抗技協取 試験法
取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 機密保持 取 Ｄ
S3-1
最小発育阻
濃度測定法Ⅱ
2012
度版
光触媒抗菌剤 MIC測定法
適用範囲
取 曓試験法 粉曒状光触媒抗菌剤 適用
試験菌株
取 (1) Staphylococcus aureus NBRC 12732 (ATCC 6538P) 取 (2) Escherichia coli NBRC 3972 (ATCC 8739)
試験 準備
取 試験 用い 薬品 器具等 特 指定 い 日曓工業規格 規定 び 日曓薬局方 規定 を用い
3.1 器具 機器
取 (1) Ｌ字形試験管 ス製 長さ130～140mm 高さ110～120mm 外径18mm 取 (2) 振 う機 恒温水槽 び振 う 養機 ±1℃以内 精度 運転可能 機種 取 (3) 恒温器 ±1℃以内 精度 運転可能 機種
取 (4) 紫外線照射装置
取 (5) 紫外線強度計 測定波長域310～400nm
3.2 地
取 (1)普通寒天 地 NA 地
取 取 取 取 取 肉 ス取 取 取 取 取 取 取 5.0ｇ 取 取 取 取 取 ン取 取 取 取 取 取 取 10.0ｇ 取 取 取 取 取 塩化 取 取 取 取 5.0ｇ 取 取 取 取 取 寒天取 取 取 取 取 取 取 取 取 15.0ｇ 取 取 取 取 取 精製水取 取 取 取 取 取 取 1,000 ml 取 取 取 取 取 取 取 取 pH 7.0～7.2
試験菌 陽性菌 陰性菌 代表 各1種類を選択
Ｌ字形試験管 栓 空気 透過 栓を用い
ノ 振 う 水 振 うあ 振方式 振 う機い 使用可 ノ 振
う機 タイ ッ 社 ッ ノ ンⅡＡ あ
原則 振 う機 組 合わ 恒温水槽を用い ン 光源 十 離 い
ン 温度 昇 い場合 振 う 養機を用い 良い
ッ イ 蛍光 ン 概 波長 310～400nm 紫外線を放出 いわゆ 殺菌灯
出 紫外線 波長 長い あ 使用 光源 曓数 出力数 い 規定
い
扱い説明書 記載 紫外線強度計 定期的 校 こ 一般的 紫外
線強度計 測定波長域 び感度 微妙 違う 測定値 一致
いこ 多い 特 状 ッ 型 光部を持 紫外線強度計 測定値 3倍程度
抗技協取 試験法
取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 機密保持 取 Ｄ
S3-2
取 (2) ヒン ン イ ン 地 MHB 地 取 取 取 取 取 肉抽出液取 取 取 取 取 取 300.0ｇ
取 取 取 取 取 ノ酸取 取 取 取 取 取 17.5ｇ 取 取 取 取 取 可溶性 ン ン取 取 取 取 1.5ｇ 取 取 取 取 取 精製水取 取 取 取 取 取 取 1,000 ml 取 取 取 取 取 取 取 取 pH 7.3±0.1
取
試験方法 4.1試験菌 養
取 試験菌をNA 地 移植 35～37℃ 24時間 養 こ 養菌をMHB 地 一白 金耳量移植 35～37℃ 16～20時間 養
4.2接種用菌液 調製
取 MHB 地 養液を希釈 菌数 1.0～5.0×10
4
ml う 調製
4.3試験用 地 調製
取 滅菌 Ｌ字形試験管 滅菌 MHB 地10mlを 注 試料 をこ 地 100μ ｇ mlを 準 順次2倍量 1 2倍量 添加 を 系列用意 明 条件試験 暗条件試験 試料添加 地 pHを測定 試料添加前 ｐＨ 比べ
±0.5 範囲 収 い け pH調整を行う こ 試料無添加 試験用 地 を ( 明条件対照 暗条件対照 )用意 こ う 調製 地 接種菌液 0.1ml を接種
日曓化学療法学会 寒天 板希釈法 ヒン ン寒天 地 用い い
MHB 地 栄研化学 寒天 地 DIFCO BBL Merck製 あ
希釈 用い MHB 地 日曓化学療法学会標準法を準用 接種用菌液 菌数 い
同標準法 同程度 接種菌数 う 設定
Ｌ字形試験管 乾熱滅菌 160～180℃ 120 以 MHB 地 高圧蒸気滅菌 121℃ 15 間 栓 適 方法 高圧蒸気滅菌 乾燥等 滅菌 試験 供
地 直接試料を入 試料由来 微生物 試験結果 影響を及ぼ こ 考え
試料 無菌 あ こ 望 い 滅菌 可能 あ 試料を滅菌 滅菌
方法 乾熱滅菌以外 高圧蒸気滅菌 ス滅菌 あ こ 望
い
取 高温加熱 可能 試料
取 取 試料を160～180℃ 120 以 加熱 試料 滅菌 び乾燥を行う 乾燥
を入 タ中 放冷さ 取
取 高温加熱 不可能 試料
取 取 試料を適当 方法 滅菌 試料 変質 い温度範囲 び時間内 乾燥さ こ を
を入 タ中 放冷さ こ 場合 乾燥 び滅菌条件を明記
加熱温度 時間 不十 あ Bacillus属 胞子 生残 こ あ 注意
規格値 800μｇ ml あ こ 3,200 1,600 800 400 200 100 50 25μｇ ml
試験 い
抗技協取 試験法
取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 取 機密保持 取 Ｄ
S3-3 4.4試験操作
取 試料 均一 混合さ う 振 う 振 う数100～200 rpm 水 び 振 う 場合 振幅40～60mm ノ 振 う 場合 振幅0～24度 明条件試験 及び 明 条件対照 試験用 地 紫外線照射 暗条件試験 及び 暗条件対照 試験 用 地 遮光 35～37℃ 24時間振 う 養
取 明条件対照区 試験用 地 最 紫外線強度 強い 置 ッ イ 蛍光 ン 中央付近 養
4.5試験成立条件
取 記 試験成立条件を べ 満 時 試験 有効 見
(1) 養 肉眼観察 暗条件対照 試験 地 試験菌 発育 認 こ (2) 養 肉眼観察 明条件対照 試験 地 試験菌 発育 認 こ
4.6 定
取 養 肉眼観察 試験菌 発育 有無を調べ 発育 認 い 明条件試験 試験用 地及び 暗条件試験 試験用 地 最 濃度を 明条件 最小発育阻 濃 度及び 暗条件 最小発育阻 濃度
以
曓書 一部あ い 全部を無断 複写複製 こ 法 認 場合を除 著作 権 侵害
抗菌製品技術協議会
振 う機 Ｌ字形試験管を 付け 状態 菌液 面 置 測定 紫外線強度を ッ
型 光部を持 紫外線強度計 測定 場合 0.4～1.0 mW ｃ㎡ 型 光部を
持 紫外線強度計 測定 場合 1.2～3.0 mW ｃ㎡ う ッ イ 蛍光 ン
置を調整 試験菌 種類 紫外線強度 変わ 良い 但 MIC値 照
射 紫外線強度を付記 こ 黄色 球菌 関 記 紫外線強度範囲
限 明条件対照区 繁殖 い わち 4.5 試験成立条件 を満 さ い
場合 あ 限近 紫外線強度 設定 方 良い
取 取 光源 点灯 30 以 経 紫外線強度を測定 こ
肉眼観察 試験菌 増殖 確認 菌数 少 10 ml以 あ
試験菌 発育 有無 肉眼観察 定を行う 試料 濁 試験菌 発育 有無
定 い場合 次 方法 定 地を ン酸緩衝生理食塩水 10,000倍 希釈
白金 線 内径1mm を用い 普通寒天 地 画線 試験菌 発育
有無を調べ
取 * ン酸緩衝生理食塩水：KH PO 34gを精製水500ml 溶解 1N NaOH pH7.2 調整
精製水を加え 1,000ml こ 1.25mlを生理食塩水 0.85％NaCl 1,000ml
121℃ 15 間高圧蒸気滅菌
用い ッ イ 蛍光 ン 種類 型式 曓数 Ｌ字形試験管 菌液 面 距離
菌液 面 置 蛍光 ン 中央部 び端部 紫外線強度 用い 紫外線強度計
