オオム ギ縞萎縮病 の汁液接種検定並 びに診断

農学研究 62:139‑149 (1990)

オオム ギ縞 萎縮病 の汁液接種検定並 びに診断

井 上 成 信 ･前 田 字 憲 ･光 畑 輿 二

近年 オオムギ縞萎縮 ウイルス

( BaYMV)

7)はわが国のみ ならず,世界各国におけ るオオ ムギに多発 して甚大 な被害 をもた らし, オオム キ栽培上大 きな問題 になってい る1･3･5･7). そ れは

Ba YMV

が

Po l

ym

y x agy l a mi ni s

を

v e c t o r

として土壌伝染す るウイルスであ ることに 起 因 してい る. しか し本病 の防除法は確 立 してい ないため, その対策には抵抗性 品種 の導 入に頼 らざるを得 ない現状 であ る.本病 の抵抗性 品種選抜試験は従来常発地 におけ る土壌 伝染 に よって行われて きた. この検定法は試験場所や環境 の変動 に よ り発病率ま,病徴の発 現に差があ り,更に年 1回の試験 しか出来 ないため,反復 試験が容易 であ る汁液接種検定 法が望 まれている. しか し

,BaYMV

の汁液接種 は感染 が非常に不安定 で常に高率の発病 を得 るこ とが なかなか困難 と言われてい る8･7･9･13.L5･16).従 って,常時高率 に発病 させ る汁液 核種検定法が確 立 されれば

,Ba YMV

の系統分化 の解析 及 び本病 の抵抗性 品種 の選抜試験 や育成, さらに抵抗性遺伝子の解析 が飛躍的に進展す るこ とが予想 され る.

本報告 は

BaYMV

の汁液接柚検定 およびその診断法につ いて,これ までに得 られた結果 を記述 した ものであ る.

BaYMVの抗血満 を分捕 された戊水省九州虐 拭字杉 布碓博 士 (現JIi水省熱幣原 盤研究セ ンター沖純支所) に深謝す るとともに,本研 究 を遂行す るに当 り,ご協 力頂 いた当研究所退伝情報発現部 門の安 田昭 =.教授に 謝意 を表す る.

実 験 材 料 及 び 方 法

ウイルス源

二BaYMV

は岡山県 児島郡灘崎町の ビール麦 を栽培す る本病常発地の土壌 を素 焼 きポッ トに入れ, オオム ギ夏大根麦 を播種 し,発病 したモザ イク病集か ら汁液接種 に よ

って夏大根麦に分離 した.接種発病薬は電顕観察及 び生物検定に よ りムギ類萎縮 ウイルス

( SBWMV)

な どの混在 が ないこ とを確認 し,また

BaYMV

抗血清 と反応す るこ とを確 か めてか ら供試 ウイルス とした.

土壌伝染試験の病土及び病根 :病土は上記灘崎町の オオムギ絹萎縮病 の常発地か ら, ムギ 刈 り取 り後の

6

月探土 し魚箱 に入れて供 試 した. また病根 は本病常発地の オオムギあ まぎ 2条の刈 り取 り後の根 を採集 し,水道の流水で土 をていねいに よ く洗 い落 として風乾 し, 殺菌土

1 5 kg

に対 し乾燥病

根2 0 g

を約

1c m

の長 さに 切って混入 した.

平成 元年12月25日受理

本研究の結束の一瓢 ま平成元年10月,日本植物蛸選挙会関西部会 において発.21‑した.また本研究の‑湖 は 昭和62年 ‑平成元年度文 部省特定研 究経 坪｢資源生物機能 の解析 と制御 に関す る研究｣に よって行 われた.

62巻 (1990) 139

汁液接種 .病葉 を

0. 005M KCN

を加 用 した

0. 1M

りん酸緩衝 液

pH 7. 0

で磨砕 して搾 汁液 を作 り,接種 源 とした.接種 は病 汁液 に カーボ ランダム を加 え,指 に よる骨 法の操 り付け 接種 を2回行 い,撲帖 迫後 に接種面 をよ く水洗 した.接種 首 は野外 に置 いて発病 させ た.

E

LI SA

法及び

DI BA

法

IBaYMV

に対す る抗血 清は農水 省九州億 試字杉 富雄博士 (現 同熱 帯農 業研究 セ ンター沖縄支所 )か ら分譲 された もの,及 び当研 究室 で純化 ウイルス をウサ ギに筋 肉注射 して得 られ た もの を用 いた

.γ

‑ グロブ リンは健全 オオムギ尭汁液で吸収 した 抗血清か ら,硫安塩析 お よび

DEAE

‑セル ロー スカラム クロマ トグラフ ィー に よ り柿製 し

た

.

DASELI SA

法は

Cl ar kandAdams

2)の方 法に従 い

,γ

‑グ ロブ リン漉度

2J L g/mP,

コンジュゲー ト希釈

4 0 0

倍 または

8 00

倍 の条件 で行 った.

DI BA

法は基本的には

Powe

1110)の方 法に準 じて行 った.ニ トロセルロースメンブレン

( Tr ans

‑

Bl otTr ans f erMedi um,Bi o‑ Rad

社 ) に植物菓組織 を

TBS

で磨砕 して得 た汁液の

2J J j

をス ポ ッ トしたの ち

,TBS

に溶解 した

2% Tr i 亡 on X ‑1 0 0

お よび

2%

ウシ血清 アル7●ミン 溶液 に

1

時 間没前 して ブ ロッキングを行 った.一次抗体 浪度

2 F L g/m 2, 25

℃ で

1

時間 反応 させ たの ち,酵素標 識二次抗体 (アルカ リフォスフ ァターゼ標 識抗 ウサ ギ

I gG( Cappe】

社 )

2, 0 0 0

倍希 釈 を

1

時間反応 させ た.

実 験 結 果 及 び 考 察

1.汁液接種 したオオムギの兼 数 と発病 との関係

本病 の汁液接種 には,骨法 として殆 どオオム ギ苗の

1‑2

薬期 に

1‑ 2

枚 の乗 に擦 り付 け接柵 されて い るl･8･9･‖･13)が,感染率 が絶 えず変動 し常時高 い発病率 を得 るこ とが なか なか 困難 であ る. そこで先 ず接種 柴数 に よ り発病率 に違 い を生 じるか ど うか につ いて調べ た.

夏大根 麦 と交

‑A

品粗 を用 い

,1 9 8 8

年

1 2

月

1 4

日か ら

1 0

日間隔

( 1 2

月

1 4 ,24

日

, 1

月

3,1 3

,

2 3

日) に芽 だ し

2

日後 のム ギ種 子 をそれ ぞれ

30

粒宛魚指の殺 幽土に播種 し, ガ ラス室 で 育成 した.接種 時の首 の大 きさは

1,2,3,4,5

非期 で, 汁液接種 の架数 を 1

,2

, 3, 4, 5枚 として, 2月

1 6

日に接種 した.接種 苗 は屋外 に置 いて発病 させ た.病徹 が最 初 に見 られ た頃か ら

3

日お きに病徴 の発現 を調べ,その発病推移 を

Fi g.1A,B

に示 した.

その結果, 夏大根 麦 では

Fi g,1 A

に見 られ るよ うに

, 3

月

8

日即 ち接種

2 0

日後 に初 発病 徴 が見 られ,その後増加 したが,接稀 薬数が 多 くなる程発嫡準 が高 くな る傾 向が見 られ た, その最終発病率 は接種 英数 1枚 区では

30%,2

枚 区で

8 3.3%.3‑ 5

枚 区 では

1 0 0%

であ っ た.交

‑A

では

Fi g.lB

に見 られ るよ うに,接

祉2 6

日後 頃か ら初 発病徴 が 見 られ, その後 増加 したが, これ も前者 と同様 接種 共数 の 多い程発病率 が高 くな る傾 向が見 られ た. その 最終発嫡率 は接種架数 1枚 区で は

2 0%,

2

枚1

ノ仁

ぐ8 3. 3

0/.

, 3

枚 区 で

9 0%, 4‑ 5

枚 区では

1 0 0%

の発病率 であ った.また発嫡率 は各 区 とも按榔約

1

カ月後 前後 頃 まで増加 し,それ以 後 あ ま り増加 しなか った.

これ らの結果 か ら

,BaYMV

をオオム ギの幼甫期 に汁液接種 し高い発病率 を得 るため に は, 4‑ 5集期 の苗 を用 い4枚 の架 に, 高度の帝病性 品種 では3枚 の葉 に 汁液接種 す る必 要があ り

,1‑ 2

枚 の葉 への桜桃 では高 い発病率 を碍 に くいこ とがわか った.安 .吉野16)は オオム ギ苗令

6‑ 7

柴 期 までは,苗令 が進 むほ ど感染率 が上昇 す る傾 向にあ るこ とを報告

1 4 0

_{戊 学 研 究}

o

0

0

0 0

o

8

6

4 2

1

suoTdulL(SqTT^STuetdJoaBeJuaulad

00 80

60

40 20 % 1

s

u 1

0JdulJ(sq7号StuetdJo

aB e

tuauJad

N atsudaik

o n

^{M u}gi

2 0

26 29 32 35 38 41

4 6

54

Ko ‑A

Fig,1.Percentage oftwo barley varieties with BaYMV symptoms after mechanicalinoculationattheone‑to five‑leafstage BaYMV was lnoculatedonFeb 16,1989.FLgureSlnthegraphsindicatenumberof inoculated 一eaves

してい る. この理 由は発令 の追 いに起 園す るウイル ス感受性 の差 異に よる もの では な く, 菓令 の高 いオオム ギでは接種 され る兼数 が 多 くな るため,結果 として接種 され る栗 の総面 積 が大 き くな るため に高 い感染率 が得 られ た もの と推察 され る.

2.汁液接種 によ るオオムギ縞萎縮病抵抗性 品種 の選抜試 験

汁液接種 に よるオオム ギ縞 萎縮病 抵抗性 品樵 の選抜 の ための予備 試験 として,上 記方法 に よ り

6 7

品種 に擦 り付 け接種 を行 い,純量 にお いて発病率 を調べ た.接櫛 は 1品

種2 0

株宛 供 試 した.

62巻 (1990) HP

100%発病 した高度の罷病性 は クワポ リ,交‑A,夏大根麦,あ まぎ2条.エチオピア31, Kagbeni1

,U

Hei19,Nachipund02の8品種 であった.これに対 し晩関取1号,虎の尾

7

号, 白大麦, コビンカタギ

9

号,半裸

2

号,節黒,長崎早生裸,はがねむ ぎ,早生大麦, 二本三,坊主麦,畿内1号,居 昌在来, 白胴裸 麦,釜麦,水原31号,三穂33,大 治, トル

コ38,エチオ ピア339,Jerusalem2の21品種 は発病 しなか った.また,これ ら以外の品種 の感染率 は5%〜95%の範囲にあ った.発病 しなか った品種 につ いては今後反復接種 を行 って,完全 な抵抗性 品種 であ るか11Iか を確認す る必要があ る. しか し上 記の方法に よ り, 汁液接種に よって抵抗性品種選 抜検定 が効率 よ く出来 るこ とが認め られ た. なお,汁液按 排 で得 られた結果 と土壌伝染の精米 とが必ず しも一致す る とは限 らない8･11)ので,澱終的に

は両者 を併用 す るのか望 ましい と考 え られ る.

3.接種後の温度が感染発病 に及ぼ す影響

ポ リ製′ト箱 に殺菌土 を入れ,夏大根 長を1区10粒苑1989年3月31日に播種 して屋外で育 成 し,4月13日に2葉期の苗に2薬宛汁液接稀 を行 って,直 ちに1区 :野外 に置 く,2区 .

6℃, 3区:8℃. 4区.10℃, 5区:12℃, 6区:14℃に1週間置 いてか ら屋外に出 す

,7

区二20℃に2日間置いてか ら屋外 に出す 区 を設け た.温度処理 は 日本医化器機製の NK式温度勾配恒温器 を用い,各室 とも20W 3本周明であった.発病率 を調べた結果は Table

lに示 した.

その結果.発病率 は接種後の温度10℃区が90%で最 も高 く,つ いで6℃ と8℃区が60%, 12℃ と14℃区が50%,野外のみ区が30%であった.20℃区は発病 しなか った.本病 の感染 党痛 には温度 が大 き く影響 し,18℃以下 で感染 し7),感染適温は13‑16℃ と言われている9).

また接種後30日間の平均外'/L温が

6

℃内外の時発病率が穀 も市か ったとの報告 もある16).本 試験の結果では汁液接種後の1週間の温度が10℃の とき食 も発病率 が高 か った.本試験 で 得 られ た結果 は接種 直後の温度 が感染 の成立に重要 な影常 を及ぼすこ とを示 してい るが, 温度は感染の成立のみ ならず,病徴発現 に も形轡 を及ぼす ことが考 え られ るので,今後 こ れ らの点につ いて も検討す る必要 があろ う.

Table.1.EFfectoftemperatureaftermechanicalinoculationoninfectionol barley∀ar.Natsudaikon MugiwithBaYMVa).

Temperature Percentageofinfectedplan亡S Outside

6℃ (for1wk) ‑Outside 8℃ (for1wk) ‑Outside 上o℃ (for1wk) ‑Outside 12℃ (For1wk) ‑Outside 14℃ (for1Wk) ‑Outslde 20℃ (for2dal′S)‑nUtSjde

a)Dayofmechallicalinoculation.1989,4,13.

4.オオムギ柵萎縮病の土射 云染 によ る発病 とヒコバ工の病徴発現

前年,殺菌土 にオオムギの病根 を入れた土 と常発地の病土 で発病試験 を行 った もの をそ の まま保有 してお き, その柄土 に,1988年11月24日夏大根麦 を播種 し,発病 を調べ た. さ

142 _{農 学 研 究}

らに病徴 が見 られ なか った株 につ いては

4

月

21

日地上約

3‑4

cmで切 り戻 しし,生長 した その ヒコバ工について病徴 を調べ た. それ らの結 果 はTable2に示 した.

その結果, 土壌伝染 試験継続2年 次 (1年 日の試験 では発病率 が譜 しく低 か った病 土) において,病根 を混入 した病 上 区 では33.9%,72%,病 十 区 では16.1‑39.3%の病徴 の発 現率 であ った.それ らの うち病徴 が見 られ なか った株 の ヒコバエに病徴 が現 れ(Plate トA), その発病率 は病根 混入土区 で平均17.0% (4/33, 4/14),病 土区 で平均31.4% (14/47, 16/40, 5/34,14/35)であ った. ヒコパエ に病徴 の現 れ た葉 につ いては一部 電顕観察

した結果BaYMV粒 子及 び細胞質 内封 入体 の破 片 (P一ate I‑B)が見 られ たが,SBW MV の粒 子 は見 られ なか った.

これ らの結 果か ら,感染 してい て も病徴 の現 われ ない株 があ るこ と,土壌伝 染 に よるオ オム ギ抵抗性 品種選 抜試験 を行 う場合 には,病徴 の見 られ ない株 では その ヒコバ エにつ い て も検査 す る と,抵抗性 品種 の選抜 をよ り確実 にす る もの と考 え る.

Table.2.Developmen亡ofBaYMV symp[omson bar一ey var.NaLsudaikon Mugigrownininfestedsollandonitssuckeraftercutting

Resultsin1988bJ

Sourceof Resultsin

pathogen 1987 sTLpotf.ST(t.7.)､vith s"poipotf.Stan.tnsswugkh｡r(%)ぐ, pTa;.alH 完.e)cdt,ed 0/50 19/56(33.9) 4/33(12.1)

4

1.1 4/84 36/50(72.0) 4/14(28.6) 8口.0

006655こJJiZ'iP■HHulJu0O53

tは.1er⊥LJI･･oed..,I;:.

9/56(16.1) 16/56(28.6) 22/56(39.3) 21/56(375)

14/47(29.8) 16/40(286) 5/34(147) 14/35(40.0)

1782

4

546

a)DriedrootsofnaturaHyinfectedplantsWeremixedinsterilizedsol).

b)TheinfestedSOHwaskep[outsideforabout10monthsaftertheexperimentsin1987 andreusedin1988.

C)AppearanceofBaYMV symptomson newly emerged suckersaflcrcutting ofthe syrnptomJessplants.

d)Theobser＼′edresu一tsonMarch29,1989.

5.オオム ギ縞萎縮病 のEL ISA法及 びD IBA法 によ る診断

植 物 ウイルスの感染 の有索引ま病徹観察. 亀節観察 な どの他 に血清学 的検 出法 が良 く用 い られてい る.本実験 においては血清学 的検 出法の うちEuSA法及 びDIBA法 について検 討 した.

1)EL fSA法 によ る診断

近年,EuSA法は ウイル スの検 出感度 が非常 に高 い,一度 に 多虫 の試料 を検 定 出来 るな どの利 点 を有 して い るこ とか ら,種 々の作物 に発生す るウイル スの診断 に広 く用 い られ て い る.本研究 におい てはELISA法 に よるBaYMVの検 出精 度 につ いて調べ た.

予備実験 においてELISA法 の検 出感度 を調べ た結果,コ‑ テ ング抗体(γ‑ グ ロブ リン) 波度2

F L g/m

P,コンジュケー ト希釈400倍 あ るいは800倍 の条件 で感染黄 か らの ウイルスの 検 出限界は5,000‑10,000倍希釈 であ り,宇杉 ら】41及 び高橋 ら12)の報告 とほぼ 同 じ感度 であ

62% (1990) 143

った.

(a)感染 オオムギの各発位の ウイルス磯度 を明 らかにす るため に,常発地及び汁液接種 し た夏大根麦の感染個体 の ウイルス濃度 を紫位別 にELISA検定 を行 った.供試 した個体は止 薬 には病微 が認め られなか ったが, それ よ り下の薬には痛徴がみ られた.対照 には健全菜 及び免疫性 品種の木石港の兼 を用 いた.その結果,ELISA値は止葉 よ り2‑ 4番 目,特 に

3

番 目薬の値 が著 しく高か ったが,病徴 の見 られなか った止葉 で も陽性 の値 を示 した(Fig.

2).福 肝 )らもELISA法に よるBaYMVの薬位別検 出 を行 っているが,最上葉か ら第4楽 日での ウイルスの検 出率が最 も高 いこ とを報告 してい る.

(b)本病の常発地に播種 し,BaYMV抵抗性 品種選抜試験のオオムギ (当研究所政伝制御 研究室試験圃場)につ いて病微柑度 を調べ ると共に,病徴発現 品種 で無痛微株 があ るもの では病葉 とともに無病徴葉 を別々に採施 してELISA検 定 を行 った. その結果はTablC3 に示 した.この結果,病徴 を現 した葉のELISA値は高 く陽性 であ ったか,病徴 の見 られな か った株 でも一部陽性 を示す株 (3品種)が認め られた. このこ とは病徴 の見 られない株 で感染 してい るものがあ るこ とを示 し, オオム ギ縞萎縮病 の確実 を抵抗性 品種 を選抜す る には字杉 ら14)及 び高橋 ら12)の報告 と同様ELISA法は有効 な方法 であ ると言 える.

0月qaSnJ0∑

J=_･>_⊥J 1 2 3 4 5

【勺

芸 Infected leaves Natsudalkon M ugs

Fig 2 ComparisonforELISA valuesofdifferenHeavesoEnaturallyInfected barleyw.'thBaYMV･Numbersito5areeachleaf(i:flag )ear,5 :oldest一eaf) ofinfected var･Natsudaikon MugiThe four lower leaves(2‑5)underfLag】eafshowedvISiblesymptoms,whiletheflag Leaf(1)hadnosymptoms･MolくuSelく1く0 (imnlune､′anety)andhealty Na亡stIdailくOnMugiⅥ′ereusedasnegativecolltrol

144

段 学 研 究

Table.3 DevelopmentofBaYM V symptoms on barley varietiesgrown in the infested field and resu一tsofELISA test

EuSA valLleS■l ELTSA valuesbl

Varlet)′ Symptom No Wlth Varlety Symptom No With SyrnPlonlSymptom symp〔onlSymP〔onl AmaglNHO

Na亡sudalkonMugl MISatOGoJden SaikalKaWa3J SalkalKaWa37 SaikalKawa38 1shukush汀aZu HaganeMugl Uke11141 Yol(0,LLlna Tochlkel144 1くaWanl】Zukl AIZu6 Da】senGo一d Ra】d̲orュ

0一･Hnl 001 QR

◆十十 0.別

+

◆

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o

o

o

oo〜

一

〜onu

nU

0

HarullaNUO Chosen Yoshln‑u KomelraZu T.N.‑2 SollJa HLtngarlan Ech10Pianbarley E,n･52

HIPrOly TalkciR661 HaganeMugl(Inst) Mokusekko3 MlhoriHada】くa3 KoA

o･‑70･090･‑9一〇･‑｡⁝mo･O｡M

o

･‑6柑o･‑3蒲o･‑｡o･‑70

十 1

0一〇

〇 〇

〇〇〇

〇

〇〇〇〇〜

0

nUo

1.llLl a) 0･no symptom. ･･+･:severe symptom.

b)Eu SA valuesofbarley var AmagiNijo asstandardswere 007 (no symptom),030 (mildsymptom)and 1.04(severesymptom).Underlined ELISA valuesareregardedas positive

2)DtBA法 によ る診断

DIBA法 はELISA法 に比較 して,ウイル スの検 出に要す る時 間か短 い,反応液 が少龍 で あ る,反応結果 の 肉眼判定が谷易 であ るな と､の利点 を有 してい るこ とか ら, 各種作 物 に発 生す るウイルスの診 断 に用 い られ るようになった.ここではBaYM Vの検 出にDIBA法 を 適用 し, その有効性 を調べ た.実験 には土壌伝染 に よ り発病 した

5

個体 (夏大 根 麦)お よ び対照 として健 全個体 を用 いた.Plate

I‑ C

に示 す よ うに発病個体 は明瞭 な どンクの ス ッ ポ トとして発色 し,健 全個体 とは明硬 に区別 で きた.この よ うにDIBA法 はBaYM VO')診

断に有効 な方法 であ るこ とか明 らかにな ったが,今後 ウイル スの抽 出緩衝 液 の種 類,一次 抗体 及 び コンジュゲー ト狼度,各 反応段階 におけ る反応条件 な どについて検 討 す る ととも に,ELISA法 との検 出感度 の比較 を行 う必要 があ る と考 え られ る.また,DIBA法は大 壷 の試料 を検定 す る場合,ELISA法 よ りも優 れて い るこ とか ら,SBW M Vの混在 す る閉場 か

ら採集 した多 くの個体 の診断には特 に有効 であ る と考 え られ る.

摘 要

1. オオム ギ品種 ,夏大根麦 と交

‑A

を用 い

, 1,2,3,4,5 黄

浦Jの苗 の総 ての菜 にBaYM Vを汁液接種 した結果,両 品椎 とも接種雅致 が 多 くな る程発病率 が高 くな る傾 向 が見 られ, 4‑ 5棄期の幼苗の 4枚, 品種 に よ り3枚 の葉 に積和 す ると高率 (100% )に発 病 した. この接種 法 に よ りオオムギ縞萎縮病 の抵抗作 品種選抜試験 を行 った結果,本 法は 抵抗性 品種 選抜 に有効 であ るこ とが明 らかに なった.

2.

汁液接枝後 の

1

週 間の温度 が感染 発柄 に及ぼす影響 を調べ た結果,発病率 は按櫛 後

62巻 (1990) HEk

の 温 度10℃ 区 が90%で最 も高 く, つ い で6℃ と8℃ 区 が60%, 12℃ と14℃ 区 が50%, 野 外 の み に 置 い た 区 が30%で あ っ た. な お, 20℃ 区 は 発 病 しな か っ た .

3.

オ オ ム ギ縞 萎 縮 病 の 土 壌 伝 染 に よ る発 病 試 験 を行 う場 合 , 病 徴 の 見 られ な い株 に つ い て は 切 り戻 しす る と, そ の ヒ コバ エ の 葉 に 病 徴 が 現 れ る場 合 が あ っ た . 従 っ て , 病 微 の 見 られ な い株 で は そ の ヒ コバ エ に つ い て も検 査 す る と, 抵 抗 性 品 種 の 選 抜 を よ り確 実 に す る もの と考 え られ た.

4.

本 病 の 診 断 に は

ELI SA

法 及 び

DI BA

法 が 有 効 で あ っ た.

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146 _{]退 学 研 究}

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Me c hani c alTr ans m i s s i onofBar l e yYe l l ow Mos ai cVi r usandDi agnos i soft heVi r us

NarinobuINOUYE,TakanoriM AEDAandKojl'M rTSUHATA

Summar y

Seedlingsoftwo barleyvarieties,Natsudaikon MugsandKoA at1to 5 leaf stage were inoculated mechanically with sap of barley yellow mosaic virus (BaYMV)infected plants. Infectionefficiencyrased according toincreaseofthe numberofinoculated leavesand a high percentage ofthe infection

( 1 0 00 / . )

was obtainedontheplantsinoculated4or5leavesof4or5leafstageseedlings,This methodprovedtobeusefulforscreening ofresistantvarieties

Thetemperatureforoneweek aftermechanicalinoculationhad influenced the infectionofbarley and theoptimum 亡emPeratureWas

1 0℃.

The percentagesof infectedplantsatvarioustemperatureswereasfollows:

9 0 % ( 1 0 ℃) ,6 0 % ( 6 ℃ ^,8℃)

and

5 0 % ( 1 2

℃

,1 4 ℃) ,

Theplantskeptoutsideduring wholeexperimenta)pen'od resultedin

3 0%

ofinfectionrateandnoneoftheplantsinfectedwhentheplants werekeptat

2 0

℃ for

2

dayと一afterinoculatlrOn.

工nthesoil‑transmissiontests,Someofthesymptomlessp一antsdevlopedsymptoms onnewlyemergedsuckersaftercutting.

ELISA and DIBA methodswereeffective forserologicaldiagnosisofBaYMV infectedplants.

62* (1990) 147

Explanation ofplate.

A IBaYMV symptomesdevelopedonnewlyemergedsuckeraftercuttingof symptomlessbarleyplantsgrownil一infestedsoil.

B :Electronmicrographofcylindrica一inculution lndip preparationofthe infected leafwlth BaYMV.BarrepreselltslOOnm.

C こDetectionofBaYMV byDIBA method 1to5aresamplesofInfected bar】eyvar.NatsudaikonMLlgigrown in infested solland 6 ishea一thy plant.

1 4 8

段 学 研 究

i ‑ ' iA l ' ‑ 1‑ : i . 1‑ 損. I l 斌 一 口 q

I . . . . ■ ▼ 〜 J I ー I ⁱ ' O i . .. Q . r P C. .

1‑ 守 一 ‑ ' : 3 , l T L d て

62番 (1990)

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