CRet Systemによるハイパーサーミア併用 低LET放射線のがん抑制効果

CRet System によるハイパーサーミア併用

低 LET 放射線のがん抑制効果

森田 雅士

_{、穐本 祐梨}

_{、伊藤 隆晃}

_、

西村 太一

_{、山口 麻衣}

_{、朝田 良子}

Carcinostatic Activities of Low LET Radiation Combined with

a Capacitive-resistive Electric Transfer (CRet) Hyperthermic

Apparatus

Masashi MORITA

_{, Yuri AKIMOTO}

_,

_{Takaaki ITO}

_,

Taichi NISHIMURA

, Mai YAMAGUCHI

, Ryoko ASADA

*1_{Faculty of Health Sciences, Butsuryo College of Osaka}

（Received and accepted February 26, 2018）

要旨：現在の死因別死亡率第一位は悪性新生物である。主ながん治療法は 1）外科的療法 2）放射線 療法 3）化学療法があり、補助的療法として温熱療法が用いられることもある。低 LET 放射線を使用 した放射線療法は細胞周期や細胞の状態で感受性が変化することや、人体への被ばくが問題となる。ま た、温熱療法は単独ではあまり効果が期待できず、単独で著しい効果を得るまで温度を上げすぎると熱 さに耐えられない。そこで、放射線療法と 40～42℃の温熱処理を行う温熱療法（マイルドハイパーサー ミア）を併用することで、がん抑制効果を高め、また被ばく線量の低減が期待できることに注目した。 本研究では放射線療法とマイルドハイパーサーミア の併用によるヒト食道扁平上皮がん（KYSE-70） 細胞の抑制効果を調べた。KYSE-70 細胞に温熱処理（42℃,15 分または 30 分）後、放射線 2~10 Gy の照 射を行った。X 線照射から 120 時間後にクリスタルバイオレット染色法を用いての細胞増殖能を評価し た。X 線単独では照射線量が大きくなるほど、がん抑制効果は増加し、6 Gy 照射からは細胞の形態も大 きく変化していた。このことから、マイルドハイパーサーミア併用実験では臨床で分割照射に利用され る 2 Gy と X 線照射単独ではあまりがん抑制効果がない 4 Gy（4 Gy および 2+2 Gy）を照射することを決 定した。マイルドハイパーサーミア併用では温熱処理 30 分と放射線照射 2+2 Gy の併用で KYSE-70 細胞 の生存率が大きく下がった。放射線単独では細胞周期 S 期後半、低酸素細胞に対する効果が低いが、温 熱療法ではそれらの細胞に対する効果が高く、また照射による損傷は温熱を使用することで固定などが おこる。このことにより X 線照射の総線量を下げることができて副作用が低減できるのではないかと考 える。

キーワード：食道扁平上皮がん、放射線照射、温熱療法（マイルドハイパーサーミア）、Indiba CRet System 装置

Keywords：esophageal squamous cell carcinoma, radiation irradiation, hyperthermia, Indiba CRet System

apparatus 1. 緒 言 現 在 行 わ れ て い る 主 な が ん 治 療 の １ つ で あ る 放 射 線 療 法 は 有 効 な が ん 治 療 で あ る が 、 正 常 細 胞 に も 障 害 を 与 え る 副 作 用 が あ る 。 ま た 放 射 線 が 効 き に く い 細 胞 周 期 や が ん 細 胞 も あ る た め 、低 LET 放 射 線 に よ る 放 射 線 療 法 と CRet （ Capacitive Resistive Electric Transfer） System を 用 い た 温 熱 療 法（ マ イ ル ド ハ イ パ ー サ ー ミ ア ） と の 併 用 に 着 目 し た 。 本 研 究 の 目 的 は マ イ ル ド ハ イ パ ー サ ー ミ ア を 併 用 す る こ と で 放 射 線 療 法 の 短 所 を 改 善 し が ん 細 胞 の 増 殖 抑 制 /殺 傷 効 果 を 高 め 、 照 射 線 量 を 低 減 で き る か の 検 討 を 行 っ た 。 ま た 、 現 在 、 臨 床 に お い て ハ イ パ ー サ ー ミ ア で は 主 に ラ ジ オ 波（ RF 波 ）や マ イ ク ロ 波 を 使 用 し て い る 。 し か し 、 こ れ ま で の 本 学 の 細 胞 実 験 （ in vitro） で は ウ ォ ー タ ー バ ス を 用 い て が ん 細 胞 の 温 熱 処 理 を 行 っ て い た 。 ウ ォ ー タ ー バ ス で の 温 熱 処 理 実 験 で は 付 着 細 胞 を 使 用 す る 場 合 、 容 器 の 移 行 の 際 の タ ン パ ク 質 分 解 酵 素 で あ る ト リ プ シ ン 処 理 が 加 わ る た め 細 胞 へ の 影 響 が 懸 念 さ れ 、 実 験 操 作 自 体 も 複 雑 に な る 欠 点 あ っ た 。 よ っ て 、 よ り 臨 床 に 近 い 温 熱 処 理 を 行 う こ と を 目 的 と し 、 医 療 や 美 容 の 方 面 で 使 用 さ れ て い た RF の 誘 電 加 温 型 Indiba CRet System を in vitro の ハ イ パ ー サ ー ミ ア 実 験 に 使 用 で き る か 検 討 し た 。 さ ら に 、 こ の 研 究 を 行 う た め に は 本 学 で 細 胞 培 養 を 行 い 、 実 験 の 際 に は 細 胞 の 正 確 な 調 整 を 行 う こ と が 大 切 で あ る 。 よ っ て 、 そ の プ ロ ト コ ル を 確 立 す る こ と も 目 的 と す る 。 2. 使 用 機 器 と 方 法 2.1 使 用 器 機

1）Indiba CRet System（ 株 式 会 社 イ ン デ ィ

バ ・ ジ ャ パ ン ）

本 研 究 に 用 い た 容 量・抵 抗 性 電 移 法：CRet System を 図 1 に 示 す 。CRet System は RF（ 中 波 領 域 0.449 MHz.） の 誘 電 加 温 型 の 加 温 装 置 で あ り 医 療 や 美 容 の 方 面 で 使 用 さ れ て い る 。 こ の RF 誘 電 加 温 は ジ ュ ー ル 熱 に よ る 深 部 、 局 部 及 び 広 範 囲 の 加 温 を す る こ と が で き た 。 低 い 周 波 数 の た め 、 皮 膚 表 面 の ホ ッ ト ス ポ ッ ト が 抑 制 さ れ る 特 徴 が あ っ た 1）_。

図 1 Indiba CRet System D.H. 308

2） X 線 照 射 装 置 MBR-1520R（ 株 式 会 社 日 立 パ ワ ー ソ リ ュ ー シ ョ ン ズ ） 本 研 究 で 用 い た X 線 照 射 装 置 を 図 2 に 示 す 。こ の 装 置 は 50-150 kV の X 線 を 小 動 物 や 細 胞 に 照 射 す る 装 置 で 、 比 較 的 大 き な 線 量 で も 短 時 間 に 、か つ 、安 全 に 照 射 で き る 。 温 度 コ ン ト ロ ー ル （ 35℃ ～ 45℃ ） も 可 能 で あ る 2）_。 図 2 X 線 照 射 装 置 MBR-1520R

2.2 使 用 細 胞

本 研 究 に は ヒ ト 食 道 扁 平 上 皮 が ん [Human esophageal squamous cell carcinoma （ KYSE-70） ] 細 胞 を 使 用 し た 。 食 道 が ん に は 扁 平 上 皮 が ん と 腺 が ん の 2 種 類 が あ る 。 扁 平 上 皮 が ん は 食 道 の 内 側 の 表 層 部 （ 粘 膜 上 皮 ） に で き る が ん で 、 日 本 人 の 食 道 が ん の 90%以 上 が こ れ に あ た る 。 ま た 、皮 膚 に 生 じ 深 部 に 浸 潤 す る 悪 性 腫 瘍 は 有 棘 細 胞 癌 と よ ば れ る 3）_{。 腺 が ん は 食 道 腺 の 線 細 胞 が} が ん 細 胞 化 し た も の で あ る 。 今 回 の 実 験 に 用 い た KYSE-70 細 胞 を 図 3 に 示 す 。 図 3 KYSE-70 細 胞 2.3 細 胞 培 養 方 法 KYSE-70 細 胞 の 培 養 で は 牛 胎 児 血 清 （ FBS GIBCO Labs Life Technologies, Inc.） を 10%加 え た DMEM（ Dulbecco‘s Modified Eagle Medium）を 使 用 し た 。ま た 、KYSE-70 細 胞 を 24 ウ ェ ル マ イ ク ロ プ レ ー ト（ Becton, Dickinson and Company, NJ, USA ） に 1.0 × 104 _{cells/1well を 分 注 し 、 炭 酸 ガ ス イ ン キ} ュ ベ ー タ を 用 い て 37℃ 5% CO2の 条 件 下 で 培 養 し た 。 2.4 細 胞 数 の カ ウ ン ト 方 法 細 胞 を カ ウ ン ト す る 際 に ト リ パ ン ブ ル ー 染 色 を 行 っ た。細 胞 懸 濁 液 と 0.4％ ト リ パ ン ブ ル ー 溶 液 1:1 の 懸 濁 液 を セ ル カ ウ ン タ に 10 μL ず つ い れ 、 顕 微 鏡 の 対 物 ス テ ー ジ に セ ッ ト し 、細 胞 が 沈 下 す る の を 1-2 分 ほ ど 待 っ た 。 4 つ の 細 胞 計 数 室 内 の 細 胞 を A→B→C→D の 順 に 数 え て 加 算 し 、 4 つ の 細 胞 計 数 室 で の 加 算 数 を N と し て 、 細 胞 密 度 を 求 め た 。 細 胞 密 度 （ 個 /mL） ＝ （ N/4） ×104 _{× 2} 実 験 で 用 い た セ ル カ ウ ン タ を 図 4 に 示 す 4）_。 図 4 セ ル カ ウ ン タ 2.5 X 線 照 射 実 験 KYSE-70 細 胞 を シ ャ ー レ 1 個 あ た り 1.1× 105 _{個 に 播 種 し 、 10%FBS 含 有 DMEM} で 37C、CO2イ ン キ ュ ベ ー タ ー 内 で 48 時 間 培 養 し た 。そ の 後 、図 2 の 装 置 を 用 い て 、 2 Gy、 4 Gy、 6 Gy、 8 Gy、 10 Gy を 照 射 し た 。2 Gy 照 射 し た 試 料 の う ち 24 時 間 後 2 Gy を 追 加 照 射 し 、さ ら に そ の う ち の 1 つ に 48 時 間 後 2 Gy を 追 加 照 射 し た 。 ま た 照 射 後 24 時 間 後 お よ び 120 時 間 培 養 後 の 細 胞 増 殖 能 を ク リ ス タ ル バ イ オ レ ッ ト 染 色 法 を 用 い て 測 定 し 、さ ら に 細 胞 形 態 を 観 察 し た 5 ) _。 X 線 照 射 条 件 は 、管 電 圧 150 kV、管 電 流 20 mA、フ ィ ル タ ー 選 択 0.5 Al、0.2 Cu、線 量 率 0.86 Gy/m で あ っ た 。 ま た 、 臨 床 現 場 に お い て 食 道 が ん の 放 射 線 治 療 は 、 60∼70 Gy/30~35 回 の 分 割 照 射 、 つ ま り 一 回 線 量 2 Gy の 線 量 を 複 数 回 に 分 け て 照 射 し て い る 6）_。 2.6 CRet System に よ る 温 熱 処 理 細 胞 に 対 す る CRetSystem の 適 用 で は 、in vitro 用 に 用 意 し た 対 の ス テ ン レ ス 鋼 電 極 を 用 い て 電 流 を 流 し た 。 CRet System に よ る 温 熱 処 理 回 路 を 図 5 に 示 す 。 A B D C 図 5 CRet System に よ る 温 熱 処 理 回 路

図 6 に 示 し た よ う に 各 々 の ウ ェ ル に 挿 入 さ れ 、直 列 に 接 続 し た 。CRet System で は 、 約 2 分 間 で 42 ºC に 到 達 し 、維 持 す る こ と が で き た 。温 熱 処 理 実 験 で は 24 ウ ェ ル の 内 3 ウ ェ ル に 対 し て 通 電 し た7 )_{。こ れ よ り 42℃} 10 分 単 独 と 42℃ 15 分 単 独 の 温 熱 処 理 を 行 っ た 。 図 6 CRet System を 用 い た 温 熱 処 理 2.7 マ イ ル ド ハ イ パ 一 サ 一 ミ ア 併 用 効 果 温 熱 処 理 は CRet System に よ り 行 っ た 。 CRet System は 0.45 MHz の 周 波 数 に お い て 電 流 プ リ ケ ー シ ョ ン に 基 づ く 、 非 侵 襲 性 の 電 熱 的 治 療 機 器 で 、 組 織 に 電 気 刺 激 と 温 熱 効 果 が 相 乗 効 果 を も た ら す 1⁾_。 KYSE-70 細 胞 を 24 ウ ェ ル 培 養 プ レ ー ト の 1 ウ ェ ル あ た り 1.0 × 104 _{個 に 播 種 し 、} 10%FBS 含 有 DMEM で 37C、CO2イ ン キ ュ ベ ー タ ー 内 で 48 時 間 培 養 し た 。 CRet System を 用 い て 42℃ を 15 分 と 30 分 間 維 持 し 、 そ の 後 、 X 線 照 射 し た 。 そ の 後 、細 胞 懸 濁 液 は X 線 照 射 の 実 験 方 法 と 同 様 の 方 法 で 処 理 し た 。 2.8 細 胞 の 形 態 観 察 KYSE-70 細 胞 に お け る X 線 照 射 お よ び マ イ ル ド ハ イ パ ー サ ー ミ ア 併 用 の 結 果 は ク リ ス タ ル バ イ オ レ ッ ト 法 で 評 価 し た 。 ク リ ス タ ル バ イ オ レ ッ ト 法 に よ る 細 胞 増 殖 度 の 測 定 は 、 ク リ ス タ ル バ イ オ レ ッ ト が 生 細 胞 の 膜 を 染 色 す る が 、 死 細 胞 は 染 色 さ れ な い こ と に 基 づ く 。シ ャ ー レ と 24 ウ ェ ル 内 の 培 地 を 取 り 除 き 、 エ タ ノ ー ル で 溶 解 し た 0.5% ク リ ス タ ル バ イ オ レ ッ ト （ Wako Pure Chemical Industries, Ltd., 大 阪 ）溶 液 に よ り KYSE-70 細 胞 を 5 分 間 染 色 し た 。 そ の 後 、 染 色 液 は 取 り 除 き 、 ウ ェ ル か ら 添 加 し た 染 色 液 が 出 な く な る ま で 水 道 水 で リ ン ス し た 。 2.9 吸 光 度 測 定 細 胞 生 存 率 は ク リ ス タ ル バ イ オ レ ッ ト 染 色 後 の 吸 光 度 測 定 を 用 い て 測 定 し た 。 10% ド デ シ ル 硫 酸 ナ ト リ ウ ム （ SDS ： Sodium Dodecyl Sulfate ）を 生 理 食 塩 水 で 1% に 希 釈 し 、シ ャ ー レ と 24 ウ ェ ル 培 養 プ レ ー ト の 1 ウ ェ ル 当 た り に そ れ ぞ れ 0.5 mL ず つ 入 れ 、懸 濁 し た 。96 ウ ェ ル プ レ ー ト 1 ウ ェ ル 当 た り 100 µL ず つ 入 れ 、マ イ ク ロ プ レ ー ト リ ー ダ ー を 使 用 し て 595 nm で 吸 光 度 を 測 定 し た 。 3. 結 果 3.1 KYSE-70 細 胞 に お け る X 線 照 射 に よ る 生 物 効 果 KYSE-70 細 胞 に X 線 照 射 後 120 時 間 培 養 し た 細 胞 数 お よ び 形 態 観 察 結 果 を 図 7 に 示 す 。 照 射 後 24 時 間 で は 細 胞 数 に 大 き な 変 化 は 見 ら れ な か っ た が 、 120 時 間 後 で は 照 射 線 量 が 増 え る ご と に 細 胞 数 が 減 っ て い る こ と が 分 か る 。0 Gy（ 照 射 な し ）と 比 べ 2 Gy 照 射 は 細 胞 数 と 形 態 と も あ ま り 変 化 は な い 。 6 Gy を 超 え る と 細 胞 数 が 減 少 し 始 め 、形 態 的 に も 線 維 化 や 丸 み を 帯 び て い る こ と が 観 察 で き る 。 こ の 試 料 を ク リ ス タ ル バ イ オ レ ッ ト で 染 色 し た も の を 図 8 に 示 す 。 図 7 細 胞 数 お よ び 形 態 観 察 結 果

図 8 ク リ ス タ ル バ イ オ レ ッ ト 染 色 法 に お け る 細 胞 抑 制 効 果 ク リ ス タ ル バ イ オ レ ッ ト 試 薬 は 生 存 細 胞 の み を 染 色 す る た め 色 の 濃 さ か ら 生 存 細 胞 を 判 定 す る こ と が で き る 。 図 8 よ り 6 Gy 以 上 の 照 射 線 量 か ら 著 し く 生 存 率 が 低 下 し て い る こ と が わ か る 。 こ の 結 果 か ら 一 回 の X 線 照 射 で 細 胞 数 に 大 き な 変 化 が 見 ら れ な か っ た 2 Gy、 4 Gy に 着 目 し 、 マ イ ル ド ハ イ パ ー サ ー ミ ア 併 用 実 験 で の 照 射 線 量 と す る こ と と し た 。 ま た 、 0 Gy、 2 Gy、 4 Gy、 6 Gy、 10 Gy、 2+2 Gy、2+2+2 Gy 照 射 し た 細 胞 を 同 様 に ク リ ス タ ル バ イ オ レ ッ ト 染 色 し た 後 、 吸 光 度 測 定 に よ り 細 胞 生 存 率 を 調 べ た 。 こ れ に よ っ て X 線 照 射 線 量 と 細 胞 生 存 率 の 関 係 を 図 9 に 示 す 。 図 9 Ｘ 線 照 射 線 量 と 細 胞 生 存 率 の 関 係 図 9 よ り 、 KYSE-70 細 胞 に 2 Gy の X 線 を 照 射 し た と こ ろ 、生 存 率 は 89.0％ と 高 く 、 4 Gy を 照 射 し た と き 、生 存 率 は 42.3％ 、6 Gy を 照 射 し た と き 、生 存 率 は 29.5％ と 大 き く 減 少 し た 。ま た 、2 Gy の 分 割 照 射 で の 生 存 率 は 、総 線 量 4 Gy で 62.0％ 、6 Gy で 51.3％ と 総 線 量 が 変 わ っ て も 変 化 が あ ま り な か っ た 。 3.2 マ イ ル ド ハ イ パ ー サ ー ミ ア 併 用 に よ る 効 果 X 線 照 射 と マ イ ル ド ハ イ パ ー サ ー ミ ア 併 用 効 果 を 評 価 す る た め ク リ ス タ ル バ イ オ レ ッ ト で 染 色 し た プ レ ー ト を 図 10 に 示 す 。 図 10 よ り 上 段 の 放 射 線 単 独 で は ク リ ス タ ル バ イ オ レ ッ ト の 色 が 濃 く 、 特 に 2 Gy の 放 射 線 照 射 単 独 で は 効 果 が ほ ぼ な い こ と が わ か る 。 左 端 の ハ イ パ ー サ ー ミ ア 単 独 で も 15 分 の 温 熱 処 理 で は KYSE-70 細 胞 に 対 す る 効 果 は ほ と ん ど な い 。 し か し 、 X 線 照 射 と マ イ ル ド ハ イ パ ー サ ー ミ ア を 併 用 す る と 細 胞 生 存 率 が 低 下 し 、 ま た 、 X 線 の 照 射 線 量 が 大 き く な る ほ ど 、温 熱 処 理 時 間 が 15 分 間 よ り 30 分 間 の 温 熱 併 用 を 行 っ た 方 が 生 存 率 は 低 下 し て い た 。 次 に 吸 光 度 測 定 に よ る 細 胞 生 存 率 を 図 11 に 示 す 。 図 10 Ｘ 線 照 射 と マ イ ル ド ハ イ パ ー サ ー ミ ア 併 用 効 果 図 11 Ｘ 線 照 射 と マ イ ル ド ハ イ パ ー サ ー ミ ア 併 用 に よ る 細 胞 生 存 率 の 変 化

図 11 よ り X 線 照 射 と マ イ ル ド ハ イ パ ー サ ー ミ ア 併 用 で は 温 熱 処 理 時 間 15 分 で 0 Gy（ 照 射 な し ）は 細 胞 生 存 率 が 75.4％ で あ っ た が 、2 Gy 照 射 を 併 用 す る と 45.8％ 、4 Gy 照 射 を 併 用 す る と 32.9%ま で 減 少 し た 。 ま た 分 割 照 射 で あ る 2+2 Gy 照 射 で も 30 分 の マ イ ル ド ハ イ パ ー サ ー ミ ア 併 用 で 4 Gy 照 射 単 独 よ り 大 き な 効 果 が 得 ら れ た 。 4. 考 察 本 研 究 の 目 的 は KYSE-70 細 胞 に お け る 低 LET 放 射 線 と マ イ ル ド ハ イ パ ー サ ー ミ ア 併 用 の 有 用 性 を 検 証 す る こ と で あ る 。 ク リ ス タ ル バ イ オ レ ッ ト 染 色 の 結 果 よ り 、 2 Gy の 放 射 線 照 射 単 独 で は 生 存 率 が 79％ と ほ ぼ 効 果 は な か っ た が 、 42℃ 15 分 、 30 分 の 温 熱 処 理 を 併 用 す る こ と に よ り 生 存 率 が 45.8％ 、 38.9％ ま で 著 し く 減 少 し た 。 こ の 生 存 率 は 4 Gy の 放 射 線 照 射 単 独 の 生 存 率 の 67.1％ よ り 大 き な 効 果 が 得 ら れ た 。ま た 、2 Gy の 分 割 照 射 の 単 独 で は 総 線 量 が 増 加 し て も 生 存 率 に あ ま り 変 化 は 見 ら れ な か っ た 。こ れ は X 線 照 射 の 際 、24 時 間 ご と に 照 射 す る こ と が で き ず 、72 時 間 の 培 養 時 間 に 亜 致 死 損 傷（ SLD：Sublethal Damage）回 復 が 起 こ っ た こ と が 考 え ら れ る 。 し か し 、 マ イ ル ド ハ イ パ ー サ ー ミ ア 併 用 実 験 で は X 線 照 射 4 Gy 温 熱 処 理 30 分 間 と X 線 照 射 2 ＋ 2 Gy 温 熱 処 理 30 分 間 で は 、 後 者 で 大 き な 効 果 が あ っ た 。温 熱 療 法 は 細 胞 周 期 S 期 後 半 、 低 酸 素 細 胞 に 効 果 が 高 く 、 照 射 に よ る 損 傷 の 固 定 な ど も 起 こ る こ と が 原 因 で あ る 。 こ の こ と に よ り マ イ ル ド ハ イ パ ー サ ー ミ ア を 併 用 す る こ と で X 線 照 射 の 総 線 量 を 下 げ る こ と が で き 、 副 作 用 が 低 減 で き る の で は な い か と 考 え る 。 今 回 の 実 験 で は 24 時 間 後 に は 生 存 率 が 低 下 せ ず に 120 時 間 後 に 増 殖 抑 制 /殺 傷 効 果 が 生 じ た 。 こ の 原 因 は 今 回 の 研 究 に 用 い た X 線 は 低 LET 放 射 線 で あ り 、細 胞 内 の 水 と 作 用 し 、 生 じ た ラ ジ カ ル が DNA に 作 用 す る 間 接 作 用 に よ る 増 殖 死 を 主 に 行 う た め で あ る 。 KYSE-70 細 胞 は 細 胞 周 期 が 29 時 間 ~30 時 間 で あ り 、24 時 間 後 で は ま だ 増 殖 死 が 起 こ っ て い な い た め と 考 え る 8）_。 ま た 2 Gy を 照 射 し 、24 時 間 後 に 2 Gy を 照 射 し た も の と 、4 Gy を 一 回 照 射 し た も の を 比 べ る と 一 回 照 射 し た 方 の 細 胞 数 が 減 少 し て い た 。こ れ は 2 Gy を 照 射 し た 後 に 十 分 な 時 間 を 空 け た こ と で SLD 回 復 が 起 こ っ た と 考 え ら れ る 。 今 回 の 研 究 結 果 に さ ら に 評 価 ま で の 培 養 時 間 や 間 隔 時 間 を 変 え て の 追 加 照 射 を 今 後 の 課 題 と す る こ と で 、 SLD 回 復 が 起 こ る ピ ー ク 時 間 の 詮 索 や 正 常 細 胞 と の 比 較 実 験 を し た い と 考 え る 。 ま た 、 分 割 照 射 に よ る が ん 細 胞 と 正 常 細 胞 の 回 復 率 の 違 い を 比 較 し 、 正 常 細 胞 を 活 か し つ つ 、 が ん 細 胞 を 抑 制 す る 最 も 良 い 線 量 や 間 隔 時 間 を 検 討 す る こ と で 、 現 状 の 放 射 線 治 療 の 向 上 や 線 量 低 減 を 実 現 で き る と 考 え る 。 引 用 文 献

1）Hernandez-BuleML; TrilloMA; CidMA,LealJ; Ubeda, A. Invitro exposure to 0.57 -MHz electric currents exerts cytostatic effects in HepG2 human hepatocarcinomacell . Int J Oncol. pp.30:583-592, 2007. 2 ） 大 阪 市 立 大 学 大 学 院 医 学 研 究 科 放 射 性 同 位 元 素 実 験 施 設 ウ エ ブ サ イ ト 機 器 案 内 http://www.med.osaka -cu.ac.jp/Radioiso/ind ex.htm, (2017-4) 3 ） 国 立 研 究 開 発 法 人 国 立 が ん 研 究 セ ン タ ー が ん 情 報 サ ー ビ ス . https://ganjoho.jp/public/cancer/esophagus/i ndex.html, (2017 -4) 4 ） 株 式 会 社 バ イ オ メ デ ィ カ ル サ イ エ ン ス . セ ル カ ウ ン タ（ 細 胞 計 数 盤 ） 取 扱 説 明 書 5） Asada, R; Kageyama, K; Tanaka, H; Matsui, H; Kimura, M; Saitoh, Y; Miwa, N.Antitumor effects of nano -bubble hydrogen-dissolved water are enhanced by coexistent platinum colloid and the combined hyperthermia with apoptosis -like cell death. Oncol Rep.24 (6), pp.1463-1470, 2010.

6） 井 上 俊 彦 . 放 射 線 治 療 学 改 訂 3 版 . 南 山 堂 , 155-152, 2007.

7） Kato, S; ,Asada, R; Kageyama, K; Saitoh,Y; Miwa N. Anticancer effects of

6-O-palmitoyl-ascorbate combined with a capacitive-resistive electric transfer hyperthermic apparatus as compared with ascorbate in relation to ascorbyl radical generation.Cytotechnology.63, pp.425-435, 2011. 8）江 島 洋 介 ．放 射 線 技 術 学 シ リ ー ズ 放 射 線 生 物 学 改 訂 2 版 . 株 式 会 社 オ ー ム 社 , 55-56, 2012. 謝 辞 NPO 法 人 日 本 老 化 防 御 医 科 学 セ ン タ ー に は 、 本 研 究 で 使 用 し た KYSE-70 細 胞 の 供 与 お よ び温 熱 装 置 CRet System の 貸 与 に 対 し て 謝 意 を 表 し ま す 。