原 著
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の増強効果
谷 口 雅 彦
徳島大学医学部耳鼻咽喉科学教室 （主任：小池靖夫 教授〕 （平成8 年 9月20日受付〕Antineo
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φtmenart Ofo a/ot η,γygologi Schoo l of neiciedM , Th e Uvein yγtis of T oku sh,aim Tok ush ima(Dir eotc γ：Pγfo oYasu Ko iek )
SUMMARY
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と呼び， 近注目されている問題の1つに抗癌剤に対する耐性獲 突然変異や抗癒剤の治療によって誘起される場合を獲 得の現象がある．元来，抗痛剤に対して感受性が低下 得耐性d
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個／llml/we ず つの細胞を播いた 谷 口 雅 彦 2 . 約81 時間、 73 ℃、 5 %CO2 で、eatubnci し細胞 が付着したところへ， 6 μg/ml1 の'5 DFUR と,0 0 . 0,521 0.0,52 0.0,5 0 .1 μg/ml のeinipadlvNi を それぞれ接触させた． 3 . 84 時間後に，それぞれの上清を吸引で除去し トリプシン005 μl で，プレートより培地を取り除き， その後トリプシン1 ml をくわえた． 4 . 51 分間，rtobacuin 内に静置した． 5 . パスツールピペットで細胞を剥がして顕微鏡で 細胞が剥がれたことを確認し，各時間の各濃度ごとに パスツールピペットでチューブドに入れた． 6 . 培地を4ml 加えて計5ml にした． 7 . 0001 rpm で5分間遠心した． 8 . 上清をデカンテーションして捨て，c
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用培地 を1ml くわえた． 9 . .10 %トリパン青液を用いて，細胞数を測定し た． 1 0 . 対照として， 5ぺDFUR を接触させず同様の実験 をおこなった． 実験I . I 実験Iと同様な手順で行い，薬剤と3時間接触させ た後， 1週間後に細胞数をカウントした． ※SCC-25 細胞（舌， ヒト扇平上皮癌）は， AME-RICAN TYPE CULTURE COLLECTION 社のもの を用いた． ※KB 細胞は，桑野信彦教授（当時大分医大，現在 九州大学）より提供をうけた． ※'5 DFUR は ， 日 本 ロ シ ュ 株 式 会 社 よ り ， N i l v a d i p i n e Cニパジーノレ③〉は，藤沢薬品工業株式会 社よりそれぞれ提供をうけた． B . 実験凹 SCC-25 細胞， KB 細胞， HeLa 細胞の3種類の培 養細胞に対して， ABC 法によりnietoprocylg-P の免 疫組織化学染色をおこなった． 実験のプロトコールは，以下に示すとおりである． 1 . 培養細胞を，スライドガラスに塗布し乾燥させ Tこ． 2 . 冷アセトンで5分間，固定した． 3 . リン酸緩衝液 （PBS ) 0/15 M, pH 7,2. 1.0 % Tween-20 含〉で3分間3回洗浄した． 4 . 01 %正常ウサギ血清 ／PBS で室温で51 分間反 応させ，非特異反応のブロッキングを行った． 5 . Pnietropcoyl-g 抗体 （第1抗体〉を室温で3時間 反応させた. (1 次反応〉 ※vetigaen lortonc として正常マウス血清を同様に反応させた． ※第一抗体（Pinteroopycgl- 抗体，抗ヒトモノクロ ーナル） (AUSTRAL slacgioloiB 社〉は， PBS で03 倍に希釈して使用した． 6 . リン酸緩衝液（PBS) 15/(1 M, pH 7 .,2 .10
%
Tween-20 含〉で洗浄した. ( 3 分× 5 回〉 7 . ピオチン結合第二抗体（抗マウスlgG) Cヤギ血 清）を室温で0 分間反応、させた. ( 1 2次反応〉 8 . リン酸緩衝液（PBS) 15/(1 M, pH 7,2. 1.0 % Tween-20 含〉で3 分間， 3 回洗浄した． 9 . ABC 溶液（ストレプトアピジンピオチンベル T a b l e 1 SCC-25 ,sllec genib deatbucni 84 shour and ,dtenuco showed yltnacifingis -idda t i v e stceffe ni anoitnbimoc fo O 1. μ 1I-gm foenipidavlin and 61 μ 1I-gm o f5' DFUR. Data tnseerpre means and S D s . C o n c e n t r a t i o n number cfoslle （×)llew/501 o f N i l v a d i p i n e 5－’DFUR(+) 5＇司DFUR （一〉 ( μg/ml)
。
1.0±0.3 1.9±0.4 0 . 0 1 2 5 1.0±0.3 1.8±0.4 0 . 0 2 5 0.9±0.3 1.8±0.4 0 . 0 5 8.0 土30. 1.8±0.4 0 . 1 7±0.4* .0 1.8±0.4 * p<0.05 .sv lortnoc by Stenudt .’ts tset -Table2 SCC ・5 c2,slle gineb detabucni 3 hrsou and dntecou retfa 1 w,eek did ton r e v e a l tnacifingis id百ecener between t he groups with and without n i l v a d i p i n e . C o n c e n t r a t i o n number cfoslle （×)llew/501 o f N i l v a d i p i n e 5'-DFUR( +) 5'-DFUR( ) ( μg/ml)
。
2.3±0.6 2.8±0.3 0 . 0 1 2 5 3.2 土70. 0 . 0 2 5 2.1±0.6 0 . 0 5 2.1±0.6 0 . 1 2.1±0.6 72. 土.20 オキシダーゼ複合体〉を室温で5分間反応させた. ( 3 次反応〉 1 0 . リン酸緩衝液（PBS) 5/1(1 M, pH 7 .,2 10. % Tween-20 含〉で3 分間， 3 回洗浄した． 1 1 . 次の発色液で5 分間反応させた． DAB mg+ H202 52 μ05 001/1 ml Tsri・
HCl pH 7.4 1 2 . 蒸留水で5 分間水洗を行った． 1 3 . ヘマトキシリンで5分間核の染色を行った． 1 4 . アルコール・キシレン系で脱水および透徹を行 った． 1 5 . 封入後，顕徴鏡で、観察を行った． Table 3 KB cslle ginbe deatubcni 84 ursho and c o u n t e d , showed evitidda stceffe ni c o m b i n a t i o n fo O .1 μ 1-Img fo avlin 司 d i p i n e and 61 μ gml 1 o 5’f －DFUR, even t h o u g h seeht id百encere were otn-sitats t i c a l l y .tnacifingis C o n c e n t r a t i o n number cfoslle （×)llew/501 o f N i l v a d i p i n e 5'-DFUR( +) 5'-DFUR （一〉 ( μg/ml)。
2.1±1.3 2.5±1.1 0 . 0 1 2 5 9.1 士2.1 2.4±1.0 0 . 0 2 5 1.6±0.8 4.2 士0.1 0 . 0 5 1.4±0.8 2.4±0.9 0 . 1 2.1 土6.0 2.4±1.1 Table 4 KB cslle gnieb detaubcni 3 hurso and c o u n t e d retfa 1 week, showed otn s i g n i f i c a n t l y . C o n c e n t r a t i o n number cfoslle （×)llew/501 o f N i l v a d i p i n e 5'-DFUR( +) 5'-DFUR （一） (μg/ml)。
5.3±0.9 6.1±0.8 0 . 0 1 2 5 5.3±1.2 0 . 0 2 5 5.3±1.1 0 . 0 5 5.5±1.1 0 . 1 5.3±1.1 6.1±0.66 4 F i g . 1 SCC-25 sllec (tpo ) and KB cslle (bottom ) showed evita Pisop-niteorpocylg- erutcip by immunohistochemical niats fo ABC m e t h o d
. Both llec membranes showed a brown .tnemeancnh-genir C×004 ) F i g . 2 HeLa sllec showed tnie-coproylg-P n e g a t i v e erutcpi by iacimoehcotsihnumml s t a i n fo ABC method . C×400 ) 谷 口 雅 彦 ※染色キットは，免疫組織染色用inostaPath ABC POD
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和光純薬工業株式会社〉を使用した． ※統計的検定には，対応のないt検定を用いた． 結 果A
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実験I
およびII 1 . SCC-25 細胞に関しては，実験Iにおいて，-'5 DFUR μg/ml61 に， enipidavliN O 1. μg/ml を加え 接触させた群と 5' DFUR μg/ml61 のみを接触させ た群との間で，統計的有意差が認められ （p < 05.0 ), N i l v a d i p i n e による' -DFUR5 の作用の増強 を認めた． 実験I においては統計的有意差は認められなかった．I (Table 1-2) 2 . KB 細胞に関しては， 実験 I では N ienipiadvl の 投与で細胞数は減少したが， 実験I では細胞数は減少I せず，ともに統計的有意差は認め なかった. (Table 3 -4) 3 . HeLa 細 胞 に 関 し て は，実験 I , II とも N i l v a d i p i n e の投与で細胞数は減少しなかった． B. 実験III 1 . SCC-25 細胞， KB 細胞はすべて，細胞膜が褐色 に染色されnietroopcylPg- 陽性ぜあった. (F.gi 1) 2 . HeLa 細胞はすべて，細胞膜が染色されず， P -g l y c o p r o t e i n 陰性であった. (F.gi )2 考 察 癌治療において，外科的切除手技あるいは放射線治 療の技術的進歩はめざましいものがあるが，外科的あ るいは放射線治療が対象となし得ない症例も依然、存在 する．また，全身化している進行癌症例に対する唯一 の治療法は化学療法である．現在，化学療法を施行す るうえで大きな問題とな っているのが癌細胞の耐性獲 得，特に獲得性多剤耐性である．抗癌剤多剤耐性の機 序としては， Lane 799(1 ）によると（1）癌細胞自身の生 化 学 的 な 変 化 （2） 薬 理 学 的 な 動 力 学 （p hr-a macodynamics ) (3 ）宿主の免疫学的不全（4）細胞周 期，特にG 。期の癌細胞数の増加などが関与する細胞 の動力学（clle scitenik ) (5 ）未知の機構などがあげら れ る これまでも多剤耐性を克服し，抗癌剤を効果的に利 用するためにいろいろな試みがなされてきたが，大き くわけて，（1）剤型の転換による効果の増強 2(）他の治 療法との併用による効果の増強 3(）非抗癌剤との併用 による効果の増強の3つに分けられる．剤型転換には， l i p o s o m e naba(I ら， 1981 ），マイ クロカプセル（Katoら ， 0891 ），油性懸濁液（Takahashi ら， 6791 ）などが 用いられ，臨床に応用されつつある．他の治療法との 併用では，放射線療法，外科療法，免疫療法，温熱療 法などがあり，抗癌剤同士の併用では，多剤併用療法 があげられる．また，非抗癌剤との併用では，アンギ オテンシンII C佐藤ら， 1,)189 Ca 括抗剤などがあげ られ，特に後者は，最近注目されている． 多剤耐性を示す細胞に推察される機構のひとつに， 薬物の細胞内とりこみ減少ならびに細胞外放出増大と いう変化があげられる．抗癌剤は，細胞膜を通して細 胞内に輸送され効果を発現する． したがって，抗癌剤 の効果は薬剤の細胞内での蓄積と維持の度合いに密接 な関係をもっている．稲葉ら9719( ）によれば，n vi ivo において P388 感受性株では， nimycairda やo-daun r u b i c i n の細胞内全体活性の05 ～0 %が 1 時間のイン7 キュベーション後細胞内に保持されている時に，-htna r a c y c l i n e 系抗生物質耐性細胞ではほとんど細胞内に 保持されていなかった （能動性xulffe の充進〉．他に も，マウス白血病L5178Y 細胞からADR 耐性株を単 離した田中らによっても同じような報告がある （田中， 1 9 8 0 ; Sugimoto ら，.)1891 したが って，もし膜作用 物質を用い膜を介しての抗癌剤の流入，流出をコント ロー ノレで きれば抗癌剤の効果増強がはかれることが推 察される． これまでにも，抗癌剤の膜の透過性促進や放出を減 少 さ せ る 物 質 と し て ， ポ リ エ ン系 抗 生 剤 （桑野， 1 9 8 1 ), ビタ ミン AC 桑野， 1389 ), Verapamil C鶴尾， 1 9 8 1 ; Turuo ら，,)1891 niipdfeiN C鶴尾， 1998 ,) D i b u c a i n e （稲葉，,)9791 Chloropromazine C稲葉， 1 9 7 9 ），スクワレン（Yamaguchi ら， 5891 ），イソプレ ノイド（Yamaguchi ら， 6981 ）などが報告されてい る。 Turuo ら1)891( によれば，マウス白血病細胞 P 3 8 8 とそのriamycinad およびenitsircniv 耐性細胞 を用いた実験において，enitsircniv 耐性細胞では， v e r a p a m i l によって0 倍以上の v1 enitsircni の蓄積が もたらされた．また， adriamycin 耐性細胞においても 2 倍以上の adriamycin の蓄積がみられた．これは， 抗癌剤の細胞外放出（exulff ）機構がalimeparv によ りおさえられたと考えることができる．また，臨床的 にはlapamiver の血中濃度は3 μg/ml まであげられ ることが報告されている （Rogan ら，.)4891 これまでにも臨床に用いられているカルシウム括抗 薬には， l,apamiVer ,mezaitliD eniipdarciN 等があ るが，これらのカルシウム括抗薬を用いた報告で血圧 降下や不整脈が認められる場合が多い．一例として， v e r a p a m i l を用いた症例で、血圧低下や1 度房室ブロッ クは必発で，左心不全， 2度房室ブロック，完全房室 ブロックが，約02 ～0 %の患者に生じるとし、う報告が3 ある （relilM ら，.)1991 そこで，いかに副作用の少な いCa 括抗剤を選択するかが問題になってくる． 今 回 用 い たeinipvadilN Cニ パ ジ ー ル ＠） は， N i f e d i p i n e , ,enipirdaciN mzeiailtD 等に比べると， 心筋に比べ血管選択性の Ca 括抗作用をもち，かつ持 続性であり，血管平滑筋の中でも脳血管および冠血管 に対する選択性が高い。よって，心機能に悪影響を及 ぼさず，脳血流，冠血流などの重要臓器の血流量をパ ランスよく増加させる作用時間の長いCa 桔抗薬であ る． 一方'5 DFUR 5 ’(enidiruoroluf－-5-yxoed ) Cフルツ ロン③〉 は， 5-FU の潜在活性型であり生体内では， p y r i m i d i n e edsieolcun resalysohpohp により 5・FU に 転換してDNA 合成を阻害する．この酵素は小腸など を除き正常組織に比べて腫蕩組機に多く存在すること から，腫蕩特異性が期待できる化合物である．本研究 においては，まずepindilvaNi の濃度を変化させ， 5'-DFUR に対する効果の増強につき，トリパンブノレ一 法にて細胞数をカウン卜することにより比較検討した． まず，予備実験をおこない，einipvadilN については それ単独で細胞に対して 毒性を示さない濃度の範囲
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～1.0 μg/ml) で濃度を変化させた. '5 DFUR の濃 度については， SCC-25 細胞に対して，,0 ,4 ,61 ,23 6 4 , (μg/ml) と濃度を変化させたものを投与し,2 ,4 7 , ,01 4 日目に細胞数のカウントを行い， 2 日後， 71 日後にコントロールと比べて有意差のでる最小濃度， つまり6 μg/ml1 に定めた． 結果では，実験Iにおけるc
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・5 細胞にのみ統計2 的有意差が認められたが，実験IのKB 細胞において も差が生じる傾向がみられた。今回， SCC-25 細胞につ いては， S DFUR 単 独 で 感 受 性 が 認 め ら れ ， N i l v a d i p i n e によりその作用が増強された．このこと は，感受性のある細胞に対しても抗癌剤の作用の増強 をおこし得ることを示唆すると考えられる．一方多剤 耐性を示す細胞は，膜成分に変化をうけているという 点が注目されている. Kartner ら （8391 ）は， Hamster 細胞の多剤耐性株に関する研究で，分子量7 万の細胞1 膜の糖蛋白質の発現の増加をともなっていたと報告 し ている．この糖蛋白質はinteroopycglP- と呼ばれ，分 子内二重構造をもっ蛋白質であり，物質の膜輸送に関 与する蛋白質であると推定されている（Gherlac ら， 1 9 8 6 ; Chen ら， 8691 ).6 6 谷 口 雅 彦 P -toropcylg e i n は正常細胞にも存在する蛋白質で 的に有意ではなかった． あり， Fojo ら8791( ）は耐性遺伝子mdr 1 の mRNA .2 ABC 法によるniP -teorpoclyg の免疫組織化学 は，副腎 （とくに皮質〉には，実験癌耐性株と同じ程度 染色ではSCC-25 細胞， KB 細胞はすべて，細胞膜が にまた，腎にも強く発現し，肺，肝，小腸，大腸にも 褐色に染色され，nietoprocylg-P 陽性であった． 中程度に検出されたと報告している． 3 . Neinipadvil によって 5'-DFUR の作用の増強 P -gniteroopcly の機能は，正常細胞において有害物 を認めた細胞に対しては，その作用増強の機序におい 質を細胞外に排出し，耐性癌においても毒物である抗 て， P - lgneitoprocy が関与している可能性が示唆され 癌剤を細胞外に排出することと考えられている． た． Hamada ら8791( ）は，nietoropcylg-P は， C キ ナ ー ゼによってリン酸化される蛋白質であることを見いだ 稿を終わるに当たり，御指導御校閲の労を賜りまし している．彼らは， niP -etoprocygl が，リン酸化され た小池靖夫教授に深謝致します．また，直接御指導， ることによりその機能が制御されるとし，そのリン酸 御教示をいただし、た野口病院 野口志郎院長， 具体的 化はカル シウム桔抗剤によ って充進するとしている． な実験手技でご協力いただいた野口病院検査科 足立 今回筆者はそれぞれの細胞に対して， ABC 法にて 光男氏，丸田淳子氏， 安岡陽子氏に深謝いたします． P -teorpoyclg i n の免疫組織学染色を行ったが，その結 果SCC-25 細胞， KB 細胞では，細胞膜が褐色に染色 され， nP -ietorpocylg 陽性であったが， HeLa 細胞で は，細胞膜が染色されず， inP -etoropcylg 陰性であっ た．すなわち，einipadlviN によって 5'-DFUR の作 用の増強を認めた細胞では，その作用増強の機序にお いて，neitroopcly-gP が関与している可能性が示唆さ れた．よ って，今回の実験系においては，多剤耐性の いかんにかかわらず， nP -ieotrpoyclg 陽性である細胞 に関しては，neiipadlvNi によって 5' DFUR の作用 が増強される可能性があるということになる．臨床に おける投薬効果の判定にあた っては，宿主の薬剤耐性 も考慮にいれなければならないが，今回の実験系では， 0 . 1 μg/ml のeinpdivailN が増強効果を示しているの で，薬剤投 与 に よ り 癌 組 織 中 に 1.0 μg/ml の N i l v a d i p i n e が出現し，かっ副作用がなければ， N i l v a d i p i n e によって'5 DFUR の抗癌作用を増強さ せる治療法は有効でありうると考えられた． 結 論 SCC-25 細胞， KB 細胞， HeLa 細胞に対して， 5'-DFUR を投与し， Ca 括抗薬である Nnepidivali の併 用による効果の増強につき実験を行い，それぞれの細 胞に対し， ABC 法により niP -etoprocylg の免疫組織 化学染色をおこなった． 1 . SCC-25 細胞に関しては，培養細胞と8 時間接4 触させた実験I において， 5
～
DFUR μg/ml 61 に N i l v a d i p i n e 1.0 μg/ml を加えた群と 5'-DFUR 61 μg/ml の み の 群 で 統 計 的 有 意 差 が 認 め ら れ ， N i l v a d i p i n e による'5 DFUR の作用の増強を認めた． 実験I の KB 細胞においても差が認められたが，統計 文 献 1 C,enh ,.J-C ,nihC J.E ., U,dae ,.K k,ralC P.D,. P a s t a n ,, I. Gottesman , M. M. and Roninson , I . .B 689(1 ) : Ilanretn notiacilpud and homolog y whit lairetcab tropnsart snietorp i n eht mdrl nieot(Propcylg- ) gene from m u l t i d r u g tnatsiser human .sllec lleC , 4,7 3 8 1 -3 8 9 2 F,ojo T.A ,. a,edU ,.K o,nmaSl J.D,. ,kacploP .D G . , Gottesman , M . M . and tansaP , I. 7891( ) . nssioxpreE of a mgduritlu cenats-rise gene in human tumors and seussit . Pc.or .ltaN A c a d . .icS USA, ,48 562 -296 3 G,hacler .J,.H ,ttocidnE .J,.A Juranka , P . . , F H e n d e r s o n , . , G ,ginarSa ,.F ,arschDeu .K .L
and ,gniL .V 6891( ) : Homology between P -g l y c o p r o t e i n and a blairetca haemoly sin t r a n s p o r t inetorp stsgegus a model rof m u l t i d r u g .ecnatsiser Nature , 342 (4), 45-8 4 8 9
4 Hamada, H. , Hagiwara, ,.K Nakajima, .T and T s u r u o , T (7819 ) : Pnoitalryohpsoh fo eht Mr 100,007 ot 000,81 nietoropyclg iceps 自c t otnatsiser-gurditlum tumor :sllec stceffE o f vl,iamapre ,enizarepoulfirt and olrbhop e s t e r s . Cancer .seR , 47 , 2086 5862 5 I,aban .,M a,idshoY N . and Tsukagoshi , S. ( 1 9 8 1 ) : Palitnerefer noitca fo -meospoil entrapped - (2-chloroethyl)-31 ・（4・ m e t h y l c y c l o h e x y l ) -1 -n i t r o s o u r e a on ngul
m e t a s t a s i s fo Lewis ngul carcinoma sa compared thiw eht eerf .gurd Gann, ,27 143 -3 4 5 6 稲 葉 実)9791( : Aenilcycrahtn 系抗生物質耐性 発現の機序とその克服についての試み．癌と 化学療法， 6 Sl.ppu I , 48-41 7 K,erntra ,.N ,anrdoiR
.
J
R . and ,gniL .V 3819( ) C e l l ecarfus P -gnietorpocyl deatiocsas w i t h rugidtlum ecnastiser ni mammalian c e l l .senil ecniecS 122 5821 8821 8 Ko,ta ,.T Nemoto, ,.R i,rMo .H and Kumagai,I . ()0891 esaele: S-rdeniatsu seiterporp fo m i c r o e n c a p s u l a t e d mitomycin C wthi -lyhte c e l l u l o s e desufni otni eht laner ryetra tfo eh d o g . r,ceanC ,64 124-1 9 桑野信彦)1819( ：ポリエン系抗生剤と制がん剤 との併用増強の試み．癌と化学療法，,)5(8 6 8 1 -6 8 8 1 0 桑野信彦3981( ）：腫蕩耐性の機構．病態生理， 2 ( 9 ) , 10-9019 1 1 桑野信彦・小宮山荘太郎389(1 ）：制がん治療にお けるビタミン A 応用の基礎と臨床的研究．癌 と化学療法， 0 (1 )2 rtaP IJ , 326 233 1 2 e,anL M. )9791( : Clacinil lsemborp fo-siser t a n c e ot rnceca chemother ョcituep .stnega F e d . .,deecorP 83 l ), C 7u-i031 1 3 ,relliM T.,.P ,nagorG T. ,M. ,ntolaD W. . , S S p i e r , .C ,.M r,eephSc .R
.
J
and Salmon, .S E . )1991( : Pnietropcoylg- niossrepxe ni m a l i g n a n t lymphoma and laserver cfo-inil c a l drug ecnatsiser hitw chemotherapy sulp h i g h -d o s e .ilmparaev.
J
nilC . O,.locn ,)1(9 1 7 -2 4 1 4 gan,Ro A. M ., Hamilton , T. ,.C Young, C.R,. K l e c k e r , .rJ .R W. and ,slozO R. .F 489(1 ) . R e v e r s a l afo incamyird ecnatsiser by v-are p a m i l ni human ianvaro .recanc ceenciS 2 2 4 499 699 1 5 佐藤春彦・佐藤和朗・佐藤幸弘・朝村光雄・金丸 竜 之 介 ・ 三 又 陽 子 ・ 涌 井 昭 )1819( : An-g i o t e n s i n IIによる制癌剤組織到達性の選択 的 増 強 の 臨 床 応 用 ． 癌 と 化 学 療 法 ， 8 S u p p l . , 91 001 1 6 ,ogimotSu ,.Y ,arumisiNh ,.T i,kzuuS .H and Tanaka, .N )1891( : Eecnediv fo deretla i n f l u x fo ycinadriam otni -eniclycahrtna r e s i s t a n t .sllec.
,J
.scitoibitnA ,)8(43 4-601 1 0 6 6 17 hashi,Taka ,.T Ueda, S ., Kono, K. and Majima , S . )6791( : Attempt ltalaco onitartsnimida o f rcencatian stnega ni eht form fo taf e m u l s i o n . Cancer 83 7051 1451 1 8 田中信男：抗癌抗生物質の耐性機構0981( ）癌と 化学療法， 701 ), 198919-88 1 9 鶴 尾 隆 （1)891 : Verapamil による抗癌剤の増 強効果の試み．癌と化学療法，,)5(8 566 -627 2 0 鶴 尾 隆6891( ）： カルシウム措抗剤による耐性 の克服．図説臨床癌シリーズ 癌化学療法の 進歩（末舛恵一，西僚長宏編〉メジカルレビュ ー社，東京， 261 -107 2 1 ,uruosT ,.T ,adiI ,.H ,igoshsukaT .S and Saku -r a i , .Y 1)891( : Overcoming foenitsircniv r e s i s t a n c e ni P388 eamikuel ni voiv and ni v i t r o ughthro enhanced ytciixottoyc fo v i n c r i s t i n e and enitsalbniv by v.ilamaper Cancer .seR 14 7619 2791 2 2 鶴 尾 隆)9891( : Ca 括抗薬の制癌剤効果.r-haP ma Ma,edic 3(7 ), 65 86 2 3 植田和光889(1 ）：癌の多剤耐性はMDRl 遺伝子 が担っているのか？ 蛋白質核酸酵素， 33 ( 8 ) , 99127-281 2 4 Yamaguchi, ,.T Nakagawa, ,.M a,dakHi ,.K Y o s h i d a , ,.T ,iksaaS ,.T Akiyama, .S and Kuwano, M. )5891( : Pnoiatinteto by s q u a l e n e fo rtumoanti tceffe fo 3・［（4・ a m i n o -2 -m e t h y l -5 -p y r i m i d i n y l ) -1yl]thme ・ ( 2 -c h l o r o e t h y l ) earou・srotni ni a murine tumor .emstys .npJ .J Cancer .seR n),Gan( 2 6 , 1201 6201 2 5 Yamaguchi, ,.T Nakagawa, ,M. ,ihsiarihS ,.N Y o s h i d a , ,.T e,suyoiK ,.T ,atirA M ., Akiyama, .S and Kuwano, M. 0986) Overcoming drug ecnatisser ni crecna sllec w i t h citehtyns .sdionerposi
