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Title
№１６：乳幼児における口腔内細菌叢の確立までの経時
的解析
Author(s)
新井, 敬; 桜井, 敦朗; 本間, 宏美; 永井, 宜子; 新谷,
誠康
Journal
歯科学報, 118(5): 480-480
URL
http://hdl.handle.net/10130/4738
Right
Description
４８０ 学 会 講 演 抄 録
№１５：鎖骨頭蓋異形成症における蝶形骨形成障害の病態解明
三友啓介１）
，松永 智２）
，北村 啓３）
，中村 貴４）
，齋藤暁子４）
，東 俊文４）５）
，阿部伸一２）
末石研二６）
，山口 朗５）
，村松 敬１）５）
（東歯大・修復）１）
（東歯大・解剖）２）
（東歯大・組織
，
発生）３）
４） ５） ６）
（東歯大・生化）（東歯大・口科研）（東歯大・矯正）
目 的：鎖 骨 頭 蓋 異 形 成 症（Cleidocranial
dyspla-sia：CCD）は 常 染 色 体 優 性 遺 伝 性 の 症 候 群 で，
RUNX２遺伝子変異で発症することが特定されてい
る。CCD の基本的な病態は膜性骨化の遅延であり，
頭蓋顎顔面領域における特徴的な症状として頭蓋冠
縫合部癒合不全，泉門開大，中顔面劣成長，高口
蓋，口蓋裂・歯の萌出遅延が知られている。一方，
蝶形骨は膜性骨化と軟骨内骨化の複合骨化であるこ
とが報告されており，CCD において蝶形骨形成障
害を認める報告も散見されるが，詳細な病態につい
て 不 明 な 点 が 多 い。そ こ で 本 研 究 は，CCD 及 び
Runx２
+/-マウスの蝶形骨における形成障害の実態
把握と，その発生メカニズムの一端を明らかにする
ことを目的とした。
方法：本研究では１）Runx２ +/+
及び Runx２
+/-マウ
スの胎生期・出生後の蝶形骨の組織学的（HE・TB
染色）及び免疫 組 織 化 学 的 観 察（Osterix），２）
Runx２+/+
及び Runx 2
+/-成獣マウスを用いた蝶形骨
のマイクロ CT 解析，３）CCD 患者の CT 画像を
用いた蝶形骨の形態学的解析を行った。
結果および考察：胎生１４．５日において Runx２ +/+
で
は将来の蝶形骨翼突起内側板領域に Osterix 陽性の
間葉系細胞の凝集がみられたが，Runx２
+/-では間
葉系細胞の凝集はみられなかった。胎生１６．５日にお
いて Runx２
+/-では将来の翼状突起内側板領域に間
葉系細胞の凝集がみられ，その中心にメタクロマ
ジーを示す軟骨を認めたが，Runx２ +/+
と比べて翼
状突起内側板の長さは短く，骨形成の遅延を認め
た。出生直後，Runx２ +/+
では翼状突起内側板上部
２／３はよく発達した海綿骨構造で占めており下部１／３
に成熟した軟骨細胞を認めた。一方，Runx２
+/-で
は翼状突起内側板の中心に海綿骨構造を認めたが，
Runx２+/+
と比べ骨の発達は未熟で翼状突起内側板
の長さも短かかった。成獣マウスを用いたマイクロ
CT 解析でも Runx２
+/-の翼状突起内側 板 は Runx
２+/+
と比べて有意に長さが短かった（ p＜０．０１）。ま
た，CCD 患者の CT 画像解析でも健常者と比較し
て翼状突起内側板が有意に短かった（n＝４）。こ
れらより CCD では蝶形骨翼状突起内側板に低形成
が起こることが明らかとなった。
（研究協力者：長崎大学 小守壽文教授）
№１６：乳幼児における口腔内細菌叢の確立までの経時的解析
新井 敬，桜井敦朗，本間宏美，永井宜子，新谷誠康（東歯大・小児歯）
目的：近年，人体の各部位に存在する細菌叢を解析
し，細菌叢の変化が疾患の発生へどのように影響す
るかを調べる研究が多く行われている。ヒトの口腔
内では，胎児の間は無菌と考えられるが，産道を通
過するときから細菌感染が始まる。しかし，齲蝕の
有無などで群分けした被験者の口腔内細菌叢の差異
を明らかにする研究が行われている一方で，乳幼児
における細菌叢の形成過程を経時的に解析した研究
はほとんど行われていない。本研究は，出生直後か
ら定期的に同一小児の唾液と舌スワブ標本を採取
し，乳幼児の口腔内細菌叢を解析した。
方法：今回，５名の乳幼児を対象とし，出生直後か
ら定期的に唾液と舌スワブを採取した。採取は哺乳
や食事の影響を避けて空腹時とし，かつ歯面清掃か
ら３時間以上経過後に行った。採取後は市販のキッ
トを用いて細菌由来の DNA を抽出した。得られた
ゲ ノ ム DNA を テ ン プ レ ー ト と し て，細 菌 の１６ s
rRNA 遺伝子の一部配列の増幅を行い，次世代シー
クエ ン サ ー Miseq に よ る 遺 伝 子 シ ー ク エ ン ス を
行った。得られた遺伝子配列はウェブ上のデータ
ベースと照合して試料中の細菌種を推定した。ま
た，特に多く検出された細菌種については，構成比
率の推移について解析した。本研究の手法について
は東京歯科大学倫理委員会の承認を経て行った（承
認番号２５１）。
結果および考察：各対象児から採取された標本から
検出された細菌の属数は，出生時には２０前後，２歳
を超えると４０～５０に増加した。唾液と舌スワブ標本
での細菌叢で大きな違いは認められなかった。研究
期間を通じて，Streptococcus 属の構成比が高かった
が，経時的に減少傾向を認めた。 Staphylococcus 属
は生後６～８か月までは高い構成比で認められた
が，その後は顕著に減少していた。また，本研究で
は，生後６～９か月以降に細菌構成パターンの明ら
かな変化が認められた。この時期から，歯の萌出や
食生活の変化が口腔内細菌叢に大きな影響を与えて
いる可能性がある。小児の口腔内細菌層は成長によ
る変化が大きいと考えられるが，健全な口腔内細菌
叢を構築するために小児期の細菌叢形成過程を明ら
かにすることは，口腔の健康を生涯にわたって保つ
ため，また，口腔疾患に関与する細菌学的要因を明
らかにするために有用であると考えている。
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