55:1 8‑ 2 2 ,2 0 0 3

弘 前 医 学

55:1 8‑ 2 2 ,2 0 0 3

下北半島過疎地域在住高齢者における

CYP2C19

4 1 3

事正

滞藤

石斉 高 畑 武 功

2)

2)

佐 々木 睦 男

1)

2)

抄録 内因性や外 因性物質 の酸化代謝 を担 うチ トクローム

P4 5 0 ( CYP)

2 C1 9 ( CYP2 C1 9)

di a z e pa

ome pr a z o l e

CYP2 C1 9

CYP2 C1 9*2

*3

ABO

CYP2 C1 9 PM

CYP2 C1 9 PM

CYP2 C1 9

1 0 8

CYP2 C1 9

ho mo EM :32

he

EM :51 . 9%,PM :1 5. 7%

*1:58. 3%,*2:

3 0. 6%,*3:

l . 1 %

CYP2 C1 9

.

弘前医学

55:1 8‑ 2 2 ,2 00 3

P450;CYP2C1 9;

ORIGINALARTICLE

CYP2C19M UTATI ON FREQUENCY I N ELDERLY SUBJECTS LI VI NG I N A SPARSELY POPULATED AREA OF SHI M OXュTA PENI NSULA

Yuki o I s hi zawa l･4)

Takenor i T

ka l1 at a 2)

Nor ioYas ui ‑ Fur uko r i 2)

Mas at o Sai t o 3)

Mut s uo Sa s ak il) and Tomonor i Tat ei s hi 2)

Abs t r act Cyt oc hr omeP4 5 0pl a ysama j o rr o l ei no xi di z i nganumbe rofe ndoge no usa nde xoge no usc o mpounds a ndi tc o ns i s t sofs ubbm il i esi nc l udi ngCY

2 C1 9,me t a bol i z i ngdi a z e pa

,ome pr a z o l ea nds oo n.Thei nvi vo a c t i vi t y o fCYP2 C1 9s howspo l ymo r phi s m a ndaJ a pa nes eCYP2 C1 9po o rme t a bol i z e r( PM)pos s es s est w?

mut a t i o ns ,cy p2C1 9 * 2a n d / o r cY p2C1 9* 3. Pr e vi ousr e po r t ss t udi ngt heABO bl oodt ypef re que nc yi nAo mo n di s t r ic ta ndt heCYP2 C1 9PM f re q ue nc yi ni nha bi t a nt so fTo ho kua r e as ugge s t e dt ha tt heCYP2 C1 9ge no t ype a ndt hemut a t i ona ll e l ef re q ue nc yl napo pul a t i onbo m i nAo mon pr e f e c t ur emi ghtbedi f f e r e ntf ro m t hos ei n o t he ra r e aofJ a pa n. The r e f わ r e,1 08i nha bi t a nt si nKa wa uc hit own,c ount Ⅳs i deofShi mo ki t ape ni ns ul a,we r e r e c r ui t e di nt hi ss t udya nda na l yz e df ort he i rCYP2 C1 9ge no t ype. Nos i gni f ica ntdi f fe r e nc ewasno t e di nt he CYP2 C1 9ge not ypeort hemut a t i o na l l e l e血･ e q ue nc ybe t we e n也epo pul a t i o ns t udi e dhe r ea nd仇os ei npr e vi ous r e po r t s . Pr e vi o uss t ud i esa ndc ur r e ntr e s ul t si ndi ca t et ha tr e g io na lva r ia t i o ni nt heCYP2 C1 9ge no t ypea nd 也emut a t i o na l l e l e血･ e que nc yma yber e l a t i ve l ys ma l li naJ a pa ne s epo pul a t i on.

Hi r os a kiMe d.J .55:18‑ 2 2 ,2 0 0 3

Ke ywor ds : Cyt ochr omeP450･ ,CYP2C191 ,genet i cpol ymor phi s m.

1)弘前大学医学部外科学第二講座

2)

3)

4)

1 5

6

1 0

1 5

7

31

1) Se co nd De pa r t me nt of Sur ge r

Hi r os a ki Uni ve r s i t y,Sc hoolo fMe di c i ne

2) De pa r t me nto fCl i ni c a lPha r m ac o l ogy , Hi r os a ki Uni ve r s i t y,Sc hoolofMe di c i ne

3) Fi r s tDe pa r t me ntofI nt e ma lMe di c i ne,Hi r os a ki Uni ve r s i t y,Sc hoolofMe di c i ne

4) Co 汀e S pO nde nc e:Y.I s hi z a wa

Re c e i ve df orpubl i c a t i o n,J une1 0,2 0 0 3

Ac ce pt e df わ rpubl i c a t i on,J ul y31 ,2 0 0 3

下北半 島在住 高齢者 の CYP2 C1 9 遺伝 子変異頻度

緒 看

ミクロソ‑ムに存在す る‑原子酸素添加酵素 の

c yt oc hr o me P4 5 0 ( CYP)

9

1 A2

2 A6

2 B6

2 C8

2 C9

2 C1 9

2 D6

2 E

,3 A4 )

( poo rme t a bo l i z e r , PM)

CYP2 C1 9

2 0%

PM

PM

5%

未 満 と い わ れ て い る

2)

CYP2 C1 9 PM

CYP2 C1 9PM

3)

Okubo

CYP2 C1 9 PM

4)

CYP2 C1 9

なる可能性がある.

川 内町は下北半 島の中ほどに位置す る海沿 い の過疎地である.明治時代以来その人 口は減少 してお り外部か らの人 口流入はほ とん どないと 考え られ る. また津軽地方 を中心 に青森,岩手 の血 液 型 を検 討 した松 木 の報 告 にお いて は,

ABO

5)

Okubo

CYP2 C1 9 PM

CYP2 C1 9

対象お よび試験方法

本試験 の試験計画 につ いて,弘前大学倫理委

1 9

員会で審議 され承認 を得て,試験 は

2 0 0 2

7

2 0 03

3

1

本試験 の被験者 (表 1) と して 日本人高齢者

1 0 8

1 3

9 5

78

( 6 5‑9 0

2)

全血

1 0m

LDNA

( QI Aa mp DNA Bl ood Ma xi Ki t ,

Q ui a ge n

ge nomi cDNA

NTPs2 0 0〟mol / L ,1 0 ⅩPCR w w / 0 1 0r r mol / L, 2 5 m M MgC1 2 1 . 5 ^{r r m} ol / L, Ta q

表 1 対 象者 の年齢 と性 別 No. ofs ub j e c t s 1 08 Age( y)

Me a n 78 Ra nge 65‑ 9 0

e nde r

Me n 1 3

Wome n 95

図 1

2 0 石 滞,地

表 2 CYP2 C1 9* 2

3 検 出のための PCRプライマー CYP2 C1 9* 2 ( e xo n5 )

Fo r wa r dp r ime r 5 ' ‑ AATTACAACCAGAGCTTGGC‑ 3I Re ve r s ep r i me r 5 I ‑ TATCACTTTCCATAAAAGCAAG‑ 3' CYP2 C1 9* 3 ( e xo n4 )

Fo r w ar dp r i me r 5 ' ‑ TATTATTATCTGTTAACTAATATGA‑ 3I Re ve r s ep r i me r 5 ' ‑ ACTTCAGGGCTTGGTCAATATAG‑ 3'

表 3 ア リル頻度

Exo n5 Exo n4

*1 * 2 * 3

kyo 1

5 8. 1 0% 2 8. 7 0% 1 3. 2 0%

Ky

us

1

5 3. 9 0% 3 5. 0 0% 11 . 1 0%

Ka

w

h

ur st u

5 8. 3 0% 3 0. 6 0% 11 . 1 0%

[文献

8)

pol yme r as e 1 . 2 5uni t s ,ge nomi cDNA 2 0 0ng

PCR f or wa r dpr ime r0. 1L L mOl / L,PCR r e ve r s e pr i me r0. 1〃mol

2)

( CYP2 C1 9* 2:

9 4

5mi n

C1 9*3:9 4

5mi n)

( cYp2 C1 9* 2:

53℃ ,1mi n, CYP2C1 9*3: 53℃ , 0. 5mi n)

( cYP2 C1 9* 2:72 ℃,

1mi n

C1 9*3:72

5mi n)

CYP2 C1 9* 2

0c yc l e , CYP2 C1 9* 3

ycl e

と した.PCRか けた後,制 限酵 素 は

e xon4:

B

,e xon5:Sma I

r os e

4%ゲルを作成

oxl oadi ngbuf fe r1 . 5L J l

0L L

ぜ 1 0 0V

0

ロマイ ドで染色 し紫外線をか けて

CYP2 C1 9

( wt )お よ び 2種 類 の 突 然 変 異 株

( e xon5

xon4)の判定を行 った.

3)統計学的処理

本研究 で得 られた川 内町在住者 の

CYP2 C1 9

8)

CYP2 C1 9

05

結 果

本研究 に参加 した被験者 の背景 を表

1

08

CYP2 C1 9

t ot a 13 a

ll e l es

,* 2,* 3

58. 3%,30. 6%,l l . 1%で あ った.今 回の研究

8)

3 2 .

ho moz ygo t ee xt e ns i ve me t a bol i z e r( EM), 51 . 9

he t e r oz ygot e EM , 1 5. 7%

poo rme t a bol i z e r( PM)

⁶⁾

4)有意の差は得 られ なか った.

考 察

本研究では下北半 島の陸奥湾沿岸 に位置す る 川内町在住高齢者を対象 に

CYP2 C1 9

78

CYP2 C1 9

( 95

下北半 島在住高齢者 の CYP2 C1 9 遺伝 子変異頻度

表 4 遺伝子型頻度

n homoEM h e

EM PM Tokyo 1 86 3 4. 9 0% 4 6. 30% 1 8. 8 0%

Kyus hu 1 4 0 31 . 4 0% 4 5. 0 0% 2 3. 6 0%

Ka wa uc hi ( o urs t udy) 1 08 32. 4 0% 51 . 9 0% 1 5. 7 0%

[ 文献8)

SmaIDi ge s t i o n( * 2)

W nⅣ m/ m W I W W/ m Wr W Wr W W/ m W/ m

1 2 3 4 5 6 7 8 9

1 0

BamH

Wr W m/ IDi m W/ ge m W s t / W W i o n( / m *

WN Wj W W r y 1

2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 図 2 PCR

‑ RFLP 解析.

1 レー ンはマ‑カー ,2 L レー ンはブランク ,3 レー

ンは正常 ア リルの コン トロ‑ル,4レー ンは変異ア リルの コン トロール

,5‑ l oレ一 ンは DNA サ ンプル

層によって CYP

2 C1 9 遺伝子型の頻度が異なる 可能性はなく,対

象の年齢を考慮する必要はな いと思われる.

生体 内

CYP2 C1 9 活性には遺伝的多型が存 在 し日本人のおよそ 2 0%が PM であ ると報告 さ

れ て い る.ま た 日本 人 PM で 見 出 され た CYP2 C1 9 変異遺 21

伝子には e xon5 にあるG681 A 変 異 ( CYP2 C

1 9*2) とe xo n4 に あ る G636 A 変異

( CYP2 C1 9* 3)の 2 種類が知 られてお り, これ ま

での報告,久保田らが東京 ( 八王子市)

でお こなった研究で

2 2 _{石 揮,他}

は ア リル頻度

* 2:35. 0%

* 3:

l . 1 %

8) .

今 回の

1 08

pM

1 5. 7%

* 3

30. 6%

11 . 1 %

CYP2 C1 9 PM

2 4. 0%

1 5. 0%

20. 0%

9) .

* 2

* 3

CYP2 C1 9* 2

4 0%

前後 で あ るのに対 し

,CYP2 C1 9* 3

1 0%

1 0. 8%

1 5. 6%

1 0%

CYP2 C1 9* 3

11 . 1 %

CYP2 C1 9* 3

CYP2 C1 9* 3

CYP2 C1 9

di az e pa

,ome pr azol e,l ans opr ozol e

mephenyt oi n

CYP2 C1 9 PM

PM

5‑ 6

CY P2 C1 9 PM

CYP2 C1 9

結 語

下 北 半 島 にあ る川 内町在 住 高齢者 を対 象 に

CYP2 C1 9

参 考 文 献

i)

Gol ds t e i nJ A,deMo r a i sSM.Bi o c he mi s t r ya nd mo l e c ul a r bi ol ogy of 也e huma n CYP2 C s ubf a mi l y.Pha r m a c oge ne t i c s1 9 9 4; 4: 28 51 9 9.

2 ) de Mo r a i s SMF

Wi l ki ns o n GR

Bl a i s de l l∫ . I de nt i 五C a t i o no fane w ge ne t i cde f e c tr es po ns i bl e f

ort hepo l y m o r phi s mo fS‑ me phe nyt o i nme t a bo l i s m i nJ a pa nes e.MoIPha m a c o l1 9 9 4; 4 6: 5 9 4 ‑ 8.

3) deMo r a i sSMF,Go l ds t e i nJ A,Xi eHG,Hua ng SL

Lu YQ

Ⅹi a

Xi a o ZS,e ta

.Ge ne t i c a na lys i soft heS‑ me phe nyt oi npol ymo r phi s m i n aChi ne s epo pul a t i o n.Cl i nPha ma c o IThe r1 99 5;

58: 4 0 4 ‑ 11 .

4 ) OkuboT,Sun°M,Suga wa r aK,Mo t o mur aS.

Gr a phi cr oo t so fCYP2 C1 9ge ne t i cpol ymo r phi s m i nJ a pa ne s epo pul a t i on.I n:Ka ne koS,Mo t o mur a S,Ta t e i s hiT,Ro ndoT,Fumka waK,e di t o r s . Phm a c o ge ne t i cs :Ta il o r ‑ ma depha r ma c o t he r a py.

A

m s t e r da m :EI s e vi e r ; 2 0 0 2: 63‑ 7.

5 )

1 9 7 6; 9‑ 2 8.

6) Kubo t aT,Chi baK,I s hi z a kiT.Ge no t ypi ngo f S一 me phe nyt oi n4 ' ‑ hydr oxyl a t i oni na ne xt e nde d J a pa nes epo pul a t i o n.Cl i nPh… a c o IThe r1 99 6;

60: 6 61 ‑ 6.

7) Ba 也um L

nd e r s e n‑ Ra nbe r g K

Bo l ds e n J

Br os e nK, J e uneB.

e no t ype sbr也ec yt o c hr ome P4 5 0e nz yme sCYP2 D6a ndCYP2 C1 9i nhuma n l onge vi t y.Eu r∫Cl i nPhm a co l1 9 98; 5 4: 4 2 7‑ 3 0.

8 )

i mur aM,I e i r iI ,M a mi yaK,Ur a eA,Hi guc hi S.Ge ne t i cpol ymo r phi s m ofc yt o c h r omeP4 50

CYP2 C1 9,a ndCYP2 C9i naJ a pa nes epo pul a t i on.

The rDmgMoni t1 9 98; 2 0: 2 4 3‑ 7.

9 ) Ta s s a ne e ya kulW,Ta wa l e eA,Tas s a ne e ya kul W,Kuko ngv ir iya pa n V,Bl a is de l lJ

ol ds t e i nJ A.

Ana l ys I SO f仙e CYP2 C1 9 pol ymo r phi s m i n a

No r t h‑ e as t e m Tha ipo pul a t i o n.Pha m a c o ge ne t i cs

2 0 0 2; 1 2: 2 21 ‑ 5.