序 文
Bartonella henselae 感染症は，主に猫や犬などの
ペットを介して感染する人畜共通感染症で，代表 疾 患 は 猫 ひ っ か き 病（cat scratch disease：CS- D） である． その臨床型は局所リンパ節腫大から，
不明熱，肝・脾肉芽腫などの全身性感染をひきお こすものまで多彩である
1）2）3）．その感染経路につ いては不明な点が多いが，寄生ノミが猫への感染 を媒介しているのではないかと考えられている．
わ が 国 の 猫 や 犬 に 見 ら れ る ノ ミ は，主 に Ctenocephalidis felis と Ctenocephalidis canis の 2 種 類で，猫に寄生するノミの 96.7％，犬に寄生するノ ミの 75.9％ が C. felis であるという報告がある
4）． しかし，ノミの B. henselae 感染の実態は明らかに されていない．そこで我々は，我が国の飼い猫・
犬か ら 採 取 し た ノ ミ に つ い て，B. henselae 特 異 DNA の保有状況を検討したので報告する．
対象と方法
1．対象
平成 6 年 7 月から平成 11 年 9 月まで，山口県お よび大阪府の飼い猫・犬から採取したノミ 62 匹
（猫から採取した C. felis 36 匹，犬から採取した C.
felis24 匹， C. canis2 匹）を対象とした．ノミは，
採取後 70％ エタノール溶液中に保存してあった ものを用いた．
2．方法
1）ノミの DNA 抽出
エタノール溶液中に保存したノミを 1 匹ずつ 1.5ml エッペンドルフチューブに入れて乾燥後，
次亜塩素酸処理したハサミで細切した．500 µ l の digestion buffer（10mM EDTA，10mM Tris-HCl pH 8.0，100mM NaCl，0.6％SDS）と proteinase K（最終濃度 800 µ g ml）を加えて，56℃ で 3 日〜
5 日インキュベートした．その後，フェノール・ク ロロホル ム 法 で DNA 抽 出 を 行 い，TE（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0）で DNA 濃度を
第74回日本感染症学会総会学術講演会座長推薦論文猫・犬寄生ノミの Bartonella henselae 感染
1）山口大学医学部保健学科，2）山口県厚生連長門総合病院研究検査科，3）山口大学農学部家畜内科学教室
石田 千鶴
1）常岡 英弘
2）飯野 英親
1）村上 京子
1）猪熊 壽
3）大西 堂文
3）塚原 正人
1）（平成 12 年 10 月 10 日受付）
（平成 12 年 11 月 6 日受理）
猫・犬に寄生する 2 種類のノミ（Ctenocephalidis felis，Ctenocephalidis canis）の
Bartonella henselae
感染 の有無を検討した．飼い猫・犬から採取したノミ 62 匹について，PCR 法によるB. henselae
特異 DNA の検出を試みたところ，猫から採取したノミの 33.3％（12 36），犬から採取したノミの 26.9％（7 26）から
B. henselae
特異 DNA が検出された．以上の事実から，猫ノミ，犬ノミ共にB. henselae
に感染しており，寄生ノミが犬・猫への感染媒体であること，および人への直接感染源となり得ることが示唆された．
〔感染症誌 75：133〜136，2001〕
要 旨
別刷請求先：（〒755―8554）山口県宇部市南小串1―1―1
山口大学医学部保健学科 塚原 正人
Key words：
Bartonella henselae, flea, Ctenocephalidis felis, Ctenocephalidis canis, PCR
133
平成13年 2 月20日
Table 1 Primers used in PCR analyses
PCR product size（bp）
Nucleotide sequence
（5 to 3 ） Primers
GATTCAATTGGTTTGAAGGAGGCT 418 Cat 1
Cat 1 & 2a)
TCACATCACCAGGACGTATTC Cat 2
AATGATGTCCGTGATCTAGC 220 Cat 1
Cat 1 & 2 b)
CATCAGAAGGAGCAACAATC Cat 2
a）Anderson B et al. 5）
b）Tsukahara M et al. 6）
Table 2 Detection of B. henselase DNA in fleas from domestic cats and dogs
No. （%）of PCR positive fleas No. of tested fleas
Species of fleas Host
12（33.3）
C. felis 36 Cat
5
（20.8）
C. felis 24 Dog
2
（100）
C. canis 2 Dog
418bp
220bp
1 2 3 4 5 6
0.1 µ g µ l に調整した．
2）プライマー
B. henselae htrA gene を 増 幅 す る Cat 1 & 2 と，
さらにその内側を増幅する Cat 1 ＆ 2 の 2 組の プライマーペアを使用した（Table 1） ．Cat 1 & 2 で first PCR をした後に，その 1 µ l をテンプレート として，Cat 1 ＆ 2 を用いて nested PCR を行っ た．
3）PCR 反応
滅菌精製 水 5 µ l に 10×Buffer（20mM MgCl
2， 500 mM Tris pH 8.3 ，2.5 mg ml BSA ， 20％ Su- crose，1mM Cresol Red） ，2mM dNTP，5 µ M プラ イマーペア，ノミ DNA（0.1 µ g µ l） ，0.4U Taq ポ リメラーゼを各 1µl ずつ順次加 え，全 量 を 10µl にしたものを PCR 反応液とした．反応条件は，
first PCR，nested PCR 共に同じで，DNA 変性 98
℃，10 秒，アニーリング 50℃，10 秒，伸長反応 72℃，35 秒を 1 サイクルとして，30 サイクル行っ た．増幅反応には，Rapidcycler（Idaho Technol- ogy）を使用した．陽性コ ン ト ロ ー ル と し て B.
henselae ATCC 49882 菌株より抽出した DNA（0.1 µ g µ l）を 1 µ l 用いた．
4）PCR 産物の検出とシークエンス
PCR 産物は，エチジウムブロミド（終濃度 0.5 µ g ml）加 1.5％ アガロースゲルを用いて電気泳動 し，紫外線照射下で目的バンドの検出を行った．
さらに， PCR 産物の塩基配列を確認する目的で，
B. henselae 特異 DNA 陽性のノミ 2 匹について，
PCR 産物を QIA quick PCR purification kit（QIA- GEN）で精製し，PRISM Ready Reaction Termi- nator Cycle Sequencing kit を 用 い て 373A―18 D- NA Sequencer（共に Applied Biosystems）でシー
クエンスを行った．
成 績
ノミ 62 匹中，猫から採取した C. felis 33.3％ （12 36） ，犬か ら 採 取 し た C. felis 20.8％（5 24） ，C.
canis 100％（2 2），計 30.6％（19 62）より B. hense- lae 特異 DNA が検出された（Table 2）．PCR 陽性 ノミ 19 匹のうち，1 匹 （猫から採取した C. felis） は
Fig. 1 Agarose gel electrophoresis of PCR products.
Lane 1, molecular size marker；lane 2, positive con- trol（Cat 1 & 2）；lane 3,C. felis（Cat 1 & 2）；lane 4, positive control（Cat 1 ＆ 2 ）；lane 5,C. felis（nested PCR）；lane 6, negative control.
石田 千鶴 他
134
感染症学雑誌 第75巻 第 2 号
first PCR で陽性だったが，他の 18 匹は，first PCR は陰性で nested PCR のみが陽 性 だ っ た．Fig. 1 に陽性コントロールと，nested PCR 陽性ノミのア ガロースゲル電気泳動像を示した．
PCR 陽性ノミのうち，猫から採取した C. felis1 匹と犬から採取した C. canis1 匹，計 2 匹の PCR 産物をダイレクトシークエンスした結果，両者と も， B. henselae htrA gene の塩基配列と 99％ が一 致していた．
考 察
今回の結果から，わが国の飼い猫寄生ノミの約 33％，飼い犬寄生ノミの約 27％ が B. henselae に感 染していることが明らかとなった．これは猫ノミ の 26〜34％ か ら B. henselae 特 異 DNA が 検 出 さ れ た と す る 欧 米 の 報 告
7）〜9）と 同 様 で あ っ た．
Chomel ら
7）は 飼 い 猫 の 39.5％ が B. henselae に よ る菌血症を示しており，菌血症の猫の方が菌血症 のない猫より，寄生ノミが多かったと報告してい る．また，ノミが，B. henselae を含む血液を摂取す ることにより， B. henselae に感染すること
10）や，菌 血症の猫から採取したノミを用いた，猫への B.
henselae 感染が実験的に確認されている
8）11）．これ
らの報告と今回の結果，さらに猫―猫間でのノミ の移動があること
12）か ら，ノ ミ が 猫―猫 間 で B.
henselae を媒介している可能性は十分にあると考
えられる．今回は犬ノミか ら も B. henselae 特 異 DNA を検出しているので，犬―犬間，さらに猫ま たは犬から人への B. henselae 感染においても，ノ ミが重要な感染媒体になり得ることが示唆され る．
B. henselae 感染症においては，猫などのペット
による受傷歴の有無は，診断の大きな手がかりと なるが，ペットとの接触歴はあるものの，受傷歴 がない例もみられる．猫や犬の口腔内や目ヤニに も菌が存在することは分かっている
13）ので，受傷 歴がなくても接触歴があれば B. henselae 感染は起 こりうると考えられる．さらに今後は，ペットと の接触に限らず，ペットに寄生するノミによる人 への直接感染も考慮する必要があると考えられ
る． B. henselae 感染予防のためには， ペットの除菌
と共に，ペットに寄生するノミの駆除もあわせて
実施することが重要と思われる．
昨 今 の ペ ッ ト ブ ー ム に よ り，わ が 国 で も B.
henselae 感染症（CSD）の報告例が増えつつある．
その早期診断，早期治療，さらに予防的見地から も猫，犬，寄生ノミ等の感染媒体及び感染経路に 関する疫学的な解明が今後の課題と思われる．
文 献
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2）Anderson BE, Neuman MA：Bartonella spp. as emerging human pathogens. Clin Microbiol Rev 1997；Apr：203―219.
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4）今井壮一，武田雅人，内野富弥，中野正和，小竹 康人：我が国における犬および猫寄生ノミの種 別分布．日獣会誌 1995；48：775―778.
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猫・犬寄生ノミのBartonella henselae感染 135
平成13年 2 月20日
（ Siphonaptera ： Pulicidae ）. J Med Entomol 1994；31：486―489.
13）塚原正人，山本きよみ，常岡英弘，他：Bartonella
henselae感染症．化学療法の領域 1999；15：87―
93.
Bartonella henselae Infection in Domestic Cat and Dog Fleas
Chizuru ISHIDA
1）, Hidehiro TSUNEOKA
2）, Hidechika IINO
1）, Kyoko MURAKAMI
1）, Hisashi INOKUMA
3）, Takafumi OHNISHI
3）& Masato TSUKAHARA
1）1）Faculty of Health Sciences, Yamaguchi University School of Medicine
2）Department of Clinical Laboratory, Yamaguchi-Ken Kouseiren Nagato General Hospital
3）Laboratory of Veterinary Internal Medicine, Faculty of Agriculture, Yamaguchi University
We studied on the infection of domestic cat and dog fleas with Bartonella henselae by polymerase chain reaction（PCR） . A total of 62 fleas（36 Ctenocephalidis felis from cats, 24 C. felis from dogs and 2 Ctenocephalidis canis from dogs） , stored in 70％ ethanol, were analyzed by PCR for B. henselae specific DNA. Of the 62 fleas, C. felis from cats and dogs were positive for B. henselae specific DNA in 12 of the 36（33.3％）and in 5 of the 24（20.8％） , respectively, and C. canis from dogs was positive in 2 of the 2
（100％） . Our results demonstrated that pet fleas were infected with B. henselae, and suggest that flea transmission of B. henselae between cats or dogs may occur, and direct transmission of B. henselae from pet fleas to human may cause cat scratch disease.
石田 千鶴 他
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感染症学雑誌 第75巻 第 2 号
