་ ඹ ᵝ ᘧ 㸯
Ꮫ ㄳ ồ ㄽ ᩥ ࡢ ෆ ᐜ ࡢ せ ᪨
ㄽ ᩥ ᥦ ฟ ⪅ Ặ ྡ ⭘ ⒆ ไ ᚚ ⛉ Ꮫ 㡿 ᇦ ፬ ே ⛉ ⭘ ⒆ Ꮫ ᩍ ⫱ ◊ ✲ ศ 㔝 Ặ ྡ ᾏ ⪁ ྡ ᮥ ዉ
㸦 ㄽ ᩥ 㢟 ┠ 㸧
Carbonyl reductase 1-overexpressing exosomes inhibit proliferation of ovarian cancer cells
࢝ ࣝ ࣎ ࢽ ࣝ 㑏 ඖ 㓝 ⣲ 㐣 Ⓨ ⌧ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࡣ ༸ ᕢ ⒴ ⣽ ⬊ ࡢ ቑ Ṫ ࢆ ᢚ ไ ࡍ ࡿ
࠙ ⥴ ゝ ࠚ
Carbonyl reductase 1 㸦CBR1㸧ࡣ ࠊNADPH ౫ Ꮡ ᛶ ࡢ ࢝ ࣝ ࣎ ࢽ ࣝ 㑏 ඖ 㓝 ⣲ ࡢ ୍ ࡘ ࡛ ࠶ ࡿ ࠋ ᡃ ࠎ ࡣ ࠊCBR1 ࡀ 㧗 Ⓨ ⌧ ࡋ ࡚ ࠸ ࡿ ༸ ᕢ ⒴ ⣽ ⬊ ࡽ ⭘ ⒆ ࡀ ༑ ศ ቑ Ṫ ࡏ ࡎ ࠊ ㏫ ༸ ᕢ ⒴ ⣽
⬊ ෆ ࡢ CBR1 ࡢ Ⓨ ⌧ ࢆ ప ୗ ࡉ ࡏ ࡿ ⭘ ⒆ ࡢ Ⓨ ⏕ ࡀ ಁ 㐍 ࡉ ࢀ ࠊ ࡢ ⮚ ჾ ࡢ ㌿ ⛣ ࡢ 㢖 ᗘ ࡀ ቑ ຍ ࡍ ࡿ ࡇ ࢆ ሗ ࿌ ࡋ ࡚ ࡁ ࡓ ࠋ ᮏ ◊ ✲ ࡛ ࡣ ࠊ ࢻ ࣛ ࢵ ࢢ ࢹ ࣜ ࣂ ࣜ ࣮ ࢩ ࢫ ࢸ ࣒ 㸦DDS㸧 ࡋ
࡚ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ╔ ┠ ࡋ ࡓ ࠋCBR1ࢆ 㐣 Ⓨ ⌧ ࡍ ࡿ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࢆ స 〇 ࡋ ࠊ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮
࣒ ࢆ ⏝ ࠸ ࡚ ༸ ᕢ ⒴ ⣽ ⬊ ෆ CBR1 DNA ࢆ ㏦ 㐩 ࡍ ࡿ ࡓ ࡵ ࡢ ᭱ 㐺 ࡞ ᮲ ௳ ࢆ Ỵ ᐃ ࡍ ࡿ ࡇ ࠊ࢚
ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࡛ 㐠 ࡤ ࢀ ࡓ CBR1 ࡢ Ⓨ ⌧ ⛬ ᗘ ࡼ ࡿ ⣽ ⬊ ቑ Ṫ ࡢ 㐪 ࠸ ࢆ ㄪ ࡿ ࡇ ࢆ ┠ ⓗ ࡋ ࡓ ࠋ
࠙ ᪉ ἲ ࠚ
ᮏ ◊ ✲ ࡣ ࠊ ⥺ ⥔ ⱆ ⣽ ⬊ ᰴ ࡛ ࠶ ࡿ Ṛ ࣄ ࢺ Ꮚ ᐑ ෆ ⭷ 㛫 ㉁ ⣽ ⬊ 㸦THESCs㸧 ࢆ ⏝ ࡋ ࡓ ࠋ
1) ࣜ ࣏ ࣇ ࢙ ࢡ ࢩ ࣙ ࣥ ἲ ࡛ THESCs CBR1 DNA ࢆ ᑟ ධ ࡋ ࡓ ࠋGFP ࢱ ࢢ ࡁ ࡢ DNAࢆ ⏝
࠸ ࡚ ࠊ DNA ࡢ ᑟ ධ ≧ ἣ ࢆ ⺯ ග 㢧 ᚤ 㙾 ࡛ ☜ ㄆ ࡋ ࡓ ࠋ Lipofectamin/DNA ẚ ࢆ Lipofectamin12~36μlࠊDNA12~48μg タ ᐃ ࡋ ຠ ⋡ ⓗ ࡞ ᮲ ௳ ࡢ ᳨ ウ ࢆ ⾜ ࡗ ࡓ ࠋࡉ ࡽ ࢘
࢚ ࢫ ࢱ ࣥ ࣈ ࣟ ࢵ ࢺ ἲ ࡛ CBR1 DNA ࢆ ᑟ ධ ࡋ ࡓ ⣽ ⬊ ࡛ ࡢ CBR1 ࡢ Ⓨ ⌧ ࣞ ࣋ ࣝ ࢆ Lipofectamin/NDAẚ ᑟ ධ ࡽ ࡢ ⤒ 㐣 㛫 ࡛ ẚ ㍑ ࡋ ࡓ ࠋ
2) CBR1 DNA ࢆ ࢺ ࣛ ࣥ ࢫ ࣇ ࢙ ࢡ ࢩ ࣙ ࣥ ࡋ ࡓ ⣽ ⬊ ࡢ ᇵ 㣴 ୖ Ύ ࡽ exoEasy Maxi Kit ࢆ
⏝ ࠸ ࡚ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࢆ ⢭ 〇 ࡋ ࡓ ࠋ ⢭ 〇 ࡋ ࡓ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࡣ ࢘ ࢚ ࢫ ࢱ ࣥ ࣈ ࣟ ࢵ ࢺ ἲ ࡛
࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࡢ ⭷ ࢱ ࣥ ࣃ ࢡ ࡛ ࠶ ࡿ CD63 ࡢ Ⓨ ⌧ ⛬ ᗘ ࢆ ☜ ㄆ ࡋ ࡓ ࠋCBR1 DNA ᑟ ධ ⣽
⬊ ࠊCBR1 si RNA ᑟ ධ ⣽ ⬊ ࠊ 㑇 ఏ Ꮚ ᑟ ධ ࢆ ⾜ ࢃ ࡞ ࡗ ࡓ ⣽ ⬊ 㸦 ࢥ ࣥ ࢺ ࣟ ࣮ ࣝ 㸧 ࡢ ୖ Ύ ࡽ ⢭ 〇 ࡋ ࡓ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࡢ CBR1 ࡢ Ⓨ ⌧ ࡢ ᕪ ࢆ ☜ ㄆ ࡋ ࡓ ࠋ
3) ༸ ᕢ ⒴ ⣽ ⬊ ᰴ TOV-21G(ࣄ ࢺ ༸ ᕢ ᫂ ⣽ ⬊ ⒴ ࡽ ᶞ ❧)ࠊSK-OV-3(ࣄ ࢺ ༸ ᕢ ₢ ᾮ ᛶ ⒴
ࡽ ᶞ ❧) CBR1 DNAᑟ ධ ⣽ ⬊ ࠊCBR1 si RNAᑟ ධ ⣽ ⬊ ࠊࢥ ࣥ ࢺ ࣟ ࣮ ࣝ ⣽ ⬊ ࡽ ⢭ 〇 ࡋ ࡓ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࢆ ῧ ຍ ࡋ ࠊ ⣽ ⬊ ቑ Ṫ ࢆ ẚ ㍑ ࡋ ࡓ ࠋ
࠙ ⤖ ᯝ ࠚ
1) CBR1 DNA ᑟ ධ ࡽ 48 㛫 ᚋ ࡲ ࡛ CBR1 DNA ࡢ ྲྀ ࡾ ㎸ ࡳ ࡀ ቑ ຍ ࡋ ࠊ ✀ ࠎ ࡢ Lipofectamin/DNAẚ ࡢ ୰ ࡛ Lipofectamin24μl/DNA 36μg࡛ ᭱ ࡶ Ⰻ ዲ ࡔ ࡗ ࡓ ࠋ࢘ ࢚ ࢫ ࢱ
ࣥ ࣈ ࣟ ࢵ ࢺ ἲ ࡼ ࡾ ࠊCBR1 DNA ࢆ ᑟ ධ ࡋ ࡓ ⣽ ⬊ ࡛ ࢥ ࣥ ࢺ ࣟ ࣮ ࣝ ⣽ ⬊ ࡼ ࡾ ࡶ CBR1 ࡢ Ⓨ ⌧ ࡀ ቑ ᙉ ࡋ ࡚ ࠸ ࡿ ࢆ ☜ ㄆ ࡋ ࡓ ࠋ
2) CBR1 DNA ᑟ ධ ⣽ ⬊ ࠊCBR1 si RNA ᑟ ධ ⣽ ⬊ ࠊ ࢥ ࣥ ࢺ ࣟ ࣮ ࣝ ⣽ ⬊ ࡽ ࡢ ᇵ 㣴 ୖ Ύ ⢭
〇 ᳨ య ࡛ CD63ࡢ Ⓨ ⌧ ࢆ ㄆ ࡵ ࡓ ࡓ ࡵ ࠊ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࡀ ⢭ 〇 ࡉ ࢀ ࡓ ࡇ ࢆ ☜ ㄆ ࡛ ࡁ ࡓ ࠋ ࡉ ࡽ ࠊCBR1 DNAᑟ ධ ⣽ ⬊ ࡽ ⢭ 〇 ࡋ ࡓ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࡛ ࠊ ࡢ 㸰 ✀ 㢮 ẚ ㍑ ࡋ ࡚ ࠊ CBR1 ࡢ Ⓨ ⌧ ࡀ ቑ ᙉ ࡋ ࡚ ࠸ ࡿ ࡇ ࢆ ☜ ㄆ ࡋ ࡓ ࠋ
3) CBR1 DNA ᑟ ධ ⣽ ⬊ ࡽ ⢭ 〇 ࡋ ࡓ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࢆ ῧ ຍ ࡋ ࡓ ༸ ᕢ ⒴ ⣽ ⬊ ᰴ ࡢ ቑ Ṫ ࡣ ࠊ CBR1 Ⓨ ⌧ ࢆ ῶ ᑡ ࡉ ࡏ ࡓ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࢆ ῧ ຍ ࡋ ࡓ ⣽ ⬊ ࡢ ቑ Ṫ ẚ ࡚ ᭷ ព ᢚ ไ ࡉ
ࢀ ࡓ ࠋ
࠙ ⪃ ᐹ ࠚ
CBR1 ࡀ ༸ ᕢ ⒴ ࡢ ቑ Ṫ ࠊ ㌿ ⛣ 㛵 ࡍ ࡿ ࡇ ࡣ ࠊ ᙜ ᩍ ᐊ ࡢ ඛ ⾜ ◊ ✲ ࡛ ♧ ࡉ ࢀ ࡚ ࠸ ࡿ ࠋ DNAࡢ ᑟ ධ ࡣ ࠊࢺ ࣛ ࣥ ࢫ ࣇ ࢙ ࢡ ࢩ ࣙ ࣥ ヨ ⸆ ࡢ ⏝ ࠊ࢚ ࣞ ࢡ ࢺ ࣟ ࣏ ࣞ ࣮ ࢩ ࣙ ࣥ ἲ ࠊ࢘ ࣝ ࢫ ࣋ ࢡ ࢱ ࣮ ࡢ ⣽ ⬊ ෆ ࡢ ᑟ ධ ࡞ ࡢ ᪉ ἲ ࡀ ࠶ ࡿ ࡀ ࠊࡇ ࢀ ࡽ ࡢ ᢏ ⾡ ࡣ ⮫ ᗋ ࡛ ࡢ ⏝ ࡣ ᅔ 㞴
࡛ ࠶ ࡿ ࠋ ᡃ ࠎ ࡣ DDS ࡋ ࡚ CBR1 DNA-ࢹ ࣥ ࢻ ࣜ ࣐ ࣮ 」 ྜ య ࢆ ༸ ᕢ ⒴ ࡢ ⭡ ⭷ ✀ ࣐ ࢘ ࢫ
⭡ ⭍ ෆ ᢞ ࡍ ࡿ ࡇ ࡛ ࠊ⏕ Ꮡ ᮇ 㛫 ࡀ ᭷ ព 㛗 ࡃ ࡞ ࡿ ࡇ ࢆ ♧ ࡋ ࡓ ࡶ ࡢ ࡢ ࢹ ࣥ ࢻ ࣜ ࣐
࣮ ࡢ ே య ࡢ ᢞ ࡢ Ᏻ ᛶ ࡣ ᮍ ▱ ࡛ ࠶ ࡿ ࠋ
ᮏ ◊ ✲ ࡣ ᪂ ࡓ ࡞ DDS ࡋ ࡚ ⏕ య ෆ ࡽ ⢭ 〇 ྍ ⬟ ࡞ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ╔ ┠ ࡋ ࡓ ࠋ ᭱ ㏆ ࡢ
◊ ✲ ࡛ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࡣ mRNA microRNA (miRNA)ࡢ ୧ ᪉ ࢆ ྵ ࢇ ࡛ ࠸ ࡿ ࡇ ࡀ ࢃ ࡗ ࡚
࠸ ࡿ ࠋ ࡲ ࡓ ࠊ ู ࡢ ⣽ ⬊ ⛣ ⾜ ࡋ ࡚ ᪂ ࡋ ࠸ ⎔ ቃ ࡛ ᶵ ⬟ ࡍ ࡿ ࡇ ࡀ ࡛ ࡁ ࠊ ศ Ἢ ⣽ ⬊ ࡢ ≧ ែ
ࡼ ࡗ ࡚ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࡢ ᶵ ⬟ ࡀ ኚ ࡍ ࡿ ࡇ ࡀ ♧ ࡉ ࢀ ࡚ ࠸ ࡿ ࠋ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࡣ ᚠ ⎔ ୰ ࡛ Ᏻ ᐃ ࡛ ࠶ ࡾ ࠊච ᣄ ⤯ ᛂ ࢆ ㉳ ࡇ ࡉ ࡞ ࠸ ࡇ ࡽ ࠊDDS ࡋ ࡚ ⒪ ࡢ ᛂ ⏝ ࡀ ᮇ ᚅ ࡉ ࢀ ࡚
࠸ ࡿ ࠋ ࢼ ࣀ ࢸ ࢡ ࣀ ࣟ ࢪ ࣮ ࡢ 㐍 Ṍ ࡼ ࡾ ࠊ Ꮫ ⒪ ἲ ⸆ ࠊ ప ศ Ꮚ ࠊmiRNAࠊsiRNA ࡞ ࡢ
⒪ ⸆ ࢆ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࢝ ࣉ ࢭ ࣝ ࡍ ࡿ ࡇ ࡀ ྍ ⬟ ࡞ ࡗ ࡓ ࠋ ༸ ᕢ ⒴ ࡛ ࡣ ࠊ ⬡ ⫫ 㛫 ⴥ ⣔ ᖿ
⣽ ⬊ ⏤ ᮶ ࡢ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࡀ ࠊ ⣽ ⬊ ࿘ ᮇ ࢆ 㜼 ᐖ ࡋ ࠊ ࣑ ࢺ ࢥ ࣥ ࢻ ࣜ ࢆ ࡋ ࡓ ࣏ ࢺ ࣮ ࢩ ࢫ ࢩ ࢢ ࢼ ࣝ ࢆ ά ᛶ ࡍ ࡿ ࡇ ࡛ ࠊA2780ࣄ ࢺ ༸ ᕢ ⒴ ⣽ ⬊ ࡢ ⣽ ⬊ ቑ Ṫ ࢆ ᢚ ไ ࡋ ࡚ ࠾ ࡾ ࠊ ࡇ ࡢ ᢚ ไ ⤒ ㊰ ࠾ ࡅ ࡿ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࡢ miRNA ࡢ 㔜 せ ᛶ ࡀ ♧ ၀ ࡉ ࢀ ࡚ ࠸ ࡿ ࠋ ᅇ ࡢ ◊ ✲ ࡛ ࡣ ࠊ
࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࡀ CBR1 DNAࢆ ༸ ᕢ ⒴ ⣽ ⬊ ෆ 㐠 ࡪ ྍ ⬟ ᛶ ࡀ ♧ ࡉ ࢀ ࠊ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ CBR1 DNAࢆ ⤌ ࡳ ྜ ࢃ ࡏ ࡓ 㑇 ఏ Ꮚ ⒪ ࡀ ⒴ ᛶ ⭡ ⭷ ⅖ ࢆ క ࠺ 㐍 ⾜ ༸ ᕢ ⒴ ᑐ ࡋ ࡚ ⮫ ᗋ ⓗ ᛂ ⏝ ࡉ ࢀ ࡿ ྍ ⬟ ᛶ ࡀ ♧ ၀ ࡉ ࢀ ࡓ ࠋ
࠙ ⤖ ㄽ ࠚ
ᅇ ࡢ in vitroᐇ 㦂 ࡛ ࡣ ࠊCBR1ࢆ 㐣 Ⓨ ⌧ ࡉ ࡏ ࡓ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࢆ స ᡂ ࡋ ࠊࡑ ࡢ ᢞ
ࡼ ࡾ ༸ ᕢ ⒴ ⣽ ⬊ ࡢ ቑ Ṫ ࢆ ᢚ ไ ࡍ ࡿ ࡇ ᡂ ຌ ࡋ ࡓ ࠋ ࡇ ࡢ ⤖ ᯝ ࡣ ࠊ ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࡀ 㑇 ఏ Ꮚ ᑟ ධ ࡢ ᭷ ⏝ ࡞ ࢶ ࣮ ࣝ ࡛ ࠶ ࡿ ࡇ ࢆ ♧ ၀ ࡋ ࡚ ࠾ ࡾ ࠊCBR1 DNA ࢚ ࢡ ࢯ ࢯ ࣮ ࣒ ࢆ ⤌ ࡳ ྜ ࢃ ࡏ ࡓ 㑇 ఏ Ꮚ ⒪ ࡀ 㐍 ⾜ ࣭ Ⓨ ༸ ᕢ ⒴ ࡢ ⒪ ᡓ ␎ ࡋ ࡚ ᭷ ᮃ ࡛ ࠶ ࡿ ࡇ ࢆ ♧ ၀ ࡋ ࡚ ࠸ ࡿ ࠋ
