集 る.こ の こ とは また免 疫 の 成 立 に 影響 す る と思 われ る.し か し経 鼻 で はfree P32と異 りvirus P32は よ く肺 に固 着 す る. 更 に 組織 培 養(Maitland, Zinsser, roller tube cul-ture)で 特 に肺,そ れ に 肝,腎 がvirus増 殖 のpoten-tialityを もつ こ とを明 か に した.以 上 の 結 果 か ら tropismと は ゆ きつい た 組 織 が 増殖 を許 す か 否 か に か ゝつ て い る と考 え た. i. c., i. p.か らvirusを 与 えて も肺 で よ く増 殖 す る こ とは 経鼻 の 場合 と同様 だ が, i. c., i. p.の 場 合 肺 のvirus 量 は3日 をpeakと し て5日 で激 減 す る特 長 が あ る. 又 い ず れ の 経 路 で も肝,腎,脾 のvirus量 は略 々 山型 の カー ブ を示 す.脳 で はi. c.で 残 存 減 少 す るが他 の 経 路 ではEID50と し ては 証 明 で きない.そ して経 鼻 の場 合103EID50近 くで マ ウ ス を倒 す が,他 の 接 種 法 では 108EID50を 与 え て もマ ウ ス は死 な な い.以 上 の基 礎 実 験 か ら第2の 命 題 と してvirnsの 増 殖 とマ ウス の生 死 との か ゝわ り合 い を と りあげ, i. p.と 経鼻 との感 染 形 式 の相 異 を もつ て検討 した. 第1に 両接 種 法 に よ る肺 内 の増 殖 の 場 の 差異 を考 え て み た が,気 管 支 のvirus絶 対 量 で は差 は な く, i. p.で は 肺 の血 管 周 囲の 炎 症 が 強 い 特長 は あ つ て もTaylor 現象 が成 立 す る とこ ろか らi. p.か ら来 たvirusも 主 気 管 支 内 で 増殖 の場 を もつ こ とは否 定 で きない. 第2に 両 接 種 法 で で きた 肺 内virusの 性 質 の 違 い を 調 べ た が, F/G, I/H ratioで も,継 代 し てpopu1a-tionの 差 を求 め て も,現 在 有 意 の 差 は え られ ない.尚 肝,腎 で も増 殖 が起 るか否 か の1つ の 裏 付 け とし て, そ れ ら臓 器 中の α-inhibitor量 の 変 化 に つ い て も触 れ た. 第3に は両 接 種 法 に よ る免 疫 成 立 の 速 度 及 び程 度 の 差 異 を考 え た. i. p.接 種 し た マ ウ スは3∼5日 す る と 経 鼻 のchallengeに 耐 え る.そ れ を裏 書 きす る よ うに 血 流 中 の 抗体 を 日を おつ て追 求 す る とi. c., i. p.の 場 合 抗 体 は 高 い が,経 鼻 の 場 合 は 甚 だ低 い.従 つ て第2の 命 題 に対 す る答 とし て経 鼻 以 外 で 接 種 され た マ ウ スで も肺 のvirus増 殖 は 同様 に起 るが,続 い て速 か に成 立 す る免 疫 に よつ て マ ウ スは 死 か ら免 れ る と推 論 した. 質 問:甲 野礼 作(公 衆 衛 生 院)我 々 もか つ て 同様 な 実 験 を行 つ た. i. v.で は 肺,気 管 に ウ イル スの 増 殖 が 証 明 され るが,他 の組 織 臓 器 では ウ イル スは一 時 的 に 証 明 され, 48時 間以 後 で は肝 と腎 に の み み られ た.ま たi. n.の 場 合 は肺,気 管 に ウ イル スの 増 殖 が起 るが2 他 の組 織 臓 器 では 全 く陰性 で あ つた.な お ウ イ レ ミー は い ず れ の場 合 も陰 性 で あ つ た. Wagnerの 実 験 で も. サ ック リ ング マ ウ スの 場 合 に は全 身 感 染 が 起 るが,成 熟 マ ウ スに つ い て は我 々 と同 様 の結 果 を え てい る.も し演 者 の結 果 の如 く, inhalationで 呼 吸 器 以 外 の 血 液,組 織臓 器 に ウ イル スが分 布 す る と,当 然 抗 体 の産 生 が 期 待 され る と 思 われ る.演 者 は, inhalationと i. p.接 種 を うけ た マ ウ スの 運 命 の 差 異 が抗 体 の産 生 の 有 無 に よつ て決 定 され る と結 論 した が,も しそ うだ と す る と, i. n.接 種 で は ウ イル スの 肺以 外 の組 織 臓 器 へ の侵 入 が な く,ウ イ レ ミー は起 らず,し た が つ て抗 体 の産 生 は悪 い で あろ う と説 明 で き る我 々の結 果 の方 が 抗 体 の動 態 と合 致 す る もの で は ない か.こ れ らの関 連 に つ い て お答 え願 い た い. 追 加,答:石 田 名香 雄(東 北 大 医 細 菌) 1.血 液 中の 早 期 ウ イル ス はEID50で な くて, P32 のcountで お つ てい る.両 者 にdissociationが あ るか 否 か は今 後 の問 題 で あ る.但 し,各 臓 器 の3時 間 まで のP32 countと6, 12, 24時 間 のEID50と の間 には 明 瞭 な correlationが 見 られ る. Wagnerの 実 験 には 多 くの 疑 問 が あ る. 2.万 遍 な く とい う書 き方 は 適 当 で ない.実 際 の dataは 表 で示 した. 質 問:金 沢謙 一(武 田製 薬 研)1/H ratioの 大 きい 価 を示 す ウ イル ス が,肝,腎 に認 め られ た とい うが, これ がiucomplete virusと 考 え られ た理 由 を説 明 さ れ たい.

却 つ て,逆 の 性 質 を示 す の で は な い だ ろ うか. 答:雪 野 博 吉(東 北 大 医 細 菌)incomplete virus の 産 生 で あ る か, accumulateし たvirusのinactiva tionか に つ い て の 結 論 は さ し ひ か え た い と 口述 し た. こ れ ら の 臓 器 で1)山 型 の 増 殖 カ ー ブ を描 く こ と. 2) 6∼12時 間 でeclipsを 描 く こ と. 3)組 織 培 養 実 験 で virusの 増 殖 を 許 すpotentialityを もつ こ と. 4) α-inhibitorの 動 態 に も カ ー ブ が 見 られ る こ と よ り,単 にaccumulateし た と は い え な い と考 え て い る. 2.イ ン フ ル エ ン ザ ・ ウ イ ル ス の マ ウ ス 感 染 症(そ の2)動 物 体 内 に 存 在 す る 種 々 な るinhibitorに つ い て 今 野 二 郎,白 取 剛 彦,安 斎 温,堀 米 栄 吉 清 水 喜 正,天 野 保 二,松 本 慶 蔵,太 田 玲 石 田 名 香 雄(東 北 大 医 細 菌) Influenza virusが マ ウ ス 体 内 に 入 つ た 場 合,そ の 分 布 と消 長 に 影 響 を 及 ぼ す 因 子 に つ い て 追 求 し た. influenza virusが 感 染 に 際 し て,先 ず 各 種 臓 器 の 所 謂receptorと 称 せ ら れ る も の に 吸 着 さ れ,つ ゞい て 侵 入 増 殖 が 起 る と考 え ら れ て い る が, virusの 分 布 が 果 し てreceptor量 と相 関 々 係 に あ る か,又 増 殖 に 対 しreceptor量 が 如 何 な る 意 味 を も つ か に つ い て は 不 明 で あ つ た.更 に 体 液 臓 器 に は こ の 外 に 各 種 のinhi bitorが 存 在 し こ れ ら の 相 互 作 用 に よ り複 雑 な 感 染 過 程 を た ど る も の と考 え ら れ る.

そ こ で 先 ずreceptorをR. D. E.で 破 壊 さ れ るFran cisのinhibitorと 同 一 の も の と考 え マ ウ ス 臓 器 の 水 で

抽 出 し う るinhibitor量 を測 定 し,更 に 抽 出 残 渣 の receptor量 をvirusの 吸 着 溶 出 の 点 か ら 検 討 を加 え

た.す る とFrancisら がPolio virusと 猿 脳 の 灰 白 質 との 組 合 せ で え た よ う な 特 異 性 は 肺 で え られ な か つ た が,一 応 肺 に は 多 量 のinhibitorが 存 在 し,脾,腎 に も また 同 様 で,そ の 他 肝,脳 で は 僅 か で あ つ た.抽 出 後 の 臓 器 残 渣 は 全 て な おinfluenza virusの 吸 着 能 を 有 し,し か も 脳 を 除 い て す べ てR. D. E.で 破 壊 さ れ る 通 常 のreceptorで あ る.只 脳 の 夫 の み はR. D. Eで 破 壊 され ず,又chloroform, methanol処 理 を 行 う と ほ ゞ完 全 に 抽 出 さ れ た. 以 上 の べ たFrancis inhibitor(α-inhibitor)はvi rusの 増 殖 を 阻 害 す る 性 質 を有 し な い が, β-inhibitor と呼 ば れ る も の は 赤 血 球 凝 集 を 抑 制 す る と共 に 中 和 能 力 を 有 す る.但 し マ ウ スnon-adaptのinfluenza A に の み 特 異 的 に そ の 作 用 を 有 し マ ウ ス にadaptし た virusに は 作 用 が な い.こ の もの は 牛 血清 中 に多 量 に 存 在 し易 熱 性 で56℃, 1hrで 可成 り破 壊 され る. R. D. E. の作 用 を受 け ずM/50KIO4で は破 壊 され ない.酵 母 及 びzymosanに 吸 着 され るの で1/3飽 和 硫 安 沈 澱 と組 合 せ てか な り精 製 す るこ とが で きる.現 在Nmg当 り 凝 集 抑 制 価 で26,300の もの が え られ,原 血 清 の約240 倍 に精 製 され て い るが,超 遠 心patternで 単 一 のpeak を う る迄 に至 つ てい ない. Pillemerら のproperdin と同 じ位 の分 子 量 を も ち, euglobulin分 劃 に 存在 す るが, properdinと 異 な り補 体 の協 同作 用 を必 要 とし な い. 更 に マ ウ スの 肝,血 清,筋 に赤 血 球 凝 集 抑制 作 用 を 有 し ない がvirusの 発 育 を阻 害 す る物 質 が発 見 され た. 肝 よ り抽 出 した 物 質 に つ い て は 精 製 を試 みL-inhibi-torと 名 付 け た. 動 物 体 内 に は 以 上 のべ た α, β, L-inhibitorの 外 に properdin抗 体 等 を含 め て多 種 多 様 の 物 質 が 存在 し, これ らの存 在 下 に感 染 が成 立 す る の で,こ れ らの物 質 が よ り よ く解 析 され,よ り高 い立 場 か ら感染 論 を展 開 す る こ とが今 後 残 され た 問題 で あ る. 質 問:後 藤 正 勝(東 大 医衛 看)吾 々の 処 で も約5年 前 胆汁 か らmucoprotein様 物 質 を とつ て試 験 した が, この物 質 は α-inhibitorに 似 て い る.生 体 内 で 感染 の 初 期 に 於 て はInfluenza virusの 感 染 を抑 制 す るが, そ の 存続 期 間 が短 い の で 治 療 的 意義 は認 め ない. 答:石 田 名香 雄(東 北 大 医 細菌)我 々が 実 験 した範 囲内 で は α-inhibitorに は 卵 で も,も つ と鋭 敏 な組織 培 養 で も中 和能 力 は認 め られ ない.た ゞし,犬 や モ ル モ ッ トの 血清 の よ うに,い ろい ろ まじ つ てい る もの が あ るか ら精製 しな い とは つ き りし ない. な お,演 者 の精 製 し た のは β-inhibitorでproteinで あ る. 3. X線 照 射 孵 化 鶏 卵 内 に お け るInfluenza virus A型(PR8株)の 増 殖 に 及 ぼ す 影 響 並 に 組 織 化 学 的 研 究(第3報) 後 藤 正 勝,本 間 彬(東 大 衛看) 三 宅 仁,福 士勝 成,松 岡 真 平(東 大 病 理) 前 回 の本 総 会 の 発 表 に 追加 しlate deathに 近 い600γ の 場合 に お け る組 織 化 学 的 研 究 特 に核 酸 の 消 長 とvi rus合 成 の 関 係 に つ い て述 べ 新 た に 今 回 は50γ の微 量 照 射 の成 績 に つい ての 生物 学 的研 究,病 理 組 織 学 的研 究 を併 せ て発 表 す る. 1)生 物 学 的研 究; PR 8接 種 後

3時 間 目に50γ 照 射 した実 験 につ い て述 べ る.す な わ ちPR8接 種 後14時 間 目 に照 射 群 の 尿 膜液 のHA価 は4 倍 で あ るが対 照 群 は32倍 でvirus合 成 の速 度 は約1/8 とな り16時 間 で照 射 群 は 対 照群 と2倍 の 差 で 抑 制 され るが40時 間 で両 群 共 に5120倍 とな り差 は 認 め られ な い. 接 種後60分 に100γ 照 射 した 時 は 照 射 群 の 尿 膜液 は HA 128倍 で あ るが 対 照 群 は0で あ り今 述 べ た 傾 向 と は全 く異 りvirus合 成 は促 進 され そ の後16時 間 も同様 8倍 の 差 で促 進 の傾 向 を もつ が 時 間 の経 過 と共 に 対 照 群 に一 致 す る.こ れ は600γ照射 の 同 一条 件 で行 つ た 実 験 成 績 に 傾 い て い る. 10γ照射 で は 両 群 に差 は 認 め ら れ ない. 50γ照射 の尿 膜 液 の 感染 価 を追 究 した 処,両 群 に著 明 な差 は認 め られ なか つ た.次 に50γ の 場 合漿 尿 膜 に つ い て 感染 価 を追 究 した処 接種 後5時 間, 8時 間,及 び16時 間 に お い て照 射 群 は 対 照群 に比 し低 下 し 23時 間 では 両群 の間 に差 は認 め られ な か つ た.病 理 組 織 学 的 研 究: 600γ照 射 の核 酸 の 変 動 に つ い て各 胚 葉 別 に追 究 す る とDNAに おい て 殆 ど有 意 の差 は認 め られ ない. RNAの 消 長 で は外 胚 葉 の空 泡 変 性 細 胞 中 にRN Aの 比 較 的 大 きな顆 粒 を認 め るた め に8時 間 では 殊 に virus接 種 のみ の対 照 群 に 比 し低 下 を示 さぬ が総 括 的 には 組 織 所 見 に よ る前 回 に報 告 した 組 織 活 性度 曲線 に 一 致 す る と思 わ れ る.す な わ ちvirus接 種 後 照 射 群 (v, x群)virus接 種 のみ の 対 照 群(v群)共 に8時 間, 10 時 間 で は核 酸 減 少 し12時 間以 後 は各 胚 葉 にお け る核 酸 の消 長 は生 物 学 的 成績,病 理 組 織 学 的 所 見 に 一致 す る (対 照9v群, vx群)又 実 験群 の 各胚 葉 の 中,核 酸 変動 は外 胚 葉,中 胚 葉 に 強 く,内 胚 葉 に比 較 的 弱 い. 50γ の病 理 組 織 学 的 所 見 につ い て:初 期 に は全 胚 葉 の 炎症 変性 な どの侵 襲 荒 廃 像(前 回発 表)が 中等 度 乍 ら瀰 慢 性 に分 布 し正 常 像 は 内 胚 葉 の み に僅 か に認 め られ るに す ぎ ない 。次 第 に侵 襲 荒 廃 像 は 軽度 に減 少 し14時 間 で 全 葉 の 正常 像 と増 殖 像 とが は じめ て 出現 し荒 廃 の軽 減 と 修 復 の 増大 を来 し22時 間 で 最 高 の組 織 活 性 度 を示 し且 つ 両 群 共 殆 ど一致 す る.結 論; 1)600γ照射 に お け る核 酸 のRNAの 消 長 はvirus増 殖 に平 行 且先 行 し感 染 組 織 活 性 度 に 一致 す る. 2) 50γ照 射 に お け るvirusの 増 殖 は 感 染 組 織 活 性 度 に一 致 す る.す な わ ちvirus増 殖 は 生 活 力 が 正 常又 は 旺盛 な細 胞 を基 礎 と して殖 え,こ れ ら の細 胞 の 数 量 的 関係 に平 行 す る と思 わ れ る. 質 問:福 見 秀 雄(予 研)卵 で ウ イ ル ス増殖 が起 る場 合 の外,中,内 胚 葉 の病 理 組 織 学 的 変 化 を総 合 的 な立 場 での べ られ た が,ウ イル ス 自体 は 内 胚葉 で増 殖 して い るの で あ るか らこ の局 所 を中 心 に して病 理 組 織 学 的 変 化 を観 察 し意 味 づ け をす る こ とが 肝要 と考 え る.私 た ちの 実 験 で は,内 胚葉 の変 化(特 に外 の変 性,ピ ク ノー ゼ な ど)は ウ イル ス粒 子 が 細 胞 内 か らも はや 出 て こ な くなつ た 頃(72時 間)後 には じめ て認 め られ るが, 組 織 病 理 学の 専 問 の立 場 とし て は,こ れ よ り早 い 時 期 に お け る細 胞 学 的,細 胞 化 挙 的 変 化 を見 て い た だ きた い. 答:福 士 勝 成(東 大 医 病理)内 胚 葉 で ウ イル スが増 殖 す る と一 般 にい わ れ て い るが,そ の 根 拠 を十分 に私 は理 解 で きない.増 殖 の 場 の 内胚 葉 の組 織 学 的変 化 の 所 見 は外,中 胚 葉 に比 して 報 告 の如 く著 し く僅 か で あ る.(前 回 に も報 告) 一応constantにvirus増 殖 が達 し た後,す なわ ち24 時 間以 後 の長 期 にvirus増 殖 が減 少 し又 組 織 像 が 低下 して い る こ とは少 数 の実 験 で 私 も認 め て い る. 40時 間 で 漿 尿 膜 の全 層 が一 様 にNekrobiose状 に な り細 胞 組 織 の 活 生度 が非 常 に低 下 し, EID50も 低 下 し てい る こ とは また 興味 あ るご とで,漿 尿 膜 の み で な く鶏 胎 を も 連 続 切 片 に し て調 べ つ ゝあ る. 答:後 藤 正勝(東 大 医衛 看)文 献 に よる とa1lantoic cavityに 接 種 す る とallantoic layerでInfluenza virusが 増 殖 す る こ とに なつ て い るが 病理 組 織 学 的 に

は,協 同研 究 者 三宅 教 授 らの実 験 の示 す よ うな変 化 が み られ た.こ れ を もつ て 直 ち にchorionic layer, me-sodermな どで 増 殖 す る とい うの では ない.こ の よ う な成 績 を えた こ と を申 し上 げ た の に過 ぎ ない4今 後 更 に研 究 を進 め な けれ ば な らな い の は 当然 と考 え る。孵 化 鶏 卵 の生 体(例 えば胎 児)に つい て も調 べ る こ とが必 要 と思 う. 質 問:釜 洞 醇 太 郎(阪 大 微研)外 胚 葉 な どの 変化 が 著 しい が,イ ン フ ル エ ンザ 固 有 の 変 化 はallantoic membraneに あ る筈 で あ る.困 難 を伴 う と思 うが, この 固 有 の変 化 を よ り深 く追 求 して頂 きたい. X線 照 射 を うけ た宿 主 細 胞 内核 酸 のmetaholismの 変 化 に 対 し て は ど うい う意 見 をお持 ち か,我 々はDNA合 成 は 核 分 裂 開 始以 前 に終 了 す る よ うに 考 え てい る. RNA に対 し ては ど うか,又ectoderm, mesodermの 著 し い 変 化 を, CAMのreactionと は 考 え られ ない だ ろ う か,こ の 方 面 の 研 究 に は,他 の類 似 ウ イル スの感 染 の 場 合 を も あわ せ し らべ られ た方 が,よ りは つ き りす る の で は な い か.

答:福 士 勝 成(東 大 病理)外,中 胚 等 に 著 明 な動 き が み られ るが,二 次 的 反 応像 を も考 え て観 察 しPR8株 以 外 のvirusに つ い て も実 験 し たい と思 う.ま た漿 尿 膜 がvirus以 外 の 生 食 水 そ の他 諸 因子 で病 変 像 を呈 す る こ とは 勿 論 で あ り, H. Vossら の 報 告 の よ うに 物 理 化 学 的 諸 刺 戟 で 反応 像 を追 求 して い る.漿 尿 膜 の 正 常 組 織像 す ら未 解 決 の もの で あ る の で経 日的 に漿 尿 膜 の 発 生 の基 礎 的 な こ とか ら実 施 中 で あ り,核 酸 は 勿論 特 に 酵素 系 を組 織 化 学 的 に 追 究 中 で あ るの で 今 回 は事 実 の み に と どめ 意味 づ け を し なか つ た. 答:本 間 彬(東 大 衛 看) PR8 virus以 外 に現 在 他 のvirusは 使 つ てい ない.御 質 問 の 如 くPR 8以 外 の mumps, Newcastle virusに つ い て も 実 験 しmeso 及 びectodermの 変化 を確 め る こ とは興 味 あ る こ と ゝ

思 う.ま た病 理 組 織 学 的 変化 がVirus以 外 の 因子 に よ る変化 か ど うか につ い て は 私 共 も注 意 し, chorioall-antoic cavityに 生 食水,又 は 無 処 置 のallantoic fluidを 接種 して の変 化 は 検 索 ず み で あ り,ま たCAM 上 に 同 上液 をた らし ての 変 化 及 び卵 殻 膜 附 着 の ま ゝの CAMを 病 理 に渡 し て更 に慎 重 を期 して い る. 答:後 藤 正 勝(東 大 医衛 看) Influenza virusに つ い て は初 期 の増 殖 の様 式 が か な り よ く研 究 され て い る の で,我 々 もX線 照射 に よつ て この 初 期 の感 染 価,凝 集 価 を対 照 と比 較 す るの が我 々 の 目的 とす る処 で今 迄 発 表 した実 験 も この点 につ い て 一番 重 点 を おい た の で あ る. 追 加:室 谷 光 三(札 医大 病 理)私 ど もの教 室 で は昨 年 来 伝 染 性 家 兎粘 液 腫 に つ い て の実 験 的 研 究 を行 つ て い るが,そ の感 染 組 織 切 片 の電 子 顕 微 鏡 像 に つ い て は 既 に 今春 電 顕 学 会 に発 表 した.す な わ ち表 皮 細 胞 で は 著 明 な ウ イル ス増 殖 と共 に封 入 体 形成 及 び ウ イ ル ス増 殖 像 を認 め た が,一 方 局 所 リンパ 節 や脾 で は皮 膚 よ り も ウ イル ス増 殖 は劣 るが か な り強 く証 明 され る と同 時 に粘 液 種 細 胞 の 腫 瘍性 増 殖 が強 い に もか か わ らず,切 片上 ウ イル ス粒 子 の 形 態 を把 握 し難 しか つ た.そ の後 Bernhardら のRous肉 腫 に つ い て の 実 験 に な らい, 中 等 量 ウ イル ス接 種 後7及 び9日 目にX線 照 射 を行 い 10日 目に 照射 部 及 び非 照 射 部 の リンパ節 を切 除 して 電 顕 的 に観 察 した が,こ の照 射 部 の もの の 一部 の 腫 瘍 細 胞 の細 胞 質 内 に 少数 な が らウ イ ル ス粒子 を認 め る こ と が で きた.こ の 際 照射 部 の腫 瘍 細 胞 の 変性 像 が著 明 で あつ た.ま だ予 備 的 実 験 で は あ るが,ウ イ ル ス性 腫 瘍 の 場 合 に も, X線 照 射 処 置 は ウ イル ス増 殖 ない し,ウ イル ス成 熟 過 程 に 対 し重 要 な意 義 を有 す る もの と考 え る. 質 問:北 岡 正 見(予 研)ウ イル ス学 的 立 場 か ら意 見 を述 べ る と, (1) X線 照 射 細 胞 内 で の ウ イ ル スの増 殖 を 論 ず る場合,細 胞 層 の 複 雑 な漿 尿 膜 を用 い ず,単 細 胞 層 組 織 培 養 とい う比 較 的 単 純 な ウ イル ス宿 主 細 胞 系 を 用い れ ば,そ の 間 に起 る機 序 の解 析 が容 易 とな るの で な か ろ うか, (2)只今発 表 に なつ た 成 績 は, X線 照 射 細 胞 と対 照細 胞 とで の ウ イル ス増 殖 の 間 に著 しい差 が あ る とは 断定 で きない と思 う. X線 照 射 に よ る細 胞 内核 酸 変化 と,ウ イル スの 増 殖 の そ れ との対 比 に つ い て は 更 に検 討 さ るべ きで あ る. 答:後 藤 正勝(東 大 衛 看)組 織 培養 にX線 を照 射 す る実 験 は 我 々 も老 え て い る し,文 献 に よつ て もVacci nia virusに つ い て は孵 化 鶏 卵 にX線 を照射 し てそ の chorio-allantoisに お け るvirusの 増 殖 をみ た実 験 は あ るが, 1500γ以 下 では 増殖 に は関 係 ない とい う.我 々 は 孵 化 鶏 卵全 体 に つい てのwhole irradiationに つ い てInfluenza virusの 増 殖 の 状 態 を述 べ た の で今 後 の 研 究 を促 進 す る予 定 で あ る. 質 問:山 本 信 人(名 大細 菌)100γ 照 射 した場 合,照 射 群 は128倍C. C. Aが 現 わ れ て,対 照 群 は0で あ る と い うこ とは50γ の デー ター と比 較 し て考 え る と き実 験 の 回 数 や卵 の数 を多 くす る とい う必 要 は ない か. 答:本 間 彬(東 大 衛 看)質 問 の要 点 は 対 照 のHA 価 が常 に一 定 に ない とい う点 と思 うが,接 種 量 を一 定

に して もvirusの 増 殖 はhost cellに 密 接 な関 係 が あ るの で,実 験 には 必 ず 同数 個 の孵 化 鶏 卵 の 対 照 をお き 検 索 して い る.卵 に よ る個体 差 を除 くた めに,本 報 告 のslideの 如 くplotを 示 した. HA価 につ い て い え ば HAをdetectす る時 期 が30分 ∼60分 ず れ て も実 験 結果 の本 質 に は変 りない と思 う.実 験 回数 は少 く とも3回 繰 返 し てい るか ら1つ のplotは 平 均15ケ に な る. 4.発 有 鶏 卵 及 び 鶏 胚 組 織 培 養 に 於 け る 日本 脳 炎 ウ イ ル ス の イ ン フ ル エ ン ザ ウ イ ル ス 及 び 西 部 馬 脳 炎 ウ イ ル ス に 対 す る干 渉 現 象 堀 田 毅(阪 大 微 研) C. E.並 び に 鶏胚 のT. C.を 用い てJap. B V.とI. V.及 びW. E. E. V.間で干 渉 させ,主 に1st V.の10倍 連 続 各 稀 釈 毎 に干 渉 の 判 定 を陽性,陰 性 に2分 し,干 渉 個 数

比 で表 した実 験 の 結 果,次 の成 績 を得 た.

渉 診 断 法 に 適 用 出 来 る が, C. E.に 於 て は, 11日 卵 以 後 の 方 が 使 い 易 か つ た.

2. C. E.に 於 け る干 渉 現 象 のchallengeに はI. V.

は14日 卵 迄 で あ る 事 が 適 当 で あ り, W. E. E. V.で は18 日 卵 迄 使 用 す る 事 が 出 来 た.

3. Jap. BV.∼I. V.間 の 干 渉, C. E.のJap. BV.に

よ る 死 を適 け てHA価 よ り干 渉 を認 め,漿 尿 膜,胎 児 及 び 脳 組 織 のT. C.に も認 め た. 4. Jap. BV.∼W. E. E. V間 の 干 渉 両V.共 にC. E. 死 を 起 す が 時 間 及 び 接 種 日令 卵 に よ る相 違 を 利 用 し て 干 渉 を 認 め,脳 及 び 胎 児 組 織 のT. C.で も細 胞 変 性 か ら 判 定 し 陽 性 で あ つ た. 5. 1st V.(Jap. BV.)の 稀 釈 よ り 計 算 し た 干 渉 価 (50%発 現 率)は 感 染 程 度 と 一 致 し て, timingを 適 当 に 選 ん だ 場 合 の 干 渉 程 度 か ら1st V量 を 推 定 出 来 る 点 を示 唆 し た. 6.紫 外 線 照 射Jap. BV.に よ るC. E.内I. V.に 対 す る 干 渉 に つ い て は,不 活 化Jap. BV.に よ る 干 渉 は 示 さ れ な か つ た. 7. Jap. BV∼W. E. E. V.間 の 干 渉 を接 種 経 路 と 干 渉 発 現 の 早 さ よ りみ た 場 合, 1st V.経 路 が 主 役 を 演 じ 漿 尿 膜 接 種 は 尿 腔 接 種 よ り も 早 く,次 い で 同 一 経 路 は 相 違 す る 経 路 よ り も 早 く干 渉 が お こ つ た. 8. Jap. BV.感 染 を う けV.の 増 殖 を 伴 つ たC. E.の 組 織 片 のT. C.で もI. V., W. E. E. Vの 感 染 を 防 禦 し, こ の 場 合 の 感 染 防 禦 も 亦 干 渉 と思 う. 9.こ れ ら の 干 渉 がJap. BV.に よ つ て お こ さ れ る 事 を 免 疫 家 兎 血 清 を 用 い て 確 認 し た. 5.ワ ク チ ニ ア ・ ウ イ ル スHeLa細 胞 に お け る 増 進 多 ケ 谷 勇,小 田 昌 彦(予 研) HeLa細 胞 に ワ ク チ ニ ア ・ウ イ ル ス(大 連I株,家 兎 皮 膚35代 継 代 後 漿 尿 膜11∼12代 継 代)を 接 種 し,時 間 を 追 つ て 細 胞 内,培 養 液 中 の ウ イ ル ス の 増 殖 を 追 跡 し た 実 験 結 果 を報 告 す る. HeLa細 胞 は0.5%lactal-bumin, 0.1% yeast extractを 加 え たEarle液(YCA)

に 牛 血 清 を20%に 添 加 し た 培 地 で4∼5日 培 養 し た (細 胞 数=106).こ の 細 胞 に 例 え ば105.7 PFu(pick forming unit)の ウ イ ル ス を 接 種 す る と.(吸 着 時 間 は 37℃1時 間,未 吸 着 ウ イ ル ス を 除 き2%牛 血 清 がYL Aでinaintainす る),細 胞 内 に お け る ウ イ ル ス の 増 加 は11∼13時 間 後 に 認 め ら れ る.培 養 液 中 の 増 加 は こ れ よ り4∼6時 間 遅 れ る.以 後 両 相 の ウ イ ル ス 量 は 直 線 的 に増 加 し, 48時 間 で最 高 値 に達 す る.但 し液 相 の ウ イル ス量 は い か な る時 期 で も細 胞 内 に く らべ 約1log 低 い.赤 血 球 凝 集 素(VHA)もPFUの 増 加 に伴 い先 ず 細 胞 内 に 現 わ れ,以 後 漸 次 増 加 す る.し か し この場 合 に は,感 染 の 末 期 に お い て液 相 のVHA量 が 細 胞 内 の それ を凌 駕 す る.恐 ら くVHA粒 子 が感 染 粒 子 に くら べ,よ り細 胞 外 に 出 や す い こ とを示 す もの で あ ろ う. この増 殖 曲線 は 接 種 量 を変 え て も本 質 的 に は 変 ら な い. 107.9 PFuと い う大 量 接種 で もPFU. VHAの 増 加 は10時 間後 で,少 く ともVHAの 増 加 がPFuの そ れ に 先 行 す る こ とは ない.又 培 養液 を毎 日交 換 して も,液 相 の ウ イル ス曲線 は殆 ん ど変化 な く,こ の こ とは細 胞 が相 当変 性 して も液 相 に現 わ れ るウ イル スは 細 胞 内 ウ イル スの 一 部 分 で あ る こ とを示 して い る. 以 上 の実 験 か らPFU/VHA比 を取 る と,そ の値 は 接 種 量 の如 何 にか ゝわ らず 常 に一 定 で あ る.但 し感 染 の 初期(液 相 にVHA証 明 され ない)と そ れ以 後 とで は, 細 胞 内PFU/VHA比 が夫 々4.16±0.21. 4.76±0.13で 有 意 の 差 を認 め る.液 相 の値 は細 胞 内の 値 よ り約1log 低 い. 次 に,こ の 一定 のPFU/VHA比 を こわ す 目的 で培 養 の 温 度 条件 を変 え て実 験 した.し か しこの 一 定 比 を くず す こ とは 出 来 な か つ た.ウ イル スは30℃, 25℃ で 増 殖 の速 度 は 遅 れ る.し か し37℃ に くらべ,夫 々1日 2日 遅 れ て 最 高 値 に達 す る. 20℃ で は 少 くと も3日 後 迄 増 殖 を認 め る こ とが で きな かつ た. 質 問:石 田名 香 雄(東 北 大 医 細 菌)HAの 正 体 とい うか, chemical natureのidentifyを は つ き り考 え て この仕 事 をす す め るの か.換 言 す る とPFU/HAの ratioのconstancyを い わ れ る言 葉 の裏 にdissociation を狙 い なが ら果 せ な い とい うふ うに 見 え るの だ が.そ うす る と具 体 的 にlargeinoculumを つ かつ た時, HA とPFUと のdissociationが でて くるの か,来 な いの か 問題 に な る.始 めの 吸着 条 件 の 検 討 につ い て お た ず ね した い. 答:小 田 昌彦(予 研) 1) hemagglutin inのche mical natureは 未 だ不 明 だ が, lipidを 含 むprotein complexと 考 え られ て い る.少 くと もinfective par ticleとは 別 個 の存 在 で,そ れ がinfective particleと 一 定 の 比 を もつ て作 られ る とい うこ とに 重 点 を おい て い る. hemagglutin inがvirus productionにess entialな もの かbyproductか とい う問 題 で あ る.

未 吸 着virusか ら 吸 着 量 を測 定 す る こ とは 不 可 能 で あ る.だ がinoculum sizeの 違 い に よ つ てhigh titer

に な る 日 が ず れ る の で,あ る程 度inoculumに 相 当 し たvirusが 吸 着 し て い る で あ ろ う と考 え て い る. 答:多 ケ 谷 勇(予 研) VHAと ウ イ ル ス 粒 子 と が 別 個 の も の で あ る こ と はestablishさ れ て い る.但 し VHAが ウ イ ル ス 粒 子 内 に あ る か 否 か は ま だ 知 ら れ て い な い.私 ど も はVHAがVariola-Vaccinia-Ectro-melia群 に 共 通 の 特 異 抗 原 で あ り,ウ イ ル ス と細 胞 の interactionに よつ て 生 じ た も の で あ る が,こ れ が ウ イ ル ス 粒 子 の 増 殖 と 如 何 な る 関 係 に あ る か,ウ イ ル ス 粒 子 の 増 殖 に 本 質 的 な も の か 乃 至 はbyproductで あ る の か, VHAが 如 何 に し て で き る の か に つ い て 興 味 を 持 つ て い る.そ れ でVHAが で きず に ウ イ ル ス 増 殖 を 行 い う る か 否 か を 知 ろ う と し て 実 験 を す す め て い る が,近 着 のVirologyに 出 て い るEhrlich対Vaccinia の 報 告 は 極 め て 興 味 あ る 所 見 と 思 つ て い る. He La細 胞 に お け る 接 種 ウ イ ル ス 量 の 差 に よ る ウ イ ル ス 増 殖 曲 線 の 相 違 は,や は り或 程 度 の 差 が あ り, maximumに 達 す る 時 間 が ず れ て く る. VHAのdetectable time も や は り 同 様 に ず れ て く る. 質 問:釜 洞 醇 太 郎(阪 大 微 研) ratioのconstancy がincubateす る 時 の 温 度 に は 無 関 係 だ とい う こ と は HAの 意 義 を知 る 上 に 一 つ の 重 要 な 知 見 と 思 う が, host cellを 変 え た 場 合,例 え ばeggのCAMを 使 つ

た 時 は 如 何.

答:小 田 昌 彦(予 研)宿 主 を 鶏 卵 漿 尿 膜,マ ウ ス脳 内 に 変 え て もPFU/VHA ratioはconstantで, PFU

が 約105.0に な ら な い とVHAは 証 明 で き な い. 質 問:尾 崎 良 克(京 大 ウ 研) 1.ウ イ ル ス 吸 着 後 の 培 養 液 と し て2%血 清 を含 む も の を 使 用 し て い る が, こ の 培 養 液 で72時 間 後 迄 細 胞 側 に 影 響 が な い か. 2. titrationにPock counting法 を 用 い て い る が そ の 価 と 培 養 細 胞 を 用 い て 測 定 さ れ た 価 との 比 較 実 験 が あ れ ば 伺 い た い. 答:小 田 昌 彦(予 研) 1. controlのcellは 少 く と も観 察 期 間 中, 2%血 清 加YLAで 変 化 な い. 2. He La monolayerでPlaque countを し た こ

と が あ る が,こ のtiterは 卵 で のpock forming unit titerよ り1log低 くで る の で,ま だ 実 際 に 利 用 し て

い な い.

6. He La細 胞, L細 胞 に お け るVaccinia

virus, NDV, WEE virusの 増 殖 に つ い

て

金 沢 謙 一(武 田 薬 工 研)

He La, L両 細 胞 系 の 瓶 培 養 に 上 記 三 種 のvirusの 種 々 の 量 を 感 染 さ せ 逐 日培 養 液 の 一 部 を 取 出 し そ のvi

rus量 をp1aque法 で 測 定 し そ の 消 長 を 観 察 し た.尚 CAM suspended Virus, CE monolayerで 培 養 し た

場 合 と の 比 較 も 行 つ た. HeLa細 胞:Vacci nia virus

二 株 ほ ぼ 同様 に 増 殖 しlatent periodは 凡 そ4.5時 間 (CE monolayerで は約5時 間, CAM suspended cultureで は16∼18時 間)で あつ た. NDV(東 京株)は よ く増 殖 しHAも 証 明 されCPも 著 明 で あ る. WEE(培 養 系)の 増 殖 率 は お そ い.(接 種 量 多 けれ ば や ゝ著 明). L細 胞: Vaccinia virusesの 内 IHD株 はHeLa細 胞 に お け る増殖 に近 い が 阪 大 株 で は 増殖 は甚 だ お くれ て か ら始 まる. NDV, WEE virus は共 に増 殖 は僅 かで 活 性virusは 漸 次 減 少 の傾 向 を示 した. 質 問,追 加:多 ケ 谷 勇(予 研)私 ども もL細 胞 に ワ クチ ニア ウ イル ス(大 連1株)を 接 種 して 増 殖 を見 てい るが,金 沢氏 の場 合 と梢 々異 る点 もあ るの で ス ラ イ ドを供 覧 す る.接 種 ウ イル ス量 が大 きい場 合 には, Schererの 云 う よ うに 翌 日細 胞 の 変性 凝 集 を お こす が,細 胞 内,培 養 液 内 の ウ イル ス量 は 有 意 の増 加 を示 し, VHAもCFAも 細 胞 内 に増 加 証 明 され,第2日 以 後 は漸 次 低 下 す る.接 種 ウ イルス 量 が 少 け れ ば,増 加 は 少 い が有 意 の 上 昇 を示 し,や は りそ の 後漸 次 低 下 す る(二 週 間後 まで観 察 した).接 種 量 を種 々に す る と, そ れ ぞ れ接 種 量 に応 じた 曲 線 が得 られ る.こ の 理 由 は 不 明 だ が,明 か に細 胞 内 にVHAの 増 加 の証 明 され る こ と,は つ き りし たPFUの 増 加 が見 られ る こ とか ら, 確 か に ウ イル ス増 殖 は お こつ て い る と思 われ る. Sch ererの 記 載 した"cell agglutination"は,ウ イル ス 増 殖 と分 離 で き る現 象 で あ る こ とは, UV照 射 ウ イル ス に よつ て も この 現象 が お こ りCFAの 増 加 が お こ る が, VHAの 増 加 は な く, PFUの 増 加 も ない と ころ か ら推 定 で きる.こ れ につ い て は 目下 詳 細 検 討 中 で あ る. L細 胞対 ワ クチ ニ アの 増 殖 の特 殊 性 が株 の 相 違 に よ る こ とは,今 年 のChicagoに 於 け るFederation meetingで も発 表 が あ り, L細 胞 で 一 見増 殖 の ない 株 で もadaptし て 増 殖 す る よ うに な る こ とが 明 か に さ れ た.こ れ らの こ とはVariolaウ イル スの 兎睾 丸 内の

態 度 に 似 て い てVariola-Vaccinia, Dermovaccinia-Neurovacciniaの 変 化 のanalogyと し て 興 味 深 い も の が あ る. 次 に 金 沢 氏 に お た ず ね し た い こ と は, eclipse pe riod 4.5時 間 と い う成 績 を 示 さ れ た が,ど の よ う な 方 法 で ウ イ ル ス の 力 価 測 定 を さ れ た か,又,力 価 測 定 の 際 の 誤 差 範 囲 を ど の 位 に 計 算 し て い ら れ る か を伺 い た い. 答:金 沢 謙 一(武 田 研)Dulbeccoの 方 法 に 準 じ て 行 つ た がmediamnは 培 養, OL共LA0.5%牛 血 清10% を 含 む も の を 用 い た.即 ちHeLa瓶(4日 前 培)のme diumを 取 去 りSeed原 液2mlを 感 染 させ36℃-30分 後Hanksで3回Ce11を 洗 い 新medium 8mlを 加 え(0 時 間)再 び36℃-30分 後mediumの 一 部 をA-sample と し て 使 用 他 を 取 去 り再 びHanksで3回 洗 つ た 後 新 medium 8mlを 加 え 以 後3.5h, 4.5h, 5.5h… …9.5h sampleを と つ て 検 査 し た. A: 10-2(13, 14)3.5 h: 10-2(14, 16) 4.5h: 10-2(20, 15), 5.5h: 10-2(52, 50) 7.5h: 10-2(55, 60) 9.5h: 10-3(10, 9)〔 数 字 は 各 シ ャ ー レ のplague数 〕即 ち4.5hと5.5hの 間 に 増 加 が 始 ま る4 (最 初 の30分 を 加 算 す る と5hと6hの 間 に 増 加 が 起 る と い え る).こ の 頃 に な る と 既 に 弱 拡 大 で 細 胞 の 初 期 変 性 が 認 め ら れ る.な お 同 様 な 実 験 は 更 に 繰 返 し て 確 め て み た い. 追 加:釜 洞 醇 太 郎(阪 大 微 研) Vacciniaのvirus releaseが4.5時 間 とい うの は 極 め て 短 時 間 の 様 に 見 え る.我 々 のectromeliaで は 大 体8∼9時 間 以 後 の 様 で あ る.し か し,こ れ はvirusを 得 る 方 法 に よ り, infectivityの 高 さ が,場 合 に よ り 相 当 の 変 動 が あ る 故,時 と し て 常 識 に 反 す る 様 な 時 間 が 出 て も そ の 可 能 性 は 認 め ら れ る が,あ ま り重 要 視 す る必 要 は な い の で は な い か. 7.エ ク ト ロ メ リ ア ・ ウ イ ル ス の 増 殖 に 関 す る 電 子 顕 微 鏡 的 研 究 東 昇,尾 崎 良 克,野 竹 邦 弘 (京 大 ウ イ ル ス 研) 鶏 胎 児 由 来 フ ァ イ ブ ロ ブ ラ ス トに 継 代 し た エ ク トロ メ リ ア ウ イ ル ス を フ ァ イ ブ ロ ブ ラ ス ト に 感 染 さ せ た 系 を 用 い た.培 養 液 はEarleの 液 に0.5%にL. A., 6%に 牛 血 清 を加 え てpH7.2; 37℃ に 培 養.接 種 ウ イ ル ス 量/瓶 は107.2MLD50,吸 着 時 間 は37℃ に2時 間,吸 着 ウ イ ル ス 量/瓶 は1.4×107MLD50で あ つ た. この よ う な実 験条 件 に おい て,感 染24時 間, 48時 間 後 の 細 胞 をGiemsa, H. E.で 染 色 し 光 学 顕 微 鏡 的 に 鏡 検 し,一 方 感 染6時 間, 12時 間, 24時 間, 48時 間後 の感 染 価 を測 定 し,ま た電 顕 用 標 本 は正 常細 胞 感 染8 時 間 後, 24, 48, 72時 間後 の 細 胞 の 超 薄 切 片 を鏡 検 し た. 光 学 的 にみ る とす べ て の細 胞 に封 入 体 を認 め た が, そ れ はMarchal bodyが 圧倒 的 に 優 勢 で あつ た.電 顕 的所 見 を要 約 す る と次 の 如 くで あ る. (1) 8時 間感 染 細 胞 に お い て はす べ て 封入 体 は小 型 で内 部 に顆 粒 を認 め るが,そ の大 きさは ウ イル ス粒 子 よ り小 さ く形 態学 的 所 見 よ りウ イル ス粒 子 で な い こ とが分 る. (2) 24時 間 ∼48時 間後 に お い て は大 型 の封 入 体 が認 め られ7特 に 強 調 す べ きは 二重 膜 を もつ 成 熟 ウ イル ス粒 子 が 封 入体 の 表 面 に 並 び,そ の若 干 は 封 入体 表 面 よ り飛 び だ して い る. 72時 間後 に おい ては 上 述 の所 見 に加 え る に封入 体 内 に 空 胞 形成 が顕 著 に なつ て く る.之 等 の 標 本 にお い て成 熟 ウ イル ス粒 子 の 所 謂 核 質 部 に 糸状 乃 至 紐 状 の 構 造 を認 め,そ れ はDNAの ア グ レ ゲ ー と解 釈 す る. この 実 験 か ら封 入 体 内 に お け る ウ イル スの発 育 は次 の よ うに考 察 され る.封 入 体 内 部 にお い て 増 殖 し発 育 し 発 育 を完 了 した粒 子 は封 入 体 の 表 面 に 向 つ て移 動 し, 表 層 に並 び,つ い に細 胞質 へ 放 出 され て ゆ き隣 切の イ ン タ ク トの 細 胞 に感 染 す る よ うに な る.細 胞 の側 の変 化 は核 は感 染 後 期 まで お か され ない.細 胞 質 内 ユ ニ ッ トの変 化 とし て は, Endoplasmic reticulumと,ミ トコ ン ドリア で あ ろ う と思 わ れ る. 追 加:金 沢 謙 一(武 田 研)か つ て, Ectromelia virusの マ ウ ス脳 内 接種 実 験 を行 つ た 際,脳 表 面 の塗 抹 標 本 の媒 染 染 色 標 本 の 光 学 顕 微鏡 所 見 でEKは あた か もmatrixの 上 に並 ん だ 様 に 見 え る と述 べ た が,只 今 拝 見 したEM像(殊 に48時 間 目の もの)と 対 比 して 甚 だ興 味 を感 じた. 質 問:室 谷 光 三(札 医大 病 理) 1.糸 粒 体 の変 化 は どの様 で あつ た か.私 共 の研 究 で は 種 々 の ウ イル ス感 染 細 胞 の電 顕 像 で は,無 機 物(四 塩 化 炭 素,黄 燐 な ど) 処 置 の場 合 同様,そ の 初期 像 とし て糸 粒 体 の 膨化 淡 明 化 が認 め られ,一 方 凝 集 化 或 は脂 肪 顆 粒 へ の 変化 を示 す もの もか な り認 め てい る(以 上 主 とし て肝 細 胞 の所 見). 2.ギ ー ム ザ染 色 で ア ズー ル好 性 の様 に見 られ た も の は,電 顕 の 上 でmatrix様 に ウ イル ス粒 子の 小 集 団 の形 成 され てい る もの に相 当 す る もの か.

3.多 数 形 成 さ れ て い る 封 入 体 の 染 色 性 は, Mar chal封 入 体 の も の と 同 様 か. 答:東 昇(京 大 ウ イ ル ス 研)(室 谷 氏 へ) 1.ミ トコ ン ド リ ヤ の 変 化 はcrista intermitochon drialに 主 な 変 化 が あ る と思 う.外 側 の 膜 のdouble structureは 最 後 ま で くず れ な い.

2. matrix areaに お け るelectron denseの 顆 粒

に つ い て 意 義 あ る像 は 今 日 の と こ ろ認 め て い な い. (金 沢 氏 へ)興 味 あ る 一 致 し た 所 見 か と も思 うが 本 質 的 に 一 致 か 否 か に つ い て は 検 討 を 要 す る.も つ と く わ し く云 え ば 光 顕 で 見 た 表 在 性 顆 粒 は 単 な る粒 で あ つ て 電 顕 の 如 くに 粒 子 の 構 造 ― そ れ を 見 て そ れ が 成 熟 途 中 の も の か 成 熟 を 完 結 し た も の か が わ か る― か ら粒 子 の 性 格 を 知 り得 な い か ら で あ る.私 の 論 点 の 焦 点 は 表 在 性 基 本 小 体 は 成 熟 を 完 了 し て い る と い う こ と で あ る. 追 加:釜 洞 醇 太 郎(阪 大 微 研)我 々 がL-strainの 組 織 培 養 でectroを か け る とhigh titerのVirusで20

時 間 後, A, B両 方 の 封 入 体 は 明 ら か に 見 ら れ る. B の 輪 廓 は 円 形 で 周 囲 は 明 瞭 で あ る. 8.日 本 脳 炎 ウ イ ル ス の 組 織 培 養 に 関 す る 研 究 永 井 勝 次(京 都 府 立 医 大 微 生 物) 日本 脳 炎 ウ イ ル ス(中 山 株)を 用 い てRoller tube

culture(R. T. C)とTrypsinized cell culture(T. C. C.)

を 併 せ て 行 つ た.培 養 に 用 い た 栄 養 液 はHants或 は Simms, chick embryo extract, serumを 使 用 し 猿 の 腎 細 胞 或 はHeLa細 胞 に は 各 々 個 有 のgrowth me diamを 用 い た.培 養 に 用 い た 組 織 は 人 胎 児,鶏 胎 児, 牛 胎 児,マ ウ ス 胎 児,猿 の 腎, HeLa細 胞 及 びEhrli chの 癌 細 胞 で あ る.組 織 培 養 に 際 し 始 め に 問 題 に な る の はpHで 組 織 量 の 多 い 時 に は 早 く酸 性 に な る の は 勿 論 で あ る,而 し 組 織 の 増 生 はpH7∼8が 最 も よ く virusはpH7.5がtiterが 高 くpH6.0で も相 当virusは 存 在 し て い る.私 が 実 験 に 用 い た 組 織 に お い て は ど の 組 織 が 特 別 に 良 くvirusの 増 殖 を 示 す と云 う も の は な く大 体 等 し い 値 を 以 て 増 殖 しR. T. C.とT. C. C.と の 関 係 はR. T. Cの 方 が24時 間 早 くtiterの 上 昇 を 示 し た. R. T. G.の 方 は48時 間 がtiterが 最 高 で 次 に72, 24時 間 と な る がT. C. C.の 方 は72時 間 が 最 高 で 次 が48, 96, 24 時 間 と な る.又virus量 が 多 い か ら と 云 つ てvirusの 増 殖 が 高 い と は 限 ら な い.例 え ば 接 種 量 と し て 原 液 の 10-2稀 釈 と10-4稀 釈 と を 用 い た 時10-4を 培 養 し た 時 の 方 が 高 い 成 績 を え た.又10-8稀 釈 を 培 養 し て も 相 当 量 のvirusを 得 る こ と が 出 来 る が そ の 増 殖 の 状 態 は 濃 厚 なVirus接 種 の 場 合 と 同 様 なcurveで あ る. 日本 脳 炎 ウ イ ル ス のCP-effectに つ い て 種 々 問 題 に な る がCP-effectは 現 在 迄 の と こ ろ で は “培 養 組 織 の 変 性,壊 死 ” を 認 め る も の を以 て そ の 定 義 と さ れ て い る が 然 し 培 養 を 行 つ た 正 常 細 胞 がvirus感 染 に よ つ て macro或 はmicro又 は 特 殊 染 色 を 要 す る か 否 か に か ゝ わ ら ず 何 等 か の 変 化 を 示 す こ と を も広 義 に 於 てCp-effectを 有 す る と い う こ と を 定 義 と す る な ら ば 日本 脳 炎 ウ イ ル ス も 亦CP-effectを 有 す る と 云 う こ と を 培 養

組 織 のH-E染 色, giemsa染 色, Sudan black染 色, methyl green pyronine染 色 所 見 に よ つ て 認 め た.

質 問:石 田 名 香 雄(東 北 大 医 細 菌) 1. chicken fi broblastは1体 何 日位 試 験 管 か ら は な れ な い で 保 つ

か.

2. Ehrlich tumor cel1の 培 養 法.

3. degenerationが 起 る 時,起 ら な い 時 の 差 の 原 因.

答:永 井 勝 次(京 府 医 大 微 生 物) 1.組 織 培 養 は fibrolblastの み で な くHeLa cell, Monkey kidney

等 ど ん な 細 胞 で もgrowth factorが 濃 厚 で あ れ ば 早 く は な れ る の で 漸 次 組 織 を生 長 させ る とfibroblastで は

10∼15日 ぐ ら い は 培 養 で き る 又 試 験 管 に 入 れ る細 胞 の

量 に も影 響 され る.

2. Ehrlich tumor cellは15g前 後 のmouseに 植

よ

え て6∼8日 頃cellを 取 り だ し てPBS(-)で1000rpm で3分 間 ぐ らい 遠 心 を2回 く り返 し 細 胞 数 を 多 く入 れ る と 急 にpHが 酸 性 に な る が 適 当 量 を 加 え る 栄 養 液 は

Hanks 50∼60% chickembryo extract0.5∼2% se-rum40∼50%で そ の 中 に 浮 遊 し,培 養 す る とEhrlich tumor cel1がfibroblastの 如 く成 長 す る. 3. degenerationが 起 る,起 き な い と 云 う こ と は 難 か し い 問 題 だ が,同 じ栄 養 液 で 同 じ 操 作 を 行 つ て も degenerationを 起 す 時 と起 さ な い 時 も あ る の でCP-effectに つ い て の 実 験 に は 取 り除 く よ り仕 方 が な い. 質 問,追 加:吉 岡 勇 雄(北 研) chik embryo由 来 のfibrolastのplasma clotし たRoller tube法 で mediumlをlactalbuminを0.1∼0.3%に 含 むHanks

液 と し た 場 合JBE virusに よ り3∼4日 後 にcytopa-thogenic effectを 認 め る.マ ウ ス に お い て10-7∼ 10-8のtiterを も つvirusを 用 い る とTCで は10-4∼10-5

のtiterでCPが 認 め ら れ る.こ のCPは 中 山 株 に よ る モ ル 免 疫 血 清 で 中 和 され る がSLEに よ る モ ル 免 疫 血

清 では 中 和 され ない. fluidを 用 い て 継 代 が 可能 で あ りCPも 継 代 毎 に認 め られ る.但 しfluidをdeep free zer中 に長 く保 存 す る とこ のfluidは マ ウ ス に対 す る 病 原 性 もTCに 於 け るcytopathogenicityも 失 わ れ る. 答:永 井勝 次(京 府 医 大 微生 物)組 織 培 養(T. C) を行 つ て そ の栄 養 液 を取 り,新 し く栄 養 液 を加 えて 培 養 組織 に移 植 す る場 合, 1代 か ら2代 ∼4代 か ら5代 とい う時 にLD50を 測 定 す る場 合 にmouseが 発病 し な い場 合 が しば しば あ るが今 日出 したpassageの 表 は1 ∼2回 の成 績 では な く10数 回 く り返 した もの で あ る. T. Cに よつ てvirusが 変 化 す る こ とは考 え ら れ る, degenerationの 問題 で あ るが 同 じ操 作 に よつ て起 る 場 合 が あ るの で,そ うい う対 照 の 場 合 は 除 か な けれ ば な らない.私 が 使 用 した組 織 の 中 で猿 の 腎 細 胞 がde-generationは 少 いの で そ れ らに つ い て 主 に実 験 に用 い た.し か しfibrohlastで もdegenerationを 起 さ な い 時 は これ も用 い た. 追 加:北 岡 正 見(予 研)組 織 培 養液 に添 加 す る栄 養 素 を減 少 す る こ とに よつ て,日 本 脳 炎 ウ イル スに 対 す る細胞 変 性 度 を高 め よ うとの 実験 は か つ て試 み た が, 只今 北 研 の吉 岡 君 が 報 告 され た よ うな所 見 は 得 られ な か つ た.と い うの は 非 特異 的変 性 との 区別 が 困 難 で あ つ た か らで あ る.今 日の と ころ デ トロ イ ト6細 胞 を用 い れ ば変 性 が 認 め られ る とい われ てい る こ と を附記 し て置 く. 9.日 本 脳 炎 ウ イ ル ス の 組 織 培 養 上 に お け る 2, 3の 問 題 に つ い て 豊島 滋,加 納 清 三 郎(大 日本 製 薬 研) 日本 脳 炎 ウ イル スのHeLa細 胞 に よ る培 養 法 につ い て基 本 的 条件 を明 らか に な して,そ の増 殖 曲線 を求 め, また この と きに お こ るウ イル スのpersistent growth を種 々の 立 場 よ り検 討 し この こ とに つ い て一 つ の 可 能 な説 明 と してanto interferenceの 現 象 を明 らか に し た.す な わ ちHeLa細 胞 に よ るウ イル スの 増 殖 は18時 間 頃 よ りお こ り,次 第 に上 昇 して3日 目で 約104.5に到 る0ウ イル ス のinoculum sizeは10-2が もつ と も適 当 で あ る. 10-4以 下 で は ウ イル ス増 殖 は お こ ら ない 。 実 験 の バ ラ ッキはLD50±0.2で あ る 。培 養 液 と して は 人 血 清 を加 え たYLAが もつ と もウ イル ス増 殖能 率 が よい.次 に 一度 感 染 した細 胞 か らは,ウ イル スは た え ず 少 量 ず つ放 出 して い る.こ の現 象 は 細 胞 を継代 して も,ま た免 疫 血 清 を加 えて も,ま た コ ル ヒチ ンに よる 細 胞分 裂 の異 状 化 を計 つ て も同様 で あ る。 但 し免 疫 血 清 を加 え る と加 えた 状 態 で は ウ イル ス増 殖 は み られ な い が,こ れ を正 常 培 養液 に も どす と再 び 増 殖 が お こ る.こ の 様 な現 象 は お そ ら くウ イル スのauto inter-ferenceに よ る もの で あろ うこ とを培 養 液 の 交 換 方 法 に よつ て お こ る干渉 現 象,加 熱 ウ イル ス に よつて お こ る干 渉 現 象 及 びUV不 活 化 ウ イル ス に よつ て お こ る干 渉 現 象 等 に つ い て し らべ,こ れ らの結 果 か ら上 述 の現 象 の 説 明 の1つ と考 えて い る. 追 加:北 岡 正 晃(予 研)日 本脳 炎 ウ イル スが 自 己 の 不 活化 ウ イル スの 添 加 に よつ て干 渉 が起 るで あろ う こ とは,他 の ウ イル スの そ れ か ら推 定 され る こ とで は あ るが,こ れ が客 観 的 証 明 に は更 に多 くの 実 験 が重 ね ら るべ きで あ る. 10.人 間 の 羊 膜 上 皮 細 胞 に よ る ポ リ オ ・ ウ イ ル ス の 組 織 培 養 遠 藤 元 繁,林 田 利 信,浅 川 浩 (伝研 第 二細 菌) 草 野 信 男,青 山 友 三(伝 研 病 理) 水 野 伝 一,竹 森 栄 子(予 研 化 学) ポ リオ ワ クチ ン研 究 の基 礎 的 実 験 と して私 共 は羊 膜 細 胞 に よ るポ リオ ・ウ イル スの 培 養 を行 つ た. 羊 膜 細 胞 の培 養 方 法: 1)正 常分 娩 の 羊 膜 を0.25% trypsin-Hanks液 (Difco 1:250)に 入 れ 室 温 に4∼5時 間 放 置 す る. 2)液 _{が不 透 明 に な る まで コル ベ ン を振 と うす る.} 3)液 を遠 心 管 に入 れ800回 転5分 間, 2回 遠 心 す る. 4) 1枚 の 羊膜 か ら 普 通1∼1.5mlの 細 胞 が とれ る か ら,こ れ を培 養 液 で0.5%∼1%の 細 胞 浮 游液 と試 験管,或 は培 養 びん に分 注 し, 37℃ の ふ らん 器 に静 置 す る. 5) 48時 間 後 に培 養 液 をか え,以 後P. H.の 変 化 に 応 じて液 を交 換 す る. (培養 液): 0.5% Lactalbumin hydrolysate-Hanks 液 に20%割 に 牛血 清 を加 え る. 以 上 の 方 法 で培 養 す る と24∼48時 間 で細 胞 の 分 裂 像 が 見 られ1週 間以 内 で細 胞 シー トが 出来 る. ポ リオ ウ イル ス に よ る羊 膜 細 胞 の病 的変 化;細 胞 全 体 が 収 縮 し,核 の 変 形 と同 時 に核 の そ ば にcytoplas-mic mass(eosinophilic mass)カ ミ生 じ,増 大 して核 を と りか こむ か,核 を細 胞 周 辺 に お しつ け る. cyto-plasmはlbasophilieに か た む きbubhlingを と もな い 細 胞 外 に 流 出 し,核 とeosinophilic massだ けが残 る

よ うに な る. ポ リオ ウ イル スの 増 殖: No. 199合 成 培 養液 を簡 単 に した 私 共 の処 方 に よる無 蛋 白半 合 成 培 養 液 を使 用 し,ポ リオ3型 ウ イル ス を培 養 し た が増 殖 は48∼72時 間 で最 高 に達 し, 10-6∼10-7 の値 を示 し た. 質 問:六 反 田藤 吉(熊 大 医 微 生 物)私 た ち の実 験 で は 羊膜 組 織 の 発 育 は妊 娠 月数 の 長 短 とは余 り関 係 な か つ た が,組 織 を採 取 して か ら使 用 まで の 時 間 の長 短 に よつ て発 育 が 著 し く影響 され るの で,な るべ く早 く 使 用 す る必 要 が あ るが,演 者 は何 れ 位 の 保 存後 に使 用 され た か 。又,羊 膜 組織 の継 代 培 養 を試 み られ た か. 尚,只 今 の表 で はVirusの 増 殖 は107以 上 位 で あ つ た が,私 達 は前 に104∼105位 と申 し たが そ の 後 培地 を改 良 す るこ とに よ り漸 次 上 昇 して い る. 答:遠 藤 元繁(伝 研)で きる だ け早 く使 用 す る が 保 存 す る場 合 はHanks液 中 に入 れ て お けば1∼2日 は使 用 に た え る. 継 代 は2∼3代 迄 は非 常 に よ くは え るが, 6∼7代 で不 成 功 に おわ つ た.培 養液 の改 良 等 を して 更 に試 み るつ も りでい る. Foghはstrainを つ くつ た と 報 告 して い るが,こ れ が 正 常 羊 胞 上 皮 細 胞 で あ る か ど う か,よ く吟 味 し なけ れ ば な らな い と思 つ て い る. 質 問:北 岡 正 見(予 研)ポ リオ ウ イル スは,人 の 羊 膜細 胞 を用 い て も培 養 可能 で あ るが,そ の 際lac-talbumin, yeastと い う単 純 な組 成 で も可 能 で ある. 羊膜 細 胞 の累 代 培 養 は 可能 で あ る が,数 代 で 中絶 す る こ とは 同感 で あ る. 答:遠 藤 元 繁(伝 研)マ グ ネ テ ィ ック ス タ ラー で 攪 絆 す る と成 績 は 悪 い. 質 問:東 昇(京 大 ウ イル ス研) 1. eosinophilie massをinclusionと 老 え る こ とは で きない か. 2.ウ イル ス増 殖 の 場 合 は核 質,細 胞 質 の 何 れ か. 答:遠 藤 元繁(伝 研) 1.電 子顕 微 鏡 な どで更 に くわ し く検 討 し たい と思 うが現 在 は, virusの 集 合 と して の意 味 に お け るinclusionと は老 え てい ない.そ れ 故 にmassと い う漠 然 と した言 葉 を我 々は つ か つ て い る. 2.こ のeosinophilic massは 核 内 か ら も 出来 るか も知 れ ない が,原 形 質 内で で きて く る像 の方 が 顕 著 で あ る. 質 問:本 間 守 男(東 北 大 医 細 菌) 1. growing mediumと してbuffer actionの 弱 いHanksを 使 用

され て い る がEarleを 用 い てstarting pHを 下 げ てや る と ど うか.

2. mediumか らyeast extractを 抜 い た理 由は. 3.室 温 は 何 度位 か. 答:遠 藤 元 繁(伝 研) 1. HanksとEarleに つ い てstarting p. H.を 同 じ に して 比較 し た がHanksの 方 が成 績 が よい. 2.初 代 培 養 の 時yeast extractを 入 れ る と,細 胞 が ガ ラ ス には りつ きに くい こ と を時 々経 験 す る. Yeast extractの 中 のfatの 量 が関 係 す るの で は な い か と思 う. 3.夏 冬 で 大 い に ち が うが, 22∼3° 位 が よい と思 う. 11.組 織 培 養 に よ るNewcastle Disease Vi rusの 培 養II.鶏 成 体 脾 臓 組 織 培 養 に よ るVirusの 増 殖 林 昇(日 生 研) NDVは 鶏 胎児 組 織 培養 中 では 比 較 的 に容 易 に増 殖 し,培 養 条 件 に左 右 され るこ とが少 い が,鶏 成 体 組 織 培 養 中 で は さほ ど容 易 に増 殖 せ ず,培 養 条 件 に左 右 さ れ る こ とが多 い.演 者 は そ の ウ イル ス増 殖 力 の 弱 い成 鶏組 織 を 用い て,し か もな る べ く大 量 培 養 に応 用 で き る方 法 に よ り,鶏 胎 児組 織 培養 あ るい は 人 工感 染 鶏 の 臓 器 の程 度 まで,更 に は そ れ以 上 の 程 度 まで ウ イル ス 価 を高 め たい と思 つ て 研 究 を行 つ てい る. 第1回 の本 学 会 で, NDVは 鶏 胎 組 織 の 液 浮 游 培 養 に よ り10-6.5∼10-7.5,成 鶏 脾 臓 の 同 法 培養 に よ り10-4.5内外 の ウ イル ス価 を示 した が,成 鶏 脾臓 の場 合 で も培 養 液 に鶏 血 清 を加 え,組 織 を紙 に固 定 す る こ とに よ り,ウ イル ス価 を1∼2桁 高 め る こ とが で きた こ と を報 告 し た.今 回 は そ の後 行 つ た実 験 の成 績 に つ い て 報 告 す る. 培 養組 織 は3∼5ヵ 月令 の 鶏 の脾 臓,ウ イル スは佐 藤 株 を用 い,通 常 組 織 を紙 に 固定 し培 養 液 に鶏血 清 を 加 え, 37℃ に3日 間 培 養 した.培 養 液 の ウ イル ス価 は 発 育 鶏卵 接種 法 に よ り測 定 した. 現 在 まで に培 養 組 織 量,組 織 固定 材 料 の 種 類,培 養 温 度,培 養液 のpH,培 養 溶 器 中 の ガ スの交 換,培 養 液 に薬 物 添 加, Rocking培 養法 な ど培 養 条 件 の検 討 な い しは改 良 と思 われ る方 法 を試 み て見 た が,特 に 良 い 成 績 を得 る こ とは で きなか つ た. と こ ろが, Rolling培 養 法 は 静 置 法 よ りや ゝ良 い成 績 を示 した.ま た,培 養 組 織 量 を若 干増 加 し,培 養液

を毎 日1∼2回 交 換 す る方法 をRolling培 養 法 に加 え た と ころ,ウ イル ス価 は 更 に上 昇 し, 10-6.5∼10-7.5を 示 す よ うに なつ た. なお本 病 に免 疾 して い る鶏 の 脾臓 を 用い た 培 養 で も,培 養 液 に加 え る血 清 が 正 常血 清 な らば,正 常組 織 を用 い た場 合 と殆 ん ど同 程 度 に ウ イル ス は増 殖 した. 追加:林 昇(日 生 研)  Newcastle病 ウ イル ス で 比較 的 良 い成 績 を示 した 培 養液 交 換 法 を豚 コ レ ラ ウ イル スの成 豚 脾 臓 組 織 培 養 に応 用 して見 た.ウ イル ス 価 の測 定 は培 養 液 の豚 接 種 試 験 に よつ た.培 養 ウ イル ス価 は 組織 浮 游法 で10-5,組 織 紙 固 定浮 游 法 で10-6, 廻 転 法 で10-7で あつ た が,培 養 液交 換 法 で は10-7を 示 した.こ の ウ イル ス価 は 人 工 感 染豚 血液,脾 臓 の ウ イ ル ス価 に 匹 敵 す る.こ ゝに一 つ 興 味 あ る こ とは これ ら 培 養 液 を接 種 した豚 の潜 伏 期 問 で,そ れ が各 培 養 の 最 高 稀 釈 液 を接 種 した 場合 で も,この 培 養液 交 換 法(10-8 cc)に よ る潜 伏 期 間 が その 他 の 方 法 の そ れ よ り著 し く 短 かか つ た.こ れ らの培 養 液 を用 い て つ くつ た予 防 液 の うちで は 培 養液 交 換 法 に よつ た もの が 最 も優 れ た 効 力 を示 した. 質 問:荒 川 清 二(伝 研)  Galloway博 士 のVirus Instituteで 口蹄 疫 の組 織 培 養 で 単 に酸 素 だ け の場 合 よ りCo2を 少 量(5%)入 れ た方 が 大 変 よい成 績 を え て い た よ うに思 う.い ろ い ろCo2の 組 成 をか え てや れ ば よい成 績 がCo2で もえ られ るの では なか ろ うか. 答:林 昇(日 生 研)  将 来 実 施 した い. Fren kelら がCo2を 用 い た主 目的 は 培 養 液 のpHを 規 正 す る こ とに あつ た と思 わ れ るが,演 者 の 場 合 はpHは 培 養 容 器 の栓 の種 類 と組織 量 とに よつ て規 正 した こ とは先 に述 べ た通 りで あ る. 質 問:東 昇(京 大 ウ イル ス研)  1.Milzを 培 養 し た と きに培 養 され た細 胞 の 種 類 は 常 に同 一 な りや 否 や. 2.ウ イル スは 新 生 細 胞 の方 で増 殖 して い る の で は な い か,組 織 そ の もの と ウ イル ス の増 殖 と関係 が あ る か 。 答:林 昇(日 生 研)  1.培 養 され た 細 胞 は概 ね 同 一 の種 類 で あ るが,培 養後 増 殖 した 細 胞 の種 類 に つ い て は厳 密 な調 査 を行 つ て い な い. 2.新 生 細胞 に よつ て も ウ ィル スは 増 殖 す るが,こ の 実 験 の 場合 の ウ イル ス増 殖 の 場 と して は どち らか と い えば,培 養 組 織 その もの に重 さ をお い て考 えた い. 質 問:甲 野礼 作(公 衆 衛 生 院)  1.液 交 換 法 に よつ て高 い ウ イル ス価 が得 られ る とい うが,そ の際 の 細 胞 変 性 は ど うか.も し強 い変 化 が あ りとす れ ば演 者 の い う よ うな連 続 的 の ウ イル スの 放 出 は 起 らぬ と思 うが. 2.綿 栓 の こ とで あ るが,我 々の 組織 培養 で は,密 栓 し ない 限 りpHが 上 つ て組 織 は 生 育 し得 ず,し た が つ て ウ イル ス価 も上 らない の が 普 通 で あ る. pH等 の 変 化 は ない の か. 我 々 は かつ て 胎 児 を除 い た孵 化 鶏 卵 にNDVを 培 養 し,培 養 液 を交 換 して ゆ く とNDVの 連 続放 出 が見 ら れ るが,ウ イル ス総 量 は交 換 し ない 場 合 と差 が ない. 演 者 の液 交 換 法 が 前 記 の実 験 と同 じ カ テ ゴ リーの もの で あ る とす れ ば,ウ イル ス価 の 総 量 は 交 換法 は特 に優 れ て い る とは云 え ない の で は な い か. 答:林 昇(日 生研)  1.細 胞 変 性 は 培 養液 交 換 の有 無 に かか わ らず起 つ て い る が,培 養液 交 換 に よ りあ る時 期 に お け る培 養 ウ イル ス価 が 高 す ぎ る こ と は,実 験 結 果 か ら見 て 事実 と思 う.演 者 は そ の 最高 の 時 期 をね らつ た もの で あつ て,ウ イル ス価 の 総 量 を問 題 に して い るの では ない. 2.こ の場 合 のpHの 規整 は容 器 の綿 栓 と培 養組 織 量 との 両者 に よつ て行 つ た.ゴ ム栓 を用 い た 場 合,組 織 量 が 培 養液 量 の1%以 上 の と きはpHは 速 か に酸性 に 傾 き,綿 栓 を用 いた 場 合 は組 織 量1%で は ア ル カ リ 性, 7%で は酸 性 に傾 き易 く, 3∼5%で は 移 動 が少 く,か つ組 織 量1∼5%の 場合 は綿 栓 を用 い た 方 が ウ イル ス価 も高 か つた こ とは さ きほ ど報 告 した 通 りで あ る. 質 問:室 谷光 三(札 医 大 病 理)  免 疫 の鶏 の 脾臓 で もほ ぼ 同 様 の ウ イル ス増 殖 を認 め た との こ と で あ る が,ウ イル ス接 種 後 の 日教 との 関係 は如 何. 宮 田の 実 験 で は,ウ イ ル スは異 るが,牛 痘 ウ イル ス を用 い た 家 兎脾 臓 の培 養 に よ る と,種 々 の免 疫 臓 器 片 の 洗 滌 後 培 養 で か な りウ イル スの増 殖 を認 め て い る が,免 疫 の 脾臓 で は先 人 の 成 績 同様 増 殖 し難 か つ た. 答:林 昇(日 生 研)  Newcastle病 予 防 液 を鶏 に注 射 して か ら10日 目 にchallengeし,そ のの ち約2 週 免 疫 が 相 当強 度 で あ る と思 わ れ る時期 に接 材 した. 質 問,追 加:分 木通 裕(三 重微 生 物)(質 問)1)組 織 培 養 に よ り発 育 し て くる細 胞 の種 類 は何. 2)免 疫 家 鶏 か らspleenを と りだ した 時 の, H1抗 体 価,中 和 抗 体 価 は どの位 か. (迫加)1.紙 に組 織 を 固定 す る こ と,液 交 換 をす る こ と等 に よ り, NDVのgrowth cuveが 上 る とい う