物質

口腔 領 域 ^{に お け る}抗 生物質^の組 織 移 行 ^に関 す^る研 究

金 沢 大学 医 学 部 附属 病 院 歯 科口腔外 科(主 任^: 玉井健 三教 授)

中 村 ^{正 利}

(昭和^{5 5}年⁴ 月5 日受 付)

本論 文^の要旨は 昭和^{5 2} 乳 第2 5回 日本 化 学療 法 学 会総 会, 昭和^{5 3}乳 第^{2 3}回 日本^口腔外 科学 合 総合, 昭 和^{5 4}乳 第2 4同 日本口腔 外 科学 会 総 会で報 告し た･

抗 生 物 質^の血 中 濃 度お よ び組 織 移 行に関 する研 究 は, 種^{々 の}面か ら研 究が進め ら れて いる が, ヒ ト の組 織^{につ い て の}研 究は少な く,口腔 外 科 領 域^におい て は,

村田 が顎 骨 内嚢 胞^への 0Ⅹytetr a CyClin e の移 行^に関 す る研 究を報 告^{l )}し て^いるにすぎ ず,は と ん ど^の報 告は 実 験 動 物に よ る もの であ り, 抗 生物 質^が感 染 病 巣で起 炎 菌^の最 小 発育阻 止 濃 度(M I C)以上^の濃 度で移 行して いる か否か は, これ ら実 験 動 物に よ る結 果か ら推 測す る 以外^に方 法が な^い｡

そこで著 者^{はt 口}腔 外 科 領 域^におい て感 染^の門戸 と な り易く, 手 術 時^に切 開を加え る機 会が最も多^い歯 肉

につい て, 抗 生 物 質^の移行 性^に関す る研 究を試み た^. そ^の際, 採 取し た歯 肉^の組織 構 造^の相 連^, すな わ ち健 康な正常 歯 肉と線 維 化^の強^い療 痕 歯 肉とでは抗 生 物 質

の移 行性^に相 違が認め ら れ ること が. 日常口腔 外 科 手 術 後^の外科 的侵 敷^こ伴^{っ て}現 象 的にみ ら れ る^{の で}, 両 者^の組 織 内 濃度を測 定し. 各 移 行 濃 度につい て比 較 検 討し た^. 使 用し た抗 生物^{質は 口腔 領 域の感 染症の起 炎} 菌^に対して感 受 性が高く^{2 〉},好 気 性 菌お よ び嫌 気性 菌^に 対しても抗 菌 力が優れ 仁現在^の口腔 領域^の感 染 症^に対 しで第1 次 選 択 剤と して使用 す^べきであ る と さ れて い る^{3 )} Am picillin,Cephalo ri d in e お よ ぴ 0Ⅹy t^etr a^‑ C yClin e の3 剤を選 択し実 験し た. さ ら^に性 別^によ る

移 行 性^{につい て}も併せ検 討を試み た^.

対象お よ び方 法

Ⅰ. 対 象

197 5 年 6 月か ら 1979 年1 2月まで の4 年 6 ^ケ月 間 に金 沢 大 学 医 学 部 附属 病 院 中央 手 術 室^{に て口}腔 外 科手 術を施 行し た男性1 59 名, 女 性1 25 名^の計284 名を対 象と し た^. 肝^･ 腎 機 能 等^に異 常が な く, 使用 す る抗 生 物 質^の皮 内反 応検 査を施 行し, アレ ルギ ^ー 反応のな^い こと を確認 し, さ ら^に術 前^に抗 生 物 質^, 消 炎 酵 素剤な どの薬 剤^の投 与を ま^っ た く う け^{て い}な^い症 例を選択し た.

Ⅱ^. 方 法

1. Am pici llin(A B P C) ^の歯 肉 移 行濃 度 測 定 法 1) 使 用薬 剤

抗 与 薬 剤と して, 臨 床で多 用さ れ る注 射 用A B P C 5 0 0 mg ( 力 価) を え ら び実 験^に供し た^. ま た標 準 曲線 用^には A B P C ^の原 末(1g 原 未 申A B P C 力価9 5 2 ^mg)を 使用 し^, 既 知 濃 度^の標 準 液 (1 0, 5,2^.5, 1^･2 5^, 0■63･

0.3 1.0 .1 5,0^.078〃g/ 雨( 力 価))を各 実験ご とに作 製 し使用 し た.

2) 検 定 方 法

Cup^‑plate m ethod^{4州 で}血 清 中 濃 度お よ び歯 肉 組 織 内 濃 度を測 定し た.

3) 前 処 置お よ び実験 方 法

A B P C 5 0 0 mg( 力 価)を注 射 用 蒸 留 水 2 ^{m上 に}溶 解し･

手 術 開始 前^に筋注 を お^こな^い, 卓の後1 時 間 経過 し た 時点^で. 口腔 外科^{手 術 中に採 取さ れ る歯 肉を被 検 材料}

と し た^, さ らに上 腕も し く は下 肢 静 脈よ り 2 山採 血し た血 液を対 象と し た^. 採 取し た歯 肉は滅 菌^{ガー ゼ に て} 付 着血液を除 去し た後, でき る限り早 急に歯 肉を計量

Studie s o n tis s u e c o n c e ntr atio n of a ntib iotic s in o r al Ar e a. M ^{a s a}to shi N aka m ura･

C liⁿic of D e nto^‑Or al Su rg^{e r}y,(^{D ir e cto r : Prof･ K･ Ta m ai}) ^{Scho ol of M edicin e}, K a n aza w a

U niv e r si_{t y}.

口腔領 域^{に おけ る}抗 生 物質^の組 織 移 行に関す る研 究

後1 0 0 ^mg に対して1^m=か割 合で pH6 .8 ^･ 0.1 M ^･ リ ン

酸緩 衝 液 (^{P B S}) を加えて ホ モジナ イズ し 3 0 0 0rpm ^･

1 0 分 間遠心分 離し た^. 血液も同 様に3000rpm ^･ 1 0 分 間遠心分 離し た. 血 液^は血 清を, 歯 肉は そ^の上 清 液を 予め作 製してお^いた普通寒 天 平板 培 地 上^{の ス テン レ ス} 製^{カ ッ}プ( 内径 6 m m, 高さ 1 0m m) 内^へ滴 下し,18時 間 37 ℃で培 養し た後,形 成さ れ る阻 止 円^の直 径を計 測し た. 標 準 液は各症 例ご とに作 製し標 準 曲 線を求め, そ の曲線か ら各 移 行 濃度を算 出し た.

得ら れ た値は各症 例を比 較す る た めに, 患 者^の体 重

の相 違を考 慮し, 移 行 濃度^の変 動を補正 す る目 的^で下 記^の計 算 式を 用^いた^.

3 0 3

移 行 濃 度 (F^Lg/^ml o r F^Lg/g) 50 0 mg/体 重 (kg)

= Ⅹ

Ⅹ は体 重^に対す る A B P C の投 与 量を ^一 定^にし た と 想定し た場 合^の移 行 濃 度で, 体 重^によ る移 行 濃 度^の変 動を補 正す る^こと が可能であ り, 全 症 例^を対 比^･ 分 析 し た.

な おホ モ ジ ナイ ズに使 用し た器 具は 5 m⊥用 硝 子 製^ホ

モ ジ ナイ ザ ^ー ( 池 本^, 東 京) を^{ホ モ ジ ナ}イ ザ^ー 電 動 装 置 (S M ^‑ 3 型^, オ^メガ^, 東京) ^に連結し組 織^{エ マ ル ジ}

ョンを作 製し た.

2. Cephalo rid in e( C E R )^の歯 肉 移 行 濃 度 測 定 法 1) 使用 薬 剤

投 与薬 剤と して_, 臨 床^で使 用す､

る注 射 用C E R 5 0 0

mg( 力価) を用^いた^. 標 準 曲 線用^には C E R の原 末(¹g

原未 申C E R 力価9 9 9 mg) を用^い, 既 知 濃度^の標 準 液 (2 0^,1 0, 5,2^.5,1 ^.2 5,0^.63,0 .31, 0^.0 7 8〟g / mH 力 価)) を各 実 験ご とに作 製し使用 し た.

2) 検 定 方 法

A B P C と同 様^{にC u}P^‑plate m ethod によ^って移 行 濃 度を測定し た が, 検 定 薗^の選択な どについ ては予 備 実 験^によ り決 定し た^.

3 ) 前 処置 お よ び実 験 方 法

A B P C にお け る方 法と ま^った く同 様^に施 行し た^. 3^. 0Ⅹy tetr a CyClin e( O T C) ^の歯 肉 移 行 濃 度 測 定 法 1) 使_用薬 剤

投与 薬 剤と して, 臨 床^で使 用す る O T C 2 5 0 mg ( 力 価) 静 注 液を用^いた.ま た標準 曲 線 用^には O T C ^の原 末 (1g 原 未 申O T C 力価 90 5mg) を用^い, 既知 濃 度^の標 準 液 (1 0, 5 , 2.5, 1.2 5, 0.6 3, 0^.31, 0^.1 5 ,

0.07 8〟g/ mエ( 力 価)) を各実 験ご とに作 製し使 用し た^. 2) 検 定方 法

A B P C お よ び C E R と同様^に C uP^‑plat_e m ethod で

移行 濃度を測定し た^.

3 ) 前 処 置お よ び実験 方 法

O T C 2 5 0 mg( 力 価) を注 射 用 蒸 留 水^で稀 釈し,全 量 20 m は して手 術 開 始 直前^に静 注し.5分 後^に上 腕も し く は下 肢 静 脈よ り 1 ^mエ採 血を お ^こ な ^い, 直 ちに 0^.1 M ^･ P B S (pH 6.8)1 mL を加え 2 倍^に稀 釈し た^{. 一} 方口腔 外 科 手 術 中におい て.静 注 後 30 分 経 過し た時点

で歯 肉を採 取し, 滅 菌ガ ^ー ゼで付 着 血液^を除 去し被検 材 料と し た. 以 下A B P C,C E R と同様の方 法^で組 織^エ

マ ルジョ ンお よ び血 液を遠心分 離し た. な お O T C に

関し^て は遠心分 離し た披 検 材 料を カップ内へ滴 下し た 後,4 ℃以下に1 0 時 間, 予 備 拡 散を おこな^った後t37

℃ ^･1 2 時 間培 養し阻 止 円 直 径を計 測^{し た.}

ま た A B P C, C E R と同 様^に補 正値を用い て各 症 例を 対 比^･ 分 析し た^. O T C にお け る計 算式^は下 記^に示 す^.

移行 濃 度 (〃g/^ml o r 〃g/g) 2 5 0m g/体重 (kg)

= Ⅹ

成 棟

Ⅰ^. A B P C の歯 肉組 織 内 動 態に^{つ い}て 1. 予 備 実験

1) 検 定 菌^の選 択に関 する基 礎実 験

抗 生 物 質^のb io a s s ay に使 用 す^る検 定 菌は被 検 抗 生 物 質^に対して感 受性が高^{い こ}と が第1 条 件^であ る^. つ

ま り, 菌^の抗 生物 質^に対す る感受 性が高い ほ ど低 濃 度 測 定が可能であ る. さ らにC up^‑plate m ethod にお^い ては阻 止 円^の鮮 明度も要 求さ れt さ らに取り扱^いが容 易^で安 全な薗 株で あ ること が望ま しい. A B P Cの

b io a s s ay には ^一般^にM ic r o c o c c u slute u s が繁用 さ れて い る が, Ba ci11u s s ubtilis, S^taphylo c o c c u s

a u r e u s を使 用^{して いる}実 験も あ る た め^に,著 者は基 礎

実 験と し^てM ^.lute u s A ^{T C C 9 3 4 1} 株, B^. s ubtili^s A T C C 6 6 3 3 株, S. a u r e u s 2 0 9 P 株お よ び B. c e r e u s

A T C C l 1 7 7 8 株を用^{い て}阻止 円^の形 成を比 較 検 討し た^.

そ^の結 果は表1 に示す ご と く, M . lute u s A T C C 9 3 4 1 株が阻 止円 が最も大き く,境 界も鮮 明^であ^っ た.

B^. s ubtilis A T C C 6 6 3 3 株は阻 止 円^の境 界は鮮 明で あ る が阻 止円直 径は小さ く. 低 濃度 測定ほ不 可 能^であ

っ た^.S ^. a u r e u s 2 0 9 P 株は境 界が不鮮 明^{であ り,}計 測

誤差を生じ易^いと考え ら れ る成 績であ^っ た^. さ らにB^.

C e r e u S A T C C l 1 7 7 8 株は 5^.OFLg/^mL 以下の濃度で は阻 止円^の形 成が な く, A B P C の b io a s s ay にお け る検 定 菌と して は 不適 当であ る と す る結果^であ^った^.

以上^の成 績か ら, 本 実 験にお け る検 定 菌^{と して M .}

1ute u sA T C C 9 3 4 1 株を使 用し た^. ま た接種 繭量 が阻

4 0

3 5

3 0

(

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缶 ぷ

E 巾

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Tab le l. A ^mpicillin s e n sitivi_{t y} of te st str ain s･

Te st str ain s

Inh ibitio n b_{y t}he A m picillin c o n c e ntr atio n(F^Lg/^ml) ^of 5.0 2.5 1^.2 5 0^.6 3 0.3 1 0.1 5 0^.0 7 8 M ic r o c o c c u slute u s A T C C 9 3 4 1

*

4 5.2 ⁴2^.7 3 9^.8 3 7^.0 3 4.8 32.0 29^.2 Ba cillu s s ubtilis A T C C 6 6 3 3 1 8^.3 1 6^.2 1 3.4 1 1.0

Staph_ylo c o c c u s a u r e u s 2 0 9 P 2 3^.7 2 1.3 1 9.1 1 8^.0 1 4^.9 1 3.0 1 0.9 Ba cillu s c e r e u s A T C C l 1 7 7 8

* ♯

*

I)ia m ete r of i nl¹ib i^{to r}y ^{z o n e}(^{m m})^.

=

Inhib i^to ry ^{z o n e w e r e n o}t ob^{s e r v e}d･

0.1 5 0.31 ∩.6 3 1.2 5 Z.5 5,O

A 叩う^c¶1 軸 C O n C e ntr atl^{o n}(明 /^ml) F ig^. 1^. Influ e n c e of diffe r e nt pH pho sphate

s olutio n o n inh ibitio n z o n e of A m picillin.

止 円^の大き さに影 響を お よ ぼ し^, 少 量^では阻止 円は大 き く な る が, 境 界が不 鮮 明と な る た めに, 本 実験^にお い て は菌数を 1 0⁷c ells/ mい^こ調 整して施 行 した.

2) 緩 衝液^の選 択に関す る基 礎 実 験

B io a s s ay におい て標 準 曲 線 用^の稀 釈 液お よ び摘 出

組 織をホ モ ジナ イ ズする た めに綬 衝 液が必 要^{であ る.} 著 者は, 生理食 塩 水お よ び 0^.1 M ^･ P B S で pH 6.4,

6^.8,7.4 ^の各pロの溶 液を用^{い て}阻止 円に お よ ぼ す影 響^{につい て}比 較 ^･検討し た^.

その結 果は図1 に示 すご と く, わ ず か^に酸 性側^で阻 止円の拡 大傾 向を示し た が. 嘘 度 測 定^に影響す る ほ ど では な く, 本 実験^にお^{い て} は緩 衝 液と して 0^.1 M ^･ P B S (pH 6^.8) を使 用して標 準 液^の稀 釈お よ び組 織^エ

マ ルジ^ョ ンの作製を おこな^っ た^.

3 ) 血 液お よ び組 織 採 取 時 間^の検 討

血 液お よ び組織 採 取時 間^は各 症 例を比 較 検 討 する た

(

ぞ 竺

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●^{･ ‑･}● ^{s E R U M} X^‑一斗×^{G INGIV A}

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1 5 30 ⁶0

T I M E AF T E R IN JE CT10N (^mln)

F ig^. 2^. A m picillin c o n c e ntr atio n in s e r u m a nd giⁿgi^{v a a}fte r i^.m administ_{r a}tio n of 50 0

m g^. Ea ch v alu e r ep^{r e s e n}ts m e a n a nd S^･E of fiv e patie nts.

めには, 抗 生 物 質投 与 後, 移行 濃 度が^{ピー ク に}達し た 時 点^の血液お よ び組 織を選択す る^こと が望ま し^い. 著 者は本 実験を おこな う前に予 備実 験と して_, A B P C 筋 往 後t 血 清 中 濃 度^{お よ び}歯 肉 組 織 内 磯度^の時 間 的推移

に つ い て検 討し た^.方 法は A B P C 5 0 0 ^mg筋 注 後1 5 分^, 3 0分,1 時 間,2時 間^にそ れ ぞ れ血 液お よ び歯 肉を採 取

し^{c u}p^‑plate m ethod で各 移 行 濃 度^の測 定を お^こな^っ た.

口腔 領 域^{に お}け る抗生 物 質の組 織 移行^に関す る研 究

結 果は図2 に示す ご と く, 血 清 中 濃度^{の ピ ー ク}は筋 注後¹ 時 間^に認 め ら れ.歯 肉 組 織 内 濃度は 30 分^{で ピ ー} ク^に達し た 1 例を除^{い て}, 他^の4 例は す^べて筋 注 後1 時 間^{で A B P C の}移 行が^{ピ ー} ク に達し た後, 両 者 共 時 間

の経 過^{と と もに}排 泄さ れ る結 果が得ら れ た^･

以 上^の成績か ら, 本 実 験におい て血 液お よ び歯 肉を 採取す る時 間を筋 往後 1 時 間^に統^一 し, 各 移 行 濃 度を

Table 2. Ampicilliⁿ c o n c e ntr atio n s in s e r u m a nd gi ^{ngl V a.}

T issu e

No.of

C a S e S

Am picillin c o n c e ntr atio n in

Se r u m Giⁿgi^{v a} (〃g/ml) (〟g/g)

No r m al 4 2 0^.9^士0^.3 0.7士0.5

C ic atricial 3 0 0.9^±0.4 0.4^士0^.3

S ER UM G IN GI 〉A Fig^.3. A mpicillin c o n c e ntr atio n sin s e r u m a nd

n o r m al gl ngl V a.

3 0 5

測 定し た.

2^, 正常 歯 肉と廠 痕 歯 肉^にお け る A B P C ^の 移 行^に

つ い て

正 常 歯 肉4 2 例t 療 痕 歯 肉30例^の計7 2 例^につ い て A B P C 5 0 0 mg筋 往 後1 時 間^の血 清 中濃 度お よ び歯 肉 組織 内 濃度を測 定し た. その結 果^. 正 常 歯 肉症 例^では 表2,図3 ^に示す ご と く血 清 中 濃 度は0 .2 ^〜 2^.1〟g/

mエの範 囲^にあ り^,平 均 値は0 .9 ± 0 .3〟g/ mエであ^っ た^. 歯 肉 組 織 内 濃 度は0.2 ^〜 2.6〟g/_{g の}範 囲^にあ り,平 均 値は 0.7 ^±0.5′上g/g であ^っ た,血清中濃 度と歯 肉 組 織 内濃 度を比 較す る と, 42 例 中 13 例 ( 約30 % ) ^におい

て歯 肉 組 織 内 濃 度が血 清 中濃 度よ りも 高^い値を示し た.

一方.碗 痕 歯 肉症 例^におい ては表2, 図4 に示す ご と く.血清 中濃 度は 0.3 ^〜 2.3〟g/ mエ^の範 囲^に認め, その

平 均 値は 0^.9±0^.如g/ 扉 であった^. 歯 肉組 織 内濃 度は 0.03 ^〜 1.4′^∠g/_g の範 囲^にあ り^･, 平 均 値は 0^.4 ± 0^.餌g/g とする成 績^であった.血 清 中濃 度^と歯 肉組 織 内濃 度との関 係は^, 30例 中2 例 ( 約6 %) ^のみ が歯 肉

p g/ml J｣g/g

S ERU M G IN GI VA F ig^. 4^. A mpicillin c o n c e ntr atio n s in s e r u m a nd

Cic atrici al _gl ng^{l V a,}