Progesterone and synthetic progestin, dienogest, induce apoptosis of human primary cultures of adenomyotic stromal cells.

Progesterone and synthetic progestin,

dienogest, induce apoptosis of human primary

cultures of adenomyotic stromal cells.

その他の言語のタイ

トル

培養子?腺筋症間質細胞に対するジエノゲストによ

るアポトーシス誘導作用の検討

バイヨウ シキュウ センキン ショウ カンシツ サ

イボウ ニ タイスル ジエノゲスト ニ ヨル アポト

ーシス ユウドウ サヨウ ノ ケントウ

著者

山中 章義

発行年

2017-03-10

URL

http://hdl.handle.net/10422/00012252

氏

名 山中 章義

学

位

の

種

類 博士（医学）

学

位

記

番

号 博士甲第７６３号

学 位 授 与 の 要 件 学位規則第４条第１項

学 位 授 与 年 月 日 平成２９年 ３月１０日

学 位 論 文 題 目 Progesterone and synthetic progestin, dienogest, induce

apoptosis of human primary cultures of adenomyotic

stromal cells

（培養子宮腺筋症間質細胞に対するジエノゲストによるアポ

トーシス誘導作用の検討）

審

査

委

員 主査 教授 河内 明宏

副査 教授 宇田川 潤

副査 教授 醍醐 弥太郎

別 賊 様 式3 (課程博士 •論 文 博 士 共 用 )

論 文 内 容 要 旨

% 整 理 番 号 _ — * ( ふ り が な ） や ま な か あ き よ し

7 7 0

氏 4 山 中 章 義

学 位 論 文 題 目

Progesterone and synthetic progestin, dienogest, induce apoptosis of human primary cultures of adenomyotic stromal cells.

(培養子宫腺筋症間質細胞に対するジエノゲストによるアポトーシス誘導作 用の検討） 【研究の目的】 子宮腺筋症とは、本栾子宮内腔に存在するはずの子宮内膜組•織が子宮筋層内に存在する疾 患である。周囲の子宮平滑筋が過形成により肥大し、月経困難症や過多月経の原因となる。 根治療法は子宮全摘術であるが、飪娠希望のある女性では病変のみ切除を行う。病変切除を 行えば症状は緩和するものの、子宫腺筋症組織のみを切除することは不可能であり子宮筋も 同時に切除しなければならない。 そのため好娠中の子宮破裂のリスクは高くなる。 また本術 式は手術を行っても再発率は高い。子 宮 腺筋症に対する薬物療法にG n R Hアナログを用いた 偽閉経療法があるが、低エストロゲンによる更年期症状を認めることが多く長期間の使用は できない。 ジエノゲストは子宮内膜症に対して使用されるプロゲステロン製剤であり、鎮痛作用が強 く、in vitroにて子宮内J3莫症間質細胞の増殖抑制やアポトーシス誘導作用を有することが分 かっている。 臨床診療では子宮内膜症類似疾患である子宮腺筋症に対しても使用され、その 鎮痛作用が有効であることは知られているが、基礎実験によるデータはこれまで報告されて いなかった。 本研究では、ジエノゲストによる子宮腺筋症細胞に対するアポトーシス誘導作用を検討す ることを目的とする。 【方法】 滋賀医科大学附属病院および高の原中央病院にて子宮腺筋症と診断され手術を施行し、病 理組織横査にて子宮腺筋症が確認された2 4名の患者の子宮腺筋症組織を検討に使用した。 子宮腺筋症間質細胞の単離は既報に従った。培 養 し た 細 胞 は 免 疫 染 色 に てVimentin陽性、 Cytokeratin 陰性、a -smooth muscle actin 陰性、von Willebrand factor 陰性であり、間 質細胞であることを確認した。

細胞増殖抑制作用の検討は以下のように行った。

① 培養した子宮 腺 筋 症 間 質 細 胞 を2 4時間飢餓状態とした後、チミジンアナログである

5-bromo-2’ -deoxyuridine (BrdU)を添加した培養液を加える。培養液はコントロール およびプロゲステロンもしくはジエノゲストを各濃度に振り分けて添加した。 ② 2時間後にフロ'-サイトメトリーにてBrdUが取り込まれている細胞数をカウントし、 細胞周期毎の細胞数の割合を算出した。 (備考）1 . 論文内容要旨は、研 究 の 目 的 •方 法 •結 果 •考 察 •結 論 の 順 に 記 載 し 、2千字 程度でタイプ等を用いて印字すること。 2 . ※印の欄には記入しないこと。

(続紙） アポトーシス誘導作用の検討は以下のように行った。

① フローサイトメトリーを用いたアポトーシス細胞数のカウント

1 ) 培養した子宮腺筋症間質細胞にコントロールおよびプロゲステロンもしくはジエ ノゲストを各濃度に振り分けた培養液を添加し4 8 時間培養した。

2 ) 細 胞 数 を 106個に揃えた接、Annexin-V お よ び 7-amino-actinomycinD (7-AAD)を添 加 し 、 1 5 分後にフローサイトメトリーを用いて取り込み細胞数をカウントした。 ② カ ス パ ー ゼ 3 / 7 活性を用いたアポトーシスの検討 1 ) 104 個に揃えた子宮腺筋症間質細胞へコントロールおよびプロゲステロンもしく はジエノゲストを各濃度に振り分けた培養液を添加し4 時間培養した。 2） ルシフエラーゼアッセイを用いてカスパーゼ3 / 7 活14細胞を発光させ、マイクロ プレートリーダ ー を用いて発光量を測定した。 [結果】 ft胞增殖抑制作用| ジエノゲストはプロゲステロンと同様、S 期細胞の割合がコントロール^群と比較し有意に 低下しており、細胞増殖が抑制されていた。 増殖抑制作用は、プロゲステロンおよびジエノ ゲストともに濃度依存性であった。 テポトーシス誘導作用| A n n ex in -V を用いたアポトーシス細胞数およびカスパーゼ3 / 7 活性において、いずれもジ エノゲストはプロゲステロンと同様、 コントロール群と比較しアポトーシス誘導作用の増強 を有意に認めた。 【考察】 プロゲステロンは子宮内膜の癌細胞株のアポトーシスを誘導することが報告されており、 ジエノゲストも子宮内膜症細胞に対し細胞増殖抑制作用やアポトーシス誘導作用を有するこ とが分かっている。 しかしながら、 これまで子宮腺筋症組織の間質細胞に対して、プロゲス テロン製剤による細胞増殖抑制作用やアポトーシス誘導作用を検討した報告は認められなか った。 ジエノゲストはプロゲステロン受容体を選択的に活，性化し、プロゲステロン作用を有する。 ジエノゲストは主席卵胞に作用し、その発育を抑制し血中エストラジオールの産生を抑制す ると考えられている。 子宮腺筋症はエストロゲン依存性疾患であり、血中エストロゲン濃度 の上昇を抑制することにより細胞増殖を抑制すると考えられていた。今回の検討により、ジ エノゲストが子宮腺筋症間質細胞への直接作用により、細胞増殖抑制とアポトーシス誘導作 用を有すると考えられる。 【結 論 】 ジエノゲストは子宮腺筋症間質細胞の細胞増殖抑制作用およびアポトーシス誘導作用を有 する。

別 紙 様 式8 (課 程 博 士 •論 文 博 士 共 用 )

学 位 論 文 審 査 の 結 果 の 要 旨

整理番号 770 氏 名 山 中 章義 論文審査委員 (学位論文審査の結果の要旨） ※ 明 朝 体1 1 ポイン ト 、6 0 0字以内で作成のこと 子 宮 腺 筋 症 は 子 宮 内 膜 が 子 宮 筋 層 内 に 侵 入 し 、子 宮 筋 層 の 肥 大 、過 多 月 経 、月経困難症 を引き起こす疾患である。 同じく子宮内膜が骨盤内の腹膜に異所性に増殖する疾患に子 宮 内 膜 症 が あ り 、 これらは類似疾患として扱われることが多い。 ジエノゲストは子宮内膜症 に 対 す る 増 殖 抑 制 効 果 と 鎮 痛 効 果 を 有 し 、子 宮 内 膜 症 に 対 し て 広 く 使 用 さ れ て い る 。 類似 疾 患 で あ る 子 宮 腺 筋 症 に 対 し て も 使 用 さ れ て き た が 、子宮腺筋症に対するジエノゲストの 効果を検討した基礎的研 究 の 報 告 は こ れ ま で に な い 。 本 論 文 で は ジ エ ノ ゲ ス ト が 子 宮 腺 筋 症 に 対 し て 、子宮内膜症と同様に細胞増殖抑制作用 を有し て い る か 、 またこれまで検討されていなかったアポトーシス誘導作用も有している か に つ い て 検 討 を 行 い 、以下の点を明らかにした。 1) ジ エ ノ ゲ ス ト は 子 宮 腺 筋 症 間 質 細 胞 に お け るG0/G1期 か らS期への移行を抑制するこ とにより、細胞増 殖 を 抑 制 す る 。 2) ジ エ ノ ゲ ス ト は 子 宮 腺 筋 症 間 質 細 胞 に お い て カ ス パ ー ゼ3/7活性を増強させる。 3) ジ エ ノ ゲ ス ト は 子 宮腺筋症間質細胞においてアポトーシス細胞を増加させる。 本 論 文 は 、子宮腺筋症間 質 細 胞 に 対 し ジ エ ノ ゲ ス ト に よ る 細 胞 増 殖 抑 制 作 用 お よ び ア ポ トーシス誘導作用について新たな知見を与えたものであり、 また最終試験として論文内容 に 関 連 し た 試 問 を 実 施 し た と こ ろ 合 格 と 判 断 さ れ た の で 、博 士 （医学） の学位論文に値す るものと認められた。 (総 字 数581字） (平 成2 9年 1月2 3日）