学 位 の 種 類 博士（歯学）

ふ り が な

氏 名

なかい けいすけ

中井 啓介

学 位 の 種 類 博士（歯学）

学 位 記 番 号 甲 第 828 号 学 位 授 与 の 日 付 平成 30 年 3 月 9 日

学 位 授 与 の 要 件 学位規則第 4 条第 1 項に該当

学 位 論 文 題 目 Simple and rapid detection of

by loop-mediated isothermal amplification method (LAMP 法を応用した

の迅速・簡易検出法 の確立)

学 位 論 文 掲 載 誌

第 10 巻 第 1 号 平成 30 年 3 月

論 文 調 査 委 員 主 査 前田 博史 教授 副 査 山本 一世 教授 副 査 梅田 誠 教授

論文内容要旨

R. mucilaginosa

は口腔内、ならびに上気道部に生息するグラム陽性菌であり、近年、難治性の根尖性

歯周炎と関連することが報告されている。また、この細菌が造血幹細胞移植、肺嚢胞線維症、あるい は腹膜炎患者において重篤な感染症を引き起こすことが報告されるようになってきた。しかしながら、

これまで

は、病原性が弱いと考えられていたため、感染根管における分布状態、ある

いは病原性について不明な点を多く残している。本研究は、将来的に

の口腔内分布状 態、そして歯内疾患との関連性を解明するため、等温遺伝子増幅法（LAMP 法）を応用した迅速・簡 易検査法を確立しようとするものである。

LAMP

プライマー（FIP、BIP、

と

つのループ・プライマー）は

士通: the net Laboratory website）、ならびに

による

解析によって設計した。標 的遺伝子は

の

遺伝子とし、菌種特異的な配列が含まれるように、2 種類のプ ライマーセットを設計・合成した。遺伝子増幅は

を使用した

Amplification Kit

によって行った。遺伝子増幅反応は

分あるいは

分の間、64℃の等温条件で行っ

た。設計したプライマー、ならびに

dentocariosa ATCC 17931

をはじめとした

菌種を使用し、

法の特異性と感度について解析し

た。

2

種類のプライマーセットのうち、１つのプライマーセットは特異的に

遺伝子を増幅 することができた。予想外に、もう一方のプライマー・セットは、他の

種の遺伝子を増幅した。

検出感度は

分および

分の

反応で、それぞれ

であった。

遺伝子増幅産物はアガロース電気泳動、あるいは

添加による目視判定によって検出した が、両方法による検出感度に違いは見られなかった。さらに検査方法を単純化するために

を 鋳型にして

法を行った。Intact cell を鋳型とした場合には

分の

反応で

が検出限界となった。

確立した

検出のための

法は、迅速性と簡便性に優れており、有用な臨床診断ツ

ールとなる可能性がある

論文審査結果要旨

LAMP

法を応用した

の迅速・簡易検出法を確立しようとするものである。

LAMP

プライマー（FIP、BIP、F3、B3 と

つのループ・プライマー）は

士通: the net Laboratory website）、ならびに

による

解析によって設計した。標 的遺伝子は

の

遺伝子とし、菌種特異的な配列が含まれるように、2 種類のプ ライマーセットを設計・合成した。遺伝子増幅は

を使用した

Amplification Kit

によって行った。遺伝子増幅反応は

分あるいは

分の間、64℃の等温条件で行っ

た。設計したプライマー、ならびに

dentocariosa ATCC 17931

をはじめとした

菌種を使用し、

法の特異性と感度について解析し

た。

2

種類のプライマーセットのうち、１つのプライマーセットは特異的に

遺伝子を増幅 することが示された。予想外に、もう一方のプライマー・セットは、他の

種の遺伝子を増幅し た。検出感度は

分および

分の

反応で、それぞれ

であっ た。遺伝子増幅産物はアガロース電気泳動、あるいは

添加による目視判定によって検出 したが、両方法による検出感度に違いは見られなかった。さらに検査方法を単純化するために

を鋳型にして

法を行った。

を鋳型とした場合には

分の

反応で

が検出限界となった。

以上の結果により、確立した

検出のための

法は、迅速性と簡便性に優れてお

り、有用な臨床診断ツールとなる可能性があることを証明した点において、本論文は博士（歯学）の

学位を授与するに値すると判定した。