難治性喘息の治療に関する研究　第2編　モルモット喘息モデルにおけるリンパ球機能に対する柴朴湯の効果

難治性喘息の治療 に関す る研究

第2編

モ ル モ ッ ト喘 息 モ デ ル に お け る リン パ 球

機 能 に 対 す る柴 朴 湯 の 効 果

岡山大学医学部 第二 内科学教室(指 導:木 村郁郎教授)

岡

本

章

一

(平成6年1月11日 受稿)

Key words:

Saiboku-to,

serum level, actively

sesitized

model, lymphocyte

緒 言 気 管 支 喘 息 は,ア トピ ー 型 と非 ア ト ピー 型 の 2つ の 病 型 に 大 別 さ れ て お り,ア ト ピー 型 喘 息 は 小 児 喘 息 に 代 表 さ れ, IgEを 介 す るI型 ア レ ル ギ ー 反 応 に よ り発 症 し,即 時 型 気 道 反 応 が 中 心 と な る病 態 で あ る.こ れ に 対 し非 ア トピ ー 型 喘 息,特 に 木 村 に よ り提 唱 さ れ て い る 中 高 年 発 症 型 難 治 性 喘 息(late onset intractable asthma, LOIA)1)の 概 念 に 代 表 され る 症 例 は,

III型お よ びIV型 ア レ ル ギ ー 反 応 を 包 含 す る い わ ゆ る 細 胞 反 応 型 ア レ ル ギ ー が 深 く関 与 し,遅 発 型 気 道 反 応(late asthmatic response, LAR) あ る い は 遅 延 型 気 道 反 応(delayed asthmatic response, DeAR)が そ の 難 治 化 の 中 心 を 成 す 病 態 と考 え られ て い る.従 っ て 気 管 支 喘 息 の 治 療 に は,か か る病 態 に 応 じた 治 療 薬 の 選 択 が 必 要 と な る. 著 者 は 第1編 に お い て 漢 方 薬 の 柴 朴 湯 が モ ル モ ッ トの 細 胞 反 応 型 ア レ ル ギ ー の う ち 特 に リン パ 球 機 能 の 抑 制 効 果 を 介 し てLARを 抑 制 す る こ と を 明 らか に し た.一 方,気 管 支 喘 息 患 者 に お け る柴 朴 湯 の 臨 床 効 果2) 3) 4) 5)は 周 知 の 如 くで あ る が,そ の 薬 理 作 用 機 序 と し てin vitroで の リ ン パ 球 機 能 に 対 す る 抑 制 効 果 を 示 す い くつ か の 報 告5) 6) 7) 8)が あ る.し か し漢 方 方 剤 は種 々 の成 分 か ら構 成 さ れ て お り,そ の 全 成 分 が 分 析 さ れ て い る わ け で は な い.さ ら に サ イ コ サ ポ ニ ン の よ う に,生 体 内 で そ の 構 造 式 が 変 化 す る と同 時 に そ の 薬 理 作 用 も 変 化 す る 成 分 を 含 ん で お り9),柴 朴 湯 の 血 中 濃 度 及 びin vivoとin vitroに お け る 効 果 の 相 関 を 表 す こ とは 困 難 で あ る.そ こ で 本 編 で は 細 胞 反 応 型 ア レ ル ギ ー の 要 と な る リン パ 球 機 能 へ の 効 果 と い う観 点 か ら,柴 朴 湯 を服 用 さ せ た モ ル モ ッ トの 血 清 を用 い たin vitroで の リン パ 球 幼 若 化 反 応 の 抑 制 効 果 並 び に 柴 朴 湯 抽 出 液 添 加 に よ る リン パ 球 幼 若 化 反 応 の 抑 制 効 果 を測 定 し, in vitroとin vivoで の 効 果 の 相 関 か ら,内 服 し た 柴 朴 湯 の 血 中 濃 度 を推 測 す る こ と を 試 み た. 対 象 と 方 法 (1)能動 感 作 モ ル モ ッ トの 作 製 約200gのHartley系 雄 モ ル モ ッ トを 用 い,飯 島 ら の 方 法10)の 変 法 に て 感 作 し た,す な わ ち, 抗 原 と してPig Ascaris suum(1/10W/V, Greer Laboratories, USA)0.1mlを ア ジ ュ バ ン トの 水 酸 化 ア ル ミニ ウ ム10mgと と も に 生 理 食 塩 水 で 溶 解 し て1.0mlと し, 2週 間 間 隔 で3回 腹 腔 内 に 注 射 を す る こ とに よ り感 作 を 行 っ た. (2)柴朴 湯 抽 出 液 の 作 製 柴 朴 湯 抽 出 液 は,柴 朴 湯20mgをRPMI 10mlで 加 熱 溶 解(60℃, 1時 間)後,遠 沈 し て 得 た 上 清 を ミ リポ ア フ ィ ル タ ー(MillexHA 0.45μm) で 濾 過 し て 作 製 し た.得 ら れ た 抽 出 液 をRPMI で 希 釈 し て 各 種 濃 度 の 抽 出 液 を作 製 した.な お 315

316 岡 本 章 一 抽 出 液 の 濃 度 は 最 終 濃 度 で 表 し た. (3)柴朴 湯 投 与 モ ル モ ッ トの 血 清 採 取 方 法 岡 山 大 学 動 物 実 験 施 設 で順 化 飼 育 し た 無 感 作 の モ ル モ ッ ト24匹 を,投 与 し た 柴 朴 湯 の 混 合 飼 料 の 濃 度 で 以 下 の5群 に 分 け た.す な わ ちA群 (n=3), B群(n=6), C群(n=6), D群(n= 3)に そ れ ぞ れ0.25%, 0.5%, 1.25%, 5.0% の 柴 朴 湯 混 合 飼 料 を1週 間 投 与 し,コ ン トロ ー ル と し てE群(n=6)に は 柴 朴 湯 を 混 合 し て い な い 飼 料 を1週 間 投 与 し た.投 与 終 了 後 心 臓 採 血 に て 血 清 を採 取 し,リ ン パ 球 幼 若 化 反 応 の 測 定 ま で-20℃ で 凍 結 保 存 した. (4)リ ン パ 球 幼 若 化 反 応 の 測 定 法 感 作 モ ル モ ッ トか ら心 内 穿 刺 に よ り20ml採 血 を行 い,モ ル モ ッ ト用 の リン パ 球 比 重 分 離 液(日 本 抗 体 研 究 所)に て 単 核 球 層 を分 離 採 取 し, RPMI 1640(GIBCO)に て2回 洗 浄 後, 10% fetal

calf serum(FCS)加RPMI 1640に て1×106/ mlに 調 整 し 浮 遊 液 を作 製 した.か か る 浮 遊 液 を 96 well tissue culture cluster(Coster)に100 μlずつtripricateに て 分 注 し,そ れ らの 各well にAscaris抗 原 液(感 作 用 抗 原 液 をRPMI 1640 に て50倍 希 釈)お よ び 対 照 と し てRPMI 1640を 50μlず つ 添 加 後,柴 朴 湯 抽 出 液 も し くは 得 られ た 血 清 を50μlずつ 添 加 して37℃ のCO2 incubator に て3日 間 培 養 し た.培 養 後 各wellに3H-thymidine(3H-TdR)0.2μCiを 添 加 し, 24時 間 培 養 後 細 胞 を 回 収 し,液 体 シ ン チ レ ー シ ョ ン カ ウ ン タ ー に て3H-TdRの 取 り込 み 値(dpm)を 測 定 した.(Fig. 1)な お 抗 原 添 加 と非 添 加 の 平 均dpm値 の 比 が3.0以 上 で あ る場 合 に 抑 制 率 の 判 定 を し,抽 出 液 添 加 で は7例,血 清 添 加 で は 9例 で 抑 制 率 を 判 定 し た. (5)抽出 液 お よ び 血 清 添 加 の 薬 理 効 果 の 判 定 と cytotoxicityの 検 討 血 清 添 加 で の 効 果 の 評 価 は, E群 の 血 清 を添 加 し た 時 の 値 の 平 均 を基 準 値 と し,抑 制 率(%)= [(基 準 値-各 血 清 添 加 時 の 値)÷ 基 準 値]×100 に よ り検 討 し た.ま た 抽 出 液 添 加 で の 効 果 の 評 価 は,抑 制 率(%)=[(薬 剤 無 添 加 時 の 値-薬 剤 添 加 時 の 値)÷ 薬 剤 無 添 加 時 の 値]×100に よ り 検 討 し た.さ ら に,抽 出 液 お よ び 血 清 添 加 に よ る 単 核 球 のviabilityを,trypan blue dye

Fig. 1 Method for lymphocyte blastogenic response to ascaris antigen.

exclusion testお よ び 培 養 上 清 中 のIactate dehydrogenase(LDH)値 の 測 定 に よ り検 討 し

た.そ の 結 果 今 回 使 用 し た 薬 剤 に は 細 胞 の 直 接 的 なcytotoxicityの な い こ とが 確 認 さ れ た.

(6)推計 学 的 検 定

得 ら れ た 測 定 値 はmean±SDと し て 表 示 し, そ の 有 意 差 検 定 はstudent's testを 用 いp value はp<0.05を 有 意 差 あ り と し た. 結 果 (1)柴朴 湯 抽 出 液 の リ ン パ 球 幼 若 化 反 応 に 及 ぼ す 作 用 1, 10, 100及 び500μg/mlの 最 終 濃 度 の 柴 朴 湯 エ キ ス を 添 加 し た 際 の ア ス カ リス 抗 原 刺 激 に よ る リン パ 球 幼 若 化 反 応 の 抑 制 率 は, Fig. 2に 示 す 如 く濃 度 依 存 性 に 上 昇 し,明 らか な 柴 朴 湯 の 抑 制 効 果 が 認 め ら れ た(p<0.01). (2)柴朴 湯 を 投 与 し た モ ル モ ッ ト血 清 の リ ン パ 球 幼 若 化 反 応 に 及 ぼ す 影 響

Fig. 2 Effect of the direct addition of extracts of Saiboku-to (TJ96) on lymphocyte blastogenic response

to ascaris antigen.

① 各群 に おけ る柴 朴 湯 投与 量

飼料 摂取 量 よ り求 め た柴朴 湯1日 平 均 投 与 量

は, A群, B群, C群 及 びD群 で それ ぞ れ200, 508,

1300及 び5230mg/kgで あ っ た.

②各 群 の 血清 を添 加 した際 の リンパ 球

幼 若 化 反 応 に及 ぼ す作 用

対照 のE群 の血清 を添 加 した際 の リンパ球 幼 若

化 反応(SI)の

平 均値 を基 準値 と し,各 群 の血

清 添加 時 のSI値

の抑 制率 を求 め る とFig. 3の

如 く, A群 が 最 も低 く,次 い でB群, C群 及 びD

群 の順 に有 意 に高率 とな った.す な わ ち柴朴 湯

投 与 量 の 多 い モル モ ッ トの 血 清 ほ ど,リ ンパ 球

幼 若 化 反応 の抑 制効 果 が 著 明 で あ っ た.

(3)柴朴湯 常 用 量服 用 時 の 血 中濃 度 の予 測

本 薬剤 の リンパ球 機 能 抑制 効 果 とい う観 点 か

ら,以 上 の 如 き抽 出液 添加 実 験 の 成 績 と血 清 添

加 実験 の成 績 と を対 比 す る事 に よ り,ヒ トで の

柴 朴湯 常 用 量服 用 時 の 血 中 濃度 を測定 した.ま

ず対 数 変 換 した柴 朴 湯 一 日投 与 量 と血清 を添加

した際 の リンパ 球 幼 若化 反 応 の 抑制 率 との 間 に

はFig. 4の 如 き有 意 な正 の相 関(r=0.77,

p<

0.01)が 認 め られ, y=36.0986x1-75.5129(y:

リン パ 球 幼 若 化 反 応 抑 制 率, x1:対 数 変 換 し た 柴 朴 湯 投 与 量)の 回 帰 直 線 が 得 ら れ た.ま た 同 様 に 対 数 変 換 し た 抽 出 液 濃 度 と リ ン パ 球 幼 若 化 反 応 の 抑 制 率 との 間 に もFig. 5の 如 く有 意 な 正 の 相 関(r=0.99, p<0.01)が 認 め ら れ, y= 25.5495x2-0.7939(y:リ ン パ 球 幼 若 化 反 応 抑 制 率, x2:対 数 変 換 し た 柴 朴 湯 抽 出 液 最 終 濃 度) の 回 帰 直 線 が 得 られ た. そ こ で 両 群 の リ ン パ 球 幼 若 化 反 応 の 抑 制 率 を 共 通 項 と して,こ れ ら の 回 帰 直 線 か ら添 加 血 清 に お け る 柴 朴 湯 投 与 量 と添 加 した 柴 朴 湯 抽 出 液 濃 度 の 関 係 を 表 す 関 係 式 を求 め た.ま ず 血 清 添 加 実 験 に お け る相 関 よ り,相 関 関 係 式y=36.0986 x1-75.5129(y:リ ン パ 球 幼 若 化 反 応 抑 制 率, x1:対 数 変 換 し た 柴 朴 湯 投 与 量)が 得 ら れ た. さ ら に 抽 出 液 添 加 実 験 で は,血 清 添 加 実 験 と 比 較 す る た め,添 加 し た 柴 朴 湯 抽 出 液 濃 度 す な わ ち最 終 濃 度 の4倍 量 と リ ン パ 球 幼 若 化 反 応 抑 制 率 との 間 の 関 係 式 を求 め,相 関 関 係 式y=25.5495 x3-16.1762(y:リ ンパ 球 幼 若 化 反 応 抑 制 率, x3:対 数 変 換 し た 柴 朴 湯 抽 出 液 濃 度)が 得 ら れ た.こ れ ら の 二 式 よ り柴 朴 湯 投 与 量 と抽 出 液 濃

318 岡 本 章 一

Fig. 3 Effect of serum obtained from guinea pigs orally treated with Saiboku-to (TJ96) on lymphocyte

blastogenic

response to ascaris antigen.

Fig. 4 Correlation

between lymphocyte

blastogenic

response to ascaris antigen

and serum obtained

from guinea pigs orally treated with Saiboku-to

(TJ96).

度 の 関 係 を 表 す 関 係 式x3=1.413x1-2.322(x3:対 数 変 換 し た 柴 朴 湯 抽 出 液 濃 度, x1:対 数 変 換 した 柴 朴 湯 投 与 量)が 得 ら れ た. (Fig. 6)

か か る関 係 式 は柴 朴 湯 投 与 量 とその際 の血 中

濃度 の関 係 を示 唆す る式 と考 え られ る.そ こで

この式 を ヒ トに 応用 す る と,ま ず柴 朴湯 の ヒ ト

常用 量 は成 人 で1日7.5gで

あ るが,体 重 を50kg

Fig. 5 Correlation

between

lymphocyte

blastogenic

response

to ascaris

antigen

and extracts

of

Saiboku-to

(TJ96).

Fig. 6 Relation between extracts

of Saiboku-to

(TJ96) and serum obtained from guinea pigs orally

treated with Saiboku-to (TJ96).

で考 え る と体 重 あた りの一 日投 与量 は150mg/kg/

dayで あ る.こ の数 値 を今 回得 ちれ た 関係 式 に

代 入す る と,同 等 の リンパ球 幼 若 化 反 応 を抑制

す る のに 要 す る柴 朴 湯 の抽 出液 濃 度 が得 られ る

(5.65μg/ml).す な わ ち リン パ 球 機 能 抑 制 効 果 の 観 点 か ら み る と ヒ トに お け る 柴 朴 湯 常 用 量 服 用 時 の 血 中 濃 度 は5.65μg/mlと _{推 測 さ れ た .}

320 岡 本 章 一 考 察 気 管 支 喘 息 の 治 療 薬 は,近 年 解 明 さ れ つ つ あ る複 雑 な 病 態 に 対 応 す べ く数 多 くの ア レ ル ギ ー 薬 が 開 発 さ れ て い る.ま た そ れ に と も な い 和 漢 薬 も ま た 西 洋 医 学 的 手 法 で そ の 薬 理 作 用 が 明 ら か に さ れ つ つ あ る が,和 漢 薬 の 特 性 の 故 に ヒ ト で の 血 中 薬 物 濃 度 の 直 接 的 な 測 定 方 法 は い ま だ 不 可 能 な よ う で あ る.そ こ で 本 編 は,第1編 で 明 らか に し た 柴 朴 湯 の 薬 理 作 用 の う ち 最 も 重 要 と考 え ら れ る リン パ 球 機 能 の 抑 制 効 果 を通 じて, 血 清 薬 理 学 的 手 法 を 用 い て ヒ トで の 血 中 柴 朴 湯 濃 度 の 予 測 を 試 み た.そ の 結 果,柴 朴 湯 は そ の 製 剤 抽 出 液 中 に リン パ 球 機 能 を 抑 制 す る 成 分 を 含 ん で お り,ま た 生 体 内 で 代 謝 さ れ た 後 の 血 清 中 の 代 謝 産 物 に も リ ン パ 球 機 能 抑 制 作 用 の あ る こ とが 確 認 さ れ た.か か る薬 理 作 用 の 観 点 か ら み る と,ヒ トに お け る 柴 朴 湯 常 用 量 服 用 時 の 血 中 柴 朴 湯 濃 度 は5.65μg/mlと 推 測 さ れ た. 気 管 支 喘 息 病 態 に お け る リ ン パ 球 の 役 割 は, IgE抗 体 産 生 系 に おけ るT細 胞 に よるregulation の み な ら ず11),好 中球,好 酸 球,好 塩 基 球 な ど の effector cellに 対 す る種 々 の リ ン ホ カ イ ン を産 生 す る こ と に よ り,直 接 的 あ る い は 間 接 的 に 関 与 し て い る もの と考 え ら れ て い る. Dunnillら12) は 喘 息 死 の 気 道 粘 膜 に は 好 酸 球 と 共 に リ ン パ 球 の 著 しい 浸 潤 が 認 め られ る こ と を 報 告 し,宮 川 ら13)は 重 症 難 治 性 喘 息 患 者 で 抗 原 特 異 的 なIL-2お よ びNCF産 生 能 の 亢 進 を報 告 し て い る.最 近 有 症 期 の 気 管 支 喘 息 患 者 のBALF中 にIL-2 を は じめ とす る種 々 の サ イ トカ イ ン が 増 加 して い る 報 告14)や,動 物 モ デ ル に お い てIL-2投 与 に よ る 気 道 反 応 の 増 強 を 認 め た 報 告15)な どか ら も気 道 反 応 に 対 す る リ ン パ 球 の 直 接 的 な 関 与 が 示 唆 さ れ て い る.さ ら にT細 胞 機 能 抑 制 剤 で あ る cyclosporinAの 気 管 支 喘 息 に 対 す る有 効 性16) 17) や,動 物 モ デ ル で のLARの 抑 制18)な ど が 報 告 さ れ て お り,気 管 支 喘 息 特 に 難 治 性 喘 息 の 治 療 に お い て は リ ン パ 球 機 能 を抑 制 す る こ と が 重 要 と思 わ れ る. 今 回 検 討 し た 柴 朴 湯 の 薬 理 作 用 に 関 し て は, 江 田 ら がIV型 ア レ ル ギー の 抑 制 作 用19)を 報 告 し た の を始 め,こ れ ま で に 様 々 な 報 告 が な さ れ て い る.難 治 性 喘 息 の 治 療 薬 と し て 柴 朴 湯 を 考 え た 場 合,細 胞 反 応 型 ア レ ル ギ ー に 対 す る抑 制 作 用 が そ の 薬 理 作 用 と し て 重 要 で あ る.柴 朴 湯 は 10種 類 の 生 薬 か ら 構 成 さ れ て い るが,そ の 中 で か か る 抑 制 作 用 を 示 す 成 分 と して,柴 胡 に含 ま れ る サ イ コ サ ポ ニ ン,半 夏 に 含 ま れ る フ ェ ル ラ 酸,黄 〓 に 含 ま れ る バ イ カ レ ン,甘 草 に 含 まれ る グ リチ ル リ チ ン,厚 朴 に 含 ま れ るK-16Cな どが 知 ら れ て い る.柴 朴 湯 の 薬 理 作 用 は こ れ ら の 様 々 な 物 質 の 相 互 作 用 に よ る もの と考 え られ て い る. 柴 朴 湯 が モ ル モ ッ ト喘 息 モデ ルに お いてin vivo で の リ ン パ 球 機 能 抑 制 効 果 を 示 す こ と は 第1編 で 報 告 し た が,ヒ トの リン パ 球 機 能 に 対 す る 抑 制 作 用 に つ い て はin vitroで の い くつ か の報 告5) 6) 7) 8)が あ る.し か し柴 朴 湯 は 漢 方 方 剤 の 特 殊 性 の た め, in vitroで の 効 果 とin vivoで の 効 果 の 相 関 が 不 明 瞭 で あ る.萩 原 は こ の 点 に つ い て, 漢 方 方 剤 を 直 接 添 加 し た 場 合 と,一 度 体 内 の代 謝 系 を 通 し た 場 合 で は 薬 理 作 用 が 異 な る可 能 性 を示 唆 して お り,そ の 薬 理 作 用 の 解 明 に は 血 清 薬 理 学 的 方 法 が 有 用 で あ る と述 べ て い る9).そこ で 今 回,血 清 薬 理 学 的 方 法 で 柴 朴 湯 の リンパ 球 に 対 す る 抑 制 効 果 を 検 討 し た と こ ろ,柴 朴 湯 の 代 謝 産 物 を 含 む 血 清 に は 投 与 量 に 依 存 し た抑 制 効 果 が 認 め ら れ,ヒ ト常 用 量 の 柴 朴 湯 服 用 時 の 柴 朴 湯 血 中 濃 度 は5.65μg/mlと 推 測 さ れ た. 今 回 の 実 験 は 血 清 を 用 い た 実 験 で あ っ た ため, 柴 朴 湯 を 投 与 し て 得 ら れ た血 清 の リン パ 球 幼 若 化 反 応 の 抑 制 効 果 が,柴 朴 湯 の 代 謝 産 物 単 独 の 薬 理 効 果 で あ る の か そ れ と も代 謝 産 物 と血 清 中 に 生 理 的 に 含 ま れ て い る 成 分 の 相 互 作 用 に よ る 薬 理 効 果 で あ る の か は 不 明 で あ る.ま た ヒ トと モ ル モ ッ トの 種 の 差 も考 え ら れ る.こ の 点 に つ い て 考 え て み る と,江 田5)に よ り報 告 され た ヒ ト 末 梢 血 単 核 球 か ら のIL-2お よびNCA産 生 抑 制 作 用 で は, 100μg/mlの 濃 度 で は そ れ ぞ れ9.6%, 8.2%の 抑 制 率 で あ り,強 い 抑 制 作 用 は 認 め られ て い な い.ま た 中 島 ら は500μg/mlの 柴 朴 湯 添 加 で,ダ ニ 抗 原 に よ る ヒ ト リ ン パ 球IgE-Fcレ セ プ タ ー の 誘 導 を抑 制 し,リ ン パ 球 培 養 上 清 に よ る好 酸 球 の 気 道 線 毛 運 動 傷 害 を 抑 制 す る と報告 し て い る6) 7).こ れ らの 報 告 で は い ず れ も今 回 推

定 され た血 中濃 度 よ りも高 濃度 での 抑制 効 果 を

示 してお り,また柴 朴 湯 抽 出液 添 加実 験 で100μg/

mlの 濃度 で の リンパ 球 幼 若 化 反 応 の 抑 制 率 が

52.28%で

あ っ た こ とか ら,上述 の 実 験 とは測 定

系 が 異 な るが,モ ル モ ッ トに比 して ヒ トの リン

パ 球 に 及ぼ す 抑制 効 果 は 弱 い可 能 性 が考 え られ

る. in vivoに お いて,モ ル モ ッ ト喘 息 モデ ル で

は1週 間 とい う短期 間 投 与 で効 果 を発 現 す るの

に対 し,ヒ トで は投 与 開 始か ら効 果発 現 まで数

ヶ月 が 必要 であ る.そ の理 由 として,ヒ

トで は

弱 い リンパ 球機 能抑 制 作 用 を長 期 間作 用 させ る

こ とに よ り効 果 が発 現 す る可能 性が考 え られ た.

一 方

_{,こ れ ら高 濃度 での抑 制 作 用 が報 告 され て}

い るの に対 し,冠 木 ら8)は30μg/mlと い う低 濃度

の柴 朴湯 添 加 でIL-2存 在 下 での リンパ球 の反 応

性 の 誘 導が 抑制 され る こ とを報 告 し,そ の薬 理

作 用 点 としてT細 胞 よ りもむ しろ抗 原 提 示細 胞 に

対 す る柴 朴 湯 の 抑制 作 用 を想 定 して お り,本 剤

の薬理 作 用 を考 え る上 で今 後 さ らに各 方 面 か ら

の検討 が必 要 と考 え られ た.

結

論

生体 内 での 柴 朴湯 代 謝産 物 の リンパ 球 機能 に

及 ぼ す 影 響 を 明 ら か に し,そ の 薬 理 作 用 を応 用 し て ヒ ト常 用 量 で の 血 中 柴 朴 湯 濃 度 を 推 測 す る 目的 で,血 清 薬 理 学 的 手 法 を用 い て リ ン パ 球 幼 若 化 反 応 に 対 す る影 響 を 検 討 し た 結 果,以 下 の 成 績 を 得 た. (1)柴朴 湯 抽 出 液 の 添 加 に よ り,リ ン パ 球 幼 若 化 反 応 は 濃 度 依 存 性 に 抑 制 さ れ た(p<0.01). (2)飼料 中 の 柴 朴 湯 濃 度 が 高 い ほ ど,そ の 血 清 添 加 に よ る リ ン パ 球 幼 若 化 反 応 は 有 意 に 抑 制 さ れ た(p<0.01). (3)それ ら の 抑 制 率 か ら柴 朴 湯 投 与 量 と そ の 際 の 血 清 中 濃 度 の 関 係 を 示 唆 す る 式 が 得 られ た, 以 上 よ り柴 朴 湯 の リ ン パ 球 機 能 抑 制 効 果 は, in vitroの み な ら ずin vivoで の 代 謝 産 物 で も

認 め ら れ,ヒ トに お け る 常 用 量 服 用 時 の 血 中 濃 度 は5.65μg/mlと 推 測 さ れ た. 稿 を終 え る に あ た り,御 指 導 御 校 閲 を賜 りま した 恩 師木 村 郁 郎 教 授 に深 甚 の謝 意 を 表 し ます と共 に, 直 接 御 指 導 御 助 言 を頂 きま した高 橋 清 講 師 に深 謝 致 します. (なお,本 論 文 の要 旨は 第5回 日本 ア レル ギー 学 会 春 季 臨 床 大 会 にお い て発 表 した.) 文 献 1) 木 村 郁 郎:喘 息 の病 型 とそ の本 質 論-中 高年 発 症 型 難 治 性 喘 息 の独 立性.日 本 胸 部 疾 患 学 会 雑 誌(1983) 21, 181-182. 2) 小 林 節 雄,笛 木 隆 三,野 口英 世,田 中一 正,川 合 満,倉 沢 卓 也,西 山秀 樹,中 島重 徳,吾 郷 晋 浩,長 野 準, 井 上 夫,近 藤 寛 治,江 頭 洋祐,山 崎 力,浅 井 貞 宏,下 田照 文,渡 辺 尚,栃 木 崇 男,樫 田裕 一:気 管 支 喘 息 に 対 す る柴 朴 湯 エ キ ス剤 の長 期 投 与効 果 の検 討-多 施 設 共 同 試 験 結 果 に つ い て-.和 漢 医薬 学 会 誌 (1985) 2, 598-599. 3) 長 野 準,小 林 節 雄,中 島重 徳,江 頭 洋 祐:気 管 支 喘 息 に対 す る柴 朴湯 の 長期 投 与 の検 討-内 科 領 域 多施 設open trialに よ る評 価-.呼 吸(1988) 7, 76-87. 4) 江 頭 洋祐:ス テ ロ イ ド依 存 性 気 管 支 喘 息 に対 す る,封 筒 法 に よ る柴 朴 湯 投 与 群,非 投 与群 の2群 比 較 臨 床 試 験 成 績 報 告.漢 方 と免 疫 ア レ ル ギー(1990) 4, 128-144. 5) 江 田 良 輔:難 治 性 喘 息 の 治 療 に 関す る研 究.重 症 難 治性 喘 息 に お け る柴 朴 湯 の臨 床 的 並 びにIV型 ア レル ギー 反 応 に及 ぼ す 影 響.岡 山医 誌(1990) 102, 1309-1322. 6) 中 島 重徳,東 田有 智,茄 原順 一,中 野 直 子,須 永 進:気 管 支 喘 息 に対 す る柴 朴 湯 の 作 用-ダ ニ抗 原 に よ る リンパ 球IgE-Fc受 容 体 誘 導 な らび に 実 験 的IAR, LARに 対 す る影 響-.漢 方 と免 疫 ア レ ル ギー(1990) 3, 157-165.

7) 山本 高宏,茄 原 順 一,黄 瑾,桜 田隆 一,浦 上 理 恵,毛 利 俊 子,瀬 口光 代,倉 知 大,原 口龍 太,中 野 直 子,大 川 健 太 郎,中 島重 徳:ア トピー 性 喘 息 患 者 リンパ 球 の特 異 的抗 原 刺 激 培養 上 清 の 好 酸 球 の気 道 線 毛 運

322 岡 本 章 一 動 傷 害 性 に 対 す る 作 用 へ の 柴 朴 湯 の 影 響.ア レ ル ギ ー(1992) 41, 1033. 8) 冠 木 智 之,野 間 剛,川 野 豊,伊 藤 雅 彦,吉 沢 い つ み,前 田 和 一,馬 場 実:気 管 支 喘 息 小 児 の 末 梢 血 リ ン パ 球 に お け る 抗 原 特 異 的Interleukin2反 応 性 誘 導 に 対 す る 柴 朴 湯 の 処 理 効 果.ア レ ル ギ ー(1990) 39, 610-614. 9) 荻 原 幸 夫:方 剤 と し て の 漢 方 を 考 え る.漢 方 と免 疫 ア レ ル ギ ー(1992) 5, 132-152.

10) Iijima

H,

Ishii M, Yamauchi K, Chao C-L, Kimura K, Shimura S, Shindoh Y, Inoue H, Mue

S and Takishima

T: Bronchoalveolar

lavage and histologic

characterization

of late asthmatic

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Studies

on the

treatment

of intractable

asthma

Part

2. Effect

of Saiboku-to

on lymphocyte

function

in the experimental

asthma

using

guinea

pigs

Shoichi

OKAMOTO

Second Department

of Internal

Medicine,

Okayama

University

Medical School,

Okayama

700, Japan

(Director:

Prof. I. Kimura)

Saiboku-to is a useful drug in the treatment of intractable asthmatics. The most important action mechanism of Saiboku-to seems to be a suppression of lymphocyte activation. The relationship between the in vitro and in vivo effects is not clear because the metabolism of Kampo medicine is unknown. Therefore, in this study two in vitro experimental systems were compared to evaluate the pharmacological effect of Saiboku-to on the lymphocyte blas togenesis. The first system involved the addition of serum obtained from guinea pigs treated orally with Saiboku-to, while the second system involved the direct addition of the Saiboku-to extract to the medium.

Saiboku-to has a suppressive effect on lymphocyte blastogenesis and also the metabolite of Saiboku-to had a suppressive effect. According to the formula based on these data, the serum level of Saiboku-to on oral administration of the common dose was assumed to be 5.65ƒÊg/ml in bronchial asthmatics.

These findings suggest that Saiboku-to may have an inhibitory effect in the cell-mediated allergic reaction by lymphocyte activation in vivo.