Clinico-epidemiologic heterogeneity and relation to the
mayibout 2 hemorrhagic fever, Gabon
Department of Pathology
Mwanatambwe Milanga • Yamada Nobutaka Asano Goro
Division of Laboratory Animal Science
Shichinohe Kazuhiro • Suganuma-Shimizu Masumi Department of Microbiology, Kinshasa University, School of Medicine, Republic of Congo
Muyembe Tamfum
Hemorrhagic fever abruptly surging in a defined cen-tral african belt these last 2 decade, with devastating human heavy toll, seem to have a common ground in their epidemiological profile.
With the Yambuku epidemic at the north western part of the Democratic Republic of Congo in 1976, estima-tions were of 300 deaths. In 1995, the Kikwit epidemic, in the Bandundu province, at about 250 km from the capi-tal city of Kinshasa, brought about a casuality of more than 150 deaths with better defined socio-epidemiologic and ecological features (Age of patients, sex distribu-tion, profession and geographical locations). Here, over 70% of the first-generation patients were hospital workers and, the subsequent 2 generation of patients seemed to be related to this hospital cluster of patients.
In about 45 days, the spread out of this second epidemiologic outbreak came under control. Using the disease transmission chain, epidemiologic features and serologic pattern of the etiologic agent are discussed, with chronologic and topographic correlations to the Yambuku (Zaire/Congo) and the Mayibout 2 (Republic of Gabon, 1996) outbreaks.
展 示 発 表
P‑1)非 典 型 ア ポE遺 伝 子 タイ プ を持 つ 家族 性III型 高脂 血症 患者8例 の解 析
老 人 病 研 究 所
分子生物学部門 八巻 恵美 ・野辺 由紀 子 ・江 見 充 同 疫学部門 勝 又晴美
目的 ・方 法:家 族 性III型 高 脂 血 症(HLPIII)は,高 コ レ ス テ ロー ル 血 症 お よ び 高 ト リ グ リセ リ ド血 症 とVLDLレ ム ナ ン トで あ る β−VLDLの 上 昇 を特 徴 と し ,早 発 性動 脈硬 化 症 を 伴 う.HLPIII患 者 の 大 部 分 が ア ポE2/E2の ホ モ 接 合 体 で,発 症 に は肝 臓 の 受 容 体 へ の 結 合 能 を 欠 くア ポE2
上 の コ ド ン158Cys変 異 に 伴 うVLDLレ ム ナ ン トの 代 謝 障 害 が 不 可 欠 と考 え られ て い る.今 回,ユ タ 州 在 住 の 高 脂 血 症 患 者 の ス ク リー ニ ン グ の 過 程 で 典 型 的 な ア ポE対 立 遺 伝 子 型 を 伴 わ な いHLPIII患 者8名 を 同 定 した の で,そ の生 化 学 的 お よ び 分 子 遺 伝 学 的 検 討 を行 った.
結 果:HLP患 者8名 は各 々 異 な る 家 系 に 由 来 して お り, そ の 血 清 脂 質 の 平 均 値 は総 コ レ ス テ ロ ー ル382mg/dl,総
ト リグ リセ リ ド411mg/ai,HDLコ レ ス テnー ル34mg/
dl,LDLコ レ ス テ ロ ー ル190mg/dl,VLDLコ レ ス テ ロ ー ル1551ng/dlで あ り,VLDLコ レ ス テロー ル/総 ト リ グ リ セ リ ド比 は0.38と 著 し く上 昇 し て い た .ア ポEタ イ プ を VLDL蛋 白 質 の 等 電 点 電 気 泳 動 お よ び ア ポE遺 伝 子 の 遺
伝 子 タ イ ピ ン グ で 調 べ た と こ ろ,5名 が ア ポE4/E3タ イ プ で112Arg‑158Arg/112Cys‑158Argの ヘ テ ロ 接 合 体, ま た3名 が アポE3/E3タ イ プ で112Cys‑158Argの ホ モ 接 合 体 で あ っ た.
考 察:こ れ ま でHLPIIIの 発 症 に は ア ポE2,す な わ ち 158Cysの ホ モ 接 合 性 が 必 須 と考 え ら れ て い た が,(1)ア ポ E上 の158Cys以 外 の 機 能 障 害 変 異 の 存 在 あ る い は,(2)ア ポE異 常 を伴 わ な いHLPIIIの 発 症 機 構 の 存 在 が 強 く示 唆 さ れ た.
P‑2)骨 粗 鬆症 にお け る遺 伝 子多 型 と骨密度 の相 関 研 究
老 人 病 研 究 所
分子生物学部門 太 田信 孝 ・塚元 和弘 ・江 見 充 付属病院整形外科 白井 康正
骨 粗 鬆 症 は 環 境 因 子 の み な らず 遺 伝 因 子 に よ っ て も影 響 を 受 け る多 因 子 疾 患 で あ る.骨 密 度 の 決 定 に お い て遺 伝 因 子 は重 要 な役 割 を 担 っ て お り,い くつ か の 遺 伝 子 は お そ ら く骨 代 謝 に お い て 調 節 因 子 と し て働 い て い る.そ の遺 伝 因 子 を明 らか に す る 目 的 で,こ の疾 患 に 関 わ る と思 わ れ る 内 分 泌,ホ ル モ ン,サ イ トカ イ ン,レ セ プ タ ー な ど の候 補 遺 伝 子 に着 目 し,そ の 遺 伝 子 あ る い は そ の 近 傍 に 存 在 す る DNA多 型 マ ー カ ー を単 離 し,そ れ ぞ れ 骨 密 度 との 相 関 を 検 討 した.ま ずP1人 工 染 色 体(PAC)で 作 製 した ヒ ト全 ゲ ノ ム ラ イ ブ ラ リー か ら,候 補 遺 伝 子 を含 むPACク ロ ー ン を同 定.ク ロー ン 内 の 遺 伝 子 近 傍 のCA反 復 配 列 を単 離 し,そ れ を 前 後 で 挟 む よ う にPCRプ ラ イ マ ー を新 た に 作 製 し,こ れ を マ ー カ ー と し た.候 補 遺 伝 子 はIL6,IL6R, CASR,PGR,TNFA,SRC,MGPの7個 で あ る.各 マ ー カ ー に お け る遺 伝 子 多 型 と骨 密 度 との 相 関 を 試 み た 結 果, IL6,CASR,MGPの マ ー カ ー で強 い 相 関 が認 め られ た.
今 後,こ の よ うな 遺 伝 子 多 型 を利 用 した マ ー カ ー を用 い れ ば骨 粗 鬆 症 の 危 険 因 子 を 予 測 し予 防 医 学 に貢 献 で き る と思 わ れ る.
P‑3)ア ン ギ オ テ ン シ ノ ー ゲ ンmRNAの 翻 訳 開 始 コ ドン に 関 す る検 討
老人病研究所分子生物学部門 中島敏 晶 ・江見 充
目 的:ア ン ギ オ テ ン シ ノー ゲ ン は 分 泌 蛋 白 で あ り,そ の N末 端 に シ グ ナ ル ペ プ チ ドを 有 す る前 駆 体 と し て 産 生 さ れ,シ グ ナ ル ペ プ チ ドに よ りendoplasmic reticulumを 介 し た 分 泌 経 路 へ と輸 送 さ れ る.ア ン ギ オ テ ン シ ノ ー ゲ ン mRNAの5'末 端 に は2つ の 翻 訳 開 始 コ ドン がinframeに 存 在 して い る.本 研 究 で は,い ず れ の 開 始 コ ド ンが 用 い ら
れ て い る の か?,あ る い は2つ の 開 始 コ ドン が 用 い られ て
い る の な ら ば,異 な る ア ミ ノ 酸 配 列 の シ グ ナ ル ペ プ チ ドが そ の 分 泌 に 影 響 す る の か 否 か?を 明 ら か に す る.
方 法:ア ン ギ オ テ ン シ ノ ー ゲ ンcDNAをpBluescript に 挿 入 し,TNTR coupled reticulocyte lysate system, canine microsomal membraneを 用 い,in vitroで の
translation,translocationを 検 討 し た.ま た,mammalian expression vectorのpMT2に ア ン ギ オ テ ン シ ノ ー ゲ ン
cDNAを 挿 入 し,in vivoで の ア ン ギ オ テ ン シ ノ ー ゲ ン の 分 泌 量 をPulse‑chase法 に よ り検 討 し た.
結 果:ア ン ギ オ テ ン シ ノ ー ゲ ン は 各 々 の 開 始 コ ド ン よ り 産 生 さ れ,異 な る ア ミ ノ 酸 配 列 の シ グ ナ ル ペ プ チ ド を 有 す
る2種 類 の 前 駆 体 と し て 産 生 さ れ る こ と が 示 さ れ た.in vitroお よ びin vivoに お け る 検 討 で は シ グ ナ ル ペ プ チ ド の 差 に よ る 分 泌 へ の 影 響 は 認 め ら れ な か っ た.
考 察:は じ め の 開 始 コ ド ン 周 囲 の 塩 基 配 列 に はKozak 配 列 が 認 め ら れ ず,そ の た め に 次 の 開 始 コ ド ン か ら も 翻 訳 が 開 始 さ れ た と 推 測 さ れ る.
P‑4)肝 細 胞癌 にお け るゲ ノム 不安 定性 と標 的 遺伝 子 の異 常の検 討
老 人 病 研 究 所
分子生物学部門 河村 直樹 ・永 井 尚生 ・江見 充 外科 第1坂 東 功 一
第 二 病 院
消 化 器 病 セ ン ター 小 山雅章 北里 大学理学部 柴 忠義
目的:DNAミ ス マ ッ チ修 復 異 常 は 発 癌 に お い て 重 要 な 意 味 を 持 つ.近 年,そ の 異 常 が ゲ ノ ム の 不 安 定 性(Mi‑
crosatellite Instability : MI)を 引 き起 こ し,発 癌 の 原 因 と な り得 る こ とが 遺 伝 性 非 腺 腫 性 大 腸 癌(HNPCC)を は じ め とす る数 々 の 腫 瘍 に お い て 明 ら か に さ れ つ つ あ る が,肝 細 胞 癌(HCC)に 関 し て は未 だ 不 明 な 点 が 多 い.そ こで,肝 発 癌 に お け る 標 的 遺 伝 子 の 異 常 に つ い て検 討 した.
方 法:HCC168症 例 を対 象 に,平 均100カ 所 の マ イ ク ロ サ テ ラ イ トマ ー カ ー を 用 い て,MIの 有 無 を検 索 した.さ ら に,MI(+)を 示 す 症 例 を対 象 にBAX,PTEN,hMSH6,
IGFIIR,TGFβIIRの 各 遺 伝 子 内 部 の 繰 り返 し配 列 を増 幅 す る プ ラ イ マ ー を 用 い て,PCRと ポ リア ク リル ア ミ ドゲ ル 電 気 泳 動 に よ りscreeningを 行 っ た.
結 果:HCC168症 例 中,MI(+)を 示 す の は44症 例 と 高 頻 度 に認 め ら れ た.ま た,MI(+)の44症 例 に つ い て各 標 的 遺 伝 子 の 異 常 を 検 索 し た と こ ろ,PTEN遺 伝 子(2 例),IGFIIR遺 伝 子(2例),TGFβIIR遺 伝 子(1例)に 肝 細 胞 癌 に お け る 体 細 胞 変 異 を 同 定 した.
考 察:HCCに お い て ゲ ノ ム 不 安 定 性 が 高 頻 度 に み ら れ る こ と,お よ びPTEN,IGFIIR,TGFβIIRな ど の標 的 遺 伝 子 の 異 常 が 発 癌 の 一 因 と し て 関 与 す る こ と が 明 ら か と な っ た.現 在,異 常 と思 わ れ る症 例 に つ い て よ り詳 細 な 解
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析 を進 め て い る.
P‑5)ユ タ州FH大 家 系 に お け る4種 の 新 規LDL受 容体 遺伝 子変 異 の同定
老 人 病 研 究 所
分子生物学部門 野辺 由紀子 ・八 巻恵 美 ・江 見 充 同 疫学部門 勝 又 晴 美
目的:家 族 性 高 コ レ ス テ ロ ー ル 血 症(FH)は500人 に1 人 が 発 症 す る最 も頻 度 の 高 い 常 染 色 体 性 優 性 遺 伝 病 で,心 筋 梗 塞 を始 め とす る 虚 血 性 心 疾 患 の 基 礎 疾 患 と し て 近 年 重 要 視 さ れ て い る.そ の 早 期 発 見 と予 防 ・治 療 にお け る分 子 遺 伝 学 的 ア プ ロ ー チ の 応 用 を 試 み た.
方 法:ユ タ州 在 中 の 心 筋 梗 塞 とIla型 高 脂 血 症 の 多 発 す る4家 系 を 対 象 に 各 々 の 発 端 者 のLDL受 容 体 遺 伝 子 を 各 エ キ ソ ン を プ ロ ー ブ と した サ ザ ン プ ロ ッ ト法 と各 エ キ ソ ン のPCR‑SSCP法 お よ び ダ イ レ ク トシ ー ク エ ン ス 法 に て 検量
索 し,変 異 の 同 定 を 試 み た.
結 果:E家 系 に お い て,LDL受 容 体 遺 伝 子 の エ キ ソ ン4 上 コ ド ン92にGlu→Lysの ミス セ ン ス 変 異 を認 め た.P 家 系 で は エ キ ソ ン4上 コ ド ン190にHis→Tyrの ミス セ
ン ス変 異 を認 め た.また,G家 系 で は エ キ ソ ン17上 にG塩 基 の 挿 入 に よ る フ レ ー ム シ フ ト変 異 を,H家 系 で は エ キ
ソ ン3上 コ ド ン54にCys→Serの ミ ス セ ン ス 変 異 を認 め た . 考 察:こ れ ら の 家 系 の 遺 伝 子 診 断 を行 い,若 年 者 を含 め て19名 の 変 異 候 補 因 者 を 同 定 で き た こ とか ら,家 系 調 査 と 遺 伝 子 診 断 を組 み 合 わ せ た ア プ ロ ー チ が 新 規 患 者 の 効 率 良 い 同定 に有 用 で あ る と考 え ら れ る.
P‑6)変 異 対立 遺 伝 子 間 の 相 互作 用:高LDL、 血 症2 家系 におけ るLDL受 容体 の 変異 の解析
老 人 病 研 究 所
分子生物学部門 勝又 晴美 ・野 辺 由紀 子 ・八巻 恵 美 江見 充
同 疫学部門 南 史朗
目的:高LDL血 症 と虚 血 性 心 疾 患 を 主 徴 とす る家 族 性 高 コ レ ス テ ロ ー ル 血 症(FH)は,LDL受 容 体 遺 伝 子 の 変 異 に起 因 す る も の で,通 常 は常 染 色 体 性 優 性 遺 伝 の 形 式 を と る.今 回,我 々 は 単 純 な 常 染 色 体 性 優 性 遺 伝 形 式 か らの 予 測 を越 え る 高 い 浸 透 率 を呈 す る 特 異 な 高LDL血 症2家 系 を発 見 した の で,連 鎖 解 析 お よ び遺 伝 子 変 異 解 析 に よ る検 討 を試 み た.
方 法:ユ タ 州 在 住 で 高LDL血 症 の 多 発 す るT家 系 と H家 系 に つ い て,LDL受 容 体 遺 伝 子 座 の 多 型 性 マ ー カ ー D19S394お よ びD19S221を 用 い て 連 鎖 解 析 お よ び分 離 分 析 を行 う と と も に,LDL受 容 体 遺 伝 子 の 変 異 ス ク リー ニ ン グ を行 っ た.
結 果:T家 系 に お い て の 高LDL表 現 型 は,LDL受 容 体 遺 伝 子 座 の2つ の 異 な る ハ プ ロ タ イ プ に 連 鎖 し,各 ハ プ ロ タ イ プ 上 のLDL受 容 体 遺 伝 子 上 に 各 々 異 な る 変 異,(1) エ キ ソ ン4上Cys146Terノ ン セ ン ス 変 異 と(2)IVS14+
1G→Aの ス プ ラ イ ス 変 異 を 同 定 し た.H家 系 に お い て も,高LDL血 症 は 同 遺 伝 子 座 の2つ の 異 な るハ プ ロ タ イ プ に 連 鎖 し,各 ハ プ ロ タ イ プ上 の 同 遺 伝 子 内 に(1)エ キ ソ ン4上Arg103Trpの ミス セ ン ス 変 異 と(2)IVS14+1G
→Aの ス プ ラ イ ス 変 異 を各 々 同 定 し た .
考 察:人 口 中 の 患 者 の 頻 度 が1/500と 高 いFHの よ う な 疾 患 で は,一 家 系 に お け る発 症 が 複 数 の 対 立 遺 伝 子 に 起 因 し,単 純 な優 性 遺 伝 形 式 を と ら な い 家 系 が 少 な か ら ず 存 在 す る こ とが 明 らか と な っ た.
P‑7)甲 状 腺 癌 に 関 わ るELKS遺 伝 子 領 域 の 三 次 元 P1人 工 染 色 体(PAC)シ ス テ ム に よ るゲ ノ ム ク
ロー ニ ン グ
老 人 病 研 究 所
分子生物学部門 横 田 隆 ・中田朋 子 ・北村 裕 江 見 充
外 科第2清 水 一 雄 ・田 中 茂 夫
目 的:わ が 国 に お い て は,甲 状 腺 癌 の う ち 約80%を 乳 頭 癌 が 占 め て い る.し か し,そ の 発 癌 機 構 の 全 体 像 は未 だ 明 らか で は な い.今 回,我 々 は 甲 状 腺 乳 頭 癌 に お い て 再 構 成 異 常 を示 す 新 規 遺 伝 子ELKSを 三 次 元 のPACシ ス テ ム を 用 い て ク ロ ー ニ ン グ し,染 色 体 遺 伝 子 の 全 構 造 を 明 ら か に
ゴ す る.
方 法:我 々 が ク ロ ー ニ ン グ し たELKS遺 伝 子 のcDNA の 配 列 を基 にPCR用 プ ラ イ マ ー を設 計 し,PACで 作 製 し た ヒ ト全 ゲ ノ ム ラ イ ブ ラ リー を ス ク リー ニ ン グ し た.
結 果:7つ のPACク ロ ー ン を単 離 し,得 られ たPACク ロ ー ンの 両 端 部 分 をSTS化 し,PCR用 プ ラ イ マ ー を 設 計 し,オ ー バ ー ラ ップ す る配 列 を もつPACク ロ ー ン を順 次 つな ぎ 合 わ せ てPACク ロ ー ン コ ン テ ィ グ を 作 製 して 遺 伝 子 の 全 領 域 ク ロ ー ニ ン グ し た.
考 察:現 在 ま で,ELKSの 遺 伝 子 を カ バ ー す る ゲ ノ ム ク ロ ー ン の コ ン テ ィ グ は400kb以 上 に お よ び,ELKSが 巨 大 な遺 伝 子 で あ る こ とが 判 明 した.さ らに,甲 状 腺 乳 頭 癌 に お け るELKSの 転 座 ・再 構 成 は イ ン トロ ン7内 に切 断 点 の 拳 る こ とが 判 明 した.
P‑8)human Smad familyで あ るSmad5 geneの full length cDNA,ゲ ノ ム 構 造,プ ロ モ ー タ ー の ク ロ ー ニ ン グ と ヒ ト肺 癌 に お け る 変 異 解 析
内科 第4弦 間 昭 彦 ・植 松 和 嗣 ・工 藤 翔 二