QCWS：造血部門

(1)

QCWS ：造血部門抗体解析

東海大学医学部付属病院杉本達哉

(2)

造血部門抗体解析報告内容

①

Quality Control

：造血部門抗体解析報告

②東海大学さい帯血バンクにおける抗

HLA

抗体検査利用紹介

(3)

造血部門抗体解析報告内容

①

Quality Control

HLA

(4)

造血部門参加施設

• QC

参加施設：５８施設

•

参加部門造血部門：

25

施設＇

36.8%

（他部門との重複＇臓器移植・輸血（

臓器移植＋造血移植＋輸血＝１４施設臓器移植＋造血移植＝８施設造血移植＋輸血＝３施設

(5)

造血部門 QC 参加内容

•

病院群：

14

施設検査センター等群：

11

施設

• DNA

＆抗体

-QC

：

18

施設病

8

＋検

10 • DNA‐QC

：

6

施設病

5

＋検

1

•

抗体

‐QC

：

1

施設病

1

造血部門＇抗体参加（：

19

施設＇

29.7%

（クラスⅠ：１９施設クラスⅡ：

16

施設

(6)

造血部門 QC ：抗体検査

抗体検査クロスマッチ

M e th o d A H G - LC T L C T L IF T IC F A M P H A P A K P L U S A b sc re en L A T F lo w P R A L A B S c re en W A K F lo w A H G - LC T L C T L IF T F C X M IC F A

病院 0 0 0 0 0 0 1 4 3 0 0 1 0 検査 3 1 1 2 1 1 0 3 8 5 3 0 1 全体 3 1 1 2 1 1 1 7 11 5 3 1 1

•

抗体検査参加施設：

19

施設

(7)

13thQCWS抗体Sample＇SH2101～2104（

SH2100 ID

Color

code Comment AB O

LCT LS single LS Mixed

HLA Class I HLA Class II MICA I II MI

CA IgG/IgM IgG BNV>=10,000 IgG BNV<10,000 IgM IgG IgG IgG SH2101 Red cross用 A A9+A25+

A32 A9+A25+A32 A1+A2+A30+A69+A

80+B12+B76 Cw7 DR53+DR9+

DR7+DR12+

(MICA01+19

)w + + w

SH2102 Blue B B40+B13 B40+B13+B21+

B27+B44 Cw3+Cw17+ ? (-) (-) + (-) (-)

SH2103 White O Cw1 Cw1+Cw14 B27+Cw3 B27+B61+C

w2+Cw17

DR12+DQ7w eak

(MICA01+07

+18)w + + w

SH2104 Green High

Background O nd - B44+B75(ADS) nd (-) (-) + (-) (-)

(8)

13thQCWS抗体結果

SH2 100 C o lor

C o mment ABO

I II

C o mment LS M ixed

ID c o de II I II HLA

C lass II M IC A I II M IC A

IgG BNV>=10,

0 0 0

IgG BNV<10,0

0 0

IgM IgG IgG IgG

SH2 101 Re d c r oss用 A

0/19 0/16

^{A9 + A25+}_{A3 2}

A1 + A2+A 3 0 +A69+

A8 0+B12 + B76

C w7

DR5 3+DR 9 + DR7+D R1 2+

(MICA01+

1 9 )w + + w

SH2 102 Blu e B

0/19 0/16

^{B4 0+B13}^{+ B21+B2}

7 + B44

C w3+Cw1

7 + ? (- ) (- ) + (- ) (- )

SH2 103 W h ite O

1 /18 1 (1)/14

^{C w1+Cw1}₄ ^{B2 7+Cw3}^{B2 7+B61}^{+ C w2+Cw}

1 7

DR12+DQ 7 we ak

(MICA01+

0 7 +18)w + + w

SH2 104 Gr een

High

O

6 /13 1/15

^- ^{B4 4+B75(}_ADS) ^{n d} ^{(- )} ^{(- )} ⁺ ^{(- )} ^{(- )}

Bac kground

陽性サンプルを陰性とした陰性サンプルを陽性とした判定保留

(9)

13thQCWS抗体正答率

SH2100 Color

Comment ABO I II ID code

SH2101 Red cross用 A 100.0% 100.0%

SH2102 Blue B 100.0% 100.0%

SH2103 White O 94.4% 87.5%

SH2104 Green High

O 66.7% 93.8%

Background

(10)

13thQCWS抗体Sample-SH2103

SH2 100 C o lor

C o mment ABO

I II

C o mment LS M ixed

IgG BNV>=10,

0 0 0

IgG BNV<10,0

0 0

IgM IgG IgG IgG

SH2 103 W h ite O

1 /16 1(1)/16

^{C w1+Cw1}₄ ^{B2 7+Cw3}^{B2 7+B61}^{+ C w2+Cw}

1 7

DR1 2+DQ 7 we ak

(M ICA01+

0 7 +18)w + + w

陽性サンプルを陰性とした：ＬＡＴ判定保留：ＩＣＦＡ＆ＷＡＫＦｌｏｗ

○陽性サンプルを陰性とした要因は不明＇ＬＡＴは造血部門で1施設のみ（

○判定保留は複数の検査よる結果の乖離？＇他と比較し全体的にスコア４を多く認めた（

(11)

13thQCWS抗体Sample-SH2104

SH2 100 C o lor

C o mment ABO

I II

C o mment LS M ixed

IgG BNV>=10,

0 0 0

IgG BNV< 10,0

0 0

IgM IgG IgG IgG

SH2 104 Gr een High

O

6 /19 1 /16

^- ^{B4 4+B75(}_ADS) ^{n d} ^{(- )} ^{(- )} ⁺ ^{(- )} ^{(- )}

Bac kground

陽性サンプルを陰性とした：FlowPRA, ICFA+WAKFlow, LCT, FlowPRA, LCT, LAT 陰性サンプルを陽性とした：LABScreen＇スコア４：陽性と判定（

○陽性サンプルを陰性とした要因：High Background、測定感度など

○陰性サンプルを陽性とした要因：High Background、結果の解釈など

(12)

13thQCWS抗体Sample-SH2101

SH2 100 C o lor C o mment ABO

I II

^{C o mment} ^{LS M ixed}

ID c o de II I II HLA C lass II M IC A I II M IC A

IgG BNV> =10,

0 0 0

IgG BNV< 10,0

0 0

IgM IgG IgG IgG

SH2 101 Re d c r oss用 A

0/19 0/16

^{A9 + A25+}_{A3 2}

A1 + A2+A 3 0+A69+A 8 0+B12+B 7 6

C w7 DR5 3+DR9+D R7 + DR12+

(M ICA01+

1 9 )w + + w

抗原 / ID 6 7 8 11 13 20 21 34 35 36

DR 1 4 1 1 1 1 1 8 1 1 1

DR4 1 1 8 1 4 1 4 1 1 1

DR7 8 8 8 8 4 8 8 8 8 8

DR8 1 1 1 1 4 1 1 1 1 1

DR 9 8 8 8 8 4 8 8 8 8 8

DR 10 8 8 8 8 8 8 8 8 1 8

DR 11 1 1 1 1 8 1 1 1 1 1

DR12 8 8 8 8 4 8 8 8 8 8

DR13 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

DR14 1 1 8 4 1 1 8 1 1 8

DR 15 1 1 1 1 4 1 1 1 1 1

DR 16 1 1 1 1 4 1 8 1 1 1

DR17 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

DR18 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

DR51 1 1 1 1 4 1 1 1 1 1

DR52 1 1 1 4 1 1 8 8 1 8

DR53 8 8 8 8 4 8 8 8 1 8

(13)

まとめ：造血部門抗体解析

• QCWS

造血部門としての抗体参加は

29.7

％であった。

•

検査方法は

FlowPRA

、

LABSrceen

、

WAKFlow

が多くを占めていた。

•

検査センター群＇主体：日赤（では複数の検査法を実施。

•

13thQCWS抗体正答率は66.7～100％であった。

(14)

問題点：造血部門抗体解析

•

抗

HLA

抗体を有するサンプルであるが、検査結果が陰性となった施設が散見された。

＇

High Background

（

•

抗原別の抗体反応態度が施設により違いを認めた。

•

施設により抗

HLA

抗体検査結果が乖離する

＇低力価、カットオフ設定など（

(15)

造血部門抗体解析報告内容

①

Quality Control

HLA

(16)

東海大学さい帯血バンクでのコーディネート検査

•

臍帯血＇セグメント解凍検査（

細胞数、

Viability

、

CD34

測定、

CFU-GM

、

HLA

•

患者検体

HLA

、抗

HLA

抗体検査

(17)

解凍確認検査の依頼票 ^{* C B N O}

20071801

cmemo

登録基準

2009/09/05 出力日：

11.0 bag内NC~8

依頼者：　　　　　

メイン

HLA確認検査 6.5 総CD34数

21.2 総CFU-GM数

○ jj-処理 HLAｽﾐ

j-HLA

○ jj-検査

バンク・入力　　　　　　　　　　　　

◆ｾｸﾞﾒﾝﾄは０ﾀﾝｸ、ﾗｯｸno4段目の箱に保管中です◆

輸血検査室メモ、連絡事項など：

◆お手数ですがCFUの仮判定(1W)結果はｺﾋﾟｰにて、その都度ご報告下さい◆

□ 解凍細胞＇ﾊﾞﾝｸ（

99.3

viablity

生細胞2万個藩種

担当者：　　　　　　

□ 解凍CFU＇輸血室（

□1W仮判定日 / / ＇担当：　　　　　　（ □２W最終判定日 / / ＇担当：　　　　　（

□ 解凍CD34＇輸血室（

ＣＢ保存時情報

ｼｮ解凍memo

×1000÷20000=

×

× 24.7 ^%

ﾊﾞｯｸﾞvol

11.0

保存ﾊﾞｯｸﾞ内NC

＝ 24.7 保存ﾊﾞｯｸﾞ量

成田赤十字病院・血液腫瘍科

施設名：

5 5 . 0 Pt.体重(kg)：

10.0

解凍segWBC

93.9

seg1生存率解凍seg予測回収率 90.9

1638 患者SEQ：

43.1

解凍seg1WBC/ul

233.32 解CD34/ul

5.8

解凍CD34数

88.7 CD34回収率

18 解GM個数

9.9

解凍GM総数

46.7

GM回収率(%)

33 ﾈﾂ処理種別　

1.8

解凍seg生存WBC/kg

2.0

W B C / 患者 C F U - G M / 患者 0.4

0.2

解凍CFU-GM

1.2

C D 3 4 / 患者

1.0

解凍CD34

血液腫瘍科

科名：

09年 09月 25日 (金 ) 出庫予定日：

佐々木ひとみ分離者

AML

DIAG：

第一寛解

STAGE：

小児1.0/kg,成人0.5/kg以上を推奨女

SEX：

61.3

年齢：不適GVHSD： 2:

2:

不適RJCSD：

1:申込、

0/2:公開 3:ｺｰﾃﾞｨﾈｰﾄ中 9:出庫 10:移植

x10⁸個 x10⁷個/kg

x10³

x10⁵個 x105個／kg

x10^5個/kg

x10⁵個

□ ＇輸血室（

38.5 CFU-GM

3.5 CFU-mix

23 BFU-E x10⁶個

x10⁶個

x10^5個/kg x105個／kg

x10^7個/kg x10⁸個

× ×^vol^24.7^÷1000=

◆測定後、DNA抽出し、HLA確認検査用とする◆

2009/08/20 seg2or3解凍日

2009/08/20 seg1or2解凍日

担当：　　　　　　　　　

40

在胎週

％

検査日測定法

SAMPLE種 VIABILITY

検査担当者 WBC(^3/ul) 生WBC(^3/ul) 備考(volumeなど)

2007/09/26 7AAD

fresh 92.79

輸血室

2007/09/26 ﾄﾘﾊﾟﾝﾌﾞﾙｰ

fresh 99.3

佐々木ひとみ

thawed seg1 93.9

さい帯血ﾊﾞﾝｸ 43.1 40.5

thawed seg2 96.8

輸血室 50.5 48.9

2009/08/21 7AAD

thawed seg2 65.21

輸血室 44.58 29.07

播種日 SAMPLE CFUGM測定法 CFU-mix/2万 CFU-GM/2万 BFU-E/2万 CFUmemo 2007/09/26 FreshHES分離後 MethoCult GF H4034 3.5 38.5 23

2009/08/21 解凍segment MethoCult GF H4034 1 18 20.5

CD34%

CD34/ul CD34測定法

sample 検査日 CD34memo

0.68 324.49 ISHAGE

FreshHES分離後 2007/09/26

0.8 233.32 ISHAGE

解凍segment 2009/08/21

(18)

HLA抗体検査報告書

2009190

検査室受付番号

2009年 09月 04日 (金 )

検査受付日

K.C

名前（検査対象者）

備考

k.c

2

Ａ１

24

Ａ２

39

Ｂ１

75

Ｂ２

7

Cw１

9

Cw２

9

ＤＲ１

15

ＤＲ２ＤＱ１ＤＱ２

検索型

2009年9月10日出力日：

【HLA】

実施者　　　　　　確認者　　　　　　　

＋

ClassⅠ

抗体検査結果 ClassⅡ

抗体検査結果

－

抗1 HLA抗体クラスⅠ特異性は、Cw5 ,A7 4 ,A3 3 ,A3 0 ,A2 6 ,A6 8 ,A2 9 です．

HLA抗体検査結果コメント

2 9 1 .8 6 N C

1 0 1 2 1 .4 6 PC 無

A b s o rb se ru m

s amp le

2 7 8 .7 8 b ead 0 1 9

1 6 8 .0 7 b ead 0 2 1

1 5 2 0 6 6 b ead 0 2 6

3 3 6 .4 6 b ead 0 2 8

2 6 4 .5 b ead 0 2 7

2 0 9 .2 3 b ead 0 3 3

0 0 1 9 Ratio

0 0 2 1 Ratio

0 0 2 6 Ratio

0 0 2 7 Ratio

0 .8 9 0 2 8 Ratio

0 0 3 3 Ratio

n e g 0 1 9 判定

n e g 0 2 1 判定

n e g 0 2 6 判定

n e g 0 2 7 判定

n e g 0 2 8 判定

n e g 0 3 3 判定

9 4 .7 3 b ead 0 5 7

1 0 3 .7 6 b ead 0 5 8

1 0 6 .1 b ead 0 5 9

0 .0 0 0 5 7 Ratio

0 .0 0 0 5 8 Ratio

0 .0 0 0 5 9 Ratio

n e g 0 5 7 判定

n e g 0 5 8 判定

n e g 0 5 9 判定

ﾘﾝﾊﾟ球交叉試験判定

LCT 判定

判定　Ratio 1.8 > 陽性

　　　　Ratio 1.2～1.8 =undetermine 　　　　Ratio 1.2 < 陰性

抗体 Ⅱ 特異性

－

MI C抗体結果　

n e g 0 1 6 判定

n e g 0 1 7 判定 0 0 1 6 Ratio

1 1 4 .8 b ead 0 1 7

1 4 4 .3 9 b ead 0 1 6

0 0 1 7 Ratio 3 1 9 .0 4

b ead 0 4 6

3 2 6 .7 4 b ead 0 4 8

3 8 3 .6 3 b ead 0 4 9

2 9 6 .5 9 b ead 0 5 2

5 3 5 .2 1 b ead 0 5 0

4 4 5 .4 9 b ead 0 5 3

0 .5 4 0 4 6 Ratio

0 .6 9 0 4 8 Ratio

1 .8 3 0 4 9 Ratio

4 .8 6 0 5 0 Ratio

0 .0 9 0 5 2 Ratio

3 .0 7 0 5 3 Ratio

n e g 0 4 6 判定

n e g 0 4 8 判定

p o s 0 4 9 判定

p o s 0 5 0 判定

n e g 0 5 2 判定

p o s 0 5 3 判定

1 4 3 .4 7 b ead 0 6 0

1 0 2 .3 2 b ead 0 6 1

0 .0 0 0 6 0 Ratio

0 .0 0 0 6 1 Ratio

n e g 0 6 0 判定

n e g 0 6 1 判定

20071801

提供予定CB番号

(19)

臍帯血 CB　　　　　　の出庫・確認検査依頼票

20071801

cmemo 登録基準

2007年09月26日(水) CB処理日

有・保存 CB回収・使い道 1

経過日 1 6 3 8

患者登録SEQ

A 2 A1

A 24 A2

B52 B1

B75 B2

Cw9 C1

Cw12 C2

0403 1502 DR4 DR1

DR15 DR2 09/08/20

ｾｸﾞﾒﾝﾄ1

09/08/20 ｾｸﾞﾒﾝﾄ2

Ⅸ-62 ｾｸﾞﾒﾝﾄ3

解凍memo

処理

入 → 在 stock

場所

2009/09/10 依頼者：　　　　出力日：

メイン

0201 2402 5201 1511 0303 1202

A ABO

+ Rh 1

sex(1=M,2=F) 10.00 ｼｮ解凍WBC計算

109 採取量

13.8 採取細胞数 (8乗 )

11.80 保存細胞数 8乗

33 ﾈﾂ処理種別　

使途：

0.68 CD34%

324.5 ccd34/ul

3.5 mix/2万 38.5 GM/2万

CFU

6.5

総CD34数(^6)

21.18

総CFUGM数(^5)

CD34 保存時：

39 ｻﾝﾌﾟﾙbox

5-44-G position2

90.9

生細胞回収率２

母 HLA型 A2

ma1 A24 ma2

B62 mb1

B75 mb2

DR4 mDR1

DR14 mDR2

成田赤十字病院・血液腫瘍科^施設名 2009年 09月 25日 (金 ) 出庫予定日

Ｋ．Ｃ

ｲﾆｼｬﾙ

ｼｰﾙ添付

mc1 mc2 Nipro;F025

凍結ﾊﾞｯｸ：破損：有・無

ｾｸﾞﾒﾝﾄ：無・　　本保存出庫ﾗｯｸ移動日：　　　　年　　月　　日

作業者：　　　・　　　　移動先(出庫ﾗｯｸ)：　　　-　　

*ｼﾞｯﾌﾟﾛｯｸ、取説は全例に添付しNipro,F025には専用ｺﾈｸﾀｰ(IP-5-N)を2個添付する。

*準備完了後、確認検査をお願いします。

※CB highreso検査済はHLA型の確認をして下さい。

93.9 解凍seg生存率(%)

出庫準備

※　　　　　　までに臍帯血ｾｸﾞﾒﾝﾄによるHLA型の確認報告して下さい。

（CB-highと母は、後日報告可）

HLA

臍帯血HLA型アリル目的　□出庫準備

　□出庫前最終HLA確認/Low 　□HLA詳細情報/High 　□解凍ｾｸﾞﾒﾝﾄの機能検査情報

検査室メモ：

<low-2桁>

□A

□B 　□C

□DR

<high-4桁>

□A

□B

□C

□DR

臍帯血　　　母

□Segment確認　□保存DNA

09月18日

対象ｻﾝﾌﾟﾙ

最終報告ﾚﾍﾞﾙ

申込患者

□母確認　□保存DNA 　　＜注意＞　

今後の作業に　ついては必ずバッグ本体も　ダブルチェック　を行うこと！

(20)

Minoko Takanashi, Koki Fujiwara, Hidenori Tanaka, et al：The impact of HLA antibodies on engraftment of

unrelated cord blood transplants ： TRANSFUSION, Volume 48 791―792, 2008.

(21)

HLA 抗体検査結果による CB コーディネート

•

患者が抗

HLA

抗体を保有しない：

CB

出庫

•

患者の抗

HLA

抗体が該当臍帯血に反応しないと考えられる

抗

HLA

抗体保有を伝達：

CB

出庫

•

患者の抗

HLA

抗体が該当臍帯血に反応すると考えられる

抗

HLA

抗体保有を伝達：主治医に

CB

利用の判断を委ねる

(22)

まとめ

•

臍帯血移植において抗

HLA

抗体検査は重要

•

東海大学さい帯血バンクでは患者が抗

HLA

抗体を保有し、該当臍帯血に反応する場合は移植施設に報告し、

CB

の利用をうかがう

•

抗

HLA

抗体力価報告が困難である

•

患者が抗

HLA

抗体を保有している場合

低力価で該当臍帯血と反応するケースでの、

臍帯血移植？？

QCWS：造血部門