厚生労働科学研究費補助金（新型インフルエンザ等新興・再興感染症研究事業）
平成 25 年度 分担者研究報告書
インフルエンザ経鼻ワクチンの体内動態評価
分担研究者： 長谷川秀樹 （国立感染症研究所 感染病理部）
協力研究者： 原田典弘 （浜松ホトニクス株式会社 中央研究所 PET センター）
鈴木忠樹 (国立感染症研究所 感染病理部第)
相内 章 (国立感染症研究所 インフルエンザウイルス研究センター)
研究要旨: 現行インフルエンザワクチンは皮下に注射されるため、全身性の IgG 抗体を誘導できるが、
ウイルスの侵入部位である気道に粘膜免疫を誘導できない。インフルエンザウイルスの感染防御には、粘膜 免疫の中でも上気道粘膜上への分泌型 IgA 抗体誘導が特に重要であることが、マウスを用いたモデル実験 等で明らかにされている。この粘膜免疫を誘導するためには、インフルエンザワクチンを鼻腔領域内に噴無す る経鼻インフルエンザワクチンが有効である。我々は、経鼻インフルエンザワクチンの実用化に向けた研究を 行っている。経鼻インフルエンザワクチンの実用化を考えた時、ワクチン接種により誘導される抗体応答の評 価に加えて、その安全性を証明する必要がある。本研究課題では、経鼻インフルエンザワクチンの安全性を 評価するために PET を用いて噴無したワクチンの動態を明らかにすることを目標とし、今年度は PET に用い るインフルエンザワクチンの 18F 標識の条件検討を行った。
A. 研究目的
インフルエンザの大流行を抑制するには効果的 なワクチンが必要不可欠である。しかしながら、変 異を繰り返し毎年のように抗原性を変化させるイン フルエンザウイルスにおいては、ワクチン株と実際 に流行するウイルス株の抗原性が大きく乖離する ことで、ワクチン効果が著しく低くなる場合がある。
そのため、現行のワクチンより有効性の高いインフ ルエンザワクチンの開発が求められている。
有効性の高いワクチンを開発するためには、
生体内におけるインフルエンザウイルスの感染様 式と感染防御に寄与する免疫を正しく理解する必 要がある。インフルエンザウイルス感染の標的細胞
は気道粘膜上皮細胞であり、感染防御に最も効果 的なのは気道粘膜上に多量に存在する分泌型 IgA 抗体であると考えられている。注射により皮下に接 種される現行の季節性インフルエンザ HA ワクチン
（エーテルおよび界面活性剤処理によりインフルエ ンザウイルスを破砕し、ヘマグルチニンを主要抗原 とするワクチン）では、血液中のウイルスに対する IgG 抗体のみが誘導され、分泌型 IgA 抗体の誘導 は認められない。経鼻インフルエンザワクチンは、
血液中の IgG 抗体に加えて感染の場となる上気道 粘膜上に分泌型 IgA 抗体を誘導することが明らか になっている。さらにこの分泌型 IgA 抗体は、抗原 性が変化したウイルスに対しても感染阻止効果が
高いこと（交叉防御能）がマウスを用いた実験から 明らかになっており、現行ワクチンより有効性の高 いワクチンであると考えられる。
我々は、不活化全粒子インフルエンザウイルス を抗原とした経鼻インフルエンザワクチンの開発研 究を行っている。近年では、健康成人ボランティア を募った臨床試験を実施し、経鼻不活化インフルエ ンザワクチンの実用化に向けて着実に研究を進め ている。現在までの所、動物やヒトにおいてワクチ ン接種に伴う重大な副反応は見られておらず、この ワクチンの安全性も高いと考えられる。しかしなが ら、多人数に接種されて初めて露見する副反応を 事前に適切に評価することは非常に困難である。さ らに、これまでにヒトで認可された経鼻噴無により 接種される不活化ワクチンは存在しないことから、
この投与ルートにおける安全性評価の指標も存在 しない。一般に医薬品の安全性を評価する上では、
製剤の体内動態を把握しておくことが非常に重要 であるため、本研究では経鼻不活化ワクチンの安 全性評価の基礎を築くために PET 検査用に放射性 同位体で標識したワクチン製剤をマウスもしくはサ ルに経鼻投与し、その体内動態を科学的に明らか にすることを目的としている。本年度は、実際に不 活化全粒子インフルエンザワクチンの18F 標識に関 する検討を行った。
B. 研究方法 １）材料
不活化全粒子インフルエンザワクチンは、一般財団 法人阪大微生物病研究会観音寺研究所より供与し て頂いた 3 価不活化全粒子インフルエンザワクチン
（A(H1N1)株として A/California/7/09 由来のワクチ ン製造株 X-179A、A(H3N2)株として A/Victoria/361
/11 由来の IVR-165、B 型株として B/Wisconsin/1/
10 由来の BX-41A を含む）、ならびに濃縮単身不活 化全粒子インフルエンザワクチン A-179A を用いた。
なお、3 価不活化全粒子ワクチンに含まれる HA 濃 度は各ウイルスに対して180 µg HA/mL、濃縮単身 不活化全粒子ワクチン X-179A の HA 濃度は 1500 µg HA/mL である。
2）ゲル濾過クロマトグラフィーカラムを用いたワクチ ン製剤の精製
不活化全粒子インフルエンザワクチンのゲル濾過 クロマトグラフィー精製は、FPLC クロマトグラフィー システム AKTAprime plus により行った。サンプルを 0.45 μm フィルターでろ過することにより清澄化を 行った。500ul のサンプルを溶出バッファー（0.01M リ ン酸バッファーpH7.4）で平衡化したゲルろ過クロマ トグラフィーカラム（Superose 12 10/300 GL, GE）に アプライし、さらに 36ml の溶出バッファーを送液し、
溶 出 液 を 0.5ml ず つ 分 取 し た 。 全 て の 送 液 は 0.5ml/min で行った。
3）HA 含量の定量
分画前後のサンプルに含まれる A(H1N1)、A(H3N2) および B 型ウイルスの HA 含量を一元放射免疫拡 散試験（Single Radial Immunodiffusion、SRD 試験）
にて測定した。SRD 試験は、現行季節性インフルエ ンザ HA ワクチンに関する国家検定の手順に従い 実施した。SRD 試験直前に、各サンプルに関して界 面活性剤 Zwittergent 処理を実施し、希釈を行った
（希釈倍率；1.0、0.75、0.5 および 0.25 倍）。各ウイル スに対する参照抗血清を含む 1%アガロースゲルに 直径 4mm の穴をあけ、界面活性剤処理済みのサ ンプルを添加した。サンプルがゲルに吸収されたの
を確認し、ゲルを洗浄後、20℃で 18 時間インキュベ ートした。ゲルを乾燥させ Coomassie Brilliant Blue 染色を行い、沈降輪の直径を測定した。測定した沈 降輪の直径をもとに平行線定量法により、各サンプ ルに含まれる HA 量を算出した。なお、HA 含量既知 の各ウイルス抗原を標準抗原として使用した。
4) ワクチンの 18F 標識
不活化全粒子インフルエンザワクチンを 18F 標識す るための、[18F]SFB 標識体の合成を行った。その 後、不活化ワクチンとのカップリング反応を行い、
18F 標識を行った。標識された不活化ワクチンは、
上述の研究方法 2)に則り、ゲルろ過クロマトグラフ ィーカラム（Superose 12 10/300 GL, GE）にアプライ し、未反応の[18F]SFB 標識体を除去した標識ワク チンを void volume に回収した。
5) PET を用いたマウスにおける 18F 標識ワクチン の動態解析
上述の手順で回収された 18F 標識不活化全粒子イ ンフルエンザワクチンをマウスに経鼻接種（片鼻 2.5µL、両鼻で計 5µL）し、PET を用いてその動態を 解析した。マウスは 6-8 週齢の雌 BALB/c マウスを 用いた。動物への処置は国立感染症研究所および 浜松ホトニクス株式会社の定める動物実験実施規 定に則り、苦痛を与えないように考慮した。
C. 研究結果
昨年度の検討により、不活化全粒子ワクチンの [18F]標識を行う際に、未反応の[18F]SFB 標識体を 除去し、標識されたワクチンのみを精製する方法と して、Superose 12 10/300 GL を用いたゲルろクロ マトグラフィーが最適であることが明らかにしている。
今年度は実際に、PET に用いる全粒子不活化イン フルエンザワクチンに対する標識の検討をおこなっ た。
最初に、現行の季節性インフルエンザワクチン と同じく 3 種類のインフルエンザワクチン（A(H1N1), A(H3N2)および B 型）を含む 3 価全粒子不活化ワク チンに関して、Superose 12 10/300 GL を用いたゲ ルろ過クロマトグラフィーを実施し、void volume に 溶出されるサンプルに関して、SRD 試験を実施し A(H1N1)、A(H3N2)および B 型の HA 含量を測定し た。その結果、各ウイルス HA 量として 90 µg をゲル ろ過カラムに添加した時、溶出される void volume ピ ークフラクション（No.15 と 16 の計 1mL）に関して、
A(H1N1)および A(H3N2)の HA 量はそれぞれ 39.6 µg と 59.6 µg となり、44〜63%の回収率で分画できる ことが明らかになった（表 1）。しかしながら、B 型ウ イルスに関しては、かなりの損失が見られた（表 1）。
B 型ウイルスに関しては十分な HA 量を回収できな いものの、A(H1N1)および A(H3N2)に関しては、現 行インフルエンザワクチンの接種量（15 µg HA/500 µL/dose）と同等の HA 量を回収できることが明らか になった。そこで、この 3 価不活化全粒子ワクチン に関して 18F 標識を試みたが、標識されたワクチン を得ることが出来たものの PET を行うには不十分 な回収率となることが判明した（結果は未掲載）。
ゲルろ過操作により回収できる HA 量がウイル スにより異なってしまうこと、また濃度が薄く PET 実 施には不十分であることが判明したため、A(H1N1) 単身不活化全粒子ワクチンでの PET 実施に切換え、
濃縮することで 1.5 mg HA/mL とした不活化全粒子 ワクチンの 18F 標識を試みた。その結果、放射線量 ならびに回収タンパク量として、PET 実施に十分な 18F 標識 X-179A ワクチンを回収できることが明ら
かになった（図 1、想定値として約 300 MBq/0.3 mg HA/1 mL）。そこで、予備的な試験としてマウスに対 して 18F 標識 X-179A の経鼻接種を行い、その動態 に関して PET を用いて検討した。標識ワクチン単独 の経鼻接種では、口腔内に流入したワクチンが、飲 み込まれ胃へ移動する様子が観察された。
D. 考察
経鼻インフルエンザワクチンは鼻腔内にワクチ ンを接種するワクチンであるため、嗅球ならびに嗅 神経をへて脳への影響を危惧する意見がある。本 研究課題では、経鼻インフルエンザワクチン接種に 伴う安全性を検証することを目標とし、PET を用い て鼻腔領域内に噴霧したワクチンの動態を明らか にすることを目的とした。今年度は、不活化全粒子 ワクチンの 18F 標識に関する検討を行った。近年、
現行のインフルエンザ HA ワクチンと比較して、精製 ウイルスを不活化して作製される不活化全粒子ワ クチンは、免疫原性が高いことが科学的に証明さ れた。そこで我々は、現行の HA ワクチンと同様に、
3 種類のウイルスから作製される不活化全粒子ワ クチンを含む経鼻インフルエンザワクチンの開発・
実用化を目指している。
マウスあるいはサルを用い、18F 標識した 3 価 不活化全粒子ワクチンを用い PET を実施すること を想定し、3 価不活化全粒子ワクチンの 18F 標識な らびに標識ワクチンの精製法の検討を行った。しか しながら、18F 標識体を用いてワクチンの標識を行 った後、未反応の 18F 標識体を除去する必要があ る。今回使用した 3 価不活化全粒子ワクチンに関し ては、Superose 12 10/300 GL を用いたゲルろ過に よるワクチン回収の条件検討をおこなったところ、
ゲルろ過後に得られるサンプルに関して、B 型のワ
クチンの回収が行えないこと、A(H1N1)と A(H3N2)に 関してはその収量が異なることが明らかになった。
したがって、本研究課題における PET 試験では、測 定に十分な量の 18F 標識不活化全粒子ワクチンを 回収することを優先し、単身 A-179A 不活化全粒子 ワクチンを用いることとした。また、この検討の過程 において、B 型不活化全粒子ワクチンを回収できな い理由として、電子顕微鏡を用いた検討から、今回 用いた B 型ワクチンが非常に業種しやすい性質を 有している可能性が考えられた。ワクチンの凝集は、
接種効率低下や、抗原の取り込みに影響を及ぼす 可能性が高いため、今後不活化全粒子ワクチンを 抗原とした 3 価経鼻インフルエンザワクチンを開発 していく上で、不活化条件等を改めて検討する必要 性があると考えられる。
次に、阪大微生物病研究会から提供して頂い た濃縮した単身 X-179A 不活化全粒子ワクチンを 用いて、18F 標識に関する条件検討を実施した。そ の結果、標識操作後に未反応の 18F 標識体を除く ゲルろ過操作における void volume に PET を行うた めに十分な放射線量を有する標識不活化全粒子 ワクチンを回収することができた。また、予備的なマ ウスへの 18F 標識ワクチン経鼻接種における PET 解析からは、投与したワクチンが鼻腔領域から口 腔内に流れ込み、飲み込まれることで胃へ移動す る様子が観察された。近年、鼻腔粘膜上に接種し たワクチンの流動性を抑え保持時間を長くすること で、ワクチン効果が増強することが示されている
（Yuki Y et al., Biotechnol Genet Eng Rev. 2013 Oct;29 (1-2):61-72.）。今後、18F 標識した不活化全粒子ワ クチンを粘稠剤であるカルボキシビニルポリマー添 加の有無で経鼻接種を行い、上気道への接種ワク チンの保持効果を改めてマウスおよびサルを用い
て検討する予定である。
E. 結論
次世代ワクチンである経鼻不活化全粒子インフ ルエンザワクチンの安全性を評価することを目標と し、PET を用いてその動態を明らかにするための 18F 標識の検討を行った。3 価不活化全粒子ワクチ ンの利用を考えたが、ウイルス株によってその標識 ワクチンの回収効率が異なり、一定とならないこと が明らかになった。そのため、単身不活化全粒子 ワクチンに関して、PET を用いた動態解析を行うこ ととした。条件検討の結果、PET を行うために十分 な放射線量を有する標識ワクチンを回収できること が明らかになった。
F. 健康危険情報 なし。
G. 研究発表 1. 論文発表
1) Senchi K, Matsunaga S, Hasegawa H, Kimura H, Ryo A. Development of oligomannose-coated liposome-based nasal vaccine against human parainfluenzavirus type 3. Front Microbiol. 2013 Nov 26;4:346.
2) Miyazaki M, Nishihara H, Hasegawa H, Tashiro M, Wang L, Kimura T, Tanino M,Tsuda M, Tanaka S. NS1-binding protein abrogates the elevation of cell viability by the influenza A virus NS1 protein in association with CRKL.
Biochem Biophys Res Commun. 2013
Nov 29;441(4):953-7.
3) Ainai A, Tamura S, Suzuki T, van Riet E, Ito R, Odagiri T, Tashiro M, Kurata T, Hasegawa H. Intranasal vaccination with an inactivated whole influenza virusvaccine induces strong antibody responses in serum and nasal mucus of healthy adults. Hum Vaccin Immunother. 2013 Sep;9(9):1962-70.
4) Okada S, Hasegawa S, Hasegawa H, Ainai A, Atsuta R, Ikemoto K, Sasaki K, Toda S, Shirabe K, Takahara M, Harada S, Morishima T, Ichiyama T. Analysis of bronchoalveolar lavage fluid in a mouse model of bronchial asthma and H1N1 2009 infection. Cytokine. 2013 Aug;63(2):194-200.
5) Kuribayashi S, Sakoda Y, Kawasaki T, Tanaka T, Yamamoto N, Okamatsu M, Isoda N, Tsuda Y, Sunden Y, Umemura T, Nakajima N, Hasegawa H, Kida H.
Excessive cytokine response to rapid proliferation of highly pathogenic avian influenza viruses leads to fatal systemic capillary leakage in chickens. PLoS One.
2013 Jul 9;8(7):e68375.
6) Dan K, Akiyoshi H, Munakata K, Hasegawa H, Watanabe K. A Kampo (traditional Japanese herbal) medicine, Hochuekkito, pretreatment in mice prevented influenza virus replication accompanied with GM-CSF expression and increase in several defensin mRNA
levels. Pharmacology.
2013;91(5-6):314-21.
7) Niikura K, Matsunaga T, Suzuki T, Kobayashi S, Yamaguchi H, Orba Y, Kawaguchi A, Hasegawa H, Kajino K, Ninomiya T, Ijiro K, Sawa H. Gold nanoparticles as a vaccine platform:
influence of size and shape on immunological responses in vitro and in vivo. ACS Nano. 2013 May 28;7(5):3926-38.
8) 長谷川 秀樹, 田村 慎一 【インフルエ ンザに立ち向かう】
インフルエンザワクチンの現状と展望 Mebio(0910-0474)30 巻 12 号 Page68-73 2013.12
9) 長谷川 秀樹【今、注目のワクチン】 次 世代ワクチンとしての経鼻インフルエン ザ ワ ク チ ン フ ァ ル マ シ ア (0014-8601)49 巻 3 号 Page196-200 2013.03
10) 石井 健、 河岡 義裕、 長谷川 秀樹 より効果的なインフルエンザワクチンを 目 指 し て イ ン フ ル エ ン ザ (1345-8345)14 巻 2 号 Page73-78 2013.04
2．学会発表
1) 岡田 清吾, 長谷川 俊史, 長谷川 秀 樹, 相内 章, 池本 健三, 佐々木 功 典, 戸田 昌一, 調 恒明, 市山 高志 インフルエンザ A/H1N1 2009 感染によ る気管支喘息モデルマウスの気管支
肺胞洗浄液解析 日本小児科学会学 術集会 広島 2013.4
2) 長谷川 秀樹: ワクチン研究の最前線 次世代ワクチンとしての経鼻インフルエ ンザワクチンの開発. 日本薬剤学会 第 28 年会 名古屋 2013.5
3) 宮崎 将也, 王 磊, 長谷川 秀樹, 津 田 真寿美, 西原 広史, 田中 伸哉: ヒ ト細胞内蛋白質 NS1BP の機能解析.
第 102 回日 本 病 理 学会 総 会 札幌 2013.6
4) 長谷川 秀樹, 中島 典子 炎症・免疫 機構の新基軸と疾病の病理 重症イン フルエンザ病態解明へのアプローチ 剖検例からの検討 第 102 回日本病理 学会総会 札幌 2013.6
5) 長谷川 秀樹: 良く効くインフルエンザ ワクチンを目指して. 第 54 回日本臨床 ウイルス学会 倉敷 2013. 6
6) 長谷川 俊史, 岡田 清吾, 脇口 宏之, 市山 高志, 長谷川 秀樹, 相内 章, 調 恒明, 戸田 昌一, 熱田 了 喘息 モデルマウスを用いたインフルエンザ 感染による気管支喘息発作重症化の 病態解析 新型と季節性インフルエン ザの比較 第 45 回日本小児感染症学 会総会・学術集会 札幌 2013.10.
7) 脇口 宏之, 岡田 清吾, 長谷川 秀樹, 相内 章, 戸田 昌一, 調 恒明, 長谷 川 俊史 気管支喘息(病態)・免疫不全 喘息モデルマウスを用いた新型インフ ルエンザ感染における気管支肺胞洗 浄液中ケモカインの検討 第 45 回日本
小児感染症学会総会・学術集会 札幌 2013.10
8) 長谷川 秀樹、相内 章、田村 愼一、
鈴木 忠樹、浅沼 秀樹、小田切 孝人、
田代 眞人、倉田 毅 高病原性鳥イン フルエンザウイルス A（H5N1）全粒子不 活化ワクチンを用いた経鼻インフルエ ンザワクチンの効果 第 17 回日本ワク チン学会学術集会 津 2013.11 9) 鈴木 忠樹、川口 晶、相内 章、田村
愼一、小田切 孝人、田代 眞人、長谷 川 秀樹 経鼻インフルエンザワクチン により鼻腔粘膜上に誘導される多量体 IgA 抗体のウイルス感染防御における 役割 第 17 回日本ワクチン学会学術 集会 津 2013.11
10) 相内 章、田村 愼一、鈴木 忠樹、小 田切 孝人、田代 眞人、倉田 毅、長 谷川 秀樹 経鼻インフルエンザワクチ ンにより誘導される抗体応答に年齢、
性別あるいは副反応が与える影響 第 17 回日本ワクチン学会学術集会 津 2013.11
11) 中島 典子、佐藤 由子、片野 晴隆、
佐多 徹太郎、長谷川 秀樹 重症イン フルエンザウイルス肺炎におけるサイト カイン・ケモカインの発現 第 61 回日本 ウイルス学会学術集会 神戸 2013.11 12) 泉地 恭輔、相内 章、鈴木 忠樹、浅 沼 秀樹、梁 明秀、長谷川 秀樹 母 子免疫によるインフルエンザウイルス 感染防御効果の解析 第 61 回日本ウ イルス学会学術集会 神戸 2013.11
13) 池田 千将、伊藤 良、相内 章、鈴木 忠樹、田村 愼一、荒尾 雄二郎、田代 眞人、浅沼 秀樹、長谷川 秀樹 経鼻 インフルエンザワクチンで誘導される抗 体応答に基礎免疫が与える影響 第 61 回日本ウイルス学会学術集会 神 戸 2013.11
14) 相内 章、 浅沼 秀樹、鈴木 忠樹、原 田 勇一、田村 愼一、田代 眞人、長 谷川 秀樹 経鼻インフルエンザワクチ ンにおけるワクチンの組み合わせが抗 体応答に与える影響 第 61 回日本ウイ ルス学会学術集会 神戸 2013.11 15) 川口 晶、 鈴木 忠樹、相内 章、佐藤
由子、永田 典代、田代 眞人、長谷川 秀樹 Nc/Nga マウスを用いた喘息発 作によるインフルエンザ感染症重症化 モデルの炸裂 第 61 回日本ウイルス 学会学術集会 神戸 2013.11
16) Hideki Hasegawa, Akira Ainai, Tadaki Suzuki, Elly van Riet, Shi-ichi Tamura, Kazuyuki, Ikeda, Takato Odagiri, Masato Tashiro, Takeshi Kurata. Antibody responses in serum and nasal mucus induced by the intranasal vaccination with a whole-virion inactivated vaccine of A(H5N1)virus in healthy naïve human adults. Keystone Symposia on Molecular and Cellular Biology.
Keystone, Colorado USA, January 2014.
17) Kazuyuki Ikeda, Ryo Ito, Akira Ainai, Tadaki Suzuki, Shin-ichi Tamura, Yujiro
Arao, Masato Tashiro, Hideki Asanuma, Hideki Hasegawa. Antibody responses induced by intranasal vaccination of a whole inactivated influenza virus in mice previously infected or vaccinated.
Keystone Symposia on Molecular and Cellular Biology. Keystone, Colorado USA, January 2014.
18) Tadaki Suzuki, Akira Kawaguchi, Akira Ainai, Shin-ichi Tamura, Ryo Ito, Masato Tashiro, Hideki Hasegawa.
Impact of the quaternary structure of human Secretory-IgA on neutralization potency to Influenza A virus in upper respiratory tract. Keystone Symposia on Molecular and Cellular Biology.
Keystone, Colorado USA, January 2014.
H. 知的財産権の出願、登録状況 なし。
表 1. 3 価全粒子不活化インフルエンザワクチンのゲルろ過前後サンプルに含まれる各ワクチン HA 含量
HA 含量 (µg HA/500 µL)
ゲルろ過前* ゲルろ過前
（測定値）
ゲルろ過後 （測定値）
Frac. 15 Frac 16 平均
A(H1N1) A/California/7/09
(X-179A) 89.5 93.3 18.3 21.3 19.8
A(H3N2) A/Victoria/361 /11
(IVR-165) 95.0 ND** 27.8 31.7 29.8
B B/Wisconsin/1/ 10
(BX-41A) 94.4 ND** 0.9 1.5 1.2 * 阪大微生物病研究会により測定された HA 含量から算出。また、500 µL をゲルろ過カラムに添加しているため、添 加した各ウイルス HA 量を示している。
** 測定限界外となり、正しい値を測定できず。
図 1. 濃縮単身不活化全粒子ワクチン 18F 標識体を用いて
Superose 12 10/300 GL
子ワクチンの用出が認められた。
濃縮単身不活化全粒子ワクチン 標識体を用いて
Superose 12 10/300 GL
子ワクチンの用出が認められた。
濃縮単身不活化全粒子ワクチン
標識体を用いて X‑179A 不活化全粒子ワクチンの標識反応を行い、その後未反応の Superose 12 10/300 GL を用いたゲルろ過を行った。
子ワクチンの用出が認められた。(A)
濃縮単身不活化全粒子ワクチン X‑179A の
不活化全粒子ワクチンの標識反応を行い、その後未反応の を用いたゲルろ過を行った。
(A) 放射線量、
の 18F 標識
不活化全粒子ワクチンの標識反応を行い、その後未反応の を用いたゲルろ過を行った。void volume
放射線量、(B) OD=280nm
不活化全粒子ワクチンの標識反応を行い、その後未反応の void volume に 18F により標識された
OD=280nm で測定した吸光度。
不活化全粒子ワクチンの標識反応を行い、その後未反応の 18F により標識された で測定した吸光度。
18F 標識体を除くため、
により標識された X‑179A 不活化全粒
標識体を除くため、
不活化全粒
