四国医誌 25巻2号 3 ～33 9
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,52 6991 （平8〕 33アカントアメーパの電子顕微鏡による形態学的観察
第
2
報抗アメーパ剤による培養アカントアメーパの形態変化
矢 野 雅 彦 ， 塩 田
洋 ， 加 藤 俊 彦 ， 三 村 康 男
徳島大学医学部眼科学教室（主任・ 三村 康 男 教 授〉 （平成8年1 月 23 日受 付）E
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アカントアメーパ角膜炎は，原生動物であるアカン トアメーパ属によ って発症する角膜感染症でありN
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ら7419( ),n
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ら5197( ）によって初め て報告された．わが国においては，石橋ら988(1 〕が初 めて報告し，我々も本症の6例を経験し報告した（塩 田ら，,8891 ,0991 ,1991 4199 .鎌田ら， 199 5). 本疾患の治療には，薬物療法 と手術療法と があ るが， まず第一に薬物療法を充分に行なうことが重要で，現 在までにフラ ジオマイシン， フルコナ ゾーノレ等の種々 の薬剤が有効であったと報告されている〔t
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ら， 1 9 8 5 ；石橋ら， 8981 .塩田ら，1991 ）.しかし特 効薬的 な薬剤は無く，失明に至る症例も多かった．近年， コ ンタク トレンズの洗浄や プーノレの消毒に使用される，p
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（以下PHMB
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ら， 9219 ;a
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ら， ).3991 これらの薬剤によるアカ ン トア メーバの形態変化を電 子顕徴鏡 （以下電顕と略す〉的に検討す ることを目的 として，我々は，先にn v
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における培養アカント アメーパの形態を観察し報告した （矢野ら， 5199 ）.今 回， フラジオマイシンおよびPHMB
添加によ る培養 アカン トアメーパの形態変化を検討 した． 実験材料及び方法 プラスチ ック製組織培養用 フラスコ（岩城硝子社製，7
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用〉を用いて，アカントアメーパ角膜炎の患者角3 4 矢 野 雅 彦 ， 塩 田 洋 ， 加 藤 俊 彦，三 村 康 男 膜から分離したAcanthamoeba iinalletsac を， 37 ℃の Peptone-Y eosucGlt-eas （以下PYG と略す〉液体培地 で培養した．培養後，栄養体は分裂を繰り返して7～01 日間で約l06/mm3 の濃度になる．約2 週間で増殖は停 止し，栄養体は次第に嚢子に変化する．前報（矢野ら， 1 9 9 5 ）では，この培養開始から2 週間目の栄養体を検 体とした．臨床的にフラジオマイシンは， .50 ～ 1
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PHMB は， 020. %で，アカントアメーパに有効とさ れている（塩田ら， 8891 : Larkin ら， 9291 : Jones ら， 1 9 9 3 : Varga ら，3991 ）.今回，この培養 2 週間目の栄 F i g . 1 Tsoitehozrop 7 syda retfa uerxsope ot 0 . 3% f.nicyomidar A number fo llmas v a c u o l e s (V ) aedppear dnuora eht usleucn (N ). K: karyosome, M: m,iadronchoti PM : plasma membrane F i g . 2 Teszoitphoro 12 syda retfa seruxope ot 0 . 3% f.nicyomdiar steoiphozTor became s m a l l e r. However, eht plasma membrane (PM ) was .dneaintaim E : e,mslaoptc N n u c l e u s 養体にフラジオマイシンを0 .05 %, 01. %, 03. %にな るように，また， PHMB を02.00 %, 6000. %, 200. %になるように加え，＋ 5 ℃に保ちながら 1 日2 ， 3 日， 7 日， 1 日目に透過型電顕で観察した．ただし， 02 20. % PHMB のみはアメーパの変性が早く起こるため， 培養8時間後にも観察を行なった．なお参考のため， 光学顕徴鏡（以下光顕と略す〉 にても平行してこれら 薬剤添加後のアカントアメー パを観察した． アカントアメーパは，前報と同様にPYG 培地から 低速の遠沈（102 G, 0 分間〉で集め， pH 71 .4 の燐酸 F i g . 3 Ttehozoirop 3 dsay retfa uerxsope ot 0.002% PHMB. A number fo lalms v a c u o l e s (V ) aredppea ahteenb eht plasma membrane (PM ). The plasma membrane
was deptursid ta some scealp (arrows ). A : a,dohoptnac DV : evitsegid ,leoucav N n u c l e u s I .必 F i g . 4 Ctys 1 day retfa uerxsope ot 006% .O PHMB xocystE (Ex ) and stcydoen (En ) were niht and ralullecartni serutcurts were d e g e n e r a t e d .
アカントアメー パー の電子顕微鏡による形態学的観察
緩衝食塩水 （phosphate derfefub enilas ）で2回洗浄 遠沈した後， BSA (bovine serum albumin ）で、懸濁， 遠沈した．次に，この沈誼に2.5% ク’ルターノレアルデヒ ドを加え，ヘマトクリ ッ ト遠沈器 （00010, G, 5 分間〉 でtellep とした． このtellep を1% オスミウム酸で 後固定，エタノールの系列を用いて脱水し，アセトン・ エポ ック 812 を用いて包埋した．薄切された切片は，酢 酸ウラン，クエン酸鉛で染色し，日本電子 JEM-1200EX 型透過型電子顕微鏡を用いて観察した． F i g . 5 Tesoithozrop 8 hsruo retfa uerosxpe ot 0.02% PHMB. The plasma membrane
(PM ) was .detpursid K : k,aryosome N : n u c l e u s j 523S 籍 軍 ’ 急 車 長 室 罷 現 議 主 主 d F u p A L F i g . 6 Tesoithozrop 3 dsay retfa uerosxpe ot 0.02% PHMB. The plasma membrane (PM ) was tmosal tsol and ralullecartni o r g a n e l l a were osla tsol tcepex karyosome CK ). 3 5 結 果 1 フラジオマイシンによる変化 1 • 1 0.05 %フラジオマイシン添加 薬剤を添加しない場合，培養後2週間目では，光顕 で観察すると多くの栄養体は培地底に付着していた． 0 . 0 5 %フラジオマイシンを加えて 1 日目には，ほとん どの栄養体が培地底から浮遊した．電顕による観察で は，アカント突起の減少が見られたが，細胞内の形態 変化はあまり認められなかった． 7 日目には，少数の 栄養体に細胞質内の軽度の空胞形成が見られた.1 日2 目には多くの細胞が小型化し， ミトコンドリアや脂肪 滴の消失，核の変性などが認められたが，ほぼ正常に 嚢子化するものも認められた． 1•2 0.1% フラジオマイシン添加 0 . 1 %フラジオマイシンを加えて 1 日目には，培地 底からの浮遊とアカント突起の減少が見られたが，細 胞内の形態変化は顕著ではなかった． 3～7 日目にな ると，細胞質内に空胞形成が認められる細胞が出現し た． 空胞形成はまず核の周囲に著明で，やがて徐々に細 胞表面に向かつて増加した．アカント突起は減少した が形質膜は保たれており，細胞表面付近の細胞質も比 較的正常に保たれていた．薬剤無添加の栄養体の細胞 質内に認められた多くのミトコンドリアや脂肪滴は減 少したが，核や核小体は保たれているものが多かった． また，嚢子化するものが少数認められた. 1 日目には2 細胞の小型化が著明で，栄養体の大きさは通常30 ～04 μであるものが， 01 μ以下に縮小していた． アカント突起， ミトコンドリア，指肪滴はほとんど 認められず，核も変性するものが多かったが，形質膜 は保たれていた． 1 ・3 03. %フラジオマイシン添加 0 . 1 %フラジオマイシン添加の場合と同様に， 1 日 目には培地底からの浮遊， 7日目には核周囲の細胞質 内の空胞形成（図1 ), 1 日目には細胞の小型化が認め2
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2 to 04巳心O') アカントアメーパの薬剤による形態変化 Table 1 薬剤添加後の時間および日数 21 日 0.05% フラジオマイシン 7 日 3 日 アカント突起の減少 1 日 培地底からの浮遊（光顕） アカント突起の減少 8 時間 n. d . 剤 j 薬 アカント突起の減少 核周囲の細胞質に空胞形成 培地底からの浮遊 （光顕） アカント突起の減少 n .d 0.1% フラジオマイシン アカント突起の減少 核周囲の細胞質に空胞形成 培地庭からの浮遊（光顕） アカント突起の減少 n.d . 0.3% フラジオマイシン 泳 場 課同w・師団 細胞質の空胞の増加 細胞質成分の漏出 変性嚢子（＋〉 細胞質の穎粒状変性 細胞の輪郭は保たれる 変性嚢子（＋ ） 細胞質の空胞の増加 細胞質成分の漏出 変性嚢子（＋） 細胞質の頼粒状変性 細胞の輪郭は保たれる 変性嚢子（＋） 形質膜の部分的欠損 形質膜付近の細胞質に空胞形成 変性嚢子（＋〉 培地庭からの浮遊 （光 顕 〉 アカント突起の減少 ミ トコンドリアの変性 n.d. 0 .002% PHMB 形質膜が徐々に消失 細胞質の頼粒状変性 変性嚢子（＋） 培地底からの浮遊 （光顕 〉 形質膜の断裂 細胞質の頼粒状変性 ミトコンドリアの変性 n.d. 0.006% PHMB 予雪崩 蒋同州－ M44 瀬川品 細胞の形態を認めない 細胞の形態を認めない 形質膜の消失 細胞質の頼粒状変性 カリオソームのみ残存 嚢子を認めない 形質膜の消失 細胞質の穎粒状変性 変性嚢子（＋） 培地底からの浮遊（光顕） 形質膜の断裂 細胞質の穎粒状変性 ミトコンドリアの変性 0.02% PHMB PHMB
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not done 細胞の小型化 形質膜は保たれる 正常嚢子（＋ 〉 細胞の小型化 形質膜は保たれる 正常嚢子（＋ 〉 細胞の小型化 形質膜は保たれる 正常嚢子（＋ 〉 核周囲の細胞質に空胞形成 形質膜は保たれる 正常嚢子 （ ＋） 核周囲の細胞質に空胞形成 形質膜は保たれる 正常嚢子（＋〉 核周囲の細胞質に空胞形成 形質膜は保たれる 正常嚢子 （ ＋〉珊 燃 アカントアメーパーの電子顕徴鏡による形態学的観察 られた（図2 ). 2 PHMB による変化 2
・
1 0200. % PHMB 添加 光顕で観察すると， 20.00 % PHMB を加えて1 日 目には，フラジオマイシンを加えた時と同様に，ほと んどの栄養体が培地底から浮遊した．電顕による観察 では， 1 日目からアカント突起の減少やミトコンドリ アの変性が認められた． 3日目頃から形質膜の部分的 な欠損（図 3 ，矢印〉が現われ，細胞表面付近の細胞質 中に空胞形成が起こり徐々に増加した（図3）.嚢子化 するものも少数認められたがその嚢子の壁は薄く，内 部構造も細胞質が頼粒状になって粗く， ミトコンドリ アや脂肪滴が見られないなど正常（矢野ら，9591 ）とは 異なっていた． 2 • 2 0.006 % PHMB 添加 光顕で観察すると， 60.00 % PHMB を加えて1 日 目には，ほとんどの栄養体が培地底から浮遊した．電 顕による観察では，多くの栄養体が形質膜の断裂を起 こしていた． ミトコンドリアや脂肪滴はほとんど認められず，細 胞質は頼粒状に変性していた．核やカリオソームは比 較的保たれていたが， 3 日目以後には消失するものが 多くなった．また嚢子化する細胞も少数見られたが， その嚢子の壁は薄く，内部構造も正常とは異なり栄養 体と同様の穎粒状の変性が認められた（図4). その後 2 1 日経過しても，なお変性した細胞の輪郭は保たれて し 、Tこ． 2 • 3 0 0. 2 % PHMB 添加 0 . 0 2 % PHMB を加えると，その直後に，アメーパ は培地底から浮遊し，光顕でも明らかに形態が桑実様 に変化するのが認められた．電顕による観察では， 8 時間後には，形質膜の断裂， ミトコンドリア，脂肪滴， 核の変性，細胞質の頼粒状の変性が認められた（図 5 ）.これらの所見は， 6000. % PHMB 添加後1 日目 と同様であった．また少数の嚢子が見られたがその嚢 子壁は非常に薄く，内部構造も正常とは異り栄養体と 同様の変性が見られた． 1～3日目には，形質膜がほ とんど消失し，細胞質は頼粒状の成分が残存するのみ であった（図6 ). ミトコンドリア，脂肪滴，核などは 消失し，カリオソームのみはしばしば認められた．嚢 子化する細胞は全く無く， 7日目以後には細胞の形態 が全く認められなくなった。 これらの結果を表1にまとめた． 3 7 考 察 アカントアメーパ角膜炎は，原生動物であるアカン トアメーパ属によって発症する角膜感染症であり， Nagington ら（1,)479 senoJ ら7591( ）が，初めて報 告している．その後次第に症例が増加し，米国では 1 9 8 8 年までに002 例以上が報告され，発症の3大危険 因子は，角膜外傷，汚染された水との接触，コンタク トレンズ装用とされている（Sene-Grrhet ら，.)9891 治療法としては，薬物療法と手術療法とがある．本 疾患は，角膜やコンタクトレンズからアメーパを分離 同定することが困難で，細菌，真菌などの他の角膜感 染症，特に単純へルベスウイルスの感染と誤診される ことも多く，失明に至り摘出された眼球や角膜の病理 組織検査で初めてアメーパ感染と診断された症例も報 告されている（Nagington ら，4791 ）.たとえアメーバ 感染と確定診断され，種々の抗生物質や抗真菌剤が使 用されても，進行した症例では薬物治療が非常に困難 であるsneJo( ら， ;5791 Moore ら， 5891 ）.その原 因は，アカントアメーパには栄養体と嚢子の2つの形 態があり，飢餓，pH の変化などによって栄養体は容易 に嚢子に変化し，この嚢子は外壁と内壁から成る厚い 二重壁を持つため乾燥や薬剤に抵抗し，環境が再び適 当な条件になると脱嚢して栄養体になるためで、ある． そのため， 0981 年代前半にアメーパを除去する目的 で，角膜移植術を施行された症例もあるが，移植片に 再発を起こすことが多い（Moore ら，.)5891 1 9 8 0 年代後半になり，アカントアメーパ角膜炎の初 期症状や分離同定法が一般に認識されるようになると， 他疾患との誤診も減少し早期診断が可能になった． Wright ら（1598 ）は初めて薬物のみでの治療に成功 し，アカントアメーパ角膜炎の治療においては薬物療 法を充分に行い，角膜内のアカントアメーパを根絶し てから角膜移植術を行なうべきであると述べている． 本邦では石橋ら（1898 ）が初めて報告したが，やはり薬 物療法を徹底的に行なうことと病巣部のebridementd が重要であると強調している．我々も，本症治療の第 一選択は薬物療法であると考えており，まず種々の抗 生物質や抗真菌剤を投与することにしている． フラジオマイシンは，アミノ配糖体系抗生物質で， リボゾームに作用し遺伝暗号の翻訳を障害して蛋白合 成を阻害する．今回，フラジオマイシンによるアカン トアメーパ栄養体の形態変化を光顕によって検討した ところ， 050.%
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30. %すべてで， 1 日目から 多くの栄養体が培地底から浮遊している．電顕による3 8 矢 野 雅 彦 ， 塩 田 洋 ， 加 藤 俊 彦 ， 三 村 康 男 観察では， 1日目には，薬剤無添加の栄養体と比較し シン添加の場合まず核の周辺から出現したが， PHMB てアカント突起の減少が認められたのみで，細胞内に の場合細胞表面から出現した．これは， PHMB により はあまり変化は見られない．薬剤を無添加の場合，培 形質膜が障害され，その部分から細胞成分が漏出した 養後2週間目では光顕で観察すると多くの栄養体は培 ためで、はないかと考えられる. 0600. %ならびに 20.0 地底に付着しており，その後次第に培地中に浮遊する %では，形質膜の障害がさらに高度で明らかな断裂が 栄養体が増加し，嚢子化していくことが多い．したが 認められるようになり，細胞内の脂肪滴， ミトコンド って，大きな形態変化は見られないものの栄養体の活 リア，核の変性もより高度になる． 動性が低下し，培地底への付着力が弱まり浮遊するの さらにPHMB では，フラジオマイシンと比較して ではなし、かと考えられる． 正常な嚢子化が起こりにくいように思われる．アカン 7 日目以後には，細胞質内に空胞を生じる栄養体が トアメーパ角膜炎が難治性である原因は，嚢子が種々 少数出現する．この空胞は最初，核の周辺に多く次第 の薬剤に対して抵抗力を持つためである．したがって， に細胞質の表面に増加する. 1.0 %と 3.0 %では， 3 栄養体の正常な嚢子化を間害したり，嚢子そのものを ～7 日目から同様の空胞形成のある栄養体が明らかに 死滅させられる薬剤は，アカントアメーパ角膜炎の早 増加し， 12 日経過すると細胞全体が著明に収縮する． 期治療や再発の防止に有効である．多くの抗生物質や これらは，フラジオマイシンの蛋白合成阻止の結果と 抗真菌剤は，アメーパの栄養体には有効であっても嚢 考えられる．フラジオマイシン添加の場合，PHMB 添 子に対しては効果の弱L、ものが多い．しかし， PHMB 加時と異なって形質膜は最後まで保たれており，細胞 は低濃度でも嚢子を死滅させることが可能であると報 内の成分が漏出することはなく，栄養体の形態変化は 告されており （rkinLa ら，2991 ），このことはPHMB PHMB よりも，より緩徐に起こる． がアカントアメーパ角膜炎の有用な治療薬になりうる また少数ではあったが，ほぼ正常に嚢子化するもの ことを示唆している．しかしいずれにしても進行し も認められる．作用発現が緩徐なため，栄養体が嚢子 た症例の治療は困難で，たとえ薬物療法でアメーパを に変化する時間的余裕があるためで，これがアカント 根絶できても，高度な角膜混濁が残れば最終的には角 アメーパ角膜炎をフラジオマイシンで治療した場合の 膜移植術が必要になる．アカントアメーパ角膜炎の完 再発の原因となるものと考えられる． 成期に出現する特徴的な輪状浸潤，輪状潰蕩，円盤状 L a r k i n ら2919( ）は，新しい種類の抗アメーパ剤で 角膜炎，円盤状角膜潰蕩やコンタクトレンズ装用の既 ある PHMB を使用し， 6例中5例に良好な結果を得 往に留意すれば，本症の診断は決して困難ではない． たと報告している．われわれも最近経験した本症の1 したがって薬物療法のみで本症を治癒可能にするため 例に対し，米国ベイラー医科大学眼科nesJo 教授から には，早期診断，早期治療が最も重要であると考えら 供与されたPHMB を使用し，良好な結果を得ている れる． （鎌田ら，.)5991 PHMB は，図7に示すような構造式を持つ多因子 のeniduaigb で，米国では一般にプールや下水の消毒 剤， コンタクトレンズの消毒薬などとして使用されて いたが，これまで感染症の治療薬として使用されたこ とはなかった．大腸菌を用いた実験で，PHMB はその 形質膜に作用し，細胞成分を漏出させ生存に必要な呼 吸酵素を阻害すると言われているseon(J ら， 3991 ). 大 腸 菌 を 用 い た 別 の 実 験 で は ， 陽 性 に 荷 電 し た PHMB 分子が，形質膜の陰性に荷電した酸性燐脂質 と結合し，形質膜の二層構造を歪めることが報告され ている（Broxton ら， 4891 ; Iaedk ら，.)4891 今回， PHMB によるアカントアメーパ栄養体の形 態変化を電顕によって検討したところ， 20.00 %の濃 度では， 3 日目頃から形質膜の部分的欠損と付近の細 胞質中に空胞形成が認められた．空胞はフラジオマイ 結 量五 回 目 PYG 培地中の培養アカントアメーパに PHMB お よびフラジオマイシンを加え，アカントアメーパの形 態変化を透過型電子顕微鏡を用いて観察した.PHMB は，早期から形質膜の断裂を起こし栄養体の変性が著 明で，かつ嚢子にも有効であり，アカントアメーパ角 膜炎の有効な治療薬になるものと考えられた． 謝 辞 本研究を行なうに当たり，試料作製に助言をいただ きました伊藤義博博士， PHMB ならびにフラジオマ イシンを提供してくださいましたsoneJ 教授と日本 化薬株式会社に深謝致します．
39 L a r k i n , D . P ., K.F ,ntognivli S . and t,raD .J.K G . 2199( ) : Treatment fo A canthamo eba k e r a t i t i s with polyhexamethylene b i g u a n i d e . ,l.molahthOp ,99 518 191
Moore , M. B ., McCulle y, J.P ., Luckenbach , M .,
G e l e n d e r , ,.H Newton, ,.C McDonald , M. B. and a,arvesvisV G . .S 985(1 ) : anth-Ac amo ebasititarek deitcossa thiw tfos tctaonc l e n s e s . Am. .J,.lolmhathpO 010 , 369 403 N a g i n g t o n , ,.J Watson, G.P . , P,riafyal JT.,. M c G i l l , ,.J,senoJ .B and .R ,eleetS A. M. .D ( 1 9 7 4 ) : Amoebic noitcefni fo eht L a n c e t , ,2 1537-1540 塩田 洋，水井研治 (9881 ）：眼科領域の日和見感 染症，あたらしい眼科， 5, 1697-1703 塩 田 洋 ・ 内 藤 毅 ・ 小 西 裕 美 子 ・ 谷 英 紀 ・ 大 谷知子・ 三 村 康 男 ・ 伊 藤 義 博 ・ 下 村 嘉 一 ( 1 9 9 0 ）：角膜ヘルベスと誤診されたアカント アメーパ角膜炎の 2 例．臨眼， 4,4 302-303 塩田 洋 （1199 ）：アカントアメーパ角膜炎の臨 床．眼科， 3,3 12707-7 塩田 洋・矢野雅彦・鎌田泰夫・片山智子・三村 康男 (4199 ）：アカントアメーバ角膜炎の臨 床経過の病期分類．臨眼， 4,8 149-11541 S t e h r -G r e e n , J. ,.K ,yeliaB T. M. and -vasveisV r a , G . .S 9198( ) : The ygioloidempe fo Acanthamo eba sititarek ni eht tedUni S t a t e s . Am . J.,.lmoalthhpO ,701 33136-3 Varga , J. ,.H f,olW T . C ., nnseJe , H G .. , Parm -l e y
, V . .C and Rowsey .J.J 93(19 ) :
Com-b i n e d enttmreat fo Acanthamo ebasititarek w i t h ,endimiaporp i,nmycoen and x-helyop a m e t h y l e n e .deinauigb Am. .J.,lmoalthphO 1 1 5 , -4466 07 矢野雅彦・塩田 洋・加藤俊彦・工藤英治・三村 康男 （9951 ）： アカントアメーパの電子顕徴 鏡 に よ る 形 態 学 的 観 察 第1報一培養アカン トアメーパについて－．眼紀， 4,6 5142-14 W r i g h t , . , WP ,hurstar .D and ,senoJ R.B . ( 1 9 8 5 ) : Acanthamoeba sititarek -sseccus f u l l y detaetr .yllacdiem .rB .J,l.olmhatphO 6 9 , 778-782 e y e . 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 1 8 1 9 アカントアメーパーの電子顕徴鏡による形態学的観察 献 B r o x t o n , ,.P Woodcock, P . ,M. ,yetlaeH F . and G i l b e r t , P . 984(1 ) : noitcaretnI fo some p o l y h e x a m e t h y l e n e esdniuaigb and mem-b r a n e dsiiplophshop ni Esch aerihci col.i .J A p p l . eitcaB ,ol. ,75 124115
-Dawson , M . .,W Brown , T . .J and lliT , D G . .
( 1 9 8 3 ) : The tceffe fo cliuaaqB on -htap o g e n i c gnivil-eerf amoebae (PFLA). .1 nI a x e n i c connoitid .sN . Z . .J Mar. hwaterFres Re s,. 7 , 31 -31105
3 Dawson , M. W,. Brown, .T,.J ikciddB , .C.J and
T i l l , G.D . 83(19 ) : The tceffe fo cilquaBa on pathogenic ngvii-leref amoebae (PFLA) . 2. snIdeatlumi laruatn sonitindoc -in eht encserep fo airetcab and/ ro o r g a n i c .rettam N. Z . .J Mar. Fre sh water R e s ., ,71 133 -302 4 I,adek ,.T ,htiwdeL ,.A Bamford, .C .H and Hamm, A . .R 984(1 ) : noitcaretnI fo a p o l y m e r i c deniuaigb edicoib hitw -sohp p h o l i p i d membranes. m.hiociB Biophys . A c t a ., ,967 57-60 石橋康久 ・松本雄二郎・渡辺亮子・本村幸子・安 羅岡一男，石井圭一 ・遠藤卓郎・小山 力・ 八木田健一 (1 988 ) : Acanthamoeba -rek a t i t i sの1例一臨床像，病原体検査法および 治療についての検討－． 日限会誌， 9,2 963 -9 7 2 6 ,senoJ B.D . 993(1 ）：感染性角膜炎の治療におけ る最近の進歩．あたらしい眼科， 1,0 405-410 7 J,seno D . B ., ,aravsevsiV S.G . and Robinson , N. M. 597(1 ) : Acanthamoeba ρo仰 haga -rek a t i t i s and A canthamodba sitievu dteaicsosa w i t h lataf sitilahepcenogninem . Trans . O p h t h a l m o l . .coS UK. , ,59 221-232 8 鎌田泰夫・塩田 洋・片山智子・矢野雅彦・ 三村 康 男 ・ 盛 重 知 (9591 ) : enelyhtemaxhyloPe b i g u a n i d e (PHMB ）点眼液で治癒した両眼 性のアカントアメーパ角膜炎の1例．眼科， 3 7 , -1451449 3 文 2 正 咬 3 7 ず ト ト h v F b L ， 、 b F K M5 い え す v r u t
