DNA分
析 に よる生物 試料 の
性 別判定 に関す る法 医学的研究
岡 山 大 学 医 学 部 法 医 学 教 室(指 導:何 川 涼 名 誉 教 授,石 津 日 出 雄 教 授)中 井 三 代 子
(平 成3年3月23日 受 稿)
Key words: sex identification, deoxyribonucleic acid (DNA), forensic science, bloodstains 緒 言 法 医 学 に お い て 生 物 試 料 の 性 別 判 定 の 持 つ 意 義 は 大 き く,従 来 は 女 性 の 細 胞 核 のdrumstick1) やsex chromatin2, 3, 4)の形 態 学 的 研 究 が 行 わ れ, ま た新 し くY染 色 体 を蛍 光 染 色 に よ り識 別 す る 方 法 に よ り行 わ れ て き た.こ の 蛍 光 染 色 法 は種 々 の 生 物 試 料 に 適 用 可 能 で あ っ て き わ め て 有 用 で あ るが,性 別 が 判 定 で き るの は 比 較 的新 鮮 な 試 料 に 限 ら れ る4). 近 年 分 子 生 物 学 の め ざ ま しい発 展 に 伴 い, Y染 色 体 に 特 異 的 なDNA配 列 が 研 究 され7, 8),法 医 学 領 域 にお い て もrecombinant DNA technique に よ る 性 別 判 定 が 行 わ れ て い る9-13).また 血 液 お
よ び血 痕 が様 々 な 環 境 要 因 に 暴 露 さ れ,あ る い は 汚 染 され た 場 合 に お け る,抽 出 さ れ たDNAの 回 収 量 お よ び そ の 質 に 関 す る研 究 もい くつ か 報 告 さ れ て い る14, 15, 16).
本 研 究 で はHuman Y-specific probeを 使 用 し たSouthern hybridization analysisに よ る 人 の 血 液,血 痕,唾 液,毛 根 か ら の 性 別 判 定 の 可 能 性 を検 討 した.さ ら に,新 鮮 血 を材 料 と し て 種 々 の 汚染 血 痕 を 作 成 し,あ る い は 解 剖 時 に 得 られ た 血 液 を使 用 し て,実 際 の 試 料 で 問 題 に な る汚 染,熱,腐 敗 等 の 性 別 判 定 に 及 ぼ す 影 響 に つ い て 詳 細 に検 討 し た.ま た 性 別 判 定 が 困 難 で あ っ た 法 医 解 剖2例 に つ い てDNA分 析 に よ る 性 別 判 定 を行 っ た の で併 せ て 報 告 す る. 材 料 と 方 法 ヒ ト男 女 よ り得 ら れ た新 鮮 血2例(男 女,各 1例),な ら び に-20℃ で3∼20か 月保 存 した 血 液50例(男25例,女25例),ろ 紙 に 付 着 させ,乾 燥 させ て 室 温 で 保 存 し た 陳 旧血 痕52例(男42例, 女10例),成 人 よ り得 られ た 唾 液12例(男10例, 女2例),毛 根 が 得 られ る よ うに 強 制 抜 去 し,室 温 で9か 月保 存 した 全 毛24例(男18例,女6例) を被 検 試 料 と し て用 い た. 牛 乳,ヨ ー グ ル ト,み そ,し ょ うゆ,キ ム チ 汁,酵 母 入 り清 涼 飲 料 水,コ ー ラ,ビ ー ル,酒, ラ ム 酒(3倍 希 釈),サ ラ ダ 油,苺,バ ナ ナ,パ イ ナ ップ ル,柿,ぶ ど う,い ち じ く,ト マ ト, 梨,み か ん,キ ウ イ,り ん ご,レ モ ン,コ ー ヒ ー,紅 茶,男 性 唾 液,男 性 汗,機 械 油, Ieucomala
chite green試 薬, luminol試 薬 に よ る汚 染 血 痕 は 以 下 の よ うに して 作 成 し た.汗,機 械 油 汚 染 血 痕 は こ れ ら を染 み 込 ませ た 木 綿 布 に 血 液 を 滴 下 した. 3か 月 を経 過 した 血 痕 を付 着 させ た 木 綿 布 をleucomalachite green試 薬, luminol試 薬 に 浸 し た.他 の 汚 染 物 に よ る汚 染 は 血 液 の20 ∼30%容 量 の 汚 染 物 質 を血 液 と混 和 し,木 綿布 に 付 着 させ た.汚 染 血 痕 は 乾 燥 させ た後,室 温 で32週 間 保 存 した. 解 剖 時 に 得 られ た 多 量 の 血 液(300∼500ml) は 室 温 に 放 置 して 腐 敗 させ た も の を腐 敗 血 試 料 と した. 解 剖 例1.海 岸 に 浮 か ん で い た 胸 部 の 骨,左 上 腕 骨,若 干 の 屍 ろ うの み か ら な る,白 骨 化 し 823
824 中 井 三 代 子 た 性 別 不 詳 の 死 体 の 上 腕 骨 よ り骨 髄 を 採 取 し て 性 別 判 定 を 行 っ た. 解 剖 例2.自 動 車 事 故 に よ り焼 死 し た3人 の う ち の1人 は 焼 損 が 激 し く,外 表 か ら 性 別 判 定 不 能 で あ っ た た め,胸 腔 内 の 血 液 を 試 料 と し て 性 別 判 定 を 行 っ た.ま た3体 の 血 液 を 多 量 (300∼500ml)採 取 し て 室 温 に 放 置 し た も の を 腐 敗 血 試 料 と し た.
Southern hybridization: DNA操 作 の 大 部 分 は 主 と し て 標 準 的 テ キ ス ト17)とそ の 変 法18)に 従 っ て 行 っ た.血 液 は 約10μl,血 痕 は 付 着 し た ろ 紙 も し く は 木 綿 布 約1㎝2 (付 着 血 痕 量 は 血 液10 μlに ほ ぼ 等 し い)を100μg/ml proteinase K, 1.0% SDS添 加DNA lysis buffer (10mM Tris-HCl, PH 7.4; IOmM NaCl; 10mM EDTA) 300μlに 浸 し, 37℃ で 一 晩incubation
後phenol/chloroformで2回, chloroformで 2回 抽 出 し, ethano1沈 殿 を 行 っ た.骨 髄 は0.4 gを100μg/ml proteinase K, 1.0% SDS添 加 DNA lysis buffer 6mlに 浸 し,頭 毛 は1本 の 毛 根 を3mm切 り 取 り, 100μg/ml proteinase K, 1.0% SDS, 0.039M DTT添 加DNA lysis buffer 100μlに 浸 し,唾 液 は2mlを100μg/ml proteinase K, 1.0% SDS添 加DNA lysis buffer 4mlと 混 和 し, 37℃ で 一 晩incubation
後,上 記 の 抽 出 操 作 を 行 っ た.
精 製 し たDNAは 制 限 酵 素Hae Ⅲ (宝 酒 造 株 式 会 社,京 都)で 消 化 し た.消 化 さ れ たDNA は0.8% agarose gel中 で50V, 1.5時 間subma rine electrophoresisを 行 っ た. electrophoresis bufferはTris-borate (0.089M Tris-HCl, pH 8.0; 0.089M boric acid; 0.002M EDTA)を 用 い た. DNAはgel中 で ア ル カ リ
変 性 さ せ,標 準 的 手 法 に よ っ てnylon membrane (Hybond N, Amersham Corp., Arlington Heights, Ⅱ, USA)に 移 し た. DNA probe, '
Human Y chromosome specific repeat' (Amersham)はmultiprime DNA labelling system (Amersham)を 用 い て32Pで 標 識 し た. Autoradiographyは 増 感 紙 を1枚 使 用 し,-60℃
で 行 っ た.
Dot hybridization: Hae Ⅲ で 消 化 し たDNA をnylon membrane (Hybond-N; Amersham) に ス ポ ッ ト し,標 準 的 手 法 に よ っ てhybridization を 行 っ た. Probeは32Pで 標 識 し た'Human Genomic DNA'(東 洋 紡 株 式 会 社,大 阪)を 用
い た.
結 果
Fig. 1 Hybridization pattern of Hae III-treated DNA from a male and a female blood. 1=100ng of DNA, 2=50ng, 3=10ng, 4=5ng, 5=1ng, 6=0.5ng and 7=0.1ng.
Probe,'Human Y chromosome specific repeat'(Amersham),の 感 度 は 新 鮮 血 を 用 い て
よ る男 性 の2.12kb bandの 検 出 限 界 は1レ ー ン あ た りのDNA量0.5ng,女 性 の2.00kb band の そ れ は10ngで あ っ た(Fig. 1, Fig. 2). -20℃ で保 存 し た 血 液10μlを 使 用 して 性 別 判 定 を行 っ た 結 果 をTable1に 示 す.同 量 の 血 液 よ り抽 出 した 女 性DNAか ら は2.12kb bandは 検 出 され な か っ た.血 痕 の付 着 し た ろ 紙1cm2を 試 料 .とした 性 別 判 定 の 結 果 は, 5年 を経 過 し た 男 性 血 痕10例 の う ち4例 に2.12kbbandを 認 め た(Fig. 3). 6年 経 過 の 男 性 血 痕 か ら 同band は 検 出 され ず,低 分 子 領 域 にsmearを 認 め た
(Fig. 4, Table 2).女 性 血 痕 か らはbandは 全 く検 出 さ れ な か っ た. 唾 液 を試 料 と し た 性 別 判 定 で は, agarose gel 中 にethidium bromide染 色 に よ る微 弱 な蛍 光 発 色 を認 め る 試 料 もあ っ たが, Y-specific probe に よ るhybridizationに よ っ て はbandは 認 め られ な か っ た. 1本 の 毛 根 を試 料 と し た性 別 判 定 で は,男 性 試 料 で は2.12kb bandは18例 中16例 に 認 め られ た.性 別 判 定 不 能 の2例 の 男 性 毛 根 は他 の 毛 根 と 肉 眼 的 に 異 な る と こ ろ は な か っ た.女 性 試 料 か らはbandは 検 出 で き な か っ た.
Fig. 2 Effect of DNA amount on dot hybridiza tion.
A=DNA from male blood, B=DNA from female blood, 1=20ng of DNA, 2=10ng, 3=2ng, 4=1ng, 5=0.2ng and 6 =0.1ng.
Table 1 Results of Southern hybridization anal ysis of DNA prepared from male blood
samples stored at -20•Ž for 3•`20
months.
Fig. 3 Southern
hybridization
analysis
of 5
paired male bloodstains
stored for 5
years. The amount of DNA in each right
lane (b) is one tenth of the respective
left lane (a). Sample 1, 2, 3 represent the
2.12kb band, while 4, 5 do not.
Fig. 4 Southern hybridization analysis of 6
male bloodstains stored for 6years.
Y-specific band
is not detected.
Degraded DNA can be seen in the low
molecular-weight-region.
Table 2 Results of Southern hybridization anal ysis of DNA prepared from old male bloodstains.
826 中 井 三 代 子 汚 染 血 痕 に つ い て は,汚 染 血 痕 を作 成 して1, 2, 4, 8, 16, 32週 後 に,汚 染 血 痕 を付 着 さ せ た 木 綿 布2∼2.5cm2か らDNAを 抽 出 して 性 別 判 定 を行 っ た.ヨ ー グル ト,み そ,し ょ う ゆ, 酵 母 入 り清 涼 飲 料 水,キ ム チ 汁 等 の 若 干 の 汚 染 物 質 そ の もの か ら もDNAは 抽 出 さ れ た が, Y -specific probeに よ るhybridization後 , band は 認 め ら れ な か っ た.レ モ ン, leucomalachite green試 薬 汚 染 血 痕 で はDNA lysis buffer中
にDNAを 検 出 で き な か っ た.キ ム チ 汁 汚 染 血 痕 で はagarose gel中 にethidium bromide染 色 に よ る蛍 光 発 色 を認 め た が1週 間 保 存 した 試 料 で す で に どの よ うなbandも 検 出 さ れ な か っ た.'材 料 と方 法'に 述 べ た そ の他 の 汚 染 物 質 に よ る汚 染 血 痕 に つ い て は32週 間 保 存 後,い ず れ の 試 料 か ら も性 別 判 定 は 可 能 で あ っ た(Table 3).汚 染 試 料 の 中 に はmultiple bandsを 認 め る も の も あ っ た(Fig. 5).
Table 3 Possibility of sex identification from DNA isolated from 32-week-old contaminated bloodstains by Southern hybridization.
Fig. 5 Southern
hybridization
analysis
of 6
paired
(5 males and 1 female)
soya
sauce contaminated
bloodstains
stored
for 8weeks.
The amount of DNA in
each right lane (b) is one tenth of the
respective left lane (a). In the lane 4-a,
the 2.47 kb band and its multiples are
evident.
腐 敗 血 で は 男 性4例,女 性1例 を検 討 し た. 解 剖 直 後,お よ び3, 5, 7, 14, 28日 後 に10 μlの 血 液 か らDNAを 抽 出 し て性 別 判 定 を行 っ た.男 性 試 料 か らは5日 な い し7日 経 過 まで2.12 kb bandが 検 出 さ れ た が,女 性 試 料 か らband は 検 出 さ れ なか っ た. 解 剖 例1の 骨 髄0.4gを 試 料 と し,白 骨 化 した 女 性 上 腕 骨 よ り得 られ た 骨 髄0.4gをcontrolと して 性 別 判 定 を 行 っ た. Y-specific probeを 使 っ たhybridization後,被 検 試 料 か らは2-12kb bandが 検 出 され た が, controlか らbandは 検出 さ れ なか っ た.試 料 のDNA濃 度 はcontroI と 同 じ位 か や や 低 め で あ っ た(Fig. 6, Fig. 7). 解 剖 例2の3体 の 焼 死 体 よ り得 ら れ た 多 量 の 血 液 は 室 温 に 放 置 し,解 剖 直 後 お よ び3, 5, 7 日後 に 各10μlを 試 料 と して 性 別 判 定 を行 っ た (Fig.8).解 剖 時 著 しい 焼 損 の た め 性 別 判 定 が 困難 で あ っ た死 体 は,解 剖 直 後 の 血 液 を 試 料 と し た 本 法 に よ る 性 別 判 定 の 結 果,男 性 で あ る こ と が 明 ら か と な り,他 の2体 の 男 性 死 体 の 性 別 も確 認 さ れ た.し か し,解 剖 の3, 5, 7日 後 の 試 料 か ら は い ず れ も2.12kb bandは 検 出 で き な か っ た.
Fig. 6 Southern hybridization
analysis of bone
marrow of unidentified sex. 1=sample
and b=control
(DNA from female bone
marrow).
Fig. 7 Dot hybridization
analysis of serially
diluted samples. A=sample,
B=cotrol.
1=Original,
1/5 concentration
of DNA
loaded for Southern hybridization analy
sis of bone marrow.
2=1/2
dilutions,
3=1/4
dilutions, 4=1/8
dilutions, 5=
1/16 dilutions and 6=1/32 dilutions.
Fig. 8
Southern
hybridization
analysis
of
heated blood of unidentified sex. a=con
trol (DNA from male blood) and b=
sample.
考 察 ヒ トのY染 色 体 に はHae Ⅲ 消 化 に よ っ て 得 ら れ る2.12kb sequenceが 約2000copyあ り, 常 染 色 体 に は こ れ に 類 似 し た2.00kb sequenceが 約100copyあ る8).男 性 試 料 か ら は2.12kbお よ び2.00kbのHae Ⅲ fragmentsが 得 ら れ る が, 女 性 試 料 か ら は2.00kb fragentの み が 得 られ る, 2.00kb fragmentの 数 は2.12kb fragmentの1/ 20で あ る た め, 2.00kb bandのsignalは 微 弱 で あ り,男 性 試 料 の 場 合 に は よ り 強 い2.12kb bandのsignalに 妨 害 さ れ て2.00kb bandは 確 認 で きな い.性 別 不 詳 のDNAか らY-specific probeを 使 っ たSouthern hybridizationに よ って1本 のbandが 得 られ た場 合,男 性 も し くは 女 性 のcontrolが あ れ ば, bandの 位 置 を そ れ と比 較 し て2.12kb bandま た は2.00kb bandと 判 定 す る こ とが で き る.位 置 を指 標 と してband の 識 別 をす る こ とが 時 に 困 難 な こ とが あ るが, そ の 場 合 に は 各 々 のsignalの 強 度 を,性 染 色 体 とは 関 係 の ないprobe,'Human Genomic DNA'
(東 洋 紡)でhybridizationし た 試 料DNAの signalの 強 度 と比 べ な け れ ば な ら な い. 血 液 お よ び 血 痕 中 のDNAの 量 的 変 異 の 大 き さ に つ い て は す でに 言 及 され て お り16, 19),本研 究 に お い て も性 別 判 定 に必 要 な 血 液 量 は-20℃ で 保 存 した もの で0.1μlか ら10klと 差 異 は大 きか っ た(Table 1).な お-20℃ で 保 存 し た 血 液 中 のDNAは 非 常 に安 定 で あ り,保 存 期 間 と高 分 子 量DNA収 量 との 間 に 直 接 の 関 係 は み られ な い と報 告 され て い る19)が,本研 究 に お い て も性 別 判 定 に 必 要 な 血 液 量 と保 存 期 間 との 間 に相 関 関 係 は み ら れ な か っ た. 一 定 の 試料 中 に お け るDNAの 量 的 変 異 性 は 毛 根 に お い て も同様 に大 き く, Higuchiら20)は 新 鮮 な1本 の 抜 去 毛 の毛 根 に含 ま れ るDNA量 は200ng以 下,脱 落 毛 の そ れ は10ng以 下 で あ る と報 告 して い る.我 々 は 新 鮮 な 抜 去 毛 の種 々 に 形 態 の 異 な る毛 根 を試 料 と して 性 別 判 定 を行 っ た が,そ の 結 果,肉 眼 的 に 毛 包 の 付 着 が ほ とん ど認 め ら れ な い 試 料 で は 性 別 判 定 は 不 可 能 で あ っ た.毛 根 は 抜 去 状 態 に よっ てDNA収 量 の 差 が 大 きい た め,内 眼 的 に差 の な い 抜 去 毛 を使 用 し て も時 に性 別 判 定 が 不 可 能 な こ と も あ る.唾 液 中 のDNAは ほ とん ど分 解 して し ま っ て い る よ う で あ る. Gill11)は4年 を経 過 した血 痕 を使 用 し て 性 別 判 定 に 成 功 して い る が,そ の 際,低 分 子 量(<10kb)のDNAの み が 得 られ た例 を報 告 して い る. Gillお よび 我 々 の得 た結 果 は, 4∼5 年 を経 過 した 血 痕 中 のDNAは 数kb程 度 に分 解 して い るが, Southern hybridization analysis に よ る性 別 判 定 は な お 可 能 で あ る こ と を示 唆 し て い る.
828 中 井 三 代 子 痕 を 付 着 させ た ろ 紙1cm2を 使 用 して 性 別 の 判 定 が 可 能 で あ っ た が,血 液10μl相 当 の 汚 染 血 痕 で は 性 別 判 定 の 不 可 能 な場 合 が しば しば 生 じ,最 終 的 に 汚 染 血 痕 の付 着 した木 綿 布2∼2.5cm2を 使 用 し て性 別 判 定 に 必 要 なDNAを 抽 出 す る こ と が で き た.汚 染 血 痕 でDNA収 量 が 少 な い の は, 汚 染 物 質 か らの 白血 球 の 分 離 が 困 難 に な っ た た め と考 え られ る.レ モ ン, leucomalachite green 試 薬 汚 染 血 痕 を 浸 したDNA lysis bufferに は
肉 眼 的 に 混 濁 は 認 め られ ず, ethidium bromide 蛍 光 定 量 法 に よ っ て もDNAは 検 出 で き な か っ
た.こ れ は 恐 ら く 白血 球 が レモ ン 中 のcitric acid ま た はleucomalachite green試 薬 中 のaceti c acidに よ り固 定 さ れ, proteinase Kが 十 分 に 作 用 し な か っ た た め と考 え ら れ る,キ ム チ 汁 汚 染 血 痕 で はagarose gel中 で 蛍 光 発 色 を し た DNAに,汚 染 物 質 由 来,血 液 由 来,外 来 の3つ が 考 え ら れ る. 1つ の レ ー ン に 流 さ れ た 汚 染 血 痕 中 の 汚 染 物 質 は 初 め に 汚 染 物 質 の み を検 討 し た 量 に 比 べ て1/100以 下 で あ り,し か も蛍 光 発 色 は 汚 染 血 痕 の 方 が 強 く,汚 染 物 質 のDNAの み に よ って 蛍 光 発 色 が 得 られ た とは 考 え られ ず, 汚 染 血 痕 は 付 着 後 速 や か に 乾 燥 させ た の で,外 来 微 生 物 が 主 要 なDNAの 供 給 源 と も考 え られ な い.血 液 由 来 のDNAが 主 と してethidium bromideに よ り蛍 光 発 色 した も の と思 わ れ,キ ム チ 汁 汚 染 血 で は 何 らか の 原 因 でDNAが 速 や か に 分 解 さ れ た もの で あ ろ う.汚 染 試 料 の 中 に はHae Ⅲ に よ る不 完 全 消 化 に 由 来 す る と思 われ るmultiple bandsの 認 め られ る も の も あ っ た. Hae Ⅲ に よ る 男 性DNAのpartial digestion
に よ って2.12kbのmultiples, 2.47kb band, 2.47 kbのmultiplesが 生 ず る が,こ れ はY染 色体 のrepeat length unitが2.47kbで あ る た め で
あ る8).
Multiple bandsを 生 じた 試料 に つ いてはDNA の 抽 出,精 製 を2度 繰 り返 して も,やは りmultiple bandsの 出 現 が み られ た.分 解 したDNAの 小 断 片 は制 限 酵 素 の働 き を阻 害 す る が,汚 染 血 痕 よ り得 られ たDNAのpartial digestionに は DNAの 小 断 片 の 存 在 の み な ら ず, DNAに 結 合 し た 汚 染 物 質 も関 与 し て い る と思 わ れ る. 比 較 的 短 期 間(5日 ま で)の 紫 外 線,湿 気, 熱 暴 露 に よ って は 乾 燥 血 痕 中 よ り抽 出 さ れ る DNAの 量,質 に 変 化 は な い14)が,血 液 が 土 砂14, 15),布地 に使 用 さ れ る染 色 液 や 化 学 物 質16)で 汚 染 され る とDNAは 量,質 と もに 様 々 な変 化 を受 け る と報 告 され て い る.本 研 究 で は 実 生 活 上 遭 遇 す る こ とが 予 想 さ れ る様 々 な 汚 染 物 質, な らび に 法 医 鑑 定 上 血 痕 予 備 試 験 に 頻 用 さ れ て い る 試 薬 の,性 別 判 定 に 及 ぼ す 影 響 を詳 細 に検 討 した.本 法 に よ りほ と ん ど の 汚 染 血 痕 か ら性 別 判 定 が 可 能 で あ る と い う結 果 は,法 医学 上 の 試 料 は しば しば 汚 染 され て い る と い う事 実 を考 えれ ば 非 常 に 意 義 深 い も の と思 わ れ る.と りわ けluminol試 薬 は,広 範 囲 に 散 布 して 血 痕 予 備 試 験 に 使 用 す る もの で あ る か ら,こ の 検 査 に 使 用 済 み の 試 料 を再 度 性 別 判 定 に使 用 で き る 利 点 は 大 きい. 白骨 化 した 死 体 の 骨 髄,高 度 な 焼 損 死 体 の 血 液 は性 別 判 定 に 使 用 可 能 で あ っ た.室 温 に放 置 し て5日 か ら7日 程 度 経 過 し,腐 敗 の 始 ま っ た 血 液 か ら も性 別 は 判 定 可 能 で あ っ た.腐 敗 血 の よ うに 湿 度 の 影 響 を うけ た 血 液 中 のDNAの 分 解 は 比 解 的 速 い が,熱 作 用 を う け,さ ら に湿 度 の 影 響 を うけ た 血 液 中 のDNAの 分 解 は さ らに 速 く, 3日 で 性 別 判 定 は 不 可 能 に な っ た.加 熱 血 液 中 の 白 血球 は 解 剖 時 に は す で に 生 存 し て お らず,速 や か なautolysisま た は バ クテ リア の 増 殖 を被 っ た も の と考 え る. 結 論
Human Y-specific probeを 使 用 し たSouth ern hybridization analysisに よ る,ヒ トの 血 液,
血 痕,唾 液,毛 根 を試 料 と した 性 別 判 定 の 可 能 性 を検 討 し,法 医 実 務 上 問 題 と な る腐 敗,加 熱, 種 々 の 汚 染 の 性 別 判 定 に 及 ぼ す 影 響 に つ い て も 検 討 した. そ の 結 果, 10μlの 血 液, 5年 を 経 過 した 血 液 お よび1本 の 毛 根 か ら性 別 判 定 は可 能 で あ った. 白骨 化 し た死 体 の 骨 髄,焼 死 体 の 血 液 か ら も性 別 判 定 は 可 能 で あ っ た.唾 液 か らは 性 別 判 定 が で き な か っ た.汚 染 血 痕 に つ い て は レ モ ン, Ieucomalachite green試 薬,キ ム チ 汁 に よ る 汚 染 を除 い た, 28種 類 の 物 質 に よ り汚 染 さ れ た 後 もな お 性 別 判 定 が 可 能 で あ っ た.室 温 に 放 置 し
た血 液 は7日 ま で は 性 別 判 定 が 可 能 で あ っ たが, 加 熱 後 に 室 温 に 放 置 され た 血 液 は3日 後 に は 性 別 判 定 が 不 可 能 と な っ た. 以 上 よ りDNA分 析 に よ る性 別 判 定 法 は,法 医 学 上 有 用 な 性 別 判 定 法 に な り う る もの と考 え た. 稿 を終 え る にあ た り,御 指 導,御 校 閲 を賜 った何 川 涼名誉 教 授,石 津 日出雄 教 授 に深 甚 な る謝 意 を表 す る とと もに,技 術上 の御 指 導 をい た だ いた 岡 山理 科大 学 池 田正 五 先生 に深謝 い た し ます.ま た 本研 究 に御 協 力 下 さ い ま した教 室員 諸 兄 に心 か ら感 謝 の意 を表 します. な お本論 文 の 要 旨の一 部 は平 成 元年5月 第73次 日 本法 医 学会 総 会,平 成 元 年10月 第6回 日本法 医 学会 中 四国 地 方会,平 成2年4月 第74次 日本 法 医学 会総 会,平 成2年10月 第1回 国際 法 医学 シ ンポ ジ ウム に お いて 発表 した. 文 献
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830 中 井 三 代 子
