βγ
α
β-Arrestin
βγ
α
AC
創薬ターゲット・Gタンパク質共役型受容体(GPCR)
GPCR
創薬研究開発の総合ソリューション
xxx
DiscoveRx
のGPCR評価アッセイ系
ProLink Tag (PK)
β-Arrestin & Enzyme Acceptor (EA) Stimulation & Binding Substrate Light Adenylyl Cyclase PLC ATP cAMP α2 α1 Gαθ IP3 Ca2+ Gα EA PK Misfolded Receptor Stabilized Pharmacochaperone ER Golgi PK Substrate Light Membrane-EA Format Endosome-EA Format EA EA EA EA EA EA Substrate Light Endosome PK EA EA PK PK PK
1
3
2
4
HitHunter
®セカンドメッセンジャーアッセイ
最適化された検出試薬と検証済み細胞株を用いて、シグナル 伝達系の過程で産出されるセカンドメッセンジャー（cAMP
およ びカルシウム）を測定PathHunter GPCR
内在化アッセイ
抗体やイメージング技術、放射性物質を使わずにGPCR
内在 化を直接的かつ定量的に測定PathHunter
®β-アレスチンアッセイ
G
タンパク質に非依存的なβ-アレスチンの補充を検出することからGPCR
の脱オーファン化やリガンドバイアスの研究にも最適PathHunter
薬理的シャペロン・トラフィッキングアッセイ
タンパク質のフォールディングおよびトラフィッキングの異常を修正する 薬理的シャペロン機能をもつ化合物の同定および最適化xxx
セカンドメッセンジャーアッセイ
ProLink Tag (PK)
β-Arrestin & Enzyme Acceptor (EA) Stimulation & Binding Substrate Light Adenylyl Cyclase PLC ATP cAMP α2 α1 Gαθ IP3 Ca2+ Gα
DiscoveRx
では、細胞内cAMP
の蓄積やカルシウム濃度変化を検出す る機能的セカンドメッセンジャーアッセイを提供しています。これらのアッセイは、 ナチュラルなカップリング状態を保った全長のGPCR
を安定発現させた細胞 株と、検出試薬によって構成されます。信頼性の高い検証済みプラットフォー ムを用いることで、スクリーニングを迅速かつ簡便に行うことができるだけでは なく、アッセイ樹立にかかる時間を削減することができます。HitHunter
®テクノロジーを用いた
cAMP
の検出
a)
幅広いアッセイウィンドウb)
少ない細胞数でアッセイ可能c)
高い血清耐性d)
HTS
アッセイフォーマットに対応（3456
ウェルまで微量化可能）e)
標準的なルミノメーターによるシグナル検出 上記のような特長を持つHitHunter cAMP
アッセイは、バイオ医薬品(ペ プチドや抗体)、完全または部分的アゴニスト、アンタゴニスト、インバースアゴ ニスト、アロステリックモデュレーターなど、幅広い分子クラスの評価に用いるこ とができます。G
s/G
i共役型
cAMP Hunter
™細胞株
DiscoveRx
では、115
種類を超える非強制的カップリングの手法で作成さ れたG
s/G
i共役型GPCR
安定発現細胞株を提供しております。本細胞株は、薬理研究や
HitHunter cAMP
アッセイを用いた機能的cAMP
応答の評価用に最適化されていますので、アッセイ樹立の時間と手間を削 減できます。
Calcium No Wash
PLUSを用いたカルシウムの検出
細胞内のカルシウム濃度を測定することで、
GPCR
やイオンチャネルの活性状態を測定することができます。
HTS
化が容易なDiscoveRx
のカルシウム検出アッセイには、化学発光を利用した
Calcium No Wash
PLUSと発光タンパク質を利用した
Coelenterazine h
がございます。洗浄ステップが不要な
Calcium No Wash
PLUSキットは、従来のアッセイ方法と比べて、迅速・確実・低コストを実現しています。
ヒト
GPCR
（既知およびオーソログ）発現細胞株
目的の薬理研究や
Calcium No Wash
PLUSキットによるカルシウム動態の評価用に最適化された、
G
q共役型GPCR
安定発現細胞株です。HitHunter IP3
アッセイおよび
cGMP
アッセイもございます
特長
• 400
件以上の査読された文献による実績
• ホモジニアスで簡便なアッセイ方法
• 高い信頼性と再現性
• 高感度かつ幅広いアッセイウィンドウ
• 確実かつ迅速な検出方法
• 低分子化合物やバイオ医薬品に対応
xxx
β-アレスチンアッセイ
多様な
GPCR
を評価可能とするプラットフォーム
PathHunter
® β-アレスチンアッセイは、DiscoveRx
独自のEnzyme
Fragment Complementation (EFC)
技術を用いて活性化GPCR
へのβ-アレスチンの結合をモニターします。リガンドによる刺激を受けると、
G
i、G
s およびG
q 共役型GPCR
にβ-アレスチンが結合します。アレスチンの補充 はGタンパク質シグナル伝達に対して非依存的であるため、PathHunter
™ β-アレスチンアッセイは、多様なGPCR
に対して利用できる万能なアッセイで あるといえます。本アッセイでは、受容体の活性化に伴い、化学発光シグナル が直線的に増加するため、化学量論的な情報を得ることができます。ヒト
GPCR
（既知およびオーソログ）発現細胞株
ヒトおよびオーソログGPCR
を含む400
種類以上の検証済み細胞株を取 り揃えているDiscoveRx
では、業界最大級のセレクションを誇る機能的GPCR
セルベースアッセイを提供しています。これらのアッセイは新規医薬品 候補化合物のカウンタースクリーニングや力価試験、免疫原生試験、構造 活性相関(SAR)
評価にご活用いただけます。PathHunter
β-アレスチン・ オーソログGPCR
アッセイでは、推定リード化合物のより詳しい情報を得た り、選択性や特異性のプロファイリング、リガンドの有効濃度を決定すること ができます。GPCR
脱オーファン化研究
PathHunter
アレスチンオーファンGPCR
アッセイは、GPCR
の脱オーファン 化の研究に最適なスクリーニングプラットフォームです。G
タンパク質に依存し ない検出方法である本アッセイは、確実かつ高感度のスクリーニングであるこ とから、セカンドメッセンジャーのシグナルを確かめることなく、リガンド＝受容体 の新規の組み合わせを明らかにすることが可能です。タグ付けされたGPCR
が活性化された際に発せられるシグナルを検出するため、内在性の受容体特長
• 90
種類以上のオーファンGPCRを含む、400種類以上の検
証済みGPCRアッセイ
• HTS
スクリーニングにも対応可能なワンステップのプロトコル
• QC
としても有用な確実で迅速な検出方法
• G
タンパク質非依存的なアッセイ法は、リガンドバイアスの研
究にも最適
• 新規薬理作用の探索やアンタゴニストスクリーニングに適し
た幅広いアッセイウィンドウ
ProLink Tag (PK) β-Arrestin & Enzyme Acceptor (EA) Stimulation & Binding Substrate Light Adenylyl Cyclase PLC ATP cAMP α2 α1 Gαθ IP3 Ca2+ Gαアロステリックモデュレーター・リガンドバイアス・バイオ医薬
品などの評価
簡便でワンステップの化学発光を利用したPathHunter
アレスチンアッセイ は、完全または部分的アゴニスト、インバースアゴニスト、アンタゴニスト、中和 抗体およびアロステリックモデュレーターなど多様な薬理作用に対応できま す。cAMP
やカルシウム動態などを検出するセカンドメッセンジャーを利用し たアッセイと組み合わせることで、多様なシグナル経路を平行して検証するこ とができることから、複数のシグナル経路が関与するリガンドの同定も可能で す。その結果、新規の化合物クラスの発見にもつながります。内在化・トラフィッキングアッセイ
EA PK Misfolded Receptor Stabilized Pharmacochaperone ER Golgi PK Substrate Light Membrane-EA Format Endosome-EA Format EA EA EA EA EA EA Substrate Light Endosome PK EA EA PK PK PK業界最大級の
GPCR
安定発現細胞株のラインナップ
DiscoveRx
の野生型カップリングG
i/G
s/G
q 細胞株GPCR
安定発現細胞株は、セカンドメッセンジャー・アレスチン補充・受容体内在化およびタンパク質 輸送を検出することにより、GPCR
シグナル伝達を評価するために構築されました。600
種類を超えるGPCR
アッセイ(ヒトまたはオーソログ)から、お客様の目 的に合ったアッセイをお選びいただけます。GPCR
を創薬ターゲットとしたアッセイは、DiscoveRx
にお任せください。特長
• 受容体生物学研究やリード化合物の同定、構造活性
相関(SAR)評価に最適
• 幅広いアッセイウィンドウと高い再現性
• G
タンパク質非依存的なアッセイ法
• 特異的・簡便・非放射性
• HTS
に適したワンステップのプロトコル
PathHunter
®GPCR
内在化アッセイ
PathHunter GPCR
内在化アッセイでは、直接的かつ定量的にGPCR
の内在化を測定することができます。イメージング技術や抗体を使ったその 他の内在化アッセイとは異なり、セルベースの本アッセイは簡便かつ放射性 物質が不要です。化学発光を利用するため、HTS
にも適しています。受容 体のリサイクリング経路を区別することで、新規の阻害剤を同定したり、候補 化合物の薬理作用や選択性を確認することが可能です。 GPCR cAMP and Calcium Detection Deorphanization Screening and Profiling Services GPCR Endocytosis and Recycling Trafficking Custom Assay Development β-Arrestin RecruitmentPathHunter
薬理学的シャペロン・トラフィッキングアッセイ
タンパク質のミスフォールディングを修正し、正しいタンパク質輸送を促す機能 を持った分子(化合物)を薬理学的シャペロン(pharmacochaperone)
と呼びます。PathHunter
薬理学的シャペロン・トラフィッキングアッセイはセ ルベースのアッセイであり、薬理学的シャペロンの同定や最適化に用いること ができます。ミスフォールディングによるタンパク質輸送や内在化が関与する 疾患において、目的化合物の薬理学的性質や機能阻害を簡便かつ定量 的に測定することが可能となります。スクリーニング＆プロファイリング試験サービス
600
種類以上の非強制的カップリングGPCR
安定発現細胞株のコ レクションがLeadHunter
SMGPCR
試験サービスのベースとなってお り、GPCR
活性応答として複数の下流シグナルを検証することができま す。LeadHunter
サービスをご活用いただくことで、リード化合物の同定や選 択性、構造活性相関(SAR)
評価など、あらゆるステージのGPCR
創薬研 究において、時間とコストを削減することができます。GPCRscan GPCR
創薬ソリューション
gpcrMAX
パネルにより、リガンド＝受容体の特異的な結合を明らかにしま す。スクリーニングにより同定されたヒット化合物候補は、DiscoveRx
の複 数の機能アッセイを用いて確実に検証をすることができます。GPCRscan
サービスおよびパネルのご紹介
パネル 内容 gpcrMAX 165種類以上のGPCR(60種類のリガンドファミリーを網羅)を搭載したフルパネル。アゴニストとアンタゴニストを同時 解析。 orphanMAX クラスAおよびクラスBオーファン受容体を網羅した70種類以上のオーファンGPCRを搭載。アゴニストモードのみ対応。 gpcrELECT 既知、オーファンおよびオーソログGPCR細胞株の中からターゲットを自由にご選択いただけるカスタムパネル。gpcrE/IC50ELECT ご指定のGPCRscanセルベースアッセイを用いた定量的な機能評価。
Chemokine Panel 20種類のケモカイン受容体を網羅するパネル。アゴニストとアンタゴニストを同時解析。
Therapeutic Panels 13種類の疾患別パネル (Cancer, Neurological, Inflammation, Pain and Addiction, Metabolic,
Cardiovascular, Digestive and Renal, Reproductive, Respiratory, Ocular, Dermatology, Auditory and Otology, and Post-Traumatic Stress Disorder)
Functional Selectivity Index 構造活性相関やリード化合物の評価に最適な、機能選択性およびリガンドバイアスの定量的評価。 β-アレスチ
ン・cAMP・カルシウム・内在化の機能アッセイを使用。 Positive/Negative Allosteric Modulator Screening GPCRセルベースアッセイ(β-アレスチンまたはcAMP)を用いた、ポジティブおよびネガティブアロステリックモデュレーターの 定量的評価。
特長
• 600
種類を超える非強制的カップリングGPCRアッセイ
• 複数の機能アッセイを網羅
（
β-アレスチン・cAMP・カルシウム・内在化）
• 既成のパネルとカスタムパネルから選択可能
• 70
種類を超えるオーファンGPCRを含むパネルは、GPCRの
脱オーファン化に最適
• gpcrMAX
パネル：アゴニストとアンタゴニストを同時に評価
GPCR # [Compound] (M) [Compound] (M) % A ct iv it yNormalized Signal (%) Normalized Signal (%)
Primary Screen
Hit Confirmation
0 10-11 10-10 10-9 10-8 10-7 10-6 10-5 10-4 10-11 10-10 10-9 10-8 10-7 10-6 10-5 10-4 0 20 40 60 80 100 120 0 20 40 60 80 100 120 0 20 40 60 80 100 120 PathHunter® Arrestin Reference Test Reference Test cAMP Hunter™ 10 20 30 40 50 60 70 80 GPCRパネルによるプロファイリングを特定のリガンド濃度により実施し、潜在的な相互作用を検出した (左)
Arrestin 2nd Messenger Internalization Ortholog
Pharmacotrafficking
Class A Class B Class C
GPR26GPR78 GPR61GPR62 GPR173GPR85 GPR27 GPBAR 1 GPR135GPR88 GPR150GPR75 GPR45 3 6 R P G GPR19 GPR120GPR103 CCKA R CCKB R GPR83 PRLHR NPY2 R NPY1 R PPY R1 NPY5 R HCRTR1 HCRTR2 NPFFR 1 NPFFR 2 TACR1 TACR3 TACR2 AVP R1B OXTR AVP R1A AVP R2 GNRHR NPSR 1 PROKR1 PROKR2 GRPR NMBR BRS3EDNRBEDNRAGPR37L1GPR37 GHSR MLNR NTSR1 NTSR2 NMU1R NMU2R GPR39TRHR GPR139 GPR142 ADORA1 ADORA3 ADORA2 A ADORA2 B GPR3 GPR6 GPR12 MC4R MC5R MC3R MC2R MC1R EDG2 EDG4 EDG7 EDG1 EDG3 EDG5 EDG8 EDG6 CNR1 CNR2 GPR119 CHRM1 CHRM5 CHRM3 CHRM2 CHRM4 HRH3 HRH4 ADRA 1A ADRA 1B ADRA 1D ADRA 2A ADRA 2C ADRA 2B HRH2HTR4 DRD2 DRD3 DRD4 ADRB 1 ADRB 2 ADRB 3 HTR6 DRD1 DRD5 HTR1B HTR1DHTR1E HTR1F HTR1A HTR5A HTR7 TAAR2 TAAR3 TAAR1 TAAR6 TAAR8 TAAR9 TAAR5 HRH1 HTR2A HTR2C HTR2B GPR21 GPR52 GPR146 DARC GPR176 GPR22 MTNR1 A MTNR1 B GPR50GPR84 GPR161 GPR101 GPR153 GPR162 GPR149 CASR GPRC6A GRM1 GRM5 GRM2 GRM3 GRM4 GRM8 GRM7GRM6 GABBR 2 ADCY AP1R 1 VIPR2 SCTR VIPR1 GHRHRPTHR2PTHR1 GCGR GIPRGLP1R GLP2R CALCR CALCR L CRHR1 CRHR2 GABBR 1 GPR160 GPR148 GPR82 GPR141 GPR151 AGTR1 AGTR2 BDKRB1 BDKRB2 AGTRL1 GPR25 GPR15 CXCR4 CCR6 CCR7 CCR9CCRL1 CXCR6 CCR10 CXCR3 CXCR5 CXCR1 CXCR2 CCBP2 XCR1 CCR1 CCR3 CCR2 CCR5 CCR4 CCR8CX3CR1 CCRL2 CXCR7 GPR182 RXFP3 RXFP4 GPER GALR2 GALR3 GALR1 KISS1 R MCHR1 MCHR2 NPBWR1 NPBWR2 SSTR1 SSTR4 SSTR3 SSTR5 SSTR2 OPRD1 OPRM1 OPRK1 OPRL1 CMKL R1 GPR33 C3AR1 FPRL1 FPR3 FPR1 GPR32 CRTH2 GPR1 C5AR1 C5L2 LTB4R LTB4R 2 GPR152 CYSL TR1 CYSL TR2 EBI2 GPR174 P2RY 10 GPR23 LPAR 6 GPR17 GPR87P2RY 14 P2RY 12 P2RY 13 GPR171 GPR34 PTAF R GPR4GPR68 GPR65 GPR132 OXGR1 GPR91 P2RY 2 P2RY 4 P2RY 6 P2RY 1 F2R F2RL1 8 Y R 2 P F2RL2 F2RL3 GPR92 GPR35 GPR20 GP R55 GPR18 FFAR2 FFAR3 FFAR1 P2RY 11 GPR109A GPR109B GPR81 OXER1 GPR31 UTR2 MAS 1 MAS 1L MRGPRX 1 MRGPRX 3 MRGPRX 4 MRGPRX 2 MRGP RD MRGPREMRGPRG MRGPRF PTGDRPTGER2 PTGIR PTGER4 PTGER1TBXA 2R PTGFR PTGER3 LHCGRTSHR FSHR LGR5LGR6 LGR4 RXFP 1 RXFP 2 OPN3OPN5
GPCR
ファミリー
Acetylcholine Galanin Neurotensin
Adenosine Ghrelin Opioid
Adrenoreceptor Glucagon Orexin
Anaphylotoxin Glutamate Purinergic Receptor (P2Y)
Angiotensin Glycoprotein Hormone Receptor Peptide P518 Receptor
Apelin Gonadotrophin-releasing Hormone Receptor Platelet-activating Factor
Bile Acid Receptors Histamine Prokineticin
Bombesin Hydroxycarboxylic Acid Receptors Prolactin Releasing Peptide Receptor
Bradykinin KISS1-derived Peptide Receptor Prostanoid
Calcitonin Leukotriene Protease activated
Calcium-sensing Receptors Lysophospholipid PTH receptor
Cannabinoid Melanin-concentrating Hormone Receptor Relaxin
Chemokine Melanocortin Rhodopsin
Cholecystokinin Melatonin Serotonin
Class A Orphan Metabotropic Glutamate Somatostatin
Corticotropin Motilin Tachykinin
Dopamine Neuromedin U Trace Amine Receptor
Endothelin Neuropeptide B and W Thyrotropin-releasing Hormone Receptor
Formylpeptide Neuropeptide F Urotensin
Free Fatty Acid Neuropeptide S Vasopressin
GABAB Receptor Neuropeptide Y VIP and PACAP
新規ターゲットが随時加わっております。最新のGPCRターゲットリストは、DiscoveRxウェブサイトにてご確認ください。 www.discoverx.com/gpcrs
アッセイ
>135
セカンドメッセンジャー
>345
アレスチン
>95
内在化
>5
トラフィッキング
種
>225
ヒト
>105
オーソログ
GPCR
創薬研究ポートフォリオ
GPCR
創薬研究開発の総合ソリューション
10-1110-1010-9 10-8 10-7 10-6 10-5 10-4 10-3 0 5000 10000 15000 20000 Acetylcholine Carbachol Oxo-M Agonist [M] + 10 µM Forskolin R L U 10-10 10-8 10-6 10-4 10-2 0 25000 50000 75000 100000 125000 Acetylcholine Carbachol Oxo-M [M] R L U 10-1010-9 10-8 10-7 10-6 10-5 10-4 10-3 10-2 0 2500 5000 7500 10000 Acetylcholine Carbachol Oxo-M [M] R L UCholinergic Receptor, Muscarinic 2 (CHRM2)
を複数の機能アッセイで評価
セカンドメッセンジャー
β-アレスチンの補充
受容体の内在化
135種類以上の野生型カップリング Gi /Gs /Gq 細胞株 415種類以上の検証済み細胞株 (オーファンおよびオーソログを含む） 95種類以上のネイティブな受容体を 発現したセルベースアッセイ本社所在地
