伴 う 海 馬 機 能 の 低 下 を 抑 制 す る

抑 肝 散 が 老 化 促 進 モ デ ル マ ウ ス の 加 齢 に

伴 う 海 馬 機 能 の 低 下 を 抑 制 す る

と や ま た つ や

外 山 達 也

本 論 文 の 要 旨 は ， 第 1 4 6 回 朝 日 大 学 大 学 院 歯 学 研 究 科 発 表 会 ( 2 0 1 9 年 4 月 2 4 日 ， 瑞 穂 ) に お い て 発 表 し た ． 本 論 文 の 一 部 は ， 第 3 2 回 老 化 促 進 モ デ ル マ ウ ス （ S A M ） 学 会 学 術 大 会 （ 2 0 1 7 年 7 月 2 2 日 ， 岐 阜 ) に お い て 発 表 し た ． ま た ， 本 論 文 の 一 部 は 以 下 の 論 文 に 掲 載 し た ．

A z u m a K , T o y a m a T , K a t a n o M , K a j i m o t o K , H a y a s h i S , S u z u k i A , T s u g a n e H , I i n u m a M , a n d K u b o K .

Y o k u k a n s a n a m e l i o r a t e s h i p p o c a m p u s - d e p e n d e n t

l e a r n i n g i m p a i r m e n t i n s e n e s c e n c e - a c c e l e r a t e d

m o u s e . B i o l . P h a r m . B u l l . 2 0 1 8 ; 4 1 : 1 5 9 3 - 1 5 9 9 .

1

緒 言

認 知 症 は ， 加 齢 に 伴 う 神 経 認 知 疾 患 で ， 記 憶 喪 失 ， 認 知 機 能 障 害 お よ び Q O L の 低 下 を 特 徴 と し て い る ． 2 0 1 5 年 の 世 界 の 認 知 症 人 口 は 4 7 0 0 万 人 と 推 定 さ れ て い る が ， こ の 数 は 2 0 3 0 年 に は 7 5 0 0 万 人 に 増 加 す る と さ れ て い る

．認 知 症 と 世 界 的 な 高 齢 化 人 口 の 増 加 が ， 健 康 お よ び 社 会 経 済 的 に 影 響 を 与 え る 重 要 な 問 題 と な っ て い る ． 認 知 症 の 病 因 は ま だ 解 明 さ れ て い な い こ と が 多 い ． し か し ， 海 馬 が こ の 疾 患 を 予 防 し 治 療 す る た め の 重 要 な 標 的 で あ る こ と は 明 ら か に な っ て き た

． 空 間 学 習 と 記 憶 の 過 程 に 極 め て 重 要 な 役 割 を 果 た す 海 馬 は ， ニ ュ ー ロ ン 間 の コ ミ ュ ニ ケ ー シ ョ ン に シ ナ プ ス が 関 与 し ， シ ナ プ ス の 大 き さ の 変 化 が 様 々 な 神 経 成 長 と リ ン ク し て い る

． ま た ， シ ナ プ ス 後 肥 厚 部 ( P S D ) の 長 さ は ，シ ナ プ ス の 可 塑 性 の 変 化 お よ び 神 経 伝 達 速 度 に 影 響 を 与 え る

． 高 齢 マ ウ ス や 記 憶 障 害 を 呈 す る ラ ッ ト な ど で P S D 長 さ が 顕 著 に 減 少 す る こ と が 確 認 さ れ て い る

．

ま た 最 近 ， 認 知 症 の メ カ ニ ズ ム 解 明 の た め 東 洋

医 学 の 臨 床 効 果 が 再 評 価 さ れ て い る

． と く に

抑 肝 散 は 厚 生 労 働 省 に よ っ て 認 可 さ れ て い る 漢 方

薬 で ， 神 経 症 ， 不 眠 症 ， 過 敏 症 の 治 療 に 使 用 さ れ

て お り ， 認 知 症 の 行 動 的 お よ び 心 理 的 症 状 を 改 善

2

す る 可 能 性 も 報 告 さ れ て い る

．さ ら に 最 近 の 研 究 で は ， 抑 肝 散 が 神 経 保 護 作 用 を 持 ち ， 神 経 可 塑 性 を 促 進 し ， 学 習 障 害 を 改 善 す る こ と も 示 し て

い る

． し か し ， そ れ ら に 対 す る 抑 肝 散 の メ カ ニ

ズ ム は ま だ 完 全 に は 解 明 さ れ て い な い ．

老 化 促 進 モ デ ル マ ウ ス ( S A M ) P 8 は 4 か 月 齢 か ら 加 齢 に 伴 う 海 馬 依 存 性 学 習 行 動 障 害 が 生 じ る 認 知 症 モ デ ル で あ る

そ こ で 本 研 究 で は ， S A M P 8 マ ウ ス に 抑 肝 散 を 飲

ま せ た 場 合 と 飲 ま せ な か っ た 場 合 に お け る 海 馬 の

変 化 に 着 目 し ， 空 間 認 知 能 ， 海 馬 C A 1 領 域 の ミ エ

リ ン 鞘 や シ ナ プ ス の 超 微 細 構 造 お よ び 海 馬 神 経 新

生 を 解 析 し ， 抑 肝 散 摂 取 の 効 果 を 検 討 し た ．

3

材 料 お よ び 方 法

実 験 に は S A M P 8 マ ウ ス ( 中 部 科 学 資 材 ， 名 古 屋 ) 5 か 月 齢 の 雄 マ ウ ス を 用 い た ． 実 験 に 用 い た

S A M P 8 マ ウ ス は 朝 日 大 学 歯 学 部 実 験 動 物 飼 育 施

設 に お い て 飼 育 し ，固 形 飼 料 ( 日 本 ク レ ア 社 ， C E - 2 ， 東 京 ) と 水 を 自 由 摂 取 で き る 状 態 と し た ．雄 1 匹 ず つ を 個 別 に ケ ー ジ 飼 育 を 行 っ た ．

実 験 に 用 い た 抑 肝 散 の 乾 燥 抽 出 物 粉 末 は ， ツ ム ラ 社 （ 東 京 ） に よ っ て 供 給 さ れ た ． 抑 肝 散 に は 7 種 類 の 薬 草 が 含 ま れ て い る ． 表 1 に 抑 肝 散 の 薬 草 成 分 お よ び 含 有 量 を 示 す ． 抽 出 物 の 品 質 は ， 厚 生 労 働 省 に よ る 適 正 製 造 基 準 に 基 づ い て 標 準 化 さ れ て い る

． 抑 肝 散 3 0 0 m g を 滅 菌 水 2 0 0 m l に 溶 解

し ， 0 . 1 5 ％ 抑 肝 散 水 を 作 製 し ， こ れ を 飲 料 水 と し

8 週 間 自 由 摂 取 さ せ た ． 0 . 1 5 ％ 抑 肝 散 水 を 摂 取 し た マ ウ ス を 「 実 験 群 」， 抑 肝 散 の 代 わ り に 滅 菌 水 を 自 由 摂 取 し た マ ウ ス を 「 対 照 群 」 と し ， 各 群 1 6 匹 ず つ 使 用 し た ．

な お こ の 実 験 は 朝 日 大 学 歯 学 部 動 物 実 験 専 門 委

員 会 の 承 認 ( 1 9 - 0 0 6 ) を 得 て い る ．

4

表 1 抑 肝 散 の 成 分 お よ び 含 有 量

1 ． M o r r i s 水 迷 路 学 習 テ ス ト

齧 歯 類 の 空 間 認 知 機 能 の 測 定 に は 広 く 利 用 さ れ て い る M o r r i s 水 迷 路 学 習 テ ス ト

を 利 用 し た ． 各 群 の マ ウ ス に 5 日 間 連 続 し ， 1 日 に 4 回 ず

つ M o r r i s 水 迷 路 学 習 テ ス ト を 実 施 し ， 空 間 認 知 機

能 に 及 ぼ す 影 響 を 検 討 し た ( 各 群 n = 6 ) ． 水 を 張 っ

た 円 形 の ス テ ン レ ス 製 の プ ー ル を 用 い て ， プ ー ル

の 中 央 近 く の 水 面 下 の 位 置 に プ ラ ッ ト フ ォ ー ム を

設 置 し ， プ ラ ッ ト フ ォ ー ム へ 到 達 す る ま で の 時 間

を 測 定 し た ． 本 実 験 で は 4 箇 所 の 投 入 場 所 か ら マ

ウ ス を 静 か に 投 入 し た ． な お 投 入 場 所 の 順 序 は 乱

数 表 に よ り 毎 日 変 化 さ せ た ． 初 日 の マ ウ ス は プ ラ

ッ ト フ ォ ー ム の 存 在 を 知 ら ず 泳 ぎ 回 る が ， テ ス ト

の 日 数 を 重 ね る に つ れ ， プ ラ ッ ト フ ォ ー ム の 位 置

を プ ー ル 周 囲 の 目 標 物 と の 位 置 関 係 で 記 憶 し ， プ

ラ ッ ト フ ォ ー ム へ の 到 達 時 間 が 次 第 に 短 く な る ．

5

各 群 の マ ウ ス を 遊 泳 中 の 動 き を コ ン ピ ュ ー タ シ ス テ ム ( M o v e - t r / 2 D

， L i b r a r y ，東 京 ) に 連 結 し た C C D カ メ ラ ( E x w a n e

， S O N Y ， 東 京 ) に よ り 記 録 し ， プ ラ ッ ト フ ォ ー ム へ の 到 達 時 間 を 計 測 し た ．さ ら に ， 5 日 目 の テ ス ト 終 了 後 プ ラ ッ ト フ ォ ー ム を 水 面 上 に 露 出 さ せ ， 視 力 お よ び 遊 泳 能 力 に よ る 影 響 を 調 べ る た め ， V i s i b l e P r o b e T e s t

を 行 っ た ．

2 ． 血 中 コ ル チ コ ス テ ロ ン ( C O ) 濃 度 の 測 定

血 中 C O 濃 度 は 実 験 最 終 日 に 各 群 マ ウ ス ( n ＝ 6 ) で 測 定 し た ． 三 種 混 合 麻 酔 ( 0 . 0 1 m l / g ) 下 で マ ウ ス の 心 臓 よ り 全 血 を 採 取 し た ． 採 血 し た 血 液 を 2 . 0 m l の マ イ ク ロ 遠 心 管 に 採 取 し ， 1 0 分 間 ， 4 ℃ 下

3 , 5 0 0 × G で 遠 心 分 離 し た 後 ， 血 清 の み を 採 取 し ，

－ 8 0 ℃ の 冷 凍 庫 で 分 析 す る ま で の 間 保 存 し た ． 血 中 C O 濃 度 は ラ ジ オ イ ム ノ ア ッ セ イ に よ り S R L B i o c h e m i s t r y L a b ( 東 京 ) で 測 定 し た ．

3 ． 海 馬 歯 状 回 に お け る 神 経 細 胞 新 生 機 構 の 解 析 海 馬 歯 状 回 で の 神 経 細 胞 新 生 機 構 に 及 ぼ す 影 響 を 調 べ た ． 細 胞 の 分 裂 周 期 に お け る S 期 の 細 胞 D N A に 選 択 的 に 取 り 込 ま れ る 5 - b r o m o - 2 - d e o x y -

u r i d i n e ( B r d U ) は ， 新 生 細 胞 の マ ー カ ー と な る 化 学

物 質 で あ る

． 今 回 ， 新 生 細 胞 の 増 殖 数 に つ い て

B r d U を マ ウ ス に 投 与 し ， 解 析 し た ．

6

B r d U 投 与

G i l b e r t ら

の 方 法 に 準 じ て ， 各 群 の 5 か 月 齢

マ ウ ス に 3 時 間 毎 に 5 回 ， 1 0 m g / m l を 5 0 m g / k g の 割 合 で B r d U 溶 液 ( B r d U : チ ミ ジ ン 類 似 物 質 ) を 腹 腔 内 投 与 し た ．

1 ) B r d U 陽 性 細 胞 の 染 色

B r d U 投 与 2 4 時 間 後 マ ウ ス を 3 種 混 合 麻 酔

( 0 . 0 1 m l / g ) 下 で ， 心 臓 か ら 3 7 ℃ の 生 理 食 塩 水 を

3 0 m l 灌 流 さ せ ， 続 い て 4 ℃ の 4 ％ パ ラ ホ ル ム ア ル

デ ヒ ド 0 . 1 M リ ン 酸 緩 衝 液 ( P B ) 固 定 液 1 0 0 m l を 灌 流 さ せ 組 織 固 定 を 行 っ た ．そ の 後 ， 摘 出 し た 脳 を ， 一 晩 4 ℃ の 2 ％ パ ラ ホ ル ム ア ル デ ヒ ド に よ り 後 固 定 し ， そ の 翌 日 か ら 4 ℃ の 1 0 ％ ス ク ロ ー ス ， 2 0 ％ ス ク ロ ー ス ， 3 0 ％ ス ク ロ ー ス 加 0 . 0 1 M リ ン 酸 緩 衝 生 理 食 塩 水 ( P B S ) に 1 日 お き に 浸 漬 さ せ 高 張 処 理 を 行 っ た ． 高 張 処 理 し た 脳 を 凍 結 さ せ ， ク リ オ ス タ ッ ト ( C M 1 8 5 0 ， L E I C A ， 東 京 ) を 用 い て 前 額 断 で

厚 さ 4 0 μ m の 海 馬 の 連 続 切 片 を 作 製 し た ． 染 色 に

は r a t m o n o c l o n a l t o B r d U ( a b c a m ， C a m b r i d g e ， U K ) 2 0 0 倍 希 釈 ( 0 . 3 ％ の T r i t o n X - 1 0 0 を 含 ん だ P B S ： P B S - T ) ，r a b b i t a n t i - r a t ( D A K O ，G l o s t r u p ，D e n m a r k ) 5 0 0 倍 希 釈 ( P B S - T ) ， p e r o x i d e s e - c o n j u g a t e d - s t r e p t o a v i d i n ( D A K O ， G l o s t r u p ， D e n m a r k ) 5 0 0 倍

希 釈 ( 0 . 0 5 M ト リ ス 塩 酸 緩 衝 液 ： T B S ) を 使 用 し た ．

7

発 色 は １ ％ H

O

お よ び d i a m i n o b e n z i d i n e

t e t r a h y d r o c h l o r i d e ( 同 仁 化 学 研 究 社 ， 熊 本 ) に よ り 行 っ た ．

2 ) B r d U 陽 性 細 胞 数 の 解 析 方 法

L i ら

の 方 法 に 準 じ て ， 作 製 し た 海 馬 の 連 続

切 片 を 4 枚 ご と ( 1 2 0 μ m 間 隔 ) に 1 切 片 を 選 び 出 し ， 左 側 海 馬 歯 状 回 の B r d U 陽 性 細 胞 を 計 8 枚 の 切 片 に つ い て 光 学 顕 微 鏡 ( B X 5 3 M ， オ リ ン パ ス ， 東 京 ) 下 で 計 測 し た ( 各 群 ， n ＝ 5 ) ．

4 ．加 齢 に 伴 う 海 馬 機 能 低 下 に 対 す る 抑 肝 散 の 影 響 の 検 討

海 馬 神 経 細 胞 や ミ エ リ ン 鞘 の 厚 さ と シ ナ プ ス の 超 微 細 構 造 の 透 過 電 子 顕 微 鏡 に よ る 検 索

1 ) 動 物 の 固 定 と 標 本 作 製

マ ウ ス ( 各 群 n = 5 ) に 3 種 混 合 麻 酔 ( 0 . 0 1 m l / g ) を 行 い ， 続 い て 4 ℃ の 4 ％ P F A / 0 . 1 M P B と 1 ％ グ ル タ ー ル ア ル デ ヒ ド の 混 合 固 定 液 に て 灌 流 固 定 を 行 っ た ． 次 い で ， 摘 出 し た 海 馬 を ， 4 ℃ の 同 混 合 固 定 液 で 一 晩 固 定 を 行 っ た ．

P B で 組 織 を 洗 浄 後 ， 1 ％ 四 酸 化 オ ス ミ ウ ム に て

1 時 間 後 固 定 し ， ア セ ト ン で 脱 水 し た 後 ， エ ポ ン

包 埋 し た ． ブ ロ ッ ク の ト リ ミ ン グ 後 ， 厚 さ 1 0 0 n m

8

の 超 薄 切 切 片 の 作 製 を P o r t e r - B l u m M T - 1

U l t r a m i c r o t o m e ( D u p o n t - S o r v l l ， W i l m i n g t o n D E ，

U S A ) で 行 っ た ． そ の 後 ， 電 子 染 色 を 酢 酸 ウ ラ ニ ル

と 鉛 塩 類 に て 施 し ， 海 馬 C A 1 領 域 の 微 細 構 造 ， ミ エ リ ン 鞘 お よ び P S D 長 さ ・ 厚 さ ・ 面 積 を 透 過 電 子 顕 微 鏡 ( J E O L ‐ 1 0 1 0 ， J E O L ， 東 京 ) に て 観 察 し た ．

2 ) 海 馬 C A 1 領 域 に お け る 神 経 細 胞 の 超 微 細 構 造

お よ び ミ エ リ ン 鞘 ， シ ナ プ ス の 形 態 変 化

海 馬 C A 1 領 域 の 神 経 細 胞 ， ミ エ リ ン 鞘 お よ び シ

ナ プ ス の 超 微 細 構 造 の 形 態 変 化 を 観 察 し た ． ミ エ リ ン 鞘 は マ ウ ス 1 匹 当 た り 2 0 の 画 像 に 基 づ い て 分 析 を 行 い ， 2 0 0 以 上 の 軸 索 を 検 討 し た ． シ ナ プ ス は ， シ ナ プ ス 小 胞 の 存 在 に よ っ て シ ナ プ ス 前 終 末

と P S D を 特 定 し ， P S D の 測 定 を 行 っ た ． P S D 長 さ ・

厚 さ ・ 面 積 の 測 定 は ， H a r a ら

の 方 法 に し た が っ て ， 1 動 物 当 た り 約 5 0 の シ ナ プ ス を 計 測 し た ．

3 ) G - r a t i o

G - r a t i o の 値 が 高 値 を 示 す と ミ エ リ ン 鞘 が 薄 く ，

神 経 伝 達 の 速 度 が 遅 く な る と 報 告 さ れ て い る

．

各 群 の 海 馬 C A 1 領 域 の ミ エ リ ン 鞘 の G - r a t i o ( 内 径

/ 外 径 ＝ G - t a r i o ) を C h o m i a k ら

の 方 法 に 従 っ て

求 め た ． 透 過 型 電 子 顕 微 鏡 の 形 態 変 化 を 観 察 し た

ミ エ リ ン 鞘 で G - r a t i o も 計 測 を 行 っ た ．

9

5 ． 統 計 学 的 処 理

各 計 測 結 果 の 統 計 処 理 は

A N O V A ま た は t 検 定

を 用 い ， p ＜ 0 . 0 5 を 有 意 差 が

あ る も の と 判 定 し た ．

10

結 果

1 ． M o r r i s 水 迷 路 学 習 テ ス ト

M o r r i s 水 迷 路 学 習 テ ス ト の 結 果 を 図 1 お よ び

V i s i b l e P r o b e T e s t の 結 果 を 図 2 に 示 す ．

実 験 群 の プ ラ ッ ト フ ォ ー ム へ の 到 達 時 間 は 対 照 群 に 比 較 し て 有 意 に 短 縮 し た ( p ＜ 0 . 0 1 ) ． V i s i b l e

P r o b e T e s t の プ ラ ッ ト フ ォ ー ム へ の 到 達 時 間 は 両

群 の 間 で 有 意 な 差 は 認 め ら れ な か っ た ( p ＞ 0 . 8 3 ) ．

図 1 M o r r i s 水 迷 路 テ ス ト ( m e a n ± S E ， 各 群 n = 6)

11

図 2 V i s i b l e P r o b e T e s t ( m e a n ± S E ， 各 群 n = 6 )

12

2 ． 血 中 C O 濃 度 の 発 現 量

実 験 群 と 対 照 群 に お け る 血 中 C O 濃 度 の 結 果 を 図 3 に 示 す ． 対 照 群 と 実 験 群 と の 間 で 血 中 C O 濃 度 に 有 意 な 差 は 認 め ら れ な か っ た ( p ＞ 0 . 0 7 ) ．

図 3 血 中 C O 濃 度

13

3 ． 抑 肝 散 の 摂 取 が B r d U 陽 性 細 胞 に 及 ぼ す 影 響 各 群 の 海 馬 D G に お け る B r d U 陽 性 細 胞 の 免 疫 組 織 染 色 像 の 典 型 例 を 図 4 に 示 す ． 実 験 群 の B r d U 陽 性 細 胞 は 対 照 群 の B r d U 陽 性 細 胞 よ り 多 数 認 め ら れ た ． B r d U 陽 性 細 胞 数 を 測 定 し 分 析 し た 結 果 を 図 5 に 示 す ． 実 験 群 の B r d U 陽 性 細 胞 数 は 対 照 群 よ り 高 値 を 示 し 有 意 差 を 認 め た ( p ＜ 0 . 0 1 ) ．

→ : B r d U 陽 性 細 胞 ， B a r s ： 1 0 0 μ m

図 4 海 馬 歯 状 回 D G 領 域 に お け る

B r d U 陽 性 細 胞 の 免 疫 染 色 像

14

図 5 海 馬 歯 状 回 D G 領 域 に お け る

B r d U 陽 性 細 胞 数 ( m e a n ± S E ， 各 群 n = 6 )

15

4 ． 海 馬 神 経 細 胞 の 超 微 細 構 造

海 馬 C A 1 領 域 の 神 経 細 胞 の 超 微 細 構 造 の 一 例 を

図 6 に 示 す ． 対 照 群 で は ， リ ポ フ ス チ ン 封 入 体 が 多 く 認 め ら れ た が ， 実 験 群 で は ほ と ん ど 観 察 で き な か っ た ．

→ : リ ポ フ ス チ ン 封 入 体 ， B a r s ： 5 n m

図 6 海 馬 C A 1 領 域 の 神 経 細 胞 の 超 微 細 構 造

16

5 シ ナ プ ス の 超 微 細 構 造 と P S D

海 馬 C A 1 領 域 の シ ナ プ ス の 超 微 細 構 造 を 図 7 に

P S D 長 さ ・ 厚 さ ・ 面 積 の 分 析 結 果 を 図 8 に 示 す ．

P S D は ， 実 験 群 で 有 意 に 高 値 を 示 し た ( p ＜ 0 . 0 1 ) ．

黄 線 ： P S D 長 さ 計 測 部 , B a r s ： 2 0 0 n m

図 7 海 馬 C A 1 領 域 の シ ナ プ ス の 超 微 細 構 造

17

図 8 P S D 長 さ ・ 厚 さ ・ 面 積 ( m e a n ± S E ， 各 群 n = 6 )

6 ． 海 馬 C A 1 領 域 の ミ エ リ ン 鞘 の 超 微 細 構 造 と ミ エ リ ン 鞘 の 厚 み の 解 析

海 馬 C A 1 領 域 の ミ エ リ ン 鞘 の 超 微 細 構 造 の 一 例

を 図 9 に ， G - r a t i o を 図 1 0 に 示 す ． ミ エ リ ン 鞘 の

断 面 は 実 験 群 で 円 形 ま た は 楕 円 形 に 観 察 さ れ た が ， 対 照 群 で は 変 性 お よ び 萎 縮 が 認 め ら れ た ． G - r a t i o は ミ エ リ ン 鞘 の 内 径 / 外 径 で 計 算 さ れ ，値 が 小 さ い ほ ど ミ エ リ ン 鞘 が 厚 い こ と を 示 し て い る ． 実 験 群

の G - r a t i o は 対 照 群 よ り 小 さ い 値 を 示 し ， 有 意 差

を 認 め た ( p ＜ 0 . 0 1 ) ． つ ま り ， 実 験 群 の ミ エ リ ン 鞘

が 対 照 群 に 比 べ て 厚 い こ と が 示 さ れ た ．

18

→ : 構 造 変 性 ， B a r s : 1 μ m

図 9 海 馬 C A 1 領 域 の ミ エ リ ン 鞘 の 超 微 細 構 造

図 1 0 G - r a t i o ( m e a n ± S E ， 各 群 n = 8 )

19

考 察

今 回 の 研 究 で は ， 8 週 間 に わ た る 抑 肝 散 の 投 与 が

S A M P 8 マ ウ ス に お け る 海 馬 の 形 態 お よ び 記 憶 障

害 を 改 善 す る と い う 効 果 が 得 ら れ た ． S A M P 8 マ ウ ス は ， 加 齢 性 記 憶 障 害 お よ び 老 化 の 急 速 な 進 行 を

示 す

． 本 研 究 で は ， 抑 肝 散 を 用 い る こ と で

S A M P 8 マ ウ ス の 空 間 記 憶 障 害 を 改 善 す る こ と を

明 ら か に し た ． ま た ， 両 群 の 血 中 C O 濃 度 に 差 が な か っ た こ と か ら 抑 肝 散 の 摂 取 が ス ト レ ス と な っ て い な い こ と ， ス ト レ ス を 抑 制 し な い こ と も 明 ら か と な っ た ．

抑 肝 散 は ，ア ル ツ ハ イ マ ー 病 モ デ ル ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス

，脳 室 内 ア ミ ロ イ ド ベ ー タ タ ン パ ク 注 入 マ ウ ス

， 統 合 失 調 症 モ デ ル 動 物

お よ び 老 齢 ラ ッ ト

に お い て も ，認 知 障 害 を 予 防 す る こ と が 報 告 さ れ て い る ．

以 前 の 研 究 報 告 で は ， 抑 肝 散 が 認 知 に 関 連 す る 海 馬 の 神 経 発 生 を 刺 激 す る こ と が 示 さ れ

，今 回 の 研 究 で も ， 抑 肝 散 が S A M P 8 マ ウ ス の 海 馬 D G 領 域 に お け る 神 経 新 生 を 増 加 さ せ る こ と を 示 し た ． い く つ か の 研 究 に よ り ， 海 馬 D G 領 域 に お け る 新 生 ニ ュ ー ロ ン と 空 間 学 習 能 の 相 関 が 確 認 さ れ て い

る

． そ し て 海 馬 の 神 経 新 生 は ， 連 想 記 憶 の 形 成

に 関 与 し て お り ， 神 経 新 生 の 減 少 し た マ ウ ス は 海

20

馬 依 存 性 の 空 間 学 習 テ ス ト の 能 力 が 対 照 群 よ り も 低 下 し て い た

． し た が っ て ， 学 習 と 神 経 新 生 と の 間 の 関 連 性 は ， 抑 肝 散 摂 取 後 の 海 馬 D G 領 域 に お け る 細 胞 新 生 が ， S A M P 8 マ ウ ス に お け る 空 間 記 憶 の 維 持 に 関 与 す る こ と を 示 唆 し て い る ． 老 齢 マ ウ ス で は ， 海 馬 の B r d U 陽 性 細 胞 の 数 が 減 少 し ， こ の 減 少 は 抑 肝 散 摂 取 に よ っ て 改 善 さ れ ， こ れ は 海 馬 D G 領 域 の 神 経 幹 細 胞 の 増 殖 に 影 響 を 及 ぼ し て い る こ と が 考 え ら れ る ． 抑 肝 散 は ， 加 齢 動 物 に お け る 神 経 発 生 を 増 加 す る 薬 理 学 的 効 力 を 有 す る こ と が 示 唆 さ れ て い る

．

海 馬 神 経 細 胞 の リ ポ フ ス チ ン 蓄 積 は ， 加 齢 動 物 に お い て 一 般 的 に 観 察 さ れ

， S A M P 8 マ ウ ス の 海 馬 神 経 に お い て ， 特 に カ イ ニ ン 酸 で 処 理 し た 後 に ， リ ポ フ ス チ ン の 蓄 積 が 観 察 さ れ た こ と が 報 告 さ れ て い る

． し た が っ て S A M P 8 マ ウ ス は ， 海 馬 神 経 の リ ポ フ ス チ ン 蓄 積 の 原 因 因 子 の 1 つ で あ る か も し れ な い カ イ ニ ン 酸 誘 導 性 酸 化 損 傷 に 感 受 性 が あ る と 考 え ら れ る

． 本 研 究 は ， 対 照 群 の

S A M P 8 マ ウ ス の 海 馬 神 経 に 多 数 の リ ポ フ ス チ ン

封 入 体 が 存 在 す る こ と を 確 認 し た ． し か し ， 抑 肝

散 の 摂 取 群 で は ， リ ポ フ ス チ ン 封 入 物 は ほ と ん ど

存 在 し な か っ た ． よ っ て 抑 肝 散 は ， リ ポ フ ス チ ン

蓄 積 に 関 与 す る ニ ュ ー ロ ン の 老 化 過 程 を 遅 延 さ せ

る 役 割 を 果 た す こ と が 示 唆 さ れ る ．し か し な が ら ，

21

リ ポ フ ス チ ン 蓄 積 ， 脂 質 過 酸 化 お よ び タ ン パ ク 質 酸 化 の 老 化 過 程 へ の 寄 与 に 関 す る 正 確 な メ カ ニ ズ ム は 未 だ に 同 定 さ れ て い な い ．

シ ナ プ ス は ， ニ ュ ー ロ ン 間 の 効 率 的 な シ グ ナ ル 伝 達 を 保 証 す る よ う に 設 計 さ れ た 構 造 で あ る

． シ ナ プ ス の 構 造 的 可 塑 性 は ， 機 能 的 可 塑 性 を 反 映 し ， 学 習 お よ び 記 憶 に お い て 重 要 な 役 割 を 果 た す

3 5 )

． P S D の 長 さ を 含 む シ ナ プ ス の 形 態 学 的 変 化 は ，

シ ナ プ ス の 生 理 学 的 機 能 に 密 接 に 関 連 し て い る ． さ ら に ， シ ナ プ ス 機 能 の 変 化 は 常 に 構 造 変 化 を 伴 う と 報 告 さ れ て い る

． P S D に は ， シ ナ プ ス 伝 達 と 可 塑 性 に 関 与 す る 受 容 体 ， 足 場 タ ン パ ク 質 ， シ グ ナ ル 伝 達 複 合 体 が 多 数 含 ま れ て い る ． シ ナ プ ス 伝 達 の 長 期 増 強 の 誘 導 は P S D の 長 さ の 増 加 と 関 連 し て い る こ と が 報 告 さ れ て い る

．シ ナ プ ス の 大 き さ は ， シ ナ プ ス 可 塑 性 お よ び 神 経 伝 達 に 関 与 す る 重 要 な パ ラ メ ー タ で あ る P S D の 長 さ を 測 定 す る こ と に よ っ て 間 接 的 に 決 定 す る こ と が で き る

． 本 研 究 で は ，抑 肝 散 の 摂 取 が S A M P 8 マ ウ ス の 海 馬

C A 1 領 域 に お け る P S D 長 さ ， 厚 さ お よ び 面 積 を 増

加 さ せ る こ と を 見 出 し た ． こ の た め ， 抑 肝 散 に よ

り S A M P 8 マ ウ ス の 海 馬 P S D に 関 与 す る 学 習 お よ

び 記 憶 障 害 の 抑 制 が 生 じ る と 推 測 で き る ．

有 髄 線 維 は ， 海 馬 と 他 の 脳 領 域 と の 間 の 神 経 イ

ン パ ル ス の 伝 達 に 寄 与 し ， 海 馬 機 能 の た め の 構 造

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的 基 礎 と み な さ れ て い る ．本 実 験 に お い て G - r a t i o は 対 照 群 よ り 小 さ い 値 を 示 し た ． G - r a t i o は ミ エ リ ン 鞘 の 内 径 / 外 径 で 計 算 さ れ ，値 が 小 さ い ほ ど ミ エ リ ン 鞘 が 厚 い こ と を 示 し て い る ． つ ま り ， 実 験 群 の ミ エ リ ン 鞘 が 対 照 群 に 比 べ て 厚 い こ と が 示 さ れ た た め ， 伝 導 能 が 維 持 さ れ て い る と 考 え ら れ る ． こ の た め ミ エ リ ン 鞘 の 菲 薄 化 お よ び 変 性 は ， 神 経 伝 導 速 度 の 低 下 に つ な が っ て い る

．脳 内 の 異 常 な ミ エ リ ン 鞘 は ， 神 経 行 動 障 害 に 関 与 し ， 認 知 発 達 遅 延 を 誘 発 す る

． し た が っ て 本 研 究 で は ， 抑 肝 散 摂 取 に よ る S A M P 8 マ ウ ス に お け る 学 習 機 能 の 低 下 の 予 防 は ， 海 馬 ミ エ リ ン 鞘 の 維 持 に 関 連 す る と 考 え て い る ． 過 去 の 研 究 で は ， 海 馬 C A 1 領 域 の オ リ ゴ デ ン ド ロ サ イ ト が 加 齢 と と も に 徐 々 に 減 少 す る こ と を 示 し た

．ミ エ リ ン 鞘 は 中 枢 神 経 系 の オ リ ゴ デ ン ド ロ サ イ ト に よ っ て 形 成 さ れ る ． 本 研 究 で オ リ ゴ デ ン ド ロ サ イ ト は 評 価 し な か っ た が ，ミ エ リ ン 鞘 の 変 化 が S A M P 8 マ ウ ス に お け る オ リ ゴ デ ン ド ロ サ イ ト の 加 齢 性 変 性 に 関 連 す る と 考 え ら れ る ．

今 後 さ ら に 研 究 は 抑 肝 散 の 神 経 保 護 効 果 の 根 底

に あ る 詳 細 な メ カ ニ ズ ム を 解 明 す る 必 要 が あ る と

考 え る ．

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結 論

S A M P 8 マ ウ ス を 用 い て ， 抑 肝 散 摂 取 に よ る 加 齢

性 脳 機 能 障 害 に 及 ぼ す 影 響 に つ い て 検 討 し た 結 果 ， 以 下 の 結 論 を 得 た ．

1 ． M o r r i s 水 迷 路 学 習 テ ス ト を 行 い ， 空 間 認 知 能

に 与 え る 影 響 を 検 討 し た 結 果 ， プ ラ ッ ト フ ォ ー ム へ の 到 達 時 間 は ， 実 験 群 で は 有 意 に 短 縮 し た ． 2 ． 血 中 C O 濃 度 は ， 実 験 群 と 対 照 群 と の 間 で 差 は な か っ た

3 ． B r d U 陽 性 細 胞 数 は ， 実 験 群 で は 有 意 に 増 加 し

た ．

4 ． 海 馬 神 経 細 胞 に お け る 超 微 細 構 造 で は 対 照 群 で 多 く の 変 性 が 認 め ら れ た が ， 実 験 群 で は 対 照 群 に 比 較 し て 少 な か っ た ．

5 ． P S D 長 さ ・ 厚 さ ・ 面 積 で は 実 験 群 で 数 値 の 上 昇

が 認 め ら れ た ．

6 ． 海 馬 ミ エ リ ン 鞘 で は 対 照 群 に 比 べ 実 験 群 で 萎 縮 が 少 な く ， G - r a t i o が 低 値 で あ っ た た め ， ミ エ リ ン 鞘 が 厚 い こ と が 示 さ れ た ．

以 上 の 結 果 か ら ， 抑 肝 散 の 摂 取 が ， マ ウ ス の 加

齢 性 の 脳 機 能 変 性 や 空 間 認 知 機 能 低 下 の 予 防 法 と

し て 有 用 で あ る こ と が 示 唆 さ れ た ．

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引 用 文 献

1 ) R e i z C , B r a y n e C a n d M a y e u x R . E p i d e m i o l o g y o f A l z h e i m e r d i s e a s e . N a t R e v N e u r o l . 2 0 1 1 ; 7 : 1 3 7 - 1 5 2 .

2 ) V i v a r C . A d u l t h i p p o c a m p a l n e u r o g e n e s i s , a g i n g a n d n e u r o d e g e n e r a t i v e d i s e a s e s : P o s s i b l e s t r a t e g i e s t o p r e v e n t c o g n i t i v e i m p a i r m e n t . C u r r T o p M e d C h e m . 2 0 1 5 ; 1 5 : 2 1 7 5 - 2 1 9 2 .

3 ) L a z a r o v O a n d H o l l a n d s C . H i p p o c a m p a l n e u r o g e n e s i s : L e a r n i n g t o r e m e m b e r . P r o g N e u r o b i o l . 2 0 1 6 ; 1 3 8 - 1 4 0 : 1 - 1 8 .

4 ) M a r g e t a M A a n d S h e n K . M o l e c u l a r m e c h a n i s m s o f s y n a p t i c s p e c i f i c i t y . M o l C e l l N e u r o s c i . 2 0 1 0 ; 4 3 : 2 6 1 - 2 6 7 .

5 ) F i a l a J C , S p a c e k J a n d H a r r i s K M . D e n d r i t i c s p i n e p a t h o l o g y : c a u s e o r c o n s e q u e n c e o f n e u r o l o g i c a l d i s o r d e r s ? B r a i n R e s R e v . 2 0 0 2 ; 3 9 : 2 9 - 5 4 .

6 ) D e s m o n d N L a n d L e v y W B . C h a n g e s i n t h e p o s t s y n a p t i c d e n s i t y w i t h l o n g - t e r m

p o t e n t i a t i o n i n t h e d e n t a t e g y r u s . J C o m p N e u r o l . 1 9 8 6 ; 2 5 3 : 4 7 6 - 4 8 2 .

7 ) M u l l e r D , N i k o n e n k o I , J o u r d a i n P a n d A l b e r i

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S . L T P , m e m o r y a n d s t r u c t u r a l p l a s t i c i t y . C u r r M o l M e d . 2 0 0 2 ; 2 : 6 0 5 - 6 1 1 .

8 ) M u Y a n d G a g e F H . A d u l t h i p p o c a m p a l n e u r o g e n e s i s a n d i t s r o l e i n A l z h e i m e r ’ s d i s e a s e . M o l N e u r o d e g e n e r . 2 0 1 1 ; 6 : 8 5 . 9 ) M i z o g u c h i K a n d I k a r a s h i Y . C e l l u l a r

p h a r m a c o l o g i c a l e f f e c t s o f t h e t r a d i t i o n a l J a p a n e s e k a m p o m e d i c i n e y o k u k a n s a n o n b r a i n c e l l s . F r o n t P h a r m a c o l . 2 0 1 7 ; 8 : 6 5 5 .

1 0 ) I w a s a k i K , S a t o h - N a k a g a w a T , M a r u y a m a M , M o n m a Y , N e m o t o M , T o m i t a N , T a n j i H ,

F u j i w a r a H , S e k i T , F u j i i M , A r a i H a n d S a s a k i H . A r a n d o m i z e d , o b s e r v e r - b l i n d , c o n t r o l l e d t r i a l o f t h e t r a d i t i o n a l C h i n e s e m e d i c i n e

Y i - G a n S a n f o r i m p r o v e m e n t o f b e h a v i o r a l a n d p s y c h o l o g i c a l s y m p t o m s a n d a c t i v i t i e s o f

d a i l y l i v i n g i n d e m e n t i a p a t i e n t s . J C l i n P s y c h i a t r y . 2 0 0 5 ; 6 6 : 2 4 8 - 2 5 2 .

1 1 ) N a g a t a K , Y o k o y a m a E , Y a m a z a k i T , T a k a n o D , M a e d a T , T a k a h a s h i S a n d T e r a y a m a Y . E f f e c t s o f y o k u k a n s a n o n b e h a v i o r a l a n d

p s y c h o l o g i c a l s y m p t o m s o f v a s c u l a r d e m e n t i a : a n o p e n - l a b e l t r i a l . P h y t o m e d i c i n e .

2 0 1 2 ; 1 9 : 5 2 4 - 5 2 8 .

1 2 ) I k a r a s h i Y a n d M i z o g u c h i K .

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N e u r o p h a r m a c o l o g i c a l e f f i c a c y o f t h e t r a d i t i o n a l J a p a n e s e k a m p o m e d i c i n e y o k u k a n s a n a n d i t s a c t i v e i n g r e d i e n t s . P h a r m a c o l T h e r . 2 0 1 6 ; 1 6 6 : 8 4 - 9 5 .

1 3 ) F u j i w a r a H , T a k a y a m a S , I w a s a k i K , T a b u c h i M , Y a m a g u c h i T , S e k i g u c h i K , I k a r a s h i Y , K u d o Y , K a s e Y , A r a i H a n d Y a e g a s h i N . Y o k u k a n s a n , a t r a d i t i o n a l J a p a n e s e m e d i c i n e , a m e l i o r a t e s m e m o r y d i s t u r b a n c e a n d a b n o r m a l s o c i a l i n t e r a c t i o n w i t h a n t i - a g g r e g a t i o n e f f e c t o f c e r e b r a l a m y l o i d b p r o t e i n s i n a m y l o i d

p r e c u r s o r p r o t e i n t r a n s g e n i c m i c e . N e u r o s c i e n c e . 2 0 1 1 ; 1 8 0 : 3 0 5 - 3 1 3 .

1 4 ) N o g a m i A , T a k a s a k i K , K u b o t a K , Y a m a g u c h i K , K a w a s a k i C , N a k a m u r a K , F u j i k a w a R , U c h i d a N , K a t s u r a b a y a s h i S , M i s h i m a K , N i s h i m u r a R , F u j i w a r a M a n d I w a s a k i K . E f f e c t o f

y o k u k a n s a n o n m e m o r y d i s t u r b a n c e i n a n

a n i m a l m o d e l o f c e r e b r o v a s c u l a r d e m e n t i a . J T r a d M e d . 2 0 1 3 ; 3 0 : 1 6 4 - 1 7 5 .

1 5 ) L i u Y , N a k a m u r a T , T o y o s h i m a T , L u F ,

S u m i t a n i K , S h i n o m i y a A , K e e p R F , Y a m a m o t o T , T a m i y a T a n d I t a n o T . A m e l i o r a t i v e e f f e c t s o f y o k u k a n s a n o n b e h a v i o r a l d e fi c i t s i n a

g e r b i l m o d e l o f g l o b a l c e r e b r a l i s c h e m i a .

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B r a i n R e s . 2 0 1 4 ; 1 5 4 3 : 3 0 0 - 3 0 7 .

1 6 ) Y a n a i S a n d E n d o S . E a r l y o n s e t o f b e h a v i o r a l a l t e r a t i o n s i n s e n e s c e n c e - a c c e l e r a t e d m o u s e p r o n e 8 ( S A M P 8 ) . B e h a v B r a i n R e s . 2 0 1 6 ; 3 0 8 : 1 8 7 - 1 9 5 .

1 7 ) M o r r i s R . D e v e l o p m e n t s o f a w a t e r - m a z e

p r o c e d u r e f o r s t u d y i n g s p a t i a l l e a r n i n g i n t h e r a t . J N e u r o s c i M e t h o d s . 1 9 8 4 ; 1 1 : 4 7 - 6 0 .

1 8 ) B r o m l e y - B r i t s K , D e n g Y a n d S o n g W . M o r r i s w a t e r m a z e t e s t f o r l e a r n i n g a n d m e m o r y

d e f i c i t s i n A l z h e i m e r ' s d i s e a s e m o d e l m i c e . J V i s E x p . 2 0 1 1 ; 5 3 : e 2 9 2 0 .

1 9 ) K u b o K , I w a k u F , T a m u r a Y , W a t a n a b e K , F u j i t a M a n d O n o z u k a M . M o l a r l e s s - i n d u c e d c h a n g e s o f s p i n e s i n h i p p o c a m p a l r e g i o n o f S A M P 8 m i c e . B r a i n R e s . 2 0 0 5 ; 1 0 5 7 : 1 9 1 - 1 9 5 .

2 0 ) O n i s h i M , I i n u m a M , T a m u r a Y a n d K u b o K . L e a r n i n g d e f i c i t s a n d s u p p r e s s i o n o f t h e c e l l p r o l i f e r a t i o n i n t h e h i p p o c a m p a l d e n t a t e g y r u s o f o f f s p r i n g a r e a t t e n u a t e d b y m a t e r n a l

c h e w i n g d u r i n g p r e n a t a l s t r e s s . N e u r o s c i L e t t . 2 0 1 4 ; 5 6 0 : 7 7 - 8 0 .

2 1 ) G i l b e r t M E , K e l l y M E , S a m s a m T E a n d

G o o d m a n J H . C h r o n i c d e v e l o p m e n t a l l e a d

e x p o s u r e r e d u c e s n e u r o g e n e s i s i n a d u l t r a t

28

h i p p o c a m p u s b u t d o e s n o t i m p a i r s p a t i a l l e a r n i n g . T o x i c o l S c i . 2 0 0 5 ; 8 6 : 3 6 5 - 3 7 4 .

2 2 ) L i G , Z h a n g X , C h e n g H , X i e H , Z h a n g X , Y u J a n d H a n J . A c u p u n c t u r e i m p r o v e s c o g n i t i v e d e f i c i t s a n d i n c r e a s e n e u r o n d e n s i t y o f t h e h i p p o c a m p u s i n m i d d l e - a g e d S A M P 8 m i c e . A c u p u n c t M e d . 2 0 1 2 ; 3 0 : 3 3 9 - 3 4 5 .

2 3 ) H a r a Y , R a p p P R a n d M o r r i s o n J H . N e u r o n a l a n d m o r p h o l o g i c a l b a s e s o f c o g n i t i v e d e c l i n e i n a g e d r h e s u s m o n k e y s . A g e . 2 0 1 2 ; 3 4 : 1 0 5 1 - 1 0 7 3 . 2 4 ) C h o m i a k T a n d H u B . W h a t i s t h e o p t i m a l v a l u e o f t h e g - r a t i o f o r m y e l i n a t e d f i b e r s i n t h e r a t C N S ? A t h e o r e t i c a l a p p r o a c h . P L o S O n e . 2 0 0 9 ; 4 : e 7 7 5 4 .

2 5 ) Y a n a i S a n d E n d o S . E a r l y o n s e t o f b e h a v i o r a l a l t e r a t i o n s i n s e n e s c e n c e - a c c e l e r a t e d m o u s e p r o n e 8 ( S A M P 8 ) . B e h a v . B r a i n R e s . 2 0 1 6 ; 3 0 8 : 1 8 7 - 1 9 5 .

2 6 ) T a b u c h i M , Y a m a g u c h i T , I i z u k a S , I m a m u r a S , I k a r a s h i Y a n d K a s e Y . A m e l i o r a t i v e e f f e c t s o f y o k u k a n s a n , a t r a d i t i o n a l J a p a n e s e m e d i c i n e , o n l e a r n i n g a n d n o n - c o g n i t i v e d i s t u r b a n c e s i n t h e T g 2 5 7 6 m o u s e m o d e l o f A l z h e i m e r ’ s

d i s e a s e . J E t h n o p h a r m a c o l . 2 0 0 9 ; 1 2 2 : 1 5 7 - 1 6 2 .

2 7 ) U c h i d a N , T a k a s a k i K , S a k a t a Y , N o g a m i A ,

29

O i s h i H , W a t a n a b e T , S h i n d o T , E g a s h i r a N , K u b o t a K , K a t s u r a b a y a s h i S , M i s h i m a K , F u j i w a r a M , N i s h i m u r a R a n d I w a s a k i K .

C h o l i n e r g i c i n v o l v e m e n t a n d s y n a p t i c d y n a m i n 1 e x p r e s s i o n i n Y o k u k a n s a n - m e d i a t e d

i m p r o v e m e n t o f s p a t i a l m e m o r y i n a r a t m o d e l o f e a r l y A l z h e i m e r ’ s d i s e a s e . P h y t o t h e r R e s . 2 0 1 3 ; 2 7 : 9 6 6 - 9 7 2 .

2 8 ) M a k i n o d a n M , Y a m a u c h i T , T a t s u m i K , O k u d a H , N o r i y a m a Y , S a d a m a t s u M , K i s h i m o t o T a n d W a n a k a A . Y i - g a n s a n r e s t o r e s b e h a v i o r a l

a l t e r a t i o n s a n d a d e c r e a s e o f b r a i n g l u t a t h i o n e l e v e l i n a m o u s e m o d e l o f s c h i z o p h r e n i a . J B r a i n D i s . 2 0 0 9 ; 1 : 1 - 6 .

2 9 ) M i z o g u c h i K , S h o j i H , T a n a k a Y a n d T a b i r a T . A m e l i o r a t i v e e f f e c t o f t r a d i t i o n a l J a p a n e s e m e d i c i n e y o k u k a n s a n o n a g e - r e l a t e d

i m p a i r m e n t s o f w o r k i n g m e m o r y a n d r e v e r s a l l e a r n i n g i n r a t s . N e u r o s c i e n c e . 2 0 1 1 ; 1 7 7 : 1 2 7 - 1 3 7 .

3 0 ) T a n a k a Y a n d M i z o g u c h i K . I n fl u e n c e o f a g i n g

o n c h o n d r o i t i n s u l f a t e p r o t e o g l y c a n e x p r e s s i o n

a n d n e u r a l s t e m / p r o g e n i t o r c e l l s i n r a t b r a i n

a n d i m p r o v i n g e f f e c t s o f a h e r b a l m e d i c i n e ,

y o k u k a n s a n . N e u r o s c i e n c e . 2 0 0 9 ; 1 6 4 : 1 2 2 4 -

30

1 2 3 4 .

3 1 ) L e u n e r B , G o u l d E a n d S h o r s T J . I s t h e r e a l i n k b e t w e e n a d u l t n e u r o g e n e s i s a n d l e a r n i n g ?

H i p p o c a m p u s . 2 0 0 6 ; 1 6 : 2 1 6 - 2 2 4 .

3 2 ) R a b e r J , R o l a R , L e F e v o u r A , M o r h a r d t D , C u r l e y J , M i z u m a t s u S , V a n d e n B e r g S R a n d F i k e J R . R a d i a t i o n - i n d u c e d c o g n i t i v e

i m p a i r m e n t s a r e a s s o c i a t e d w i t h c h a n g e s i n i n d i c a t o r s o f h i p p o c a m p a l n e u r o g e n e s i s . R a d i a t R e s . 2 0 0 4 ; 1 6 2 : 3 9 - 4 7 .

3 3 ) K i m H C , B i n g G , J h o o W K , K i m W K , S h i n E J , P a r k E S , C h o i Y S , L e e D W , S h i n C Y , R y u J R a n d K o K H . O x i d a t i v e d a m a g e c a u s e s f o r m a t i o n o f l i p o f u s c i n - l i k e s u b s t a n c e s i n t h e h i p p o c a m p u s o f t h e s e n e s c e n c e - a c c e l e r a t e d m o u s e a f t e r

k a i n a t e t r e a t m e n t . B e h a v B r a i n R e s . 2 0 0 2 ; 1 3 1 : 2 1 1 - 2 2 0 .

3 4 ) M a r g e t a M A a n d S h e n K . M o l e c u l a r m e c h a n i s m s o f s y n a p t i c s p e c i fi c i t y . M o l C e l l N e u r o s c i . 2 0 1 0 ; 4 3 : 2 6 1 - 2 6 7 .

3 5 ) M u l l e r D , N i k o n e n k o I , J o u r d a i n P a n d A l b e r i S . L T P , m e m o r y a n d s t r u c t u r a l p l a s t i c i t y . C u r r M o l M e d . 2 0 0 2 ; 2 : 6 0 5 - 6 1 1 .

3 6 ) W e e k s A C , I v a n c o T L , L e b o u t i l l i e r J C , R a c i n e

R J a n d P e t i t T L . S e q u e n t i a l c h a n g e s i n t h e

31

s y n a p t i c s t r u c t u r a l p r o fi l e f o l l o w i n g l o n g t e r m p o t e n t i a t i o n i n t h e r a t d e n t a t e g y r u s . I I I .

L o n g - t e r m m a i n t e n a n c e p h a s e . S y n a p s e . 2 0 0 1 ; 4 0 : 7 4 - 8 4 .

3 7 ) S h e n g M a n d K i m E . T h e p o s t s y n a p t i c

o r g a n i z a t i o n o f s y n a p s e s . C o l d S p r i n g H a r b . P e r s p e c t B i o l . 2 0 1 1 ; 3 : a 0 0 5 6 7 8 .

3 8 ) M o r e t t i P , L e v e n s o n J M , B a t t a g l i a F , A t k i n s o n R , T e a g u e R , A n t a l f f y B , A r m s t r o n g D , A r a n c i o O , S w e a t t J D a n d Z o g h b i H Y . L e a r n i n g a n d m e m o r y a n d s y n a p t i c p l a s t i c i t y a r e i m p a i r e d i n a m o u s e m o d e l o f R e t t s y n d r o m e . J N e u r o s c i . 2 0 0 6 ; 2 6 : 3 1 9 - 3 2 7 .

3 9 ) C h o m i a k T a n d H u B . W h a t i s t h e o p t i m a l v a l u e o f t h e g - r a t i o f o r m y e l i n a t e d fi b e r s i n t h e r a t C N S ? A t h e o r e t i c a l a p p r o a c h . P L o S O N E .

2 0 0 9 ; 4 : e 7 7 5 4 .

4 0 ) F a n L W , C h e n R F , M i t c h e l l H J , L i n R C , S i m p s o n K L , R h o d e s P G a n d C a i Z . A l p h a - P h e n y l - n - t e r t - b u t y l - n i t r o n e a t t e n u a t e s l i p o p o l y s a c c h a r i d e - i n d u c e d b r a i n i n j u r y a n d i m p r o v e s n e u r o l o g i c a l r e fl e x e s a n d e a r l y s e n s o r i m o t o r b e h a v i o r a l

p e r f o r m a n c e i n j u v e n i l e r a t s . J N e u r o s c i R e s . 2 0 0 8 ; 8 6 : 3 5 3 6 - 3 5 4 7 .

4 1 ) T a n a k a J , O k u m a Y , T o m o b e K a n d N o m u r a Y .

32

T h e a g e - r e l a t e d d e g e n e r a t i o n o f

o l i g o d e n d r o c y t e s i n t h e h i p p o c a m p u s o f t h e

s e n e s c e n c e a c c e l e r a t e d m o u s e ( S A M ) P 8 : a

q u a n t i t a t i v e i m m u n o h i s t o c h e m i c a l s t u d y . B i o l

P h a r m B u l l . 2 0 0 5 ; 2 8 : 6 1 5 - 6 1 8 .