NODマウスにおけるTh2サイトカインおよびTh2サイトカイン産生能と糖尿病発症との関係
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(2) NODマ. ウ ス に お け るTh1サ. Th2サ. イ トカ イ ン お よ び. イ トカ イ ン産 生 能 と糖 尿 病 発 症 との 関 係 近畿大学医学部第2内 科学教室 山. 内. 孝. 哲,大. 野. 恭. (指導:青 木. Relation. Th 1 /Th. between. development. Takaak. Second. of. University. :. Prof.. 示 す よ う にcyclophosphamide(CY)が 尿 病 発 症 とTh1サ. in. Med. ウ ス に お い て は糖 尿 病 発 症 に 性 差 が あ り,過 糖 尿 病 発 症 を 促 進 す る.CY投 γ お よ びTh2サ. 生 能 の 増 加 を 認 め た が,そ. の産 生 パ ター 一ン に は 差 が あ り,Th2/Th1サ. ウ ス で は 投 与1週. 与2週. Key. ウ ス で はCY処. 後 よ り も2週. 後 の 観 察 で は,saline投. 発 症 を み た.本 実 験 に よ り,CYが 生 じ,そ. mine. Aoki). の 結 果,NODマ. た.CY投. Imamura. 録. イ トカ イ ンで あ るIL-2,IFN一. 与 雌NODマ. mice. Me dicine,. 能 と の 関 係 を 検 討 し た.そ. CY投. NOD. Minoru. Internal of. and. production. Nori hiko. 抄 糖 尿 病 の モ デ ル で あ るNODマ. Ohno,. School. 稔. 教 授). mellitus. Yasuhiro. (Director. 村. 2 cytokines. Department. Kinki. ヒ トの1型. 矩彦. of diabetes. i Yamauchi,. 裕,今. 与 雌 雄NODマ. ウ ス のTh1サ. 生. サ イ トカ イ ン は い ず れ も 産. イ トカ イ ン比 の 不 均 衡 を 生 じた. イ トカ イ ン)の. 与 群 と比 較 し てIL-10/IL-2比. 雌NODマ. ウ スに お け る糖. イ トカ イ ン で あ るIL-4,IL-10産. 理 に よ り 上 記4種. 後 にIL-2(Th1サ. 去 の デ ー タが. 産生能増加 を示 し. の 有 意 な 低 下 を 認 あ,糖. イ トカ イ ン とTh2サ. 尿病. イ トカ イ ン の 不 均 衡 を. の こ と が 糖 尿 病 発 症 を 促 進 す る 一 因 と な る 可 能 性 が 示 唆 さ れ た.. words. : NOD. mice,. interferon. T-lymphocyte, 7,. type. 1. cytokine, DM,. interleukin. cyclophosphamide. 2 , interleukin. 4 , interleukin. 10,.
(3) 緒. 言 ヒ トの1型. り,そ. 糖 尿 病(イ. ン ス リ ン依 存 型 糖 尿 病,IDDM)は,現. 在 自 己 免 疫 疾 患 と して と ら え られ て お. の 機 序 に は サ イ トカ イ ン を 含 め て 多 様 な 免 疫 学 的 因 子 の 関 与 が あ るL2.. Non-Gbesediabetic(NOD)マ. ウ ス は 塩 野 義 製 薬 油 日 ラ ボ ラ ト リ ー一ズ に お い てICRマ. 近 交 系 化 さ れ た 糖 尿 病 好 発 系 マ ウ ス で あ り,ラ. 氏 島 炎(insulitis)が. ウ ス よ り分 離 ・. 認 め ら れ る こ と,isletcell. cytoplasmicantibody(ICA),insulinautoantibody(IAA),isletcellsurfaceantibody(ICSA), な ど の 自 己 抗 体 が 検 出 さ れ る こ と よ り,ヒ 使 用 さ れ て お り3-8,そ NODマ. ト ・イ ン ス リ ン依 存 型 糖 尿 病 の モ デ ル 動 物 と して 広 く 実 験 に. の 糖 尿 病 発 症 機 序 に つ い て は 様 々 な 報 告 が な さ れ て い る.. ウ ス の 糖 尿 病 発 症 は,T細. 胞 を 中 心 とす る リ ンパ 球 の ラ氏 島 内 浸 潤(ラ. 続 い て 起 こ る 膵 β細 胞 破 壊 に よ っ て 生 じ る.ラ 氏 島 炎 は 性 差 は あ る が,雌 頃 に は ほ ぼ 全 例 に 観 察 さ れ る.し か し雌 のNODマ 積 発 症 率 は 約80%)の NODマ. に 対 し て 、 雄 のNODマ. 氏 島 炎)と. 雄 と も約4週. そ れ に引 き. 齢 で 生 じ,10週. ウ ス が 高 率 に 糖 尿 病 を 発 症 す る(30-40週 ウ ス に お い て は 低 率(20%前. ウ ス の 糖 尿 病 発 症 に は ラ氏 島 炎 が 基 本 病 変 で あ る が,そ. 後)で. 齢. あ る.そ. 齢 まで の 累 の ことか ら. れ以 外 に も関 与 す る因 子 の あ る事 が 想 像. で き る. 最 近 の 知 見 と し て,NODマ. ウ ス の 糖 尿 病 発 症 に は ヘ ル パ ーT細. T-helpertype1(Th1)とT-helpertype2(Th2)の2つ を 分 泌 す る こ と が 確 立 して い る9.し の サ イ トカ イ ン のNODマ. 胞 が 関 与 し て お り ヘ ル パ ーT細. 胞 には. が 存 在 し、 そ れ ぞ れ 異 な る サ イ ト カ イ ン. か しNODに. 関 す る 従 来 の デ ー タ で は 充 分 な 説 明 で は な く、 こ れ ら. ウ ス の 糖 尿 病 に お け る 役 割 は い ま だ 明 確 な 結 論 に 達 し て い な い.. 一 方 、cyclophosphamide(CY)の. 単 回 投 与 後8-10日. で 破 壊 的 ラ 氏 島 炎 を 生 じ、NODマ. ウス の糖. 尿 病 発 症 を促 進 す る作 用 が あ る こ と が知 られ て い るエ ゜%. 糖 尿 病 未 発 症 の15週 齢 のNODマ 投 与1週. 後,2週. ウ ス にCYを. 投 与 し糖 尿 病 発 症 を 促 進 さ せ る系 に お い て 、CY投. 後 と経 時 的 観 察 を 行 っ て 、Th1サ. イ ト カ イ ン お よ びTh2サ. 与 前,. イ トカ イ ンの 産 生 能 と 糖. 尿 病 発 症 の 関 係 を 検 討 した.. 方. 法. 対象 8週 齢 の 雌 雄NODマ はNODマ. ウ ス と8週. 齢 の 雌ICRマ. ウ ス と 起 源 を 同 じ く し,糖. 育 は 一 定 の 温 度(23±1.0℃),湿. 用 い,飲. ウ ス と 雌ICRマ. CO.,St.Louis,MO,USA)(200mg/kg)ま お け る 無 処 置 群,生 5,ICRマ. 間 周 期)の. 条 件 で 行 い,飼. 料 は 日 本 ク レ ア株. 料 水 は 水 道 水 を 用 い た 。飼 料 と水 は 自 由 摂 取 と し た.. ウ ス の 腹 腔 内 にcyclophosphamide(CY:SigmaChemical た は 生 理 食 塩 水 を1回. 理 食 塩 水 投 与 群,CY投. ウ ス は 各n・=10で. ウス. 尿 病 を 発 症 しな い マ ウ ス で あ る た め 正 常 対 照 と し た .両 マ ウ ス の 飼. 度(50±5%),光(12時. 式 会 社 よ り購 入 し た 固 形 飼 料CA-1を 15週 令 の 雌 雄NODマ. ウ ス は 日本 ク レ ア 株 式 会 社 よ り購 入 し た.ICRマ. 与 群 の 雌NODマ. あ っ た.. 一2一. 投 与 し た .15,16,17週. ウ ス は 各n=10,雄NODマ. 齢 マ ウス に ウ ス は 各n=.
(4) 実験方 法 マ ウ スの 処 置 雌 雄NODマ そ の 後,下. ウ ス と正 常 対 照 で あ る雌ICRマ 大 静 脈 を 切 開 し,心. ウ ス をdiethylether麻. 腔 よ りEDTAを10ml注. 酔 し,心. 腔 穿 刺 に て 採 血 し た.. 入 し て 血 液 を マ ウ ス 体 内 よ り除 去 し た.血. 液除去. 後 脾 臓 を 摘 出 し た.. マ ウ ス 脾 細 胞 の 分 離 と培 養 1)滅. 菌 シ ャ ー レ(滅. 菌Sシ. ャ ー レ:栄. 研 器 材 株 式 会 社,東. serum:GIBCOBRL,GrandIsland,NY,USA)お. 京)に5miの10%牛 よ び1%ペ. 合 剤(BIOWHITTAKER,Walkersville,MD,USA)含 (DMEM:GIBCOBRL)(培. 地)を. 入 れ,amphotericinB(DainipponPharmaceuticalCo., え た も の の 中 に10分. 間 浸 し た.. 記 に20m1のphosphate-bufferedsaline(PBS),pH7。4を 子 径75μm)上. 加 え た 後,脾. で ス ラ イ ド グ ラ ス を 使 用 し て す り っ ぶ し,シ. 遊 液 を 遠 心 チ ュ ー ブ に 入 れ,2000xgで7分 3)0.16MtrisNH4Cl,pH7.2で. ニ シ リ ン ・ス ト レ プ トマ イ シ ン. 有Dulbecco'smodifiedEaglemedium. Ltd。,Osaka,Japan)を200μ1加 2)上. 胎 児 血 清(fetalbovine. 細 胞 を 金 属 メ ッ シ ュ(格. ャ ー レ 内 の 液 中 に 浮 遊 し た.そ. の細 胞 浮. 間 遠 心 し 上 清 を 除 去 し た.. 混 入 し た 赤 血 球 を 除 去 し た.そ. の 後PBSで3回. 洗 浄 し,培. 地 に 細 胞. を 浮 遊 さ せ た. 4)1×106ceUs/mlの 胞 浮 遊 液 を24穴 5)各. 濃 度 に 培 地 を 加 え て 調 節 し た 。細 胞 浮 遊 液 のviabilityは95%以 マ ル チ プ レ ー ト(lwakiGlass,Chiba,Japan)に1m1ず. ウ エ ル 毎 に5μg/mlの. 上 で あ っ た.細. つ 入 れ た.. 最 終 濃 度 に な る よ う にconcanavalinA(ConA:Sigma)を. 加 え て72時. 間 刺 激 培 養 し た.. サ イ トカ イ ンの 測 定 72時. 間 後 に 培 養 上 清 を 回 収 し,遠. 清 中 のIL-2,IL-4,IL-10,IFN一 キ ッ ト はIL-2,IL-4,IFN一. 心 分 離 し て 細 胞 成 分 を 除 去 し た も の を サ イ ト カ イ ン 測 定 に 供 し た.上 γ 濃 度 をEL,ISAキ. ッ ト で 測 定 し た.マ. ウ ス サ イ ト カ イ ン 用ELISA. γ に つ い て はGenzyrneDiagnostics(Cambridge,MA,USA)の. を 使 用 し,王L-10はPerseptiveBiosystems(Framingham,MA,USA)の ELISAに. よ る 測 定 はduplicateで. 行 い,CYに. も の も の を 使 用 し た.各. 検 体 の. よ る 変 動 に つ い て 検 討 し た.. 糖尿病 の判定 血 糖 値 は ヘ キ ソ キ ナ ー ゼ 法(タ マ ゥ ス 血 液 を 直 接 測 定 し た.随. イ ド,バ. イ ヱ ル ・三 共,東. 時 血 糖 値200mg/dl以. 京)を. 使 用 し,解. 剖 時 に 心 腔 よ り採 取 し た. 上 を 糖 尿 病 と診 断 した 。. 統計学 的処理 結 果 は,平. 均 値 ± 標 準 誤 差(mean±SE)で. 表 現 し,2群. 一3一. 間 の 平 均 値 の 差 の 検 定 はStudentむ. 一testで.
(5) 行 い危 険 率5%以. 成. 下 を 有 意 と した.. 績 15週 齢 の 雌 雄NODマ. ウ ス お よ び 雌ICRマ. 間 を 経 た 時 点 で 脾 細 胞 を 回 収 し た.脾 結 果 を 図1-4に. IL-2産 CY投. 細 胞 を37℃. る い はCYを. 投 与 し,そ. の 後1週. 間,2週. で72時 間 培 養 して 上 清 の サ イ ト カ イ ン 濃 度 を 比 較 し た. 示 す.. 生 能 につ い て 与1週. 及 び2週. め た が,1週. 後 よ り2週. 後 にIL-2産. 与 群 よ りCY投. 1-b),ICRマ. ウ ス で は,1週. ウ ス で は,saline投. 後 でCY投. 与 群/saline投. 与 群)を. 後5.90と2週. 激IL-2産. NODとICRマ. 後3.88,2週. 後,2週. 後. 後 はCY投. 与 群 とsaline投. 後2.94と2週. 与 群 とsaline投 与 群 のIL-2比. 間 後 に 減 少 し,一. 方雌では. 間 後 に 増 加 を 認 め た.. 図1cyclophosphamide(CY)投 Con-A刺. ウ ス に お け るCY投. は1週. は り1週. と 異 な り2週 後 の 値 の 方 が 高 か っ た(図. 与 群 に 産 生 増 加 を 認 め た が,2週. ら に,NODマ. と る と,雄. 与 群 に比 し有 意 の 増 加 を 認. ウ ス で は,や. 与 群 で 有 意 の 増 加 を 認 め た が,雄. 与 群 と の 間 に 有 意 差 が な か っ た.さ. 1週 後2.19,2週. 生 能 は,雄NODマ. 後 の 方 が 値 が 低 か っ た(図1-a),雌NODマ. と も にsaline投. (CY投. ウ ス にsalineあ. 与 したNODとICRマ. ウ ス に お け る培 養 脾 細 胞 に よ る. 生. ウ ス(15週. 齢)の. 腹 腔 内 にCY(200mg/kg)あ. る い は生 理 食 塩 水 を. 投 与 し た. デ ー タ は 平 均 値 ± 標 準 誤 差(mean±SE)で 表 し た. *p〈0 .05,**p<0.0001:そ れ ぞ れ生 理 食 塩 水 投 与 群 との 比 較 ▲p<0。05:15週. 齢 グ ル ー プ と の 比 較.. こ れ ら の マ ウ ス の 糖 尿 病 発 症 率 はCY投 ウ ス は7/10,ICRで は 各 群 と も に0%で. は0/10で. 与 後2週. 間 後 の 時 点 で,雄NODマ. あ っ た(表1).し. か し な が ら,CY投. あ っ た.. 一4一. ウ ス は0/5,雌NODマ 与1週. 後 の 時点 は糖尿 病 の発 症.
(6) a)15週. 齢 のNODとICRマ. ウ ス にCYを200mg/kg投. 与 し 、2週. 後 の. 17週 齢 で 血 糖 値 を 測 定 し た. b)血 糖 値200mg!dlを 以 上 を 、 糖 尿 病 と 診 断 し た.. IFN一 γ 産 生 能 に っ い て 雄NODマ. ウ ス で は,CY投. 与1週. 後 の みsaline投. 与 群 あ る い は 投 与 前 群(15週. γ産 生 が そ れ ぞ れ 有 意 に 増 加 し て い た が(図2-a),雌NODマ saline投. 与 群 あ る い は 投 与 前 群(15週. 齢)と. 図2cyclophosphamide(CY)投 Con-A刺. 与 したNODとICRマ. 激IFN一. NODとICRマ. 比 較 してIFN一. ウ ス で はCY投. 与1週. 比 較 し てIFN一 後,2週. 後共 に. γ 産 生 能 が 有 意 に 増 加 し た(図2-b).. ウ ス に お け る培 養 脾 細 胞 に よ る. γ 産 生.. ウ ス(15週. 齢)の. 腹 腔 内 にCY(200㎎/kg)あ. 投 与 した. デ ー タ は 平 均 値 ± 標 準 誤 差(mean±SE)で 表 し た. *p<0 .05:そ れ ぞ れ生 理 食塩 水 投与 群 との 比 較 ▲p〈0.05:15週. 齢)と. 齢 グ ル ー プ と の 比 較.. る い は生 理 食 塩 水 を.
(7) さ ら に,NODに と,雄. は1週. お け るCY投. 後3.37,2週. 与 群 とsaline投. 後2.09と2週. 与 群 のIFN一. γ 比(CY投. 後 に 減 少 して い る の に 対 し,雌. 与 群/saline投 で は1週. 与 群)を. 後4.64,2週. とる. 後6.03と2. 週 後 に 高 値 を 示 し た.. IL-4産. 生 能 につ い て. 雄NODマ. ウ ス で は,CY投. を 示 し た が,CY投. 与2週. 与1週. と る と,雄. ウ ス に お け るCY投 は1週. 低 下 を 認 め て お り,IL-4に. 与 群 と比 較 して そ れ ぞ れ 有 意 の 増 加. 後 に は 有 意 差 を 認 め な か っ た(図3-a).雌NODマ. 見 で あ っ た(図3-b).NODマ 投 与 群)を. 後 に 投 与 前 あ る い はsaline投. 後7.25,2週. 与 群 とsaline投. 後1.55,雌. で も1週. ウ ス に つ い て も同 様 の 所. 与 群 のIL-4比(CY投. 後5.64,2週. 後1.51と,い. 与 群/saline ず れ も2週. 後 に. 関 し て は 雌 雄 と も 同 様 の 傾 向 を 示 した.. Wee】. Weeks. 【s. 口Untrea重ed 囲Saline-￠reated 圏CY-tlea重ed. 図3cyclophosphamide(CY)投 Con-A刺. 激IL4産. NODとICRマ. 与 したNODとICRマ. ウ ス に お け る培 養 脾 細 胞 に よ る. 生. ウ ス(15週. 齢)の. 腹 腔 内 にCY(200mg/kg)あ. る い は生 理 食 塩 水 を. 投 与 し た. デ ー タ は 平 均 値 ± 標 準 誤 差(mean±SE)で 表 し た. *p<0 .05,索*p〈0.0001:そ れ ぞ れ生 理 食塩 水 投 与 群 と の比 較 ▲p<0,05,▲. IL-10産. ▲p〈0.0001:15週. 齢 グ ル ー プ と の 比 較.. 生 能 につ い て. 雄NODマ. ウ ス で は,CY投. な か っ た(図4-a).雌NODマ. 与 群 は 非 投 与 群 あ る い はsaline投 ウ ス はCY投. 与 に よ り1週. 一6一. 与 群 と比 較 して そ れ ぞ れ 有 意 差 を 認 め. 後 にIL.10産. 生 能 の 増 加 を 認 め た が,2週. 後.
(8) に はsaline投. 与 群 よ り低 い 値 を 示 した(p〈0.05)(図4-b).雌ICRマ. 週 後 と もCY投. 与 群 に お い てsaline投. ウ ス のIL-10産. 生 能 は1週. 後,2. 与 群 と 比 較 し て 有 意 差 を 認 め な か っ た(図4.c).. Wo吐8W6●k8W㏄ks 口U塞t鵬atod ZSa甑ne■tfoatod 國CY。troa象od. 図4cyclophosphamide(CY)投 Con-A刺. 与 したNODとICRマ. 激IL40産. NODとICRマ. ウ ス にお け る脾 細 胞 培 養 に よ る. 生.. ウ ス(15週. 齢)の. 腹 腔 内 にCY(200mg/kg)あ. るい は生 理 食 塩 水 を. 投 与 し た. デ ー タ は 平 均 値 ± 標 準 誤 差(mean±SE)で 表 し た. * p<0.05:そ れ ぞ れ生 理 食 塩 水 投 与 群 との比 較 ▲p〈0,05:15週 齢 グ ル ー プ と の 比 較,. NODマ. ウ ス に お け るCY投. 与 群 とsaline投. 雄 は1週. 後1,24,2週. お り,こ. の 点 で 雌 雄 は 反 対 の 所 見 を 示 した.. ま た,図. 後1.99と2週. 与 群 のIL-10比(CY投. 後 に 増 加 し,雌. に は 示 して い な い が,雌ICRマ. で は1週. ウ ス で はCY投. 与 群/saline投. 後1.58,2週. 後0.49と2週. 与 に よ るIL-4,IFN一. 与 群)を. と る と,. 後 で低下 を認 め て. γ 産生能 の有意 な変 化. は 認 め な か っ た,. 次 にTh1サ. イ ト カ イ ン とTh2サ. イ トカ イ ン産 生 量 の 比 を 検 討 し た.IL-4とIFN一. 感 度 以 下 の 検 体 も 出 た た めTh1とTh2そ す な わ ち,IL-10/工L-2比. IL40/IL-2比 CY投. れ ぞ れ の サ イ トカ イ ン の 代 表 と してIL-2とIL-10を. を 算 出 しTh2/Th1活. 使 用 した.. 性 比 の 推 定 に 用 い た.. の比 較. 与2週. 後 で は,雄NODマ. 差 は 認 め な か っ た.CY投 約13分 の1に し てCY投. γ につ いて は測 定. 与 雌NODマ. ウ ス のCY投. ウ ス のIL-10/IL2比. 低 下 して い た(P<0.0001)(図5).雌 与 雌NODマ. 与 群 とsaline投. ウ ス のIL-10/IL-2比. 与 群 の 間 に,IL-10/IL2比 はsaline投. 与 雌NODマ. 雄 間 で 比 較 す る と,CY投 は 有 意 に 低 下 し て い た(p〈0.05).. 一7一. 与 雄NODマ. 値 で有 意 ウ ス に 比 較 して ウ ス と比 較.
(9) CY投. 与2週. 後 で 認 め た 上 記IL-10/IL-2比. の 有 意 な 変 化 は,. CY投. 与1週. 後 で は認 め られ なか った. (図 示 せ ず).. 図5. 培 養 脾 細 胞 に お け るIL-10/IL-2比 NODマ. ウ ス(15週. 齢)の. の 比 較,. 腹 腔 内 にCY(200mg/kg)あ. る い は 生 理 食 塩 水(saline)を. 投 与 し、17週 齢 で 実 験 に 供 した. 脾 細 胞 を 取 っ て 、 方 法 に 書 か れ た よ う に3日 デ ー タ は 平 均 値 ± 標 準 誤 差(mean±SE)で. CY投 CY投. 与 雌NODマ 与2週. ウ ス に お け るDM発 後 で は,雌NODマ. 間 培 養 した 。 表 し た.. 症 群 と非 発 症 群 のIL-10/IL.2比. ウ ス は そ の70%に. 一8一. の比 較. 糖 尿 病 を 発 症 して い た(表1).こ. の 時点 にお け る.
(10) 発 症 群 と 非 発 症 群 の 間 に お け るIL-10/IL-2比 て は,同. 比 の 有 意 の 低 下(p〈0.05)を. 図6CY投. 与 雌NODマ 雌NODマ. の 比 較 を す る と,図6に. 認 め た.. ウ ス に お け るDM発. ウ ス(15週. 示 す よ う に糖 尿 病 発 症 群 に お い. 齢)の. 症 群 と未 発 症 群 の 王L-10/IL-2比. 腹 腔 内 にCY(200mg/kg)あ. の比 較. る い は生 理 食 塩 水(saline). を 投 与 し、17週 齢 で 実 験 に 供 し た. 脾 細 胞 を 取 っ て 、 方 法 に 書 か れ た よ う に3日 デ ー タ は 平 均 値 ± 標 準 誤 差(mean±SE)で. 考. 間 培 養 した. 表 し た.. 察 NODマ. 20%弱. ウ ス の糖 尿 病 発 症 に は性 差 が あ り,無 処 置 の 場 合 で雌 は約80%に で あ る.CY投. 与 がNODマ. 自 然 発 症 す る が,雄. で は約. ウ スの 糖 尿 病発 症 を促 進 す る こ とが 知 られ て い る が,そ の作 用機 序 の. 解 明 を サ イ ト カ イ ン 産 生 の 面 か ら試 み た.そ. の 結 果,雌NODマ. 一9一. ウ ス で はCY投. 与 に よ りTh1サ. イ トカ.
(11) イ ン,Th2サ. イ トカ イ ン共 に 産 生 能 は 増 加 し た が,そ. CYはTh1細. 胞,Th2細. ス で はCY投. の 増 加 はTh1サ. 胞 の 各 々 に ど の よ う に 作 用 す る か は未 だ 明 らか に さ れ て い な い が,NODマ. 与 に よ り マ ク ロ フ ァ ー ジ が 活 性 化 さ れ,IL-12を. が あ る 正7.この 事 が 我 々 の 実 験 に お い てTh1サ ら れ る.Th2細. 胞 はIL-2受. り産 生 さ れ るIL-2に っ ま りTh2サ. イ トカ イ ン で よ り顕 著 で あ っ た.. 産 生 し,Th1細. 胞 が 活 性 化 さ れTh2サ. イ ト カ イ ン の 増 加 はCYに. 胞 の活 性 化 を導 くと の報 告. イ トカ イ ン優 位 な 産 生 能 増 加 を 認 め た 一 つ の 機 序 と 考 え. 容 体 を 発 現 し う る細 胞 で あ り,CY投. よ り,Th2細. ゥ. 与 に よ り 活 性 化 さ れ たTh1細. 胞 にょ. イ トカ イ ンが 増 加 し た 可 能 性 が 考 え ら れ る.. よ る マ ク ロ フ ァ ー ジ,Th1細. 胞 の 活 性 に 引 き 続 き生 じ た と 考. え ら れ る. 病 態 的 に は,CY投 一方. ,雄NODマ. 与2週. 後 に 雌NODマ. ウ ス で はCY投. 10/IL2比. は 雌NODマ. てp<0.05で. 有 意 差)と. 週 後4.44と,ほ. ウ ス で はTh2/Th1比. 与 後Th2/Th1比. ウ ス で はCY投. 与1週. が 低 下 し70%が. の 有 意 な 変 化 は な く糖 尿 病 発 症 は 認 め な か っ た.IL後 で12.18で,2週. 後 で0.63(saline群. 急 激 に 低 下 を 認 め て い る.し か し,雄NOD群. ぼ 同 程 度 の 値 を 維 持 した.CY投. 糖 尿 病 を 発 症 し た.. 与2週. よ り有 意 に 低 下 し. に お い て は,同1週. 後4.03,同2. 後 に お け る 糖 尿 病 発 症 率 は,CY投. 与 雄NOD群. が 糖 尿 病 を 発 症 しな か っ た こ と を 考 え る と,Th2/Th1サ. イ トカ イ ン比 の 不 均 衡 が 糖 尿 病 発 症 に 強 く 関. 与 し て い る こ と が 推 定 さ れ る. Th2/Th1比. が ど の 程 度 に な れ ば 糖 尿 病 が 発 症 す る か は 現 時 点 で は 推 察 の 域 を 出 な い が,CY投. 糖 尿 病 非 発 症 の 雌NODマ 2=0.63)の. ウ ス(IL10/IL-2=2.06)の. 値 と 糖 尿 病 発 症 の 雌NODマ. 値 の 間 に あ る と 考 え る こ と も で き る が(CY投. 与 雌ICRマ. 与後. ウ ス(IL10/IL-. ウ ス で はIL-10/IL-2=8.05),. こ の 点 に つ い て は 今 後 さ ら な る 研 究 が 必 要 で あ る. 1型 糖 尿 病 の 自 己 抗 原 で あ るglutamicaciddecarboxylase(GAD)に 発 症NODマ. 対 す る血 清 抗 体 価 は糖 尿 病. ウ ス で は 同 週 齢 の 非 発 症 群 に 比 較 して 高 値 で あ る こ と が 報 告 さ れ て い る5。GADの65-kDa. isoformで. あ るGAD65を. よ りTh2細. 投 与 したNODマ. 胞 が 活 性 化 さ れ,β. ウ ス で は,糖. 細 胞 特 異 的Th1細. 尿 病 発 症 が 抑 制 さ れ る.こ. れ て お り,著 つ ま り,1型. イ トカ イ ンが 増 加 し て,IL-4,IL-10が. ウ ス の 糖 尿 病 は抑 制 さ れ る2L22.completeFreund'sadjuvantに. ス で はIL-2,IFN一. γ の 減 少 や23,IL-4,IL-10の. 者 の 得 たCY使. よ って免 疫 され たマ ウ. 増 加 を 生 じ21・23糖 尿 病 の発 症 が 抑 制 さ れ る事 が 報 告 さ. 用 の デ ー タ を 理 解 す る上 で 同 一 線 上 に あ る 現 象 と と ら え る こ と が で き る.. 糖 尿 病 発 症 に はTh1サ. カ イ ン(IL-4,工L-10)が. 与に. 胞 活 性 が 抑 制 さ れ る た め と 考 え ら れ て い る'8 2°.ま た. 1型 糖 尿 病 の 自 己 抗 原 の 一 つ で あ る イ ン ス リ ン投 与 で もTh2サ 増 加 しNODマ. れ はGAD65投. イ ト カ イ ン(IL-2,IFN一. γ)が. 促 進 的 に 働 き24-26,Th2サ. 抑 制 的 に 作 用 す る27-3ユと い う基 礎 事 実 を 背 景 にTh1とTh2の. イ ト. 機能 上 の不 均. 衡 が 糖 尿 病 発 症 に 結 び っ く と考 え る こ と が で き る. 我 々 の 実 験 で は 脾 細 胞 の サ イ トカ イ ン 産 生 能 でNODマ GAD65に. よ っ て 免 疫 さ れ た マ ウ ス か ら の 脾 細 胞 のCD4+T細. 糖 尿 病 発 症 が 抑 制 さ れ たiaL9.ま NODマ. ウ ス の 糖 尿 病 発 症 に っ い て 検 討 し て い る が,. た 糖 尿 病 を 発 症 し たNODマ. ウ ス は 糖 尿 病 を 発 症 す る19.こ の 事 か らNODマ. 特 異 的 な リ ンパ 球 が 存 在 して お り,膵. 胞 の 養 子 免 疫 移 植 実 験 でNODマ. ウスか らの脾細 胞 を養 子 免疫 移 植 され た. ウス の糖 尿 病 発 症 に は 脾 細 胞 に お い て も β細 胞. ラ氏 島 炎 に 対 応 し て い る.. 一10一. ウス の.
(12) 過 去 の 研 究 で は,CY投 清 中 の 抗GAD抗 後1週. と2週. 与 後 のNODマ. 体 価 の 上 昇5等. 活 性 化Bリ. と2週. ウ ス のTh1サ. こ でIL-2とIFN一. で ほ ぼ 同 等 の 値 で あ っ た が,兀. 記 す べ き こ と は,IL-10がCY投 NODマ. ンパ 球 数 と 血 清 中 の 抗GAD抗. 者 の 研 究 に お い て 雌NODマ. 与 後 い ず れ も顕 著 な 上 昇 を 示 し た.こ 与1週. 与2週. 体 価 は2週. 目 よ り も2週. 後 の 雌NODマ. 与. で増加 を迎 え る こと. イ トカ イ ン のIL-2とIFN一. γ はCY投 γ で はCY投. 目 に よ り高 い 値 を 示 し た.さ. ら に特. ウ ス に お い て は 有 意 に 低 下 し た こ と で あ り,雄. な わ ち,CY投. 与 実 験 に お い て み る 限 り,投. ウ ス の サ プ レ ッ サ ーTリ. ンパ 球 の 機 能 を 抑 制 し,IL-6産. ジ を 活 性 化 す る こ と が 従 来 の 研 究 に よ り明 ら か に さ れ て い る が7,今 能 の 増 強 と こ れ に 比 較 してTh2機. 以 上 の こ と よ り,CYはNODマ らのIL-6の き7,そ. し てII.-6はCY投. 与1週. 後で は. 後 の サ イ ト カ イ ン変 化 が 重 要 で あ る こ と が 明 らか に な っ た.. CYはNODマ. Th1機. 生 増 強7,血. γ の 産 生 を 比 較 し て み る とIFN一. 一2は1週. ウ ス に は こ の 変 化 を 認 あ な か っ た.す. な く,2週. ン パ 球 数 の 増 加6,IL6産. が ほ ぼ 同 時 に 生 じて い る こ と が わ か っ て い る.そ. に 増 加 を 認 め,脾. が 判 明 して い る7.著. ウ ス で は 脾 活 性 化Bリ. 胞 障 害 性 を 増 し,さ 進 行 さ せ,こ. 回 の 実 験 で はCYが. 脾細 胞 にお け る. 能 の 相 対 的 低 下 も生 じ る こ と を 明 ら か に し た.. ウ ス の マ ク ロ フ ァ ー ジ の 活 性 化 を 誘 導 す る 結 果8,マ. 産 生 を 生 じ,Bリ. れ と 同 時 にTh1サ. 生 を 増 強 し,ま た マ ク ロ フ ァ ー. ク ロフ ァー ジか. ンパ 球 の 活 性 化 を刺 激 す る こ と で抗 体 産 生 と抗 原 提 示 能 両 面 の 増 強 へ と導. イ トカ イ ン(IL-2,IFN一. ら に はTh2サ. γ)産. 生 能 増 強 を 生 じ る事 で 膵 島 細 胞 に 対 す る細. イ トカ イ ン産 生 能 の 相 対 的 低 下 が 原 因 と な っ て,自. 己免疫 性 膵 島炎 を. れ らの諸 因 子 ま た 未知 の諸 因 子 の総 合 作 用 の 中 で 糖 尿 病 が 顕 性 発 症 す る と い う事 が 示 唆 さ. れ る.. 謝. 辞 本 稿 を終 え る に あ た り御 指 導 御 校 閲 を賜 りま した青 木 矩 彦 教 授 に 深 甚 な る謝 意 を捧 げ ます.ま た,終 始. 的 確 な御 助 言 を い た だ き ま した雑 賀 豊 彦 講 師 に深 く謝 意 を い た し ます と共 に,御 協 力 い た だ き ま した 本 学 第2内 科 学 教 室 員 各 位 に も深 く謝 意 を表 します.. 本 研 究 の 要 旨 は 第10回 国 際 内 分 泌 学 会(1996年6月14日,サ 代 謝 学 会(1998年3月5日,東 第71回. 京),第41回. ン フ ラ ン シ ス コ,米. 国),第35回. 日本 糖 尿 病 学 会 年 次 学 術 総 会(1998年5月21日,和. 日 本 内 分 泌 学 会 学 術 総 会(1998年6月4日,福. 岡)に. お い て 発 表 し た.. 日本 臨 床 歌 山),.
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