,々 テッポウユリから分離されたキュウリモザイクウイルスの性質

曲学研究 60:69‑80(1983)

テ ッ ポ ウ ユ リ か ら 分 離 さ れ た キ ュウ リモザ イク ウイル スの性質

前

田 宇 宙 ･ 井 上 威 信

緒 言

わが国で栽培 されてい るユ リの多 くは ウイルス病 に俊 されてい る｡ と くに.テ ッポウユ リの球根お よび切花生産地 での ウイル ス病 に よる収徴 率 の低 卜は栽培者 の深刻な問題 とな りつつあ る｡筆者 らはさきにテ ッポウユ リに発 生す るci亡rustatterleafvirusにつ いて 報 告 したが7㌧ キ ュウ リモザイ クウイルス (CMV)もテ ッポウユ リに 広 く分布 してい る 謹要 な ウイルスであ ることが nJlらかにな った｡ ユ l)におけ るCMVの発生は混初,1937年 Price13)に よ り吉d L伐されたが , わが国では川 uJら10)が チ ッポウ‑ 1)か ら

,々

^{L:一木 ら8)が カ}

ノコユ リか らCMVを分離 し 搬告 してい る. ユ リか ら 分断 され るCMVは クバ ･‑,i二全身 感染 しに くいな どの点で ,他 の植物か ら 分断 され た 系統 とは 異な ることが 知 られてい る がl･8･10･13), その謂性質 につ いては まだ十分 明 らかに されていない. 本報告 は各地で採 集 したテ ッポウユ リか ら分 離 されたCMVの性質 につ いて得 られた結果 を記述 した ものであ る.

本研究/<行 うにあたり, テノ･‑ドゥユリ病棟の採盟に際し格別の班宜を 与えられた 各地の試験研究機 L',JJの多 くの方々,ならびに終始1jf鋲

にl d , j J

いただいた光畑興二技'Ll'に深謝の意を去する.

材 料 お よ び 方 法

本突放 に供試 したCMV (6分離株 )は1975‑1981年 に 三 乱 矧札 佐出,鹿 児島 の 各県で採集 した テ ッポウユ リの病棟か ら分断 した もので ,以下 CMV‑Liと

呼ぶ.

それ ら のCMVが分離 された原株 の品種 ,病徴お よび採鵜地 は Table

l

に示 して あ る. いず れ の原株 もCMVと他 の ウイルスとが重 松感染 してい ることが認め られたので ,原株 の病 徴

と本 ウイル スとの関係は明 らかではない.

比較のために用 いたCMV苅斑系 (CMV‑Y)川)は嫉結乾燥標 品 として, ‑20oCで操存 していた ものであ った.

実験植物の育成 ,接種試験 お よび アプラムシ伝搬試験はすべて20‑30oCの ガラス温室 で行 った.

原株か らの ウイルスの分離は汁液抜掛 こよって 感染 した

Che no Po di um qui no a

あ るい は ツルナの按粗菓を接種源 として,C.

qui ･ no a

でqJ印‑局部病珪分離を2‑ 3回 くり返す

昭和57年12)i7日受理

69

Table1.OriginofCMV isolatesobtainedfrom lily Originofisolate

Locality Hostvariety FukuokaPref.

SagaPrer. SagaPref. KagoshimaPref MiePref. FukuokaPref.

しIniden【i丘ed Hinomoto++

HlnOmOtO Georgia*

unidentL丘ed HinonlOLo

mOSalC mosaic mOSalC mOSalC, nlOSalC Severe

Symptoms

anddlStOrtlOnOfaower andnecrotic一尺ecks andnecrotic‑necks

necrotlC‑aecksanddwarf andnecrotic‑necks mosaicandnecro亡ic‑neclくS +Lilium longiPorum Thumb.

**A hybridlily.L.×/orTTWlongthort.(L.longlPorumThumb.×L formosanu7nWall.) ことに よ り行 った. 分離 した ウイルスは

C.

quinoaで増殖 させたのち, 凍結 乾燥 して保 存 した.CMVの同定は ウイルス粒 子の形億 お よび 抗 CMV‑Y血清 との 反応 に よ り行 っ た.汁液接種は カーボ ランダムと 綿球を用 い る常法 に よった. 接種源 には病薬 を0.01M Na‑DIECAを含む0.1M りん恨緩衝液 (pH 7.0)中で磨砕 した ものを用 いた.

庶糖密度勾配液は0･05M EDTA‑ほ う政 ナ ト.)ウム綾衡液 (pH 9.0)に溶崩 した35, 25,15,5% (W/v)の庶掛液を それ ぞれ7,7,7,5mlず つ 遠心チ ューブに正桝 し, 15時間4oCに静taLして作成 した. 密度勾配 遠心は E]立 RPS 25Ap‑ターを用 いて行 っ

た .

ウイルス粒子 の観 察は2% PTA (pH 7･0)を用 いた逆染色法に よ り,昭子戯敏鏡 (日 立HU‑12)で行 った.

抗血清は純化 ウイルス (合計70mg)を家兄 に 静脈注射を

1

rt!l,次に Freund's com‑

pleteadjuvant(Difco Lab.)を用 いた筋肉注射を3Lg行 うことに よ り作成 した.寒天 ゲ ル内二'iLI拡 散法の ゲルは0.85%鮎化 ナ トリウム, 0･0025M EDTAお よび0.01% 窒 化 ナ ト.)ウAを 含む0･02M りん倍 鍵 術液 (pH 712)に寒天 (Agar Noble,Difco Lab.) を1%にな るよ うに溶解 した ものである18'.

実 験 結 果 1.寄主範 囲および病徴

タノミコ (品種 ,ホ ワイ トノミー レー) または NicoLiana ̀･leuelandiiの接唖集 を接税源 と して･供試6分離株をそれぞれ11科28癌 の植物に汁液接柾 を行 った ところ,寄主範囲お よび病 敬に分離株間で若干 の差異がみ られたが,基本的 にはほは同 じであ った.それ らの うち, 鹿 児島県で採集 した テ ッポ ウニ .) (副 乱 Georgia)か ら得 られた分離株4につ い ての寄主反応を Table2に示 した. 本 ウイルスは他 の植物か ら分戯 された多 くの系統 と 同様に広 い'#主範囲を有 していたが, タノミコ,N.gluiinosa. トマ トな どの ナス科植物や 千 ‑ウ リには全身感染 しなか った.ササ ゲ, ソラ‑･7メ, エ ソ ドゥ な どの マ メ科 組物には CMV‑0 (普通系)や CMV‑Yな どとr.･]様の局部病斑 が形成 さ,lLたが, その数は少なか っ た･主な軸物での病 故を以下 に記述す る.

7 0

_{出 挙 研 究}

Table2.Hostrangeand symptomsofCMV obtained from lily Symp〔oms*

Local Systemic Family and species

AIZOaCeae

TelragonlaeXPansa Amaranthaceae

Gom｣坤renaglobosa ChenOpOdlaCeae

CjwT10Pod壬um amaranllCOlor C.quLr10a

SJ)lnaClaOleracea Compositae

Helianthusannuus Zmniaelegans Cruciferae

BrassicaraJ)a RaphanussaはノuS CucurbltaCeae

CiLrulluslallalus

Cucumismelovar.conomon

C.salivus

Cucurbilamoschala Gramineae

Zeamays LegumlnOSae

PIS7Lm Salivum l′iClajTaba VignaSinensLS P/ICSeOlusvulgarts LillaCeae

LiliZ+m XjTomwlongi Pedaliaceae

Scsamum indicuTn Solanaceae

Nicotianaglutinosa

N

.

labacumcvs.W hileBurley,Samsun N.clevelandll

Daluraslramonium CapsICum annuum LycoPersICOneSCulenlum Solanum melongeT?a PelunLa Xhybrlda

NS NS

CS,NS M

NS

CS,NS M

十 十

CS.NS NS NS

NS

N S

NS

CS

NS

CS,NRS CS,NS.NRS CS.NS CRS NRS CS NS,NRS CS,NRS

一一l一㌔lll N

一一叶Ll一1一

*Explanationofsymbols:NS,necroticspots･,CS,ctllorolicspots.M,mosaic',N, necrosisこNF,necroticIRecks;NRS,necrolicringspots;CRS′chlor'o[icrlngSPOls;

+ ;syrTIPlomLesslnfeclioni ‑,no infection.

60澄(1983) ⁷¹

テ ッポウユ リ:4‑ 5禁期のシソテ ッポウユ リの実生荷に接租 した結果 ,接種葉に不鮮 明な退色斑点,上架に軽い モザイクを生 じた.夏掛 こ接種 した場合には,上薬 に腔いえそ 粂斑を生 じることもあった. これ らの病微は植物が生育す るにつれて不 明瞭 とな り,やが て消失 したが,戻 し接種の結果 ウイルスは回収 された.翌春に休眠 した球根か ら出た新発 には モザイ クとえそ粂斑が認められた (Plateト1).

タノ､コ:ホ ワイ ト/:‑レ‑では接穂薬に

付

置0.5‑1cmの退色斑点を生 じ(PlateI‑2), のちえそ斑′煮またはえそl'f右紋 とな った.冬期には,えそ症状は Z,tられす ,下葉が苛rj色に な りは じめた ときに緑色斑′Li.凍 るいほ緑 色輪紋 を残す病斑 とな った.サ ムスソでの病故は ホ ワイ ト/;‑レーの場 合とほぼ同様であ った.接種薬に退色斑点を生 じ,のil)にはえそ斑 点あるいは輪郭の明瞭なえそ齢紋 とな る特徴があ った.えそ輸紋が2‑ 3韮 とな り,それ

らが融合す る場合 もみ られた (Plateト3).

N

.

gl ul i no s a:

接概葉に粒径

1

‑1.5cmの退色斑点 あ るいは輪郭の 不 明瞭なえそ輪紋 を生 じた (PlateI‑4).葉が深化す ると線色斑点あるいはえそを伴 う緑色輪紋 を残す病斑 とな った.いずれの分離株 も全身感染 しなか った.

N

.

c l e v e l andi 1:

接価額に般初退 色蜘′在を/生 じ,のちえそ軋 克とな った. 分離株に よっ ては電光形のえそ症状を皇す るもの もあ った.上輩には明瞭な モザイクお よびえそが現わ れた (PlateI‑5). 接種菓お よび上薬に生ず るえそ症状の程度は分離株 によってjhiな り, 激 しいえそ柿状を示す もの,あ るいは軽微なえそ症状 しか生 じない ものがあ った.

ベチ ュニ7:接称菜に葉脈にそ った大形の退色斑点あるいはえそ輸紋 を生 じた.全身感 染 しなか った.

キ ュウ I):品種, 久留米落合Hお よびさちかぜでは 接種薬 にtTj‑̲f!約1mmの退色斑点 あ るいは灰 白色のえそ斑点を生 じた. この場合,感染性の高い接種源 を用 いない と局部病 斑が形成されず ,ウイルス も回収 されないことが多か った.全身感染は しなか った.

ヒャクニチソウ:接唖菜 に退色斑点あ るいはえそ斑点を生 じた.全身感汲 しない ことが 多か ったが,夏期の気温のT':.'Jい場合には上兼 にモザイ クを生ず ることもあ った,

ツルナ:接磯薬に退色斑点を

l

Lじ,のちえそ斑点 とな った.接細葉が芯化す ると,えそ 斑点の周囲に緑色を残す病斑 とな った (PlateI16).

C.

qui no a:

接価薬に退色斑点を生 じ, のちえそ斑点 とな った (PlateI‑7).全身感数 は しなか った.

トウモロコシ:描凝集に退色軌 !1.7,あるいは 白色の えそ粂斑を生 じた.上薬 には モザイ クと白色のえそ粂斑が現れ ,病徴の激 しい塀合には 上薬が枯死す ることも あ った (Plate I‑8).

2 .

病葉粗汁液中での安定性

タ/:コ (品柄 ,ホ ワイ トノミ‑レ‑)の 接種薬粗汁液 中での 安定性を

C.qui no a

を検定 拍物 として調べた結果,不活化温度は60‑65oC (loヵ),希釈限度は103‑10㌦ 保存限 度は6‑ 8日(20oC)であ った.

3 .

77ラムシ伝搬

モモ7カアブラムシ

( Myz uspe r s i c ae )

お よび ワタアブラムシ

( Aphi sgo s s y pi i )

を用 い C

･qui no a

の病薬か らC.

qut noa

への伝搬試験 を行 った結果,本 ウイルスは これ らの 7プラムシに よって非永続的に伝搬 された.

7 2

_{).r<学 研 完}

4

. ウイルスの純化

ウイル スの純 化は タバ コ (晶櫛 ,ホ ワイ ト/､‑ レ‑)の接種葉 を用 い ,基本的 には高 浪

ド)17)の方法に準 じて行 った. 凍結案 に等温 (V/W)の

0. 0 025M EDTA

と

0. 1

% チオ ク )

)コール憶 を含む

0. 5M

くえん醸緩 衝

液 ( pH 6, 5)

を加 え , ミキサ ーで 増枠後

2

虚 の ガ 一七で こ した. そ の粗汁液 に

1 / 4

容鹿 の 凹塩 化炭素 を 加 え, ス ター ラーで

1 0

分 間 捜拝 したの ち

, 3, 0 0 0×9.1 5

分間 遠心 した. 上 清 に

Tr i t onX‑1 0 0(1

% ),塩 化 ナ トリウム

( 0. 1 M)

お よびポ リエチ レング リコー

ル 6. 0 0 0(6 %

) を加 え溶解 した のち

, 4o C

に

3

時 間 以上 櫛冊 した. この液 を

5 , 0 0 0×9,2 0

分間 遠心 し, 沈殿 を

0･ 0 05M EDTA

‑ほ う酸 ナ トリウム緩衝

硬 ( pH 9. 0)

に懸濁 したの ち. 分

t T I

.

i

遠心

( 8 , 0 0 0×9,2 0

分間

,65 , 0 0 0×

9.

1 2 0

分間 )を

2

回繰返 し行 った

.

高速 遠心 の沈毅 を少農 の上記緩 衝 液 に懸濁 し

. 5‑3 5%

照射密度勾配 カラムに重層 し

, 5 5 , 0 0 0×9,3

時間 遠心 した. 遠沈管 の中央部 に 乳 白色の

r

j1‑ の/I./ ドが 認め られ たので

( Pl at eI I ‑ 3)

, この部分 を分取 し, 上記 緩 衝液 に 対 して

1

夜透析 したのち

,65 , 0 0 0×

9

.1 2 0

分 遠心 した.生 じた沈殿 を

0. 05M

ほ う酸 緩衝 液

( pH 9, 0)

に懸濁 し

,8. 0 0 0×9,2 0

分 間 櫨心 して得 られた

上

清 を 純 化 ウイル ス とした. 純化原 品は喝節観 察の結果 ,爽難物 を ほ とん ど 含 んでいなか った. また, 純 化 ウイル スのlE.物 活性 を

C.

qum oa で調べた ところ,T.I:;い感染性 を有 していた. ウイル スの収砲 は タバ コ 葉

1kg

当た り

,5 0‑1 0 0mg

で あ った.純化標 晶の紫外 部 吸収 曲線 は

25 8nm

に極大値 ,

2 42nm

に極少値 があ り

,Am｡ x / m . n‑1, 3 2.A

280/･28

｡ ‑1. 6 7

であ った.

5 .

ウイルス粒 子の形 態

タバ コ

, N c l e u e l andi i

な どの感染輩 か ら

,2% PTA ( pH7. 0)

を用 いた

DN

法 で試料 を作成 し

,

尾野観察 した ところ,部分 崩壊 した多数の球 状粒子が認 め られ た

( Pl at eI ト1) .

純化試料 の場 合に も

,PTA

染 色に よ り粒 丁か部 分崩壊 したが , 試料 を

2%

ホル マ リソ液 で前 固定す ることに よ り粒 丁の形態が正常 に よ く保持 され た

( Pl at eI ト2) .

ホル マ リソ同 定 した純化 ウイル スの

PTA

染 色試料 中での粒子は酎

羊2 8‑3 0nm

の球状 で あ った.

6

. ウイルス粒子の塩化 カルシ ウムに よ る崩壊

CMV‑ Li

お よび

CMV‑ Y

の

塩化 カル シ ウム に よ る 崩 壊 を

Fr anc ki

ら⁵⁾の方法に よ り 調べた.

0. 0 05M

ほ う慨感 衝 液 に 懸濁 した 純 化 ウイル ス

( 0. 2mg /

rnC)に

2‑4

×1^{0 3}

M

の

1 0

段階 の 濃度 の 塩 化 カル シ ウム溶液 をそれ ぞそ尊敬 加 え.

4o C

に

1 6

時間

伸

際 した.

その混 合液 を

3 , 0 0 0×9,1 5

分 間 遠心 し,その上清 の

2 8 0nm

に おけ る 吸収を 分光 光 度計 (日立

1 2 4)

で測定 した

.CMV‑

Li

お よび

CMV‑ Y

は 供訳 し

6 0

巻

( 1 9 8 3 )

2 0 0 ulu

志ZTe

a3 utZq

10Sq.V

2

05

0､125

0 . 0 3 2 00 0 8 C o n c e n t r a h o no fC a C

l2(M)

Fi g .1 .Di s r up t i o nofCMV‑ Lian dCMV‑ YWi t hCa Cl

2.

Pr e p a r aL i o n so fCMV( 0 . 2mg / mβ )l V e r e mi xe d wi t he qu a lvo l ume sofCa C1

2

S O l ut 1 0 n San d l ef t f o T1 6hrat4 o C.Th em) xt ur e swe r ec e nt r L f u g e d a

l3.000x

gf o r1 5mL nan dt h es up er n a t a nt swe r e an al vs e dbys p e c t r o ph ot o met r y.

7 3

た最低漁獲 の

4 ×1

0

1

3

M

塩化 カルシ ウム溶液で も沈殿 した.両 ウイル ス とも

,6. 3×1 02 M

で粒子の崩壊が始 ま り, 温度が 高 くな るにつれて 崩壊す る是 が多 くな った (Fig.1).逮 心上酒 中に山川Rされた ウイルス蛍

白T B : ほ

翻ニ CMV‑Liの方が CMV‑Y よ り多か った.

7 .

血清学的試験

純化 ウイルス (分離株 4)を家兎に注射 して 得 られた 抗血清は micro‑pTeCipitin 亡est で部分純化 ウイルス と256倍希釈 まで反応 した. この抗 血清 お よび 抗 CMV‑Y血清を用 い ,部分純 化 した

6

分離株 の血清学的性質 を寒天 ゲル内二 両

拡

散法で調べた ところ,各分 離株の沈降線は互いに融合 し, また,それ らは対照 として用 いたCMV‑Yのそれ とも融 合 L spurは形成 されなか った (plateH‑4).その結果,供試6分酢株 お よび CMV‑Yの 抗原性はfJLlj‑であ ることが認 め られ た.

考 察

わが国の テ ッポウユ リの主要な ウイルスの 1稀であ るCMVの諾性質 を調べ るため

,描

岡,佐賀

,

此児島お よび三範 の各県で採症 した ユ リか ら検出 した

6

分離株 について実験 し た ところ,それ らはいずれ もほぼ同 じ性質 を有す るこ とが認め られた.CMV‑Liの種 々の 植物での病 数は, 一般に他 の組物か ら分離 されたCMVの多 くの系統J･6)に よるもの とは 大 きな相違 がみ られた. すなわち,CMVの多 くの系統は タバ コや

N.gl ul i no s a

な どの 多 くのナス科植物や キ ュウ リに全身感 染す るが,CMV‑Liは汁液接種 を行 った11科28種 の植物の うち,全身感熟 した種物は シソテ ッポ ウユ リ

, N

.

c l ev e l andi i

,ヒヤクニチソウ, ホ ウ レンソウお よび トウモ pコシの

5

唖のみであ った. メ/ミコ

, N

.

gl u

l

i no s a

,トマ ト,べ チ ュニ7, キ ュウ リな どには 接唖非 の局部感染 に とどま り全身感染 しなか った.Price‑3)

は チ ッポウユ .)お よび

L,gi gant e um

か ら 分離 されたCMVは ユ リか ら 直接 タ/:コに汁 液穀種 した場 介, ウイルスは接種薬に とどま り全身感染 しなか ったが, タバ コで継代相席 させ た ウイル スは タバ コ, キ ュウ リに全身感染す るよ うにな った ことを報 祷 している.同 様 の現勧 まテ ッポウユ リ1110)や カノコユ リ8)か ら分離 されたCMVで も知 られている.本 報 CMVのいずれ の分離株 もタバ コで数代継代 したのちで もタバ コな どの植物に全身感染 しなか ったので, これ までに 経営 されてい るユ リか らのCMVとは 異な る 寄生性を示 し た. 本報 のCMVは C.

q

u

i no a

での 単一局部病斑分離 を練返す ことに よって 分断 した も のを供試 したが, この よ うな分軌 酎乍が ユ リか ら汁液接練のみに よって分離 された ウイル ス株 と病原性を輿にす るものであ るか苗かは明 らかでない. 最近

,

高浪 ら17)は CMV‑Y をササゲで 単‑局部病斑 分錐を

練

返す ことに よ りsatelliteRNAが除去 され, その結 果 タバ コでの病徴が 変化す ることを :,rl告してい る.

C.qui no a

でU)単一局部病斑 分舵が CMVILiの病原性を硬化 させ るか否かについては現在検討中であ る.

マ メ科植物 のササゲ, ソラマ メお よびエソ ドゥでは感触性 の高い接種源を用 いな い と局 部病斑が形成 されに くか った. CMVの検定 佃物 としては一般に ササゲが よ く用 い られ て いるが,上記 の よ うな寄生性 の性質か ら, ユ リのCMVの検出に検定植物 としてササゲを 用 い るのは不適 当 と思われた.

CMV‑Liの種 々の榊 物に対す る病原性は弱か ったが, トウモ ロコシでは モザイ クと激 し いえそ粂斑を生 じ,CMV‑Yな どの系統 と異な った. 本 ウイル スがなぜ トウモロ コシに強

7 4

_{雌 羊 研 究}

い病原性 を有す るのかは明 らかではないが,今後,他 の単 子葉植物 の感受性につ いて も試 験す る必要があ ると思われ る.

従来, テ ッポ ウユ リのえそ粂班は CMVとlllysymptomlessvjrusとの重複感染iJこよ り生 じるとされていたが2･3', 本実験 では シ ソテ ッポ ウユ リ

( L.×for mo l ongi )

にCMV の単独感染に よってえそ粂斑が現われた. シ ･/テ ッポ ウユ リは,わがLgで多 く栽培 され て お り, チ ッホ ウユ リ

( L.l o ngi j l or um)

とタか サゴユ リ(

L.for mo s a num)

との雑稜であ る.本報 のCMVが チ ッポ ウニ ))に もえそ集成を生ず るか否かにつ いては今後 明 らかにす る考えであ る.以上,寄生性につ いて述べた よ うに,ユ リか ら分離 され るCMVが特 徴の あ る生物学的性質を持つ ことは, ユ リに発生す るCMVの伝染喋や病原性 の分化な どの点 で興味深い.

本報の ウイルスは モモアカアプラムシと ワタア ブラムシに よって 非永続的 に 伝搬 され た. ワタ77ラムシはユ リに寄生す る主要 な種であ ると思われ るので.本7プラムシが ユ

リにおけ るCMVの伝鞭 に遺草 な役割を果た しているもの と推察 され た.

タ,:コの接種薬 を材料 として本 ウイルスは容 易に純 化す ることがで きたが,収丑は タバ コ薬 1kg当た り50‑100mgで あ り, 他のCMⅤ 系統 の場 合1日 7)よ りも か な り低か っ た. この ことは CMV‑Liは クノミコに局部 感染 し, 全身感染 しないため, メ/(コ華 中での

ウイルス漉度が低い ことに よるもの と思われた.

CMVは塩に対 して不安定な ウイルスであ ることが知 られ ているが5･9･L4),本実験におい ても同様に塩化 カルシ ウムに よ り粒子が崩壊す ることが認め られた. CMV粒子の崩壊は 塩化 カルシウム限度が約

3

×102Mでお こ り, 塩快慶が高 くな るにつれて,遠心上清 に回 収 され るウイルス外被蛋 白の止 も多 くな った. この よ うな結果はFranckiら5)がCMV‑Q 系統で 得た結果 と よ く‑致 している.CMV‑Yは CMV‑Liよ りも 塩化 カル シ ウムに よ り崩壊 しに くい よ うに思われた, また, CMV‑YはCMV普通系や 他の系統 に くらべ て

PTA

に よ り明壊 しに くい こと12)千,純化軌 品での保存限度 が長 いlL)ことな どか ら,笹了 の安定性が本報 のCMVや 他の系統 よ りも高 い もの と思われ る.

CMV‑Liの血清学的性質 につ いて,本 ウイルスに対す る抗血 清お よび抗CMV‑Y血清を 用 い寒天 ゲ/i,内二重 拡 倣法に よ り調べたが, 画抗 血帖 とも抗原 として用いた CMV‑Liと CMV‑Yに対す る 沈降線 とは 完全に 融 合L spurは形成 され なか った. こ0)ことか ら, CMV‑Liの抗原性は CMV‑Yのそれ と同一であ ると考え られ た.

摘 要

わが国の テ ッポ ウユ リの重要な柄原 ウイルスの 1唖 であ るCMVの諸性飾 こつ いて, 日 本各地で採集 した テ ッポ ウユ リか ら検出 した

6

分離株 を用いて調べた.

1) 本 ウイルス(CMV‑Li)は汁液接唖 を 行 った11科28種 の うち11科25都に 感 染 し た. これ らの うち シソチ ッポユ リ

,N.c l e v e l and

L

i

,ホ‑ レンソウ, ヒャク二チ ソウお よび トウモ ロコシに全身感歎 したが, メ/(コ

, N.gl ul i no s a

,キ ュウ リな どの多 くの植物では 接種薬 に局部感染す るに とどま り, 他の多 くの植物か ら分離 されたCMVの 多 くuj系統 と は大 きな相違がみ られた.

2) タバ コ接種共 の粗汁椴中での ウイルスの不活化温度は60‑65oC (lo介 ),希釈限度 は103‑104,保存限度は6‑ 8日(20oC)で あ った.

60巻 (1983) 75

3) CMV‑Liは モ モアカアブラムシ とワタ アブラムシに よって非永続的 に伝搬 された.

4) タバ コの接種葉 を材料 として,CMV‑Liは容 易に純 化す る ことが で きた. ウイルス の収量は生薬 1kg当た り50‑100mgであ った.純 化標 品の紫外 部吸収 曲線 は258nmに 極 大値,242nmに撞 少値が あ り,Am｡x/m

,

n‑1･32,A26｡/2

8 .

‑1･67であ った.

5) ウイルス粒 7‑は PTA染 色に よ り部分崩城 したが ,前 もって 試料 を2%ホルマ リソ 液 で楓定す る ことに よ り粒 子の形態が よ く保持 された.純 化 ウイル ス (ホル マ リソ固定試 料 )は直L

f

.28‑30nmの球状 粒子で あ った.

6) CMV‑Liは6.4×1012M以上の濃度 の塩 化 カル シ ウムに よ り崩壊 した.

7) 純化 ウイル スを家兎に注射す る ことに よ り力 価256倍の抗血清が 得 られわ. CMV‑

Liの寒 天 ゲル内での 沈降線 は CMV‑Yのそれ と融 合 し, 両者 の抗原性 は同一で あ った.

文 献

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A St r ai no fCu c umb e rMo s ai cVi r u sI s o l a t e df r o m Li l y

TakallOriMAEDA and対al‑1m buINOUYE

Summary

A dlSlinctivestrainofcucumbermosaicVJt‑us(CMV)wascommonlyisolatedfrom LLILum longLjorumandi.×formolongLCOllected in Japan. The vlruS,deslgnaled as CMVILi,could bedlSlinguished from otherCMV sLralnSby characteristic infection of manyexperimentalhostplants. CMV‑Liinfected25of28specieslnllI(lmllleSteSted, butthevirusremainedinlnOCulated leaves of many host plants lnCludlngNICOLlana labacum,N.glulmosa,PeEL〃Lla Xhybrida andCIJCumES SallZJuS.Sys【emLC infection was induced by the virus ln Only Rye specleS:i.×/OrlnOlong‡

,

N.clevelandlt,Spinacea oleracea,ZLnnLaelcgLinS andZedmays.In tobacco sap,the vlruS Was infeclive ala dilulLOnOflo一abutnot10‑4,afterheatingat60oC for10 mlnbutnot65oC.and after6 daysbutnot8daysat20oC. ThevirusWas trilnSmltted in a nol1‑Persistentmanner bytheaphidsMyzuspersLCaeandA少htsgossypL'i, Theyield of＼′irus Was 501100mg/kg InoculatedleavesoftobLICCO. PurLfiedpreparahOnShadAmax/Enh‑i.32,A260/2&0‑1･67and containedasinglesedimentinglSOmetrlCParticlesof28‑30nm dlameter. CMV‑Liwas unstablein2

%

PTA,atpH 710and in a CaCl:solution, AntlSerum With a hlre of 1/256wasobtained frolTLa rabbleinjected wi th thepurlRedvlruS. TheprecIPitlnbands ofSIXCMV･L11SOlateswerefused with tllatOfCMV‑Y inadoublediffusion test.

60巻 (1993) 77

Explattatiol10fpLatea PlateI,

SymptomsinlestplantsnleChanically inoculatedwithCMVILi･ 1.Systemicmosaicandnecrotic･fleckslnLillum Xformolongi.

2.Chloro[icspotsinan】noculatedleafofNwoliaTlaiabacumcv.WhiteBurley.

3.NecroticrlngSPOtSinN.labacumcv.Samsun.

4･NecroticrlngSpOtSinN.gLutinOSa.

5SymptomslnanInoculatedleaf(left)andanuninocu加 edupperleaf(right) of.N.cLeveLandLt.

6.NecrotICSpotsin TelragonLaexpanse, 7.NecL‑OticspotsinChe7709od7um qu川Oa･

8.SystemicseveremosaicandnecrosislnZe･amays. 91Necroticspotsin VLCiafaba.

PlatelI.

1･CMV‑LiparllClesinleafdippL‑eParationslこ1inedwith2% phosphotungs【ate.

pH 7.0. Barrepresents200nm.

2 PuriRed preparation ofCMV‑LIStained with phosphotungsLate after pre‑

Fixationwithformaldehyde. Barrepresents200nrn.

3,Singlelighトscattering zone formed by CMV‑Llafter centrlfugation in a sucrosedensltygradient.

4.SerologlCaLreacl10nSOfCMV‑LLisolatestoanllSerum againstCMV‑Y in a doublediffusionlest.

As:antlSeruTn:Y:CMV‑Y;116:six isolatesofCMV‑Ll.

78 出 学 研 究

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