D W F
W
：乾燥減量% F
：脱脂減量% [
注]
１ 食物繊維 定量法 し 、ここに採用した酵素
-
重量法が簡便 、 信頼性 高い方法 あ 。本法 、
Asp
ら、Prosky
らによっ 提案さ 、AOAC
法 し 採用さ 広く用いら ようになった。 が国 も衛生試験法 注解等に採 用さ た。なお、動物性食品やき こ類に含ま キチンやキトサン 、 食物繊維 考えら が、窒素を含 た 、本法 正確に定量さ な い。キトサン加工食品 ようにキトサンを豊富に含 食品 、こ 点に留意す 必要があ 。しかし、食物繊維 主た 給源 な 食品 植物性食品 あ 、こ ら 食品 多く 、本法 適用に ほ 問
題 ない。
また、食品 原材料 し 用いら 水溶性食物繊維 中に 、一連 酵素処理後、約
80 v/v%
エタ ー 中 沈殿を生成しないた 本法 正しく定量 きないも があ 。そ らについ 示差屈 率 検出器付き高速液体クロマト 法を適用す 。２ ター 直径約４
cm
も ２G
２ がよい。３ つぼ形ガ ス 過器 し ２
G
２を使用す 場合に 、約１g
程 度 けいそう土が必要。４ カ シウ を豊富に含 食品 場合、 ン酸緩衝液を用い ン 酸カ シウ 沈殿が形成さ 、こ が結晶水を含 残渣 灰分を正 し く 補 正 き な い た に 食 物 繊 維 量 を 過 大 に 評 価 し し ま う こ が あ
。したがっ 、カ シウ 含有食品 ようにカ シウ を豊富に含 食品 場合に 、 ン酸緩衝液に代え 、
MES-TRIS
緩衝液MES
：2- N-Morpholino ethanesulfonic acid
、TRIS
：Tris hydroxymethyl aminomethane
使用が望ましい。なお、使用す 熱安定α -
アミ ーゼプロテアーゼ 種類及び反応
pH
が ン酸緩衝液 場合 微妙に異な、 細につい
AOAC Official Methods of Analysis 32
１17 AOAC Official Methods 991 43
を参照さ たい。５
Novo Nordisk
製注14
No.P-5380
、Sigma
製注14
No.A-9913
、Sigma
製注14
1998
年以降に 販さ い も 酵素濃度が従来品 ３倍 、10 mL 100
回 測定が可能。８
Fisher Scientific Co.
製等注14
固形分 し 約１
g
相当量を採取す こ を目安 す が、粘性が 高く、 過操作が困難な試料 場合に 、採取量を0.1
～0.5 g
に下 た 方がよい。S
PS
A 差20 mg
以内 なけ ならない。10
試料採取量が多い場合 全量が約50 mL
にな ように加え 緩衝液 量を加減す 。11 1998
年以降に 販さ い も100
回分、10 mL
包装単 も 添加量 し 示した。従来品100
回分、30 mL
包装単 も 、添加量を0.3 mL
にす こ 。12
脂質 多い試料等 、アセトンによ 洗浄を30 mL
ずつ ５回程 度に増やした方がよい。さらに、アセトンによ 洗浄 後、 エチ エーテ
10 mL
３回以 上洗浄す 、よ 効果的 あ 。13
同ー ロット 酵素に限 、10
～20
回程度 繰返し測定値から ンク値を係数化し もよい。14 Sigma
製 キットNo.TDF-100A
し も販売さ い 。[
参考文献]
１
Asp, N.G., et. al
：J. Agric. Food Chem., 31, 476 1983
２
Prosky, L., et. al
：J. Assoc. Off. Anal. Chem., 67, 1044 1984 , 68, 677 1985 , 69, 259 1986
３
AOAC International
：“Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL 19th Ed”, 45.4.07, 1995
４ 日本薬学会 ：
“
衛生試験法 注解", 295,
金原出爮1990
２ 高速液体クロマト 法 酵素-HPLC
法注１
適用さ 食品
プ ロ ス キ ー 法 分 析 が 困 難 さ 低分子水 溶性食 物繊維を 含 食 品 に適用さ 。
本法 、まず、プロスキー法 食物繊維を定量す 。次に 過工程 発 生す 液につい イオン交換樹脂によ た ぱく質、有機酸類、無機塩類 を除去し高速液体クロマト ーに供し、得ら クロマト 上 食物繊維画分 糖類以上 単糖類、二糖類画分 を分け、食物繊維画分
ウ糖 ピーク面積 比率を求 。同時に、内標準物質
注２
し ぷ 分解等によ 生成す ウ糖 質量を別途酵素法によ 求 、 ピーク面積比率に ウ糖質量を掛け こ によ 低分子水溶性食物繊維 含量を求 、先にプロスキー法によ 求 た値 併せ こ によ 総食物繊 維を求 方法 あ 。
装置及び器具
過装置：ガ ス 過器が装着 き、 液が回収しやすいも 。 ロータ ーエバポ ーター
メン ン ター
0.45 μ m
高速液体クロマト ：脱気装置、屈 率検出器付き カ ：ゲ 過系、又 配 子交換樹脂系
注３
充填イオン交換樹脂カ ：
OH
型及びH
型 ２つ 樹脂を１:
１に混合し たも 又 相当品注４
試薬
ピ ースオキシ ーゼ
注５
そ 他 試薬 、特に指定 ない限 特級を用い 。 試料 調製
１ プロスキー法 酵素
-
重量法 、 測定５ 過 操作 得ら た 液につい 、95 v/v%
エタ ー 洗浄ま 全量を定量的に回収し、ロータ ーエバポ ーター 濃縮し、エタ ー 分を除去した後
100 mL
定容 し低分子水溶性食物繊維を含 酵素処理液 す 。酵素処理液に不 溶物が含ま 場合に 過す 。測定
１ た ぱく質、有機酸、無機塩類 除去
注
イオン交換樹脂によ 上記 酵素処理液
50 mL
をイオン交換樹脂50 mL
を充填したカ ガ ス管、20 mm×300 mm
にSV1.0
通液速度：50 mL
溶液/
１時間 通 液し、さらに蒸留水 し出し、溶出液200 mL
す 。こ 溶液をロー タ ーエバポ ーターを用い 濃縮し、水 適当な濃度 例え 、Brix
５程度 に調整し 孔径
0.45 μ m
メン ン ター 過し、高速液体クロマト ーに供す 。 ２ 高速液体クロマト ー
１ 調製した試験溶液を次に示す高速液体クロマト 操作条件 注入し、高速液体クロマト を得 。内標準物質 ウ糖又 添加 内標準物質 及び食物繊維画分
注
ピーク面積を求 。 高速液体クロマト 操作条件例
カ ：
TSKgel G2500PW
XL 東ソー 、内径7.8 mm
、長さ300 mm
を2
本直列に接続カ 温度：
80
℃ 移動相：水流速：
0.5 mL/
分 注入量：20 μ L
３ 内標準物質１ 得ら 酵素処理液中 ウ糖をピ ースオキシ ーゼ 測 定し、そ 含量を求 、標準物質 す 。酵素処理後に既知質量 内標準 物質 種々選択 き が、例え セ ン を添加し同様 操作を行い、
ウ糖に代わ 標準物質 す こ が き 。た し、こ 場合、当該 内標準物質 感度を ウ糖 感度に対し 補正す 必要があ
注２
。 計算
低分子水溶性食物繊維質量
B mg
食物繊維 ピーク面積ウ糖 ピーク面積
酵素処理溶液中 ウ糖質量
mg
低分子水溶性食物繊維質量C mg
食物繊維 ピーク面積 添加内標準物質 ピーク面積 補正係数 内標準物質質量
mg
乾燥 脱脂試料中 低分子水溶性食物繊維含量
D g/ g
食物繊維質量B or C mg
試料採取量
mg
生試料中 低分子水溶性食物繊維含量
E g/ g
D
乾燥減量%
脱脂減量%
生試料中 総食物繊維含量
g/100g =
プロスキー法 求 た食物繊維含量TDF g/100 g +
低分子水溶性食物繊維含量E g/100 g
[
注]
１ 本法 、国際的に受け入 ら い プロスキー法を基本 し、高 速液体クロマト 上 食物繊維画分を測定す 方法 あ 、 ト 消化酵素によ 分解さ ない食品成分 し 基本概念を大きく異 にす も ない。そ 以上に、最近 参考文献３ によ 次世代
定量方法 し 酵素
-HPLC
法 期待さ い も あ 。本法に記載さ 酵素処理を行った場合、消化性 ぷ 、水飴、
キスト ン ほぼ完全に ウ糖にま 加水分解さ 。また、還元 水飴も ウ糖及びマ チトー な 、二糖類ま を糖類、また糖ア コー す なら 、ほぼ、完全に食物繊維から除去 き 。しかし、
難消化性 オ 糖を併用した食品 場合、単一カ 測定 きな くな た 、別法、又 、他 概念を入 必要があ
注８
。
２ 試料 種類又 使用す 分離カ 種類によっ 、高速液体ク ロ マ ト 上 共 存 成 分 ピ ー ク が ウ 糖 ピ ー ク を 妨 害 す 可 能性があ 、 ウ糖に代え セ ン等を内標準物質 し 添 加す 方法も用い 良い。た し、そ 場合、添加内標準物質 酵素処 理液を定容す 際に既知質量を添加す も す 。なお、 ウ糖 添加内標準物質 感度 同質量当 ピーク面積 に差があ た 、 ト ウ 糖 感 度 を 基 準 し 添 加 内 標 準 物 質 ピ ー ク 面 積 を 補 正 す 必 要があ 。補正 、あらか 求 た補正係数 有効数字２桁 を乗ず こ によ も す 。例え 、同質量 セ ン ウ糖 同 一クロマト 操作条件におけ ピーク面積比 、用い 操作条件 多少異な も 、およそ
0.82:
１ あ 。すなわち、補正係数 し0.82
に近い数値が得ら こ にな 。補正係数 一度求 おけ 、 クロマト 操作条件を変更しない限 同一 係数を用い 良い。セ ン以外 物質を内標準 す 場合につい も同様 あ 。
３ カ 配 子交換系又 ゲ 過系 も を用い 。た し、前
者 ナト ウ 型又 カ シウ 型 も 例え 、
Ultron PS-80N
、MCI-GEL CK08EC
等 が推奨 き 。また、後者5,000
程度 排除 限界分子量を持つも 例え 、TSKgelG2500PW
XL、Shodex Asahipak GS220HQ
等 を２本直列に接続し 用い こ を推奨す 。４ アンバー イト
IRA-67 OH
型 アンバー イト200CT H
型 ： オ ガ 株 製等があ 。なお、アンバー イト200CT H
型 販 売時Na
型な 、使用時に希塩酸H
型に変換し、十分水洗し 使用 す こ 。５ ピ ースオキシ ーゼ法によ ウ糖測定キット タミナー
GL-E
：協和メ ックス 株 製 が 販さ い 。明らかに低分子水溶性食物繊維 けを使用した食品 飲料等 につ い エ タ ー 沈 殿 を 行 う 前 酵 素 処 理 液 に つ い イ オ ン 交 換 樹 脂 以降 操作をす こ が き 。
原則 し 、 糖類 つ あ マ トト オース ピーク溶出 置を指標 し、こ 同 かこ よ 前に溶出す も を食物繊維画 分 す 。
８ 消化性画分、難消化性オ 糖画分 食物繊維画分につい 考え 方：
二糖類ピーク中に 、ショ糖、乳糖が含ま 可能性があ 、 糖類以上 ピークを難消化性画分 難消化性オ 糖 食物繊維画分よ
な す 。
こ 難消化性画分に難消化性オ 糖 た し、
35
熱量 項にお い エネ ー換算係数 設定さ い も が含ま お 、そ 含量表示がなさ い 試料 場合、オ 糖分析カ 例え 、ア ミ プロピ カ ：溶液：アセトニト-
水 を用い、HPLC
によ糖類以上 難消化性オ 糖を定量し、難消化性画分よ 差し引いた も を食物繊維量 す 。なお、難消化性オ 糖 中に 食物繊維 定量操作 過程 部分的に分解さ 可能性 あ も もあ 、こ
点 酵素処理液 た し、酵素処理液自体 塩類等を含 い 、 １ 処理 得ら 高速液体クロマト ー用 液 確認す 必要があ 。
[
参考文献]
１ 日本農芸化学雑
, 64, 3, 539 1990
２J. Assoc. Off. Anal. Chem., 68, 677 1985
３J. Assoc. Off. Anal. Chem., 78, 22 1995
４ 特定保健用食品試験検査マニュア 低分子ア ン酸 項 亜鉛
１ 原子吸光光度法
装置及び器具 原子吸光光度計
電気炉：熱電対温度計付き も
500±10
℃に設定 き も を用い 。 ホットプ ート水浴 試薬
塩酸：原子吸光分析用
塩酸 １
+
１ ：塩酸1
容に対し水１容を加え混和す 。 １%
塩酸：塩酸を水 希釈し 用い 。亜鉛標準溶液： 販 原子吸光分析用標準溶液を１
%
塩酸 希釈し 用い。
試験溶液 調製
試料１～
10 g
をビーカーに精密に量W g
、電熱器上 予備灰化した後、500
℃ 電気炉中 灰化す 。放冷後、灰に塩酸 １+
１ ３mL
を加え、水 浴上 蒸発乾固す 。さらに、１%
塩酸20 mL
を加え、時計皿 覆い30
分 間ホットプ ート上150
～200
℃ 加温した後、 紙を用い 、全量 スコ中に 過す 。水 洗い込 操作を繰 返し、 紙及びビーカーを数回 洗浄す 。残渣があ 、 紙 もに元 ビーカーに入 、ホットプ ー ト上 乾燥させ、同様に灰化、塩酸乾固を行う。塩酸 １+
１ ２mL
及び 少量 水を加え 加温溶解した後、先 全量 スコに 過す 。 液及び 洗液を合わせ、水 定容V mL
し、試験溶液 す 。測定
原子吸光光度計を用い 、試験溶液 吸光度を測定し、あらか 作成し た検量線から試験溶液中 濃度
C μ g/mL
を求 。こ き、濃度 高 い試験溶液につい 、１%
塩酸を用い 、適当な濃度に希釈した後測定す希釈倍数：
D
。 原子吸光測定条件例ー ：空気‐アセチ ン 測定波長：
213.8 nm
計算
試料中 亜鉛含量
mg/ g C V D W C
：検量線から求 た亜鉛 濃度μ g/mL V
：定容量mL
D
：希釈倍数W
：試料採取量g
２ キ ート抽出