連絡者 木下英樹（きのした ひでき） 〒9820215 宮城県仙台市太白区旗立2 丁目 21 宮城大学 食産業学部（太白キャンパス）フードビジネス学科 （Tel，Fax0222451382，E-mailkinoshih＠myu.ac.jp） 2011年 7 月15日 受付 2011年11月14日 受理
Milk Science Vol. 60, No. 3 2011
原著論文
MRS 寒天培地と変法 LBS 寒天培地における
乳酸菌の選択的単離能の比較
木下英樹・井本 瞬・須田義人・石田光晴
(宮城大学食産業学部)
Comparison of selectivity of MRS agar and modiˆed LBS agar for isolation of lactobacilli
Hideki Kinoshita, Shun Imoto, Yoshihito Suda, Mitsuharu Ishida
(Department of Food Management, School of Food, Agricultural and Environmental Sciences, Miyagi University, Taihaku-ku, Sendai, Miyagi 9820215)
Abstract
Members of the genus Lactobacillus are good candidates for probiotics. Methods are needed to select for these microor-ganisms. In this study, we isolated lactobacilli using two selective media, MRS agar and modiˆed LBS (mLBS) agar; and compared their selectivity for lactobacilli. The detection rate for lactobacilli was diŠerent comparing MRS agar and mLBS agar, 59.4 and 75.0, respectively. A growth test showed Lb. plantarum, Lb. coryniformis, Lb. rhamnosus, Lb. gasseri, Lb. brevis, Lb. fermentum, Lb. alimentarius, Lb. paracasei and Lb. casei strains grew on mLBS agar; whereas the growth of Lb. sakei was slight and no growth for Lb. curvatus and Lb. rossiae. All strains isolated using mLBS agar could grow on MRS agar. The results suggest selectivity of mLBS agar was attributed to its acidity.
緒 言 プロバイオティクスは，アンチバイオティクス（抗生 物質）の対義語として作られた用語であり，1989年， Fuller によって，「腸内菌叢のバランスを改善すること により宿主動物に有益に働く生菌添加物」と定義され た1)。現在，プロバイオティクスは，WHO/FAO によ り「適正量を摂取することにより宿主の健康に有益な作 用をもたらす生きた微生物」と定義されている2) 。Lac-tobacillus属乳酸菌は，プロバイオティクスの代表的な 菌 で あ り ， 整 腸 作 用3)， 血 中 コ レ ス テ ロ ー ル 低 減 作 用4)，免疫賦活化作用5)および抗腫瘍作用6)など様々な 生理効果が知られている。我が国で市販されている機能 性 ヨ ー グ ル ト に は ， ブ ル ガ リ ア 菌 （ Lactobacillus
del-brueckiisubsp. bulgaricus ） お よ び サ ー モ フ ィ ル ス 菌
（Streptococcus thermophilus）以外に，Lb. acidophilus グ
ループ乳酸菌，Lb. casei, Lb. rhamnosus, Lb. reuteri,
Bi-ˆdobacterium longumや B. breve などがプロバイオティ
クスとして添加され，その一部は「特定保健用食品」と しての認可を得ている。また，Lactobacillus 属を含む乳 酸菌は発酵乳，日本酒，漬物などを通じて古くから利用 さ れ て お り ， こ の よ う な 菌 群 は 「 GRAS ( Generally Recognized As Safe)｣7,8)と呼ばれ，一般に安全と認めら れている。最近では，植物由来の乳酸菌が注目されるな ど，現在でも有用乳酸菌の単離は数多く行われており， 今後も益々増えてくると予測される。
MRS 寒天培地（MRS agar: de Man, Rogosa, and Sharpe agar）は，代表的な乳酸桿菌（Lactobacillus 属） の選択培地であり，現在，多くの研究で使用されてい る。しかしながら，その選択性は低く，Enterococcus 属，
Streptococcus属，Escherichia coli など乳酸桿菌以外の様
々な菌がコロニーを形成する9)。一方，変法 LBS 寒天
培地（mLBS agar: modiˆed LBS agar）はビフィドバク テリウム属などが小さなコロニーを形成するが，生育す
るコロニーのほとんどが Lactobacillus 属である9)。その
ため，乳酸桿菌を効率的に単離する際は，非常に有用な 培地であると言える。しかしながら，選択性が強すぎる ため，Lactobacillus 属も生育できない可能性があると考
第巻 えられた。そこで本研究では，2 種の乳酸桿菌用選択培 地を用いて菌を単離し，その選択性を比較検討すること を目的とした。 実験方法 . 乳酸菌の単離 漬物やキムチなど様々な試料（Table 1）に滅菌 PBS を加え良く懸濁し，懸濁液0.1 mL を MRS 寒天培地お よび変法 LBS 寒天培地に塗抹し，37°Cで 2 日間，嫌気 培養した。コロニー形成後，各プレートからできるだけ 形，色，大きさの異なるコロニーを 5 つまたは10ずつ 釣菌し，MRS broth で培養し，30グリセロール中に － 80 °Cで 保 存 し た 。 MRS 寒 天 培 地 は ， MRS broth
(Difco Laboratories, Detroit, MI, USA）に1.5寒天 （Unipath Ltd, Basingstoke, Hampshire, UK）を添加し， 作製した（pH 6.5）。変法 LBS 寒天培地（以下 mLBS 寒天培地modiˆed LBS agar; pH 4.3）は，0.8 (w/v) Lab-lemco powder (Oxoid Ltd, Basingstoke, Hampshire, UK), 0.1 M 酢酸ナトリウムおよび3.7 (v/v）酢酸を LBS 寒天培地（Becton Dickinson and Co., Sparks, MD,
USA )10)に 添 加 し ， 作 製 し た 。 MRS 寒 天 培 地 お よ び mLBS 寒天培地の組成は Table 2 に示した。 . 単離菌の同定 保存した菌を MRS 寒天培地で培養し，コロニー形成 後，63f (5′CAGGCCTAACACATGCAAGTC3′）と 518r (5′ATTACCGCGGCTGCTGG3′）のプライマー セ ッ ト を 用 い ， コ ロ ニ ー ダ イ レ ク ト PCR に よ り 16S rDNA（約450 bp）を増幅した。塩基配列解読は，Big-DyeTerminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, CA, USA）を用いたダイターミネーター法 によって行った。プライマーは，63f を用い，Applied Biosystems 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosys-tems, CA, USA）により配列を解析した。配列解析後， DNA Data Bank of Japan (DDBJ, Mishima, Japan）の FASTA または BLAST プログラムにより，相同性解析 を行い，簡易同定を行った。 . 各寒天培地での乳酸桿菌の生育性 MRS 寒 天 培 地 か ら 単 離 さ れ た 乳 酸 菌 に つ い て ， mLBS 寒天培地での生育性を検討した。MRS 寒天培地 から単離された乳酸菌を MRS broth で一晩培養し，菌 液を LBS 寒天 培地に 塗抹し ，37°Cで 2 日 間嫌 気培養 し，その生育の有無を検討した。同様に mLBS 寒天培 地で単離した菌についても MRS 寒天培地での生育性を 検討した。 結 果 乳酸桿菌の単離・同定結果を Table 1 に示した。漬物 やキムチなど主に植物由来の16サンプルから計47菌株 の乳酸桿菌を単離することができた。その他，乳酸桿菌 以外の菌も29菌株単離した。MRS 寒天培地からは全部 で64菌株の細菌を単離し，乳酸桿菌はそのうち38菌株 で ， 全 体 の 59.4 だ っ た 。 乳 酸 桿 菌 以 外 で は ， Leu-conostoc sp., Weissella cibaria, Pediococcus pentosaceus, Staphylococcussp., Pantoea agglomerans, Enterobacter sp.,
Enterobactersp./Pantoea sp. および Escherichia coli が単
離された。一方，mLBS 寒天培地では全部で12菌株を 単離し，そのうち 9 菌株が乳酸桿菌と同定された（検 出率75）。乳酸桿菌以外の 3 菌株は，Staphylococcus 属 ， Pediococcus 属 お よ び Enterobacter 属 が そ れ ぞ れ 1 菌株ずつであった。しかしながら，mLBS 寒天培地に 生育したStaphylococcus 属，Pediococcus 属の生育性は悪 く，小さなコロニーだった（データ未記載）。 Table 3には単離した乳酸桿菌を菌種別にまとめた。 単離された乳酸桿菌で最も多かった菌種は Lb. sakei で 13菌株，次いで Lb. plantarum が 5 菌株，Lb. corynifor-misおよび Lb. rhamnosus が 4 菌株ずつとなった。それ ぞれの全体に対する検出率は27.7, 10.6, 8.5およ び8.5だった。また生育性試験において，Lb.
planta-rum, Lb. coryniformis, Lb. rhamnosus, Lb. gasseri, Lb. bre-vis, Lb. fermentum, Lb. alimentarius, Lb. paracasei および
Lb. caseiは，単離した全ての菌株が mLBS 寒天培地に 良好な生育をみせた（生育率100）。一方で，13菌株 と最も多く単離された Lb. sakei は，mLBS 寒天培地で は 1 菌株のみしか生育できなかった（生育率 8）。ま た，Lb. curvatus および Lb. rossiae は，mLBS 寒天培地 では全く生育することができなかった（生育率 0）。 mLBS 寒天培地で単離した12菌株は，全て MRS 寒天培 地で良好な生育が見られた（データ未記載）。 Table 4 には，乳酸桿菌以外の単離菌をまとめた。乳 酸桿菌以外の乳酸菌としては，Leuconostoc sp. が 8 菌株，
Weissella cibariaお よ び Pediococcus pentosaceus が 1 菌
株ずつの計10菌株が単離された。しかしながら，それ らは MRS 寒天培地では生育性を示したが，mLBS 寒天 培地で生育したのは P. pentosaceus, 1 菌株のみだった。 また，乳酸菌以外の菌種は，Staphylococcus 属が12菌株 と最も多く検出された。次いで，Pantoea agglomerans,
Enterobactersp. および Enterobacter sp./Pantoea sp. が 2
菌株ずつ，Escherichia coli が 1 菌株単離された。これ ら の 中 で mLBS 寒 天 培 地 に 生 育 性 を 示 し た 菌 株 は ，
Staphylococcus属が 1 菌株（生育率8.3），Pantoea
Table 1 Identiˆcation of lactobacilli from various materials.
Strain number Species identiˆed Homology Isolated Source Isolated culture
1 Lb. gasseri 99.8 Takuan pickle1 MRS
2 Lb. sakei 98.8 Takuan pickle1 MRS
3 Lb. sakei 98.1 Takuan pickle1 MRS
4 Lactobacillussp. 98.6 Takuan pickle1 MRS
5 Lb. gasseri 94.8 Takuan pickle1 MRS
6 Lb. gasseri 99.8 Kimchi2 MRS
7 Lb. curvatus 99.6 Kimchi2 MRS
8 Lb. curvatus 99.8 Kimchi2 MRS
9 Lb. sakei 99.1 Kimchi2 MRS
10 Lb. paracasei 100.0 Nozawana pickle3 MRS
11 Lb. casei 98.3 Nozawana pickle3 MRS
12 Lactobacillussp. 98.5 Nozawana pickle3 MRS
13 Lb. coryniformis 99.1 Kimchi4 MRS
14 Lb. coryniformis 98.3 Kimchi4 MRS
15 Lb. sakei 98.3 Kimchi4 MRS
16 Lb. coryniformis 99.6 Kimchi4 MRS
17 Lb. brevis 99.3 Kimchi5 MRS
18 Lb. rhamnosus 99.8 Rice-bran paste6 MRS
19 Lb. rhamnosus 99.8 Rice-bran paste6 MRS
20 Lb. rhamnosus 100.0 Rice-bran paste6 MRS
21 Lactobacillussp. 100.0 Rice-bran paste6 MRS
22 Lb. rhamnosus 100.0 Rice-bran paste6 MRS
23 Lb. coryniformis 99.6 Japanese pickle7 MRS
24 Lb. sakei 100.0 Rice8 MRS 25 Lb. sakei 99.0 Kimchi9 MRS 26 Lb. sakei 99.0 Kimchi9 MRS 27 Lb. sakei 99.0 Kimchi9 MRS 28 Lb. sakei 100.0 Amazake10 MRS 29 Lb. sakei 99.4 Amazake10 MRS 30 Lb. sakei 99.6 Amazake10 MRS 31 Lb. sakei 100.0 Amazake10 MRS
32 Lb. plantarum 99.6 Chinese yam pickle11 MRS
33 Lactobacillussp. 99.8 Chinese yam pickle11 MRS
34 Lactobacillussp. 99.6 Chinese yam pickle11 MRS
35 Lb. fermentum 99.8 Garbage12 MRS
36 Lb. fermentum 99.8 Garbage12 MRS
37 Lb. rossiae 96.6 Ginger pickle13 MRS
38 Lactobacillussp. 98.9 Ginger pickle13 MRS
39 Lb. plantarum 99.8 Japanese pickle14 mLBS
40 Lb. sakei 98.8 Rice-bran paste15 mLBS
41 Lb. plantarum 99.6 Rice-bran paste15 mLBS
42 Lb. brevis 99.6 Rice-bran paste15 mLBS
43 Lactobacillussp. 99.8 Leaf mustard pickle16 mLBS
44 Lb. alimentarius 99.3 Leaf mustard pickle16 mLBS
45 Lb. plantarum 99.6 Leaf mustard pickle16 mLBS
46 Lb. plantarum 100.0 Leaf mustard pickle16 mLBS
47 Lb. alimentarius 99.8 Leaf mustard pickle16 mLBS
Not identiˆed
116 The same numbers indicate same samples.
第号 2 菌株（生育率100）だった。また，mLBS 寒天培地 では生育できなかった菌をランダムに選択し，酢酸と Lab-lemco powder（牛肉粉末）を添加していない市販 の LBS 寒 天 培 地 で の 生 育 性 を 確 認 し た と こ ろ ， Lac-tobacillus属は試験した10菌株全てが良好な生育を示し た 。 ま た ， Leuconostoc 属 は 9 菌 株 中 7 菌 株 （ 生 育 率
Table 2 Components of MRS agar and mLBS agar. MRS agar
Components g/L
Proteose Peptone No. 3 10.0
Yeast Extract 5.0 Dextrose 20.0 Ammonium Citrate 2.0 Polysorbate 80 1.0 Sodium Acetate 5.0 Magnesium Sulfate 0.10 Manganese Sulfate 0.05 Dipotassium Phosphate 2.0 Beef Extract 10.0 Agar 15.0 added component mLBS agar Components g/L
Pancreatic Digest of Casein 10.0
Yeast Extract 5.0
Dextrose 20.0
Ammonium Citrate 2.0
Polysorbate 80 1.0
Sodium Acetate Hydrate 25.0 Magnesium Sulfate 0.575 Manganese Sulfate 0.12 Monopotassium Phosphate 6.0 Ferrous Sulfate 0.034 Agar 15.0 Lab-lemco powder 8.0 Sodium Acetate 9.0 added component
Table 3 The number of detected lactobacilli and growth strain on mLBS agar.
Species detected strainsNumber of strain on mLBS agarNumber of growth (growth rate) Lb. sakei 13(27.7) 1( 8) Lb. plantarum 5(10.6) 5(100) Lb. coryniformis 4( 8.5) 4(100) Lb. rhamnosus 4( 8.5) 4(100) Lb. gasseri 3( 6.4) 3(100) Lb. curvatus 2( 4.3) 0( 0) Lb. brevis 2( 4.3) 2(100) Lb. fermentum 2( 4.3) 2(100) Lb. alimentarius 2( 4.3) 2(100) Lb. paracasei 1( 2.1) 1(100) Lb. casei 1( 2.1) 1(100) Lb. rossiae 1( 2.1) 0( 0) Lactobacillussp. 7( 2.1) 5( 71) Total 47 30( 64) Not identiˆed
Table 4 The number of detected other species without lac-tobacilli and growth strain on mLBS agar.
Species detected strainsNumber of (detection rate) Number of growth strain on mLBS agar (growth rate) Leuconostocsp. 8(27.6) 0( 0) Weissella cibaria 1( 3.4) 0( 0) Pediococcus pen-tosaceus 1( 3.4) 1( 100) Staphylococcussp. 12(41.4) 1( 8.3) Pantoea agglomerans 2( 6.9) 1( 50) Enterobactersp. 2( 6.9) 2( 100) Enterobactersp./ Pantoeasp. 2( 6.9) 0( 0) Escherichia coli 1( 3.4) 0( 0) Total 29 5(17.2) 第巻 77.8），Weissella 属は 1 菌株中 1 菌株（生育率100）， Staphylococcus属は11菌株中 6 菌株（生育率54.5）， Escherichia coli は1 菌株中 1 菌株（生育率100）とい う結果になった。Pantoea agglomerans (1 菌株）および Enterobactersp./Pantoea sp. (2 菌株）は生育できなか った（生育率 0）。 考 察 乳酸菌は，宿主への健康保健効果に加え，バクテリオ シンを利用した食品保存や抗生物質の代替品としての家 畜への投与など様々な利用性があるため，現在でも積極 的に分離と利用が行われている。中でも Lactobacillus 属は，プロバイオティクスの代表的な属であり，積極的 に利用されている。本研究では，様々な試料より MRS 寒天培地と mLBS 寒天培地の 2 種の乳酸桿菌用選択培 地を用いて菌を単離し，その選択性を比較した。 単離試験の結果，乳酸桿菌の検出率は，MRS 寒天培 地では59.4，mLBS 寒天培地では75.0であり，また， mLBS 寒天培地で検出された Staphylococcus 属，Pedio-coccus属の生育性は悪く，小さなコロニーだった。ま た，筆者らが以前に行ったヒト腸管ムチンからの乳酸桿 菌の単離試験においても，MRS 寒天培地では，乳酸桿 菌の検出率は僅か12であり，Enterococcus
属，Strep-tococcus属，Escherichia/Shigella 属および Staphylococcus
属の菌が多く検出されたが，mLBS 寒天培地では単離 した菌全てが乳酸桿菌だった9)。今回用いた漬物などの 単離源は，乳酸桿菌の存在比率が高いため，MRS 寒天 培地を用いても乳酸桿菌の検出率は59.4と比較的高か ったが，腸管や糞便のように多種多様の菌種がいる場合， MRS 寒天培地では乳酸桿菌を効率的に単離するのは難 しいと考えられ，その場合，選択性の高い mLBS 寒天
第号
培地を用いる方が適切かも知れない。
また，菌種別で比較した場合，Lb. plantarum, Lb.
coryniformis, Lb. rhamnosus, Lb. gasseri, Lb. brevis, Lb. fermentum, Lb. alimentarius, Lb. paracasei および Lb.
caseiは，単離した全ての菌株が mLBS 寒天培地に良好 な生育をみせた。一方で，MRS 寒天培地で最も多く単 離された Lb. sakei は，mLBS 寒天培地では 1 菌株のみ し か 生 育 で き ず ， Lb. curvatus お よ び Lb. rossiae は mLBS 寒天培地では全く生育できなかった。このこと から，mLBS 寒天培地は選択性が高く乳酸桿菌でも生 育できない菌があり，それは菌種によって異なると考え られた。また，市販の LBS 寒天培地（酢酸と Lab-lemco powder（牛肉粉末）無添加）では，Lactobacillus 属は 試験した10菌株全てが良好な生育を示した。各培地の pH に注目してみると，MRS 寒天培地が pH 6.5, LBS 寒天培地が pH 5.8，そして mLBS 寒天培地が pH 4.3で ある。Lactobacillus 属は LBS 寒天培地に良好な生育を 示したことから pH 5.8では生育に影響がないと考えら れた。また，MRS 寒天培地にも牛肉粉末が添加されて いることから牛肉粉末の添加により生育が阻害されたと は 考 え に く く ， mLBS 寒 天 培 地 に 生 育 で き な い Lac-tobacillus属乳酸菌は，酢酸添加により pH が4.3に低下 したことで生育が阻害されたと考えられた。実際に Lb. plantarum, Lb. acidophilus, Lb. rhamnosus, Lb. gasseri, Lb. fermentum, Lb. salivarius, Lb. casei, Lb. paracasei お よび Lb. oris などは，胃酸耐性試験（pH 2～3）でも生 存可能な菌が多く報告されており，耐酸性に優れている と考えられるが，Lb. sakei や Lb. ruminis などの菌種は 比 較 的 低 pH で の 生 存 性 が 低 い こ と が 報 告 さ れ て い る11～14)また，LBS 寒天培地と mLBS 寒天培地の比較か ら Lactobacillus 属に関しては，牛肉粉末や過剰なミネ ラルは生育に必ずしも必要ではないと考えられた。なお， Leuconostoc 属，Staphylococcus 属，Pantoea agglomerans および Enterobacter sp./Pantoea sp. では MRS 寒天培地 には生育するが LBS 寒天培地では生育しない菌株が存 在したことから，これらの菌株は pH 5.8でも生育でき ないか，または牛肉粉末の成分を生育のため必要とする 菌株であると考えられた。また，乳酸菌の中では Lac-tobacillus属 以 外 に mLBS 寒 天 培 地 に 生 育 で き た の は Pediococcus属 1 菌株だけあり，同じ乳酸菌の中でも属 の違いで培地による選択性に差異が見られた。以上のこ とからターゲットが Lactobacillus 属である場合，mLBS 寒天培地の方が効率的に単離できると考えられた。但し， Lactobacillus属でも mLBS 寒天培地に生育できない種 もいることを考慮に入れる必要があるだろう。 現在，乳酸菌を効率的に単離するために炭酸カルシウ ムを含む MRS 寒天培地もよく使われている。水に不溶 性の炭酸カルシウムは，乳酸が生産されると乳酸カルシ ウムになり水溶性に変化するため，乳酸が産生されたコ ロニーの周りだけ透明なハローを形成する。この原理を 利用して乳酸菌を効率的に単離可能となるが，実際には 炭酸カルシウムは酢酸やギ酸などの有機酸とも反応し， 水溶性の酢酸カルシウムやギ酸カルシウムなどへと変化 するため，乳酸菌だけを単離するのは困難である。ま た，本研究でも明らかなように Leuconostoc 属，Weis-sella属および Pediococcus 属も MRS 寒天培地で生育す るために Lactobacillus 属以外の乳酸菌も単離すること になると考えられる。また，MRS broth に寒天とバン コマイシンを加え，pH を 5 に調整した LAMVAB 寒天 培地も Lactobacillus 属を選択的に培養するためには有 効であると考えられるが，一部 Lactobacillus 属でも生 育できない菌や Streptococcus gordonii など Lactobacillus
属以外で生育する菌も存在する15)。これらのことから 酸耐性の強い乳酸桿菌を単離したい場合，Lactobacillus 属乳酸菌を効率よく単離したい場合，様々な乳酸菌を単 離したい場合など目的に応じて培地を使い分ける必要が あると考えられる。本研究では，Lactobacillus 属に焦点 を絞って研究を行ったが，最近では Lactobacillus 属以 外の乳酸菌の利用もふえてきたことから，その他の乳酸 菌についてもその特性を考慮して，より適切な培地を選 択していく必要があるだろう。そのためにも今後，更に 既知の細菌の属，種，株ごとの栄養要求性や pH 耐性な どの特徴を把握することが重要だろう。本実験において MRS 寒天培地と mLBS 寒天培地の乳酸桿菌の単離選択 能の違いは，両培地の pH の相違に起因していることが 明らかとなった。また，属や種によっても選択性に違い がみられたことから，今後の更なる研究の発展により， ある特定の種だけを選択的に培養できるようになるかも しれない。本研究が今後の乳酸菌利用の参考になれば幸 いである。 要 約 プロバイオティック乳酸菌の単離は現在でも積極的に 行われており，効率的な方法が望まれる。本研究では MRS 寒天培地と mLBS 寒天培地を用いて乳酸桿菌を単 離し，その選択性について比較した。単離試験の結果， 乳 酸 桿 菌 の 検 出 率 は ， MRS 寒 天 培 地 で は 59.4 ， mLBS 寒天培地では75.0であった。また，MRS 寒天 培地で最も多く単離された Lb. sakei は，mLBS 寒天培 地では 1 菌株のみしか生育できず，Lb. curvatus および Lb. rossiaeは mLBS 寒天培地では全く生育できなかっ
た。L. plantarum, Lb. coryniformis, Lb. rhamnosus, Lb. gasseri, Lb. brevis, Lb. fermentum, Lb. alimentarius, Lb.
paracaseiお よ び Lb. casei は ， 単 離 し た 全 て の 菌 株 が
第巻 以 外 の 乳 酸 菌 で は ， Leuconostoc 属 ， Weissella 属 ， Pediococcus 属が検出されたが，mLBS 寒天培地に生育 できたのは Pediococcus 属だけだった。このように MRS 寒天培地は選択性が低く乳酸菌以外の様々な細菌も分離 され，mLBS 寒天培地は選択性が高く乳酸桿菌でも生 育できない菌株が存在することが明らかとなり，目的に 応じた培地の選択が必要であると考えられた。 謝 辞 本研究は，日本学術振興会の科学研究費補助金（若手 B）および社日本酪農乳業協会の平成21年度牛乳栄養学 術研究委託事業のサポートにより，実施いたしました。 記して御礼申し上げます。また，本研究を遂行するにあ たり，東北大学大学院農学研究科の齋藤忠夫教授に多く のご助言をいただきましたことを深謝申し上げます。 引用文献
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