山 梨 肺 癌 研 究 会 会 誌24巻2011
肺癌切除標本におけるEGFR遺 伝子変異検索に関す る検討
市立甲府病院 呼吸器外科
外科
呼吸器内科
病理診断科
宮澤正久
赤池英憲
佐藤亮太
宮 田和幸國光多望
三井文彦
山家理 司國友和善
大木善之助
千須和寿直
西川 圭 一 巾 芳昭 ノ」・澤 克 良 要 旨:肺 癌切 除標 本 に てEGFR遺 伝 子 変 異 検 索 を行 っ た36例 に つ き検 討 した。 測 定 は 手術 検 体 の パ ラ フ ィ ン包 埋 標 本 か ら薄 切 切 片 を作 製 し、 高 感 度 法(PNA-LNA PCR clamp法)を 用 い て 行 っ た。1例 を除 き測 定 可能 で あ り測 定 成 功 率 は97.2%で あ っ た 。 対 象 症 例 全 体 の 遺伝 子 変 異 陽 性 率 は51.4%(18/35)で あ り、女 性 、腺 癌 、非喫 煙 者 に お け る陽 性 率 は それ ぞれ77.8%、 75.0%、82.4%と 高 率 で あ っ た。BAC成 分 を もつ 腺 癌 に お い て 陽 性 率100%、 ま た 、女 性 、腺 癌 、非 喫 煙 者 の3因 子 を満 た した場 合 も陽 性 率100%で あ った 。非腺 癌 の 陽 性 例 は な か っ た。 EGFR遺 伝 子 変 異 検 査 に 切 除 標 本 を用 い る こ とは 、確 実 に腫 瘍 組織 を 含 ん だ 検 体 を提 出す る こ とに よ り偽 陰 性 を な くす とい う利 点 が あ り、 術 後 再 発 時 に お け る治 療 法 の 適 切 な 選 択 に つ な げ られ る と考 え られ た。 キー ワー ド:肺 癌 、EGFR遺 伝 子 変 異 検 査 、切 除 標 本 は じめ に 2004年 、非 小 細 胞 肺 癌 にお い て 上皮 増 殖 因 子 受 容 体(EpidermalGrowthFactor Receptor:EGFR)遺 伝 子 変 異 の存 在 が 明 ら か に な り、EGFR遺 伝 子 変 異 の あ る肺 癌 で は gefitinibが 奏 効 す る こ とが 見 い だ され た i)2) 。 そ の 後 複 数 の第 皿相 臨床 試 験3)4)の 結 果 が 発 表 され 、EFGR遺 伝 子 変 異 陽 性 症 例 に お い てgefitinibが プ ラチ ナ 併 用 化 学 療 法 に比 し、有 意 に 無増 悪生 存期 間 を延 長 す る こ とが 示 され た。 これ らのevidenceよ り 肺 癌 領 域 にお け るEFGR遺 伝 子 変 異 検 査 の 重 要性 は ます ます 高 ま り、EGFR遺 伝 子 変 異 が あ れ ば フ ァー ス トラ イ ンか らgefitinib 治療 の 可 能 性 が あ る こ とか ら、診 断段 階 で のEGFR遺 伝 子 変 異 検 査 が推 奨 され て き て い る5)。EGFR遺 伝 子 変 異 検 査 は2007年6 月 に 保 険 収 載 され 、 当 院 に お い て は2009 年4月 よ り非 小 細 胞肺 癌 手 術 症 例 に お い て は 、原 則 切 除 標 本 に てEGFR遺 伝 子 検 査 を 施 行 す る こ と と した。 今 回 、 肺 癌 切 除 標 本 に お け るEGFR遺 伝 子 検 査 につ い て検 討 を 行 った 。 対 象 と方 法 2009年4月 以 降 に手 術 を施 行 した 非 小 細 胞 肺 癌 症 例 中 、肺 癌 切 除 標 本 に てEGFR遺 伝 子 変 異 検 査 を施 行 した36例 を 対象 と し た。 検 体 作 成 につ い て は 、20%ホ ル マ リン に24∼48時 間 切 除 検 体 を 固 定後 、 パ ラ フ ィ ン包 埋 標 本 を作 製 、癌 の代表 的組 織 所 見 を 呈 し癌 の 割 合 が 高 い 部 分 に つ き厚 さ10 ミク ロ ンの 切 片 を5切 片 作 成 した。 検 査 は PNA-LNAPCRclamp法 に て 行 っ た。 測 定成 功 率 、変 異部 位 お よび 組織 型 ・性 別 ・喫 煙 歴 に 着 目 した 変 異 陽 性 率 等 に つ き 検 討 を 加 えた 。 結 果 対 象36例 の 年 齢 は28∼84歳(平 均69.8 一34一平 成23年4月1日
歳)、 男 性18例 ・女 性18例 、喫 煙 者19例 ・ 非 喫 煙 者17例 で あ った 。 組 織 型 は 腺 癌25 例 ・扁 平 上 皮 癌10例 ・他1例 、病 理 病 期 はIA23例 ・IB2例 ・HA1例 ・ilBl例 ・ 皿A8例 ・IVI例 で あ っ た。 対 象36例 中1 例(男 性 ・喫 煙 者 ・腺 癌 ・IA期)の み 測 定 が 不 可 能 で あ っ た が他35例 で 測 定 が 成 功 し成 功 率97.2%で あ っ た。 変 異 陽 性 は35 例 中18例 で陽 性 率51.4%、 陽 性18例 の 変 異 部 位 はExon21(L858R)が9例 、Exon19 の 欠 失 変 異 が8例 、Exon18が1例 で あ っ た 。 棚1」陽 性 率 は 男 性23.5%(4/17)、 女 性77.8%(14/18)で あ り、喫 煙 歴 別 陽 性 率 は 喫 煙 者22.2%(4/18)、 非 喫 煙 者82.4% (14/17)で あ っ た 。 組 織 型 で は 腺 癌 の 陽 性 率 が75.0%(18/24)、 うち細 気管 支 肺 胞 上 皮 癌(BAC)typeは8例 全 例 陽 性 で あ り 非BACtypeは62.5%(10/16)の 陽 性 率 で あ った 。 扁 平 上皮 癌 な ど非 腺 癌 症 例 の陽 性 例 は な か っ た(図1)。 性 別 ・喫 煙 ・組 織 型 の3因 子 の組 み 合 わ せ に着 目す る と、女 性 ・腺 癌 ・非 喫 煙 に お い て100%陽 性 (13/13)、 男性 ・腺 癌 ・喫 煙 で は33.3% (3/9)の 陽性 率 で あ っ た。
40
症例 数
35
30
25
20
15
10
5
0
■ 変 異(一)
ロ 変 異(+)
喫
煙
者
非
喫
煙
者
非
腺
癌
腺
癌
男
性
女
性
全
体
図lEGFR遺 伝子変異検査結果 一35一山 梨 肺 癌 研 究 会 会 誌24巻2011 考 察 当院 で はEGFR遺 伝 子 変 異 検 査 が保 険 収 載 され た2007年6月 を契 機 に 、 非 小 細 胞 肺 癌 に 対 し原 則 全 例EGFR遺 伝 子 変 異検 査 を行 っ て い る。 そ の な か で 山家 ら のは気 管 支 鏡 下検 体 等 、 手 術 検 体 以 外 で測 定 を行 っ た130例 に 関 す る結 果 を報 告 し変 異 陽 性 率 は28.5%(37/130)で あ っ た と して い る。 手 術 検 体 を 用 い た 変 異 陽 性 率 に 関 して は 22.8%4)、29.0%7)と の 報 告 が あ り、 対 象 症 例 数 、 そ の 内 訳 、 測 定 法 の違 い な どが あ り単 純 な 比 較 は で き な いが 、今 回 の検 討 に お け る陽 性 率51.4%は そ れ ら に比 し高 値 で あ り、腺 癌 の割 合 が約70%と 高 か っ た こ とが要 因 の1つ と考 え られ た。 EGFR遺 伝 子 変 異 測 定 法 に 関 して は 、手 術 検 体 を含 め喀 疾 、 気 管 支 洗 浄 液 、 胸 水 な ど あ ら ゆ る検 体 で 施 行 可 能 な 高 感 度 法 を 用 い る こ とが推 奨 され て い る8)。 わ れ わ れ も 高 感 度 法 の ひ と つ で あ るPNA-LNAPCR clarnp法9)で 測 定 を行 っ て お り、 そ の 感 度 は1000個 の 正 常 細 胞 の 中 に1個 のEGFR遺 伝 子 変 異 細 胞 が あ っ て も検 出 可 能 と され て い る。 病 理 で癌 細 胞 の存 在 が確 認 され た 検 体 で は 癌 細 胞 の割 合 が1%以 上 、 と くに 手術 組 織 検 体 にお い て は10%以 上8)と され てお り、 高感 度 法 を用 いれ ば偽 陰 性 の確 率 は極 め て低 くな る とい え る。 特 に 手術 検 体 の 場 合 は 癌 細 胞 の 占 め る 割 合 が 高 い 部 分 を 肉眼 的 に選 択 す る こ とが 可 能 で あ り、 高 感 度 法 と の組 み 合 わ せ に よ り偽 陰 性 を ゼ ロに 近 づ け る こ とが 可 能 と考 え られ る。 EGFR遺 伝 子 変 異 の 頻 度 は 、女 性 、腺癌 、 非 喫 煙 者 に 高 く臨 床 背 景 に 強 く関 連 して い る と され る10)。今 回 の検 討 で もそれ を示 唆 す る結 果 で あ り、 特 に 腺 癌 の な か で も BACの 成 分 を持 つ 症 例 で は100%の 陽 性 率 で あ っ た。 これ は 、 腺 癌 の 亜 型 別 で はBAC 成 分 を もつ タ イ プ11)、TrF-1や サ ー フ ァ ク タ ン トを発 現 して い る よ うな タ イ プ12)に変 異 頻 度 が 高 い と され る 報 告 に 一 致 して い た 。糊1」、組 織 型 、喫 煙 の うち独 立 してEGFR 遺 伝 子 変 異 に か か わ っ て い る の は 組 織 型 と喫 煙 で あ り、 女性 、 非 喫 煙 、 腺 癌 の3つ の 条 件 を重 ね て も変 異 頻 度 は63%に と ど ま る と され て い る13)。われ わ れ の 検 討 で は 3因 子 を満 た した場 合 は 陽 性 率100%で あ っ た が 、 限 られ た症 例 数 で もあ り今 後 さ ら に 症 例 を 蓄 積 す る必 要 が あ る と考 え られ た。 手術 検 体 の 扱 い につ い て は 、 ホ ル マ リン 固 定 に よ るi)NA損 傷 に留 意 しな け れ ば な ら な い。 ホル マ リン に よ り長 期 固 定 され た 検 体 お よび3年 以 上 前 の 検 体 は検 査 デ ー タの 信 頼 性 が 乏 しい と され5)、 ホル マ リ ン固 定 期 間 を 固 定 で き る 最 低 限 の 期 間 に 限 定 す る 必 要 が あ る。 今 回 の 対 象 症 例 の 中 で も DNA損 傷 に よ り測 定 が 不 可 能 で あ っ た症 例 が1例 み られ 、原 因 と して は ホ ル マ リン の 影 響 が 考 え られ た。 EFGR変 異 陽 性 例 の72%にgefitinibが 奏 効 しt4)、複 数 の第 皿相 臨 床試 験3)4)に よ りEFGR遺 伝 子 変 異 陽 性 症 例 に お い て gefitinibの プ ラチ ナ 併 用 化 学 療 法 に対 す る倒 立性 が 示 され た現 在 、 フ ァー ス トライ ン か らgefitinibを 導 入 す る傾 向 が 高 ま り つ つ あ る6)。2010年 版 肺 癌 診 療 ガ イ ドライ ン にお い て も、EGFR遺 伝 子 変 異 陽 性stage IV症 例 に 対 す る 治 療 と し てperformance statusに か か わ らずgefitinibが グ レー ド Aで 推 奨 され てお り、術 後 症 例 にお い て も、 EGFR変 異 陽 性 症 例 で は 再 発 後 治 療 の 第1 選 択 と してgefitinibが 考慮 され る よ うに な るで あ ろ う。 事 実 、今 回 の 対 象 症 例 の 中 に も術 後 短 期 再 発 を き た したEGFR変 異 陽 性 症 例 が あ り、gefitinibを 導 入 し良 好 な 治 療 効 果 が 得 られ て い る。 EGFR遺 伝 子 変 異 検 査 に 切 除 標 本 を 用 い る こ とは 、確 実 に腫 瘍 組 織 を含 ん だ 検 体 を 提 出 す る こ とに よ り偽 陰性 を な くす とい 一36一
平 成23年4月1日 9 う利点 があ り、術 後再発時 にお ける治療 法 の適切 な選 択 につ なげ られ る と考 え られ る。 結語肺癌 切除標本 にお けEGFR遺 伝子異変 検 索に関 し検討 を加 えた。 引用文献
1) Lynch TJ, Bell DW,
Sordella R, et al.
Activating mutations in the epidermal
growth
factor
receptor
underlying
responsiveness of non-small-cell
lung
cancer to gefitinib.
N Engl J Med
2004;350:2129-2139.
2) Paez JG, Janne PA, Lee JC, et al. EGFR
mutations in lung cancer: correlation
with clinical
response to gefitinib
therapy. Science 2004; 304:1497-1500.
3) Mok TS, Wu YL, Thongprasert S, et al.
Gefitinib or Carboplatin-Paclitaxel
in
pulmonary adenocarcinoma. New Engl J MED
2009; 361:947-957.
4) Mitsudomi T, Morita S, Yatabe Y, et al.
Gefitinib
versus
cisplatin
plus
docetaxel
in
patients
with
non-small-cell
lung cancer harbouring
mutations of the epidermal growth factor
receptor
(WJT0G3405): an open label,
randomized phase 3 trial.
Lancet Oncol
2010; 11:121-128.
5)前 門戸任.EGFR遺 伝 子 変 異 を い つ どの よ うに 検 索 ずる か― 治 療 方 針 に生 かす タイ ミ ン グ―.Medical Practice 2010;27:1142-1146. 6)山 家 理 司 、 佐 藤 亮 太 、 大 木 善 之助 、 他. EGFR遺 伝 子 変 異 陽 性非 小 細 胞 肺癌 に 対 す る ゲ フ ィチ ニ ブ の使 用 経 験(第2報).山 梨 肺 癌 研 究 会 会誌 2010;23:2-5. 7)朝 比 奈 肇 、 山崎 浩 一 、 木 下一 郎 、 他.非 小 細 胞 肺 癌 に お け る検 体 採 取 方 法 別EGFR 遺 伝 子 変 異 検 出 に 関 す る 検 討.気 管 支 学 2006;28:597-600.8)萩原弘一.Epidermal growth factor receptor(EGFR)遺 伝 子 変 異 ア ッセ イ 方 法 の 比 較 と 問 題 点.肺 癌 2009;49:928-933. 9) Nagai Y, Miyazawa H, Hugun, et al. Genetic heterogeneity of the epidermal growth factor receptor in non-small cell lung cancer cell lines revealed by a rapid and sensitive detection system, the peptide nucleic acid-locked nucleic acid PCR clamp. Cancer Res 2005; 65:7276-7282.
10) Mitsudomi T, Yatabe Y. Mutations of the epidermal growth factor receptor gene and related genes as determinants of epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors sensitivity in lung cancer. Cancer Sci 2007; 98:1817-1824.
11) Miller VA, Kris MG, Shah N, et al. Bronchioloalveolar pathologic subtype and smoking history predict sensitivity
to gefitinib in advanced non-small-cell lung cancer. J Clin Oncol 2004; 22:1103-1109.
12) Yatabe Y, Kosaka T, Takahashi T, et al. EGFR mutation is specific for terminal respiratory unit type adenocarcinoma. Am J Surg Pathol 2005; 29:633-639.
13) Kosaka T, Yatabe Y, Endoh H, et al. Mutations of the epidermal growth factor receptor gene in lung cancer: biological and clinical implicactions. Cancer Res 2004; 64:8919-8923.
14) Mitsudomi T, Kosaka T, Yatabe Y. Biological and clinical implications of EGFR mutations in lung cancer. Int J Clin Oncol 2006; 11:190-198.
