三 重 大 学 大 学 院 医 学 系 研 究 科

位 学

再開

文 の 要 旨

一 重 大 学

三 重 大 学 大 学 院 医 学 系 研 究 科

所 属 ｜ 乙 生 命 医 科 学 専 攻 病 態 修 復 医 学 講 座 運 動 器 外 科 学 分 野

氏 名 判11’ 未 ~~ ）

主論文の題名

Th e  e f f e c t s  o f   b i s pho s phon a t e  on  pa i n ‑ r e l a t e d   b e h a v i o r   a nd immun o h i s t o c h e m i c a l   a n a l y s e s   i n   h i n d l i m b ‑ u n l o a d e d   mi c e  

主論文の要旨

［

背 J i J :

骨粗穏症患者は臨床的に骨折がなくても骨捕を生じることがあり、骨粗彪症性庭婦 7 と言われて いる。これまでに 閉 経 後 骨 粗 穏 症 モ デ ル マ ウ ス で あ る 卵 巣 摘 出 （ OVX ） マ ウ ス を 用 い て 、 骨

彪 症

癖 痛 を 確 認 し ビ ス フ ォ ス フ ォ ネ ー ト （ BP ） 投 与 で 底 摘 が 抑

さ れ た と の 報 告 が あ る 。 し か し 、 長期｜臥床によって廃用性骨粗懸症が引き起こされること

［

目的 ］

本研究の目的は、不動によって引き起こされる廃用性骨粗軽症モデルである尾部懸垂による後 肢 非 荷 重 マ ウ ス を 用 い て 痔 痛 関 連 行 動 評 価 と 当 該 領 域 の 後 根 神 経 節 （ DRG ） の 免 疫 組 織 学 的 評 価 を 行 い 、 骨 粗 穏 症 に 関 連 し た 痔 痛 に 対 す る BP の 効 果 に つ い て 検 討 す る こ と で あ る 。

［

方法〕

8 週 齢 の 雄 性 ddY マ ウ ス に 尾 部 懸 垂 を 行 い 、 後 肢 非 荷 重 と し て veh i c l e を 投

与 す る H U 群 、 後 肢 非 荷 重 と し て ア レ ン ド ロ ネ ー ト CALN ） を 投 与 す る H U ‑ ALN

併 と、 対 照 と し て 尾 部 懸 垂 の み 行 い 後 肢 荷 重 と し v ehicle を 投 与 す る HL 鮮 の 3

群 （ 各 群

匹 ） を 作 成 し た 。

h i c l e 及 び ALN ( 

） は 尾 部 懸 垂 直 後 よ り

週 2 回、 2 週 間 皮 下 投 与 し た 。

次 元 骨 梢 造 解 析 は 尾 部 懸 垂 2 週 後 に マ イ ク ロ

部 懸 垂 2 週 後 に 機 械 的 刺 激 に 対 す る 痛 党 過 敏 を み る von Fr ey filament テ ス ト

を 用 い て 評 価 し た 。 評 価 項 目 は 最 小 の 刺 激 強 度 （ 閑 値 ） 、 up ‑down me t h od を

用 い た

閥値、 逃 避 行 動 を 起 こ す 頻 度 （ 陽 性 率 ） と し た 。 免 疫 組 織 学 的 評 価

は 後 肢 の 当 該 領 域 に あ た る L 3

5DRG に お い て 痔 痛 関 連 蛋 白 で 炎 症 性 誌 痛 に 関

与 す る カ ル シ

ニン遺伝子関連ペプチド（ CGRP ） 、 酸 感 受 性 受 容 体 で あ る

ran s i e nt

r ece ptor pot e nti a l  channel  vani l l o i d  s ubfamil y  member 1  (  TRPVl ） の 発 現

を 評 価 し た 。 大 腿 骨 遠 位 骨 幹 端 及 び I J 霊骨 近 位 骨 幹 端 に お け る 破 骨 細 胞 数 に つ い

て の 評 価 は 、 酒 石 酸 抵 抗 性 酸 性 ホ ス フ ァ タ ー ゼ （ TRAP ） 染 色 を 用 い て 行 っ た。

［

結果〕

Bon e  volum e / T i s s u e  volume  ( B  V  / TV

、 Tr a be c ularthickn e s s ( Tb .  Th ） 、 Tr a b e c ular s e p  a r a  t i  on  ( Tb. Sp ） 、 Trab e c ularnumb e r  (Tb.N ） は 、 大 腿 骨 遠 位 骨 幹 端 、 腔 骨 近 位 骨 幹 端 に お い て H U 群 で HL

に 比 べ 有 意 な 組 終 化 を 認め、 HU‑ALN 群 で は H U 群 に 比 べ 有 意 に 組 老

を 抑 制した。 vonF rey  f i l ament を 用 い た 悲 痛 関 連 行 動 評 価 は す べ て H U

で HL 群 に 比 べ て 有 意 に 痛 覚 過 敏 を 示 し 、 HU‑ALN 群 で は H U 群 に 比 べ 有 意 に 痛 党 過 敏 を 抑 制 し て い た 。 免 疫

織 学 的 評

では、

L 3

5DRG ニ ュ ー ロ ン に お け る CGRP 、 TRPVl の 陽 性 細 胞 数 に つ い て 、 HU

は HL

に 比 べ て 有 意 に 増 加 しており、 H U ‑ ALN 群 は H U 群 に 比 べ 有 意 に 減 少 し て い た 。 大 腿 骨 遠 位 骨 幹 端 及 び 腔 骨 近 位 骨 幹 端 に お け る TRAPI 場 性 破 骨 細 胞 数は、 H U 群 で HL

に 比 べ 有 意 に 多 く 、 HU‑ALN 群 で は H U 群 に 比 べ 有 意 に 減 少 し て い た

［

考察］

これまでに閉経後骨粗蕗症患者において BP 投与で骨摘が改善したとの報告がある。また、 平賀 らは炎症モデルを用い、 破骨細胞が骨吸収時に形成する微小酸性環境が骨痛を増加させることを示 し、そのメカニズムは骨吸収の際に破骨細胞より放出されるプロトンによって感党神経で発現され る殴感受性受容体である TRPVl や酸感受性イ オンチャネルの活性 によると示されている。 加えて BP 投与によって骨吸収の増加に関連した骨痛が峰減したことを報告している。また、 HU モデル を m いたいくつかの研究では、破骨＊ I I I 胞数の附加 によって骨吸収の増加を認め什 f i l が減少すると報 告されている。本研究ではマウスの後肢を非荷重とすることで破骨細胞が泊加するとともに、後肢 の当該領域にあたる DRG ニューロンにおいて CG RP お よ び TRPVl 発 現 の 附 加 を 認 め た

こ と か ら 、 骨 組 長 芸 症 に 起 因 し た 痕 痛 を 惹 起 し た と 考 え ら れ た 。 ま た 、 A LN 投 与 に て 骨 組 怒 症 の 予 防 と と も に 痔 摘 を 予 防 し た 。

｛

結論〕

H U マ ウ ス は 後 肢 非 荷 重 に よ る 骨 の 粗 穏 化、 機 械 的 痛 党 過 敏 な ら び に DR G ニ

ュ ー ロ ン に お け る CGRP お よ び TRPVl の 増 加 を 認 め 、 不 動 に よ る 什 粗 忠 症 性

終 捕 の モ デ ル と し て 有 用 と 考 え ら れ た

BP 投 与 が H U マ ウ ス の 骨 粗 怒 化

と機 械 的 嫡 党 過 敏、 CGRP と TRPVl の 発 現 上 昇 を

し た 。 破 骨 細 胞 に 対 す

る BP の 阻 害 効 果 は 、 骨 組 懸 症 性 痕 焔 の 改 善 に 寄 与 す る 可 能 性 が あ る