ㄽᩥᑂᰝࡢ⤖ᯝࡢせ᪨
Ặྡ㸸ᕷ
༤ኈࡢᑓᨷศ㔝ࡢྡ⛠㸸༤ኈ㸦⸆Ꮫ㸧
ㄽᩥ㢟ྡ㸸Indirubinࡢ⏕≀Ꮫⓗぶᛶࢆ⏝ࡋࡓࣁࣈࣜࢵࢻᆺᢠ⭘⒆ࡢ〇 ᑂᰝጤဨ㸸㸦ᰝ㸧 ᩍᤵ ᐑධ ఙ୍
㸦ᰝ㸧 ᩍᤵ 㣤ᓥ ὒ ᩍᤵ 㧘␊
ᮏㄽᩥࡣ㸪᪂つᢠ⭘⒆ࡢ〇ࢆ┠ⓗࡋࡓ㛤Ⓨ◊✲㛵ࡍࡿࡶࡢ࡛࠶ࡿࠋ㏆ᖺ㸪ᶆⓗࢱࣥࣃࢡ㉁୰ࡢ ࢳࣟࢩࣥṧᇶࡢࣄࢻࣟ࢟ࢩᇶࢆࣜࣥ㓟ࡋ࡚⣽⬊ᶵ⬟ไᚚࢆ⾜࠺ࢳࣟࢩࣥࣜࣥ㓟㓝⣲(ࢳࣟࢩࣥ࢟ࢼ࣮
ࢮ)⩌୰ࡢ≉ᐃ㓝⣲ࡢάᛶ㜼ᐖࢆస⏝ᶵᗎࡍࡿ
Gefitinib
➼ࡢᢠ⭘⒆ࡀୖᕷࡉࢀ࡚࠸ࡿࠋ࢟ࢼ࣮ࢮࢆᶆⓗࡋࡓᢠ⭘⒆ࡣ≉␗ᛶࡢ㧗ࡉࡽศᏊᶆⓗ⸆ศ㢮ࡉࢀ࡚࠾ࡾ㸪ࡑࡢከࡃࡣࢳࣟࢩࣥ࢟ࢼ࣮ࢮ㜼ᐖ
࡛࠶ࡿࠋ࡞࠾㸪࢟ࢼ࣮ࢮ㜼ᐖࢆస⏝ᶵᗎࡍࡿศᏊᶆⓗ⸆ࡣ࢟ࢼ࣮ࢮࡢάᛶ୰ᚰ࠶ࡿ
ATP
⤖ྜࢻ࣓ࣥᑐࡋ࡚ぶᛶࢆ♧ࡋ㸪ATPࡢ⤖ྜࢆ㜼ᐖࡍࡿࠋⴭ⪅ࡣ㸪⣽⬊ቑṪࡸ⣽⬊࿘ᮇᅇ㌿῝ࡃ㛵ࡋ࡚࠸ࡿࢢ
ࣜࢥ࣮ࢤࣥྜᡂ㓝⣲࢟ࢼ࣮ࢮ3E (GSK3E)ࡸࢧࢡࣜࣥ౫Ꮡᛶ࢟ࢼ࣮ࢮ(CDK)╔┠ࡋ㸪ࡑࢀࡽࡢ≉␗ⓗ
㜼ᐖࢆ࣮࣋ࢫࡋࡓᢠ⭘⒆ࡢ㛤Ⓨࢆ⾜ࡗࡓࠋࡇࢀࡽ࢟ࢼ࣮ࢮࡣ㸪ᶆⓗࢱࣥࣃࢡ㉁୰ࡢࢭࣜࣥ࠶ࡿ࠸ࡣ ࢫࣞ࢜ࢽࣥṧᇶࡢࣄࢻࣟ࢟ࢩᇶࢆࣜࣥ㓟ࡍࡿࢭࣜࣥ/ࢫࣞ࢜ࢽࣥ࢟ࢼ࣮ࢮ࡛࠶ࡾ㸪࢟ࢼ࣮ࢮ࢝ࢫࢣ࣮ࢻୖ
࡛ࡣࢳࣟࢩࣥ࢟ࢼ࣮ࢮࡢୗὶ⨨ࡍࡿࡓࡵࡼࡾ≉␗ⓗ࡞⣽⬊ᶵ⬟㜼ᐖࡢㄏⓎࡀᮇᚅ࡛ࡁ㸪స⏝ࡢⅬ
ࡽ᭷⪃࠼ࡽࢀ࡚࠸ࡿࠋᮏㄽᩥ࠾࠸࡚㸪ⴭ⪅ࡣ㓝⣲㜼ᐖຊࡢྥୖࡢ㠃ࡽ㓝⣲άᛶ୰ᚰ࠾ࡅࡿඹ᭷
⤖ྜᙧᡂࡀస⏝ࡢᣢ⥆࣭ᙉຊ᭷⏝⪃࠼㸪⏕యᡂศࡢඹ᭷⤖ྜᙧᡂࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿ࢚࣏࢟ࢩࢻ ᵓ㐀╔┠ࡋ㸪๓㏙ࡢ࢟ࢼ࣮ࢮ㜼ᐖ≀㉁⤌ࡳྜࢃࡏࡓࣁࣈࣜࢵࢻྜ≀ࡢྜᡂࢆ⾜࠸㸪ࡑࡢᢠ⭘⒆ά ᛶ࣭ᛂᛶཬࡧ௦ㅰᵝᘧࢆ᳨ウࡋࡓࠋ࡞࠾㸪ᮏㄽᩥ࡛ࡣᢠ⭘⒆άᛶࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿ
indirubin (II)ࡢㄏᑟ
య࡛࠶ࡿ
indirubin 3’oxime (III)࠾ࡼࡧࡑࡢ⮯⣲⨨యࢆ࣮࣋ࢫࡋ࡚࠸ࡿࡀ㸪ࡇࢀࡽྜ≀ࡢ୰ࡢ࠸ࡃࡘ
ࡣ
GSK3Eࡸ CDK
ࡢATP
⤖ྜࢻ࣓ࣥࡢぶᛶཬࡧ㧗࠸㓝⣲άᛶ㜼ᐖ⬟ࢆ♧ࡍࡇࡀ▱ࡽࢀ࡚࠸ࡿྜ≀࡛ࡶ࠶ࡿࠋ
➨
1
❶࡛ࡣ㸪ࣉࣟࢺࢱࣉࡋ࡚ indirubin 3’(O
oxiran2ylmethyl)oxime (IIII)ࢆྜᡂࡋ㸪ࣄࢺ⫢ࡀࢇ⏤᮶⣽⬊(HepG2 ⣽⬊)ࢆ⏝࠸ࡓ⣽⬊യᐖάᛶ㸪⏕యᡂศࡢᛂࡢྍ⬟ᛶ㸪௦ㅰᵝᘧ࠾ࡼࡧ௦ㅰ⏘≀ࡢ⣽
⬊യᐖάᛶ➼ࢆ᳨ウࡋ㸪ࡑࡢᢠ⭘⒆ࡢࢩ࣮ࢻྜ≀ࡋ࡚ࡢ᭷⏝ᛶࢆ᫂ࡽࡋࡓࠋྜ≀
III
ࡣ㸪ྜ≀
II
epibromohydrin
ࢆస⏝ࡉࡏ࡚〇ࡋࡓࠋ࡞࠾㸪ᮏྜ≀ࡣ᪂つ≀㉁࡛࠶ࡿࠋྜ≀III
ࡢHepG2
⣽⬊ᑐࡍࡿ⣽⬊യᐖࡣ⏝㔞౫Ꮡⓗቑࡋ㸪
IC
50್ࡣ1.7 PM
ࢆ♧ࡋࡓࠋࡇࡢ್ࢆẕྜ≀࡛࠶ࡿྜ≀II
ࡢࡑࢀ(15 PM)ẚ㍑ࡋ㸪ⴭ⪅ࡣ࢚࣏࢟ࢩࢻᇶࡢᑟධࡀ⣽⬊യᐖάᛶࡢⴭࡋࡃᨵၿᐤࡍࡿࡇࢆ᫂ࡽࡋࡓࠋࡲࡓ㸪ࡇࡢ್ࡣᙉຊ࡞ᢠ⭘⒆ຠᯝࢆ♧ࡍ
cis
platin (IC50್㸸4.0 PM)ࡰྠ➼࡛࠶ࡿࡇࡶᣦࡋ࡚࠸ࡿࠋḟ࠸࡛㸪GSK3Eࡢάᛶ୰ᚰ࡛ࡣࢩࢫࢸࣥṧᇶࡀ㔜せ࡞ᙺࢆᢸࡗ࡚࠸ࡿࡇࡽ
thiol
ᇶࡢᛂᛶࢆ᳨ドࡋࡓࠋࡇࡇ࡛ࡣ㸪ࣔࢹࣝྜ≀ࡋ࡚
2mercaptoethanol
ࢆ⏝࠸㸪ྜ≀III
ࡢ࢚࣏࢟ࢩࢻᇶ㒊ศࡀ
thiol
ᇶඹ᭷⤖ྜᛶࡢᏳᐃຍయ(IIV)ࢆᙧᡂࡍࡿࡇࢆ᫂ࡽࡋ㸪ᮏྜ≀ࡀ㓝⣲ࡢάᛶ୰ᚰ࡛ࢩࢫࢸࣥṧᇶᏛⓗᏳᐃ࡞ຍయࢆᙧᡂࡍࡿྍ⬟ᛶࢆ♧ࡋࡓࠋᘬࡁ⥆ࡁ㸪HepG2⣽⬊ࡽㄪ〇ࡋ ࡓ⣽⬊⼥ゎᾮࢆ⏝࠸࡚௦ㅰᵝᘧࢆ᳨ウࡋࡓࠋⴭ⪅ࡣ
HPLC
ཬࡧUPLCMS
ࢆ㥑ࡋ࡚௦ㅰ≀ࢆ᳨⣴ࡋ㸪᭷ᶵ⁐፹ᢳฟ⏬ศ୰࢚࣏࢟ࢩࢻ㒊ศࡢຍỈศゎ≀(V
V)ࢆ၏୍ࡢ᭷ᶵ⁐፹ྍ⁐ᛶ௦ㅰ≀ࡋ࡚ྠᐃࡋࡓࠋࡉ
ࡽู㏵ྜᡂࡋࡓྜ≀
V
ࢆ⏝࠸࡚⣽⬊യᐖάᛶࢆྜ≀III
ẚ㍑᳨ウࡋ㸪⤊⃰ᗘ3 PM
࠾࠸࡚▷㛫 ᇵ㣴(24 㛫)࡛ࡣ୧⪅㛫࡛ࡁ࡞ᕪ␗ࡣㄆࡵࡽࢀ࡞࠸ࡶࡢࡢ㸪㛗㛫ᇵ㣴(72㛫)࡛ࡣྜ≀
II
࡛ࡢࡳ⣽⬊യᐖ άᛶࡀ⥔ᣢࡉࢀࡿࡇࢆ☜ㄆࡋࡓࠋ௨ୖࡢ⤖ᯝࡽ㸪ⴭ⪅ࡣ࢟ࢼ࣮ࢮࡢ
ATP
⤖ྜࢻ࣓ࣥぶᛶࢆࡶࡘ㜼ᐖ࣑ࣀ㓟ṧᇶࡢඹ᭷⤖ྜ⬟ࢆ᭷ࡍࡿ࢚࣏࢟ࢩࢻᇶ ࡢᵝ࡞ᐁ⬟ᇶࡢࣁࣈࣜࢵࢻࡣ㸪ᢠ⭘⒆㛤Ⓨ࠾࠸
࡚᭷⏝࡞᪉ἲㄽ࡛࠶ࡿ⤖ㄽࡋࡓࠋ Fig. 1. Indirubin ㄏᑟయࡢᵓ㐀
➨
2
❶࡛ࡣ㸪ྜ≀IIII
ࡢⰾ㤶⎔ୖࡢᵝࠎ࡞⨨⮯⣲ཎᏊࢆ୍ࡘ࠶ࡿ࠸ࡣࡘᑟධࡋࡓ⮯⣲⨨యࢆྜᡂࡋ㸪ࡑࢀࡽࡢ⣽⬊യᐖάᛶࢆẚ㍑᳨ウࡋ࡚ᢠ⭘⒆ࡋ࡚ࡢάᛶྥୖࢆᅗࡿඹࡑࡢ๓㥑≀㉁࡛࠶ࡿ
ྜ≀
II
ࡢ⮯⣲⨨య࠾ࡅࡿᵓ㐀άᛶ┦㛵ࢆ㸪⣽⬊യᐖάᛶࢆᣦᶆࡋ᳨࡚ウࡋࡓࠋࡲࡓ㸪๓❶ೌ࠸࢚࣏࢟ࢩࢻㄏᑟయࡢ㛗㛫ᇵ㣴(72 㛫)࠾ࡅࡿ⮯⣲ᑟධࡢຠᯝཬࡧ௦ㅰࡢᙳ㡪ࡘ࠸࡚ࡶ᳨ウࡋࡓࠋ
3’oxime
య(III)ࡢ⮯⣲⨨ࡣ㸪⣽⬊യᐖάᛶཬࡧGSK3Eࡸ CDK
ࡢぶᛶࡁࡃᙳ㡪ࡍࡿࡇࡀ▱ࡽࢀ࡚࠸ࡿࡀ㸪ᚑ๓ࡢሗ࿌ࡣಶูࡢ⮯⣲⨨య㛵ࡍࡿ▱ぢ࡛࠶ࡾ㸪⣽⬊യᐖάᛶࡘ࠸࡚⮯⣲⨨యࢆ⥙
⨶ⓗᢅࡗࡓࡣ࡞࠸ࠋⴭ⪅ࡣ㸪ྜ≀
II
ࡢ⮯⣲⨨య13
✀(5Br; 6Br; 7Br; 5’Br; 6’Br; 5,6Br2; 5,7Br
2; 5,5’Br
2; 5,6’Br
2; 6,5’Br
2; 6,6’Br
2; 7,5’Br
2; 7,6’Br
2)ࢆㄪ〇ࡋ㸪ࡑࡢ࡚ࢆ࢚࣏࢟ࢩࢻㄏᑟయ
ኚࡋࡓࠋ⣽⬊യᐖάᛶࡣ
HepG2
⣽⬊ࢆ⏝࠸࡚ホ౯ࡋ㸪࢚࣏࢟ࢩࢻㄏᑟయཬࡧ3’oxime
ㄏᑟయ࠾ࡅࡿ⮯⣲⨨⨨ࡢᵓ㐀άᛶ┦㛵ࢆ▷㛫ᇵ㣴(24㛫)ࡢ
IC
50್ࢆᇶ᳨ウࡋࡓࠋྜ≀III
ࡢ5
⮯⣲⨨య(V
VI)࡛ࡣ㸪IC
50್ࡀẕྜ≀ࡢ⣙1/3
ࡢ0.62 PM
࡛࠶ࡾ㸪⮯⣲ཎᏊᑟධࡼࡿ⣽⬊യ ᐖάᛶࡢྥୖࡀ☜ㄆࡉࢀࡓࠋࡲࡓ㸪ࡢ୍⨨య࡛ࡣ㸪6 㸪7ࡢ⮯⣲ཎᏊࡢᑟධ ࡣ⣽⬊യᐖάᛶࢆࡁࡃῶᑡࡉࡏ㸪 5’㸪6’ࡢᑟධ࡛ࡶ ⱝᖸࡢῶᑡࡀㄆࡵࡽࢀ㸪⨨య࡛ࡣ㸪5,6㸪5,5’ࡢᑟධ࡛ࡣࡁ࡞ኚືࡣㄆࡵࡽࢀ࡞ࡗࡓࡀ㸪5,7㸪
7,5’ࡢᑟධ࡛ IC
50್ࡀẕྜ≀ࡢ5㹼6
ಸࡢ್࡞ࡾ⣽⬊യᐖάᛶࡢపୗࡀほᐹࡉࢀࡓࠋ࡞࠾㸪ࡢᅄࡘࡢ⨨య࡛ࡣ⣽⬊യᐖάᛶࡣᾘኻࡋࡓࠋ௨ୖࡢ⤖ᯝࡽ㸪ⴭ⪅
ࡣ࢚࣏࢟ࢩࢻㄏᑟయࡢሙྜࡣ
5
ࡢ⮯⣲ཎᏊࡢᑟධࡣ⣽⬊യᐖάᛶྥୖᐤࡍࡿࡀ㸪ࡢ㒊ࡢ ᑟධࡣዲࡲࡋࡃ࡞࠸⤖ㄽࡋࡓࠋ୍᪉㸪3’oximeయ(III)ࡢ୍⨨య࡛ࡣ㸪5㸪6㸪7ࡢ⮯⣲ཎᏊࡢ ᑟධࡼࡾ⣽⬊യᐖάᛶࡀ2㹼3
ಸ⛬ᗘྥୖࡋࡓࡀ㸪5’㸪6’ࡢᑟධ࡛ࡣࡁ࡞ᙳ㡪ࡣㄆࡵࡽࢀ࡞ࡗ ࡓࠋࡋࡋ㸪⨨య࡞ࡿ5,6’㸪6,6’㸪7,6’ㄏᑟయࡢሙྜࡣ⣽⬊യᐖάᛶࡀపୗࡋ㸪๓㏙ࡢ୍
⨨య࠾ࡅࡿ
5
㸪6
㸪7
ࡢᑟධຠᯝࡀ6’ࡢ⮯⣲ཎᏊࡢᑟධࡼࡾᡴࡕᾘࡉࢀࡿࡇࡀุ᫂ࡋ
ࡓࠋࡲࡓ㸪ࡢ⨨య࡛ࡣ6,5’⨨య࡛ 5
ಸᙅࡢ⣽⬊യᐖάᛶྥୖࡀㄆࡵࡽࢀ㸪5,6
࡛ࡣ3
ಸᙉ㸪7,5’
࡛ࡣ
3
ಸ⛬ᗘ㸪5,7
࠾ࡼࡧ5,5’࡛ࡣ 2
ಸ⛬ᗘ࡛࠶ࡗࡓࠋࡇࢀࡽࡢ⤖ᯝࡽⴭ⪅ࡣ㸪3’oxime
ㄏᑟయ࠾ࡅࡿ⣽⬊യᐖάᛶࡢྥୖࡣ
6,5’ࡢ⮯⣲ཎᏊࡢᑟධࡀ᭱ࡶ᭷࡛࠶ࡿ⤖ㄽࡋࡓࠋḟ࠸࡛㸪ྜ≀
VI
ࡘ࠸࡚ᇵ㣴㛫⣽⬊യᐖάᛶࡢ㛵ಀࢆ᳨ウࡋ㸪㛗㛫ᇵ㣴(72㛫)࠾࠸࡚ࡣྜ≀IIIྠࡌ3 PM ῧຍຍ࠼࡚⤊⃰ᗘ1 PM
࡛ࡶ⣽⬊യᐖάᛶࡀ⥔ᣢࡉࢀࡿࡇࢆㄆࡵࡓࠋࡇࢀࡣᮏྜ≀ࡢIC
50 ್ࡀẕྜ≀ࡢ
1/3
࡛࠶ࡗࡓࡇⰋࡃ┦㛵ࡍࡿ⤖ᯝ࡛࠶ࡿࠋᘬࡁ⥆ࡁ๓❶ೌ࠸௦ㅰᵝᘧࢆ᳨ウࡋ㸪ྜ≀VI
ࡢሙྜࡶ࢚࣏࢟ࢩࢻ㒊ศࡢຍỈศゎ≀ࡀ၏୍ࡢ᭷ᶵ⁐፹ྍ⁐ᛶ௦ㅰ≀࡛࠶ࡿࡇࢆ♧ࡋࡓࠋࡉࡽ㸪ྜ≀
VI
ྜ≀III
ࡢῶ⾶㏿ᗘࢆẚ㍑ࡋ㸪5⮯⣲ཎᏊࢆᑟධࡍࡿࡇ࡛௦ㅰ㏿ᗘࡀపୗࡍࡿࡇࢆ᫂ࡽࡋ㸪௦ㅰ㏿ᗘపῶࡀ⣽⬊യᐖάᛶࡢ⥔ᣢཬࡧ
IC
50್ࡢపୗࢆࡶࡓࡽࡍせᅉᏊ࡛࠶ࡿྍ⬟ᛶࢆ♧၀ࡋ ࡓࠋ௨ୖ㸪ᮏㄽᩥࡣ㸪ⴭ⪅ࡀ㛤Ⓨࡋࡓ᪂つᢠ⭘⒆ࡢ≉ᛶࢆ᫂ࡽࡍࡿඹ⣽⬊യᐖάᛶࡢྥୖࡢࡓࡵ
ࡢᅉᏊࡶゝཬࡋ࡚࠾ࡾ㸪ᚋࡢᢠ⭘⒆㛤Ⓨᐤࡍࡿࡇࡀᮇᚅ࡛ࡁࡿࡶࡢ࡛࠶ࡿࠋ
ࡼࡗ࡚ᮏㄽᩥࡣ㸪༤ኈ㸦⸆Ꮫ㸧ࡢᏛࢆᤵࡉࢀࡿ್ࡍࡿࡶࡢㄆࡵࡽࢀࡿࠋ
௨ ୖ
ᖹᡂ㸰㸶ᖺ㸯᭶㸯㸳᪥
Fig. 2. ྜ≀VVI ࡢᵓ㐀
