1.8.1 CLint,in vitroの算出
非標識のDSP-0565を用いて、in vitro代謝実験の条件を設定した。代謝活性の線形性を反
応時間 (1、2、4時間) 及び基質濃度 (1及び10 μM) の線形性を確認し、[14C]DSP-0565を 用いた代謝物プロファイリングの反応条件を10 μM、4時間で実施した（詳細はラット、イ ヌ、ヒト肝細胞を用いたin vitro代謝実験を参照）。CLint,in vitroを各種肝細胞中における基質 減少速度から下記の式に基づき算出した。
CLint,in vitro = kel/concentration of hepatocytes (1)
[14C]DSP‐0565の残存率 (% of total peak area, n = 2) の平均値を片対数目盛で反応時間に対し てプロットし、線形回帰してelimination rate constant (kel (min−1)) を算出した。
1.8.2 ラット及びイヌのCLint,in vivoの算出
肝クリアランス (CLh) を静脈内投与後の全身血漿クリアランス (CLiv) から下記の式に 基づき算出した。腎クリアランス (CLr) はラット及びイヌのDSP-0565の排泄率 (Table 6及
びTable 8) から無視できると仮定した。
97 CLh = CLiv/Rb (2)
CLint,in vivoは、well-stirred model (Pang and Rowland, 1977) もしくはdispersion model (Roberts
and Rowland, 1986) を用いて算出した。
Well-stirred model: CLh = fup/Rb × CLint,in vivo ×Qh/(fup/Rb × CLint,in vivo + Qh) (3)
Dispersion model: Fh = 4a/(1 + a)2 exp{(a − 1)/2DN} − (1 − a)2 exp{− (a + 1)/2DN} (4) Fh = 1 − CLh/Qh (5)
a = (1 + 4 RN × DN)1/2 (6) RN = fup/Rb × CLint,in vivo/Qh (7) DN = 0.17 (8)
fup: DSP‐0565 free fraction in plasma Qh: hepatic blood flow
DN: the dispersion number
98 肝固有クリアランスの算出時には、以下の生理学的パラメータを用いた。
Rat Dog Human
Cells/g livera 135 × 106 240 × 106 120 × 106
liver weight (g)a 10 400 1470
Weight (kg) a 0.25 12.5 70
Qh (mL/min/kg) a 70 40 20
Protein binding (%) 63 65 70
Rb 0.95 0.95 0.95
aThe parameters are quoted from Table 4 (Hosea et al., 2009).
1.8.3 ヒトのCLint,in vivo及び経口クリアランス (CL/F) の算出
ヒトのCL/Fは下記の式3′及び9で算出した。Faはラット (Fa = 0.957、radioactivity excretion ratio in rats urine and bile after oral administration of [14C]DSP‐0565を胆管カニュレーションラ
ットに10 mg/kgで経口投与したときの尿及び胆汁中の放射能排泄率の合計値、Table 5)とヒ
トで等しく、小腸代謝は無視できると仮定した（予備検討において、ヒトの小腸 S9 (phenylmethylsulfonyl fluoride free, Xenotech LLC) 1 mg/mL中でDSP-0565を37℃で1時間イ ンキュベーションした結果、残存率は90%以上であり極めて安定であった）。また、ヒトで
のDSP‐0565の尿中排泄率は1% of dose未満であることからCLrは無視できると仮定した。
CLh = fup/Rb × human CLint,in vitro × SF × Qh/(fup/Rb × human CLint,in vitro × SF + Qh) (3’) CL/F = CLh/(Fa × Fh) (9)
SF: the scaling factor in animals
99 SFは下記の3つの方法を用いた。
Method 1: SF = 1 (10)
Method 2: SFtotal = CLint,in vivo/CLint,in vitro (11)
Method 3: SFoxidation = CLint,in vivo,oxidation pathway/CLint,in vitro,oxidation pathway (12) and SFhydrolysis = CLint,in vivo,hydrolysis pathway/CLint,in vitro,hydrolysis pathway (13)
Human CLint,in vitro × SF = human CLint,in vitro,oxidation pathway × SFoxidation + human CLint,in vitro,hydrolysispathway
× SFhydrolysis (14)
SFoxidation: SF for oxidation pathway
CLint,in vivo,oxidation pathway: CLint,in vivo for oxidation pathway CLint,in vitro,oxidation pathway: CLint,in vitro for oxidation pathway
SFhydrolysis: SF for hydrolysis pathway
CLint,in vivo,hydrolysis pathway: CLint,in vivo for hydrolysis pathway CLint,in vitro,hydrolysis pathway: CLint,in vitro for hydrolysis pathway
酸化代謝及び加水分解経路の寄与率は、推定代謝経路に基づき算出した (Fig. 4 及び Table 10).
100 1.8.4 ヒトのCLint,in vivoの推定
ヒトのCLint,in vivoは式3、5、15及び16に基づき算出した。
CL/F = CL/Fplasma/Rb (15) CLh/Fh = CL/F × Fa (16)
CL/Fplasma: plasma oral clearance (mean of 6 subjects).
101 2 第二章実験方法
2.1 実験材料
Acebutolol hydrochloride、amitriptyline hydrochloride、azithromycin、chlorambucil、chloroquine diphosphate salt、dofetilide、flecainide acetate salt、ketanserin、nateglinide、nefazodone hydrochloride、 nifedipine、ranitidine hydrochloride及びvalproic acid sodium saltは、Sigma-Aldrich Corporation, LLC. (St. Louis, MO) から購入した。Chlorpromazine、cyclophosphamide monohydrate、enalaprilat dihydrate及びfolinic acid calcium saltは、Wako Pure Chemical Industries (Osaka, Japan) から購 入した。Haloperidol及びquinineは、Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. (Tokyo, Japan) から購 入した。Tegaserod maleateは、Toronto Research Chemicals (North York, ON, Canada) から購入 した。その他の試薬及び溶媒は、最もグレードの高いものを用いた。
2.2 ヒトのV1、Vdss及びVdβのデータ収集
多様なヒトのV1とVdssの比 (0.053～0.66) を示す20化合物を選択した (Table 13)。ヒト のV1、Vdss及びVdβは引用文献でコンパートメント解析された値を収集した。引用文献の 中でコンパートメント解析されていない化合物では、静脈内投与後のヒトの血漿中濃度推 移の画像を Origin 9.0 SR1 (OriginLab Corporation, MA) を用いて読み込み、1-もしくは
2-compartment modelを用いて解析した。ヒトの体重が引用文献に記載されていない場合は、
ヒトの体重を70 kgと仮定して、計算した。
102 2.3 血清蛋白結合率
ラット、イヌ、サル及びヒト血清中のDSP-0565の濃度が10 μMとなるようにサンプルを 調製し、各サンプル200 μL及びPBS 200 μLを96-well type dialyzer (MW10K: Harvard Apparatus, Holliston, MA) にセットした。約20 rpm、37°Cで22時間インキュベーションした後、透析 後の血清10 μLにPBS 40 μLを添加し、透析後のPBS 40 μLにブランク血清10 μLを添加し た。Sulfaphenazoleメタノール溶液 (1 μM) 300 μLを各サンプルに添加した。室温、3000 rpm で遠心後、上清を超純水で希釈し、LC/MS/MS分析した。分析条件を以下に示す。
LC–MS/MS system: LC -10AvP or LC -20A series (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan) API‐4000 (Applied Biosystems, Foster City, CA)
Column: Kinetex XB-C18 column (50 × 2.1 mm, 5 μm; Phenomenex Inc., Torrance, CA)
Mobile phase: A) 10 mM ammonium acetate solution, pH 4.0 B) methanol
Column temperature: 40℃
Gradient program: B (%)/time (min), 5/0, 90/2.5, 90/3.7, 5/3.71, and 5/5
Flow rate: 0.4 mL/min
Ion mode: positive or negative
m/z precursor ion/product ion: sulfaphenazole: 315/158 (positive)、313/156 (negative) 評価化合物のQ1/Q3 の条件は、ラット、イヌ、及びサ ルPKを参照
Analyteとinternal standardのピークエリア比をbufferサンプル (Abuffer) 及び血清サンプル
103
(Aserum) に対して算出した。血清蛋白結合率は下記の式に基づき算出した。
Protein binding (%) = [1 − Abuffer / (4 × Aserum)] × 100 (1)
2.4 ラット、イヌ及びサルPK
2.4.1 動物実験
雄性Sprague–Dawleyラット (7 weeks、0.25-0.31 kg、Charles River Laboratories Japan, Inc.、 Yokohama、Japan)、雄性ビーグル犬 (1 year、11-15 kg、Kitayama labes Co. Ltd.、Nagano、Japan)、 及び雄性cynomolgus monkeys (2-3 years、2.7-3.2 kg、Guangxi Luxsen Technology Co., Ltd.、 Guangxi、China) に各20化合物を0.1 mg/kgで静脈内投与した (n = 3)。Azithromycinのラッ トへの投与量のみ、1 mg/kgとした。投与液調製に用いた媒体を以下に示す。
Saline: acebutolol hydrochloride, amitriptyline hydrochloride, chloroquine diphosphate salt, chlorpromazine, cyclophosphamide monohydrate, ranitidine hydrochloride, valproic acid sodium salt 10 mM hydrochloric acid in saline: azithromycin, dofetilide, enalaprilat dihydrate, flecainide acetate salt, folinic acid calcium salt, haloperidol, quinine, tegaserod maleate
10 mM sodium hydroxide in saline: chlorambucil and nateglinide Saline containing 50% polyethylene glycol 400: ketanserin
5% dimethyl sulfoxide solution: nefazodone hydrochloride
Saline containing 10% polyethylene glycol 400 and 10% ethanol: nifedipine
静脈内投与0.083、0.25、0.5、1、2、4、6及び24時間後にラット頸静脈、イヌ及びサル 橈側皮静脈から血液をheparinized tubeに採取した。
104
2.4.2 血漿中濃度測定
Ketanserin及びnifedipine を除く血漿サンプル50 μL及びinternal standard methanol solution
200 μLを混合し、1800g、4°Cで5分間遠心した。上清を0.45 μmのフィルターに通した後、
超純水で希釈し、LS-MS/MS 分析した。Ketanserin 及び nifedipine の血漿サンプル 50 μL、 standard buffer solution pH 9 (Nacalai Tesque, Inc.、Kyoto、Japan) 100 μL及びinternal standard 酢酸エチル溶液700 μLを混合後、1800g、4°Cで5分間遠心した。有機層を乾固し、残渣を 50% (v/v) methanolもしくは初期移動相200 μLに再溶解し、LS-MS/MS分析した。分析条件 を以下に示す。
105 Analytical conditions for measurement of plasma concentrations in rats and dogs
Compound Column Mobile phase A Mobile phase B Gradient Electrospray
interface
Analyte (Q1 → Q3)
Internal standardg (Q1 → Q3 )
Acebutolol a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 336.9 → 116.1 253.2 → 182.2
Amitriptyline a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 278.0 → 233.0 253.2 → 182.2
Azithromycin a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 749.7 → 591.5 253.2 → 182.2
Chlorambucil a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 304.2 → 192.2 253.2 → 182.2
Chloroquine a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 320.2 → 247.2 253.2 → 182.2
Chlorpromazine a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 319.1 → 86.1 253.2 → 182.2
Cyclophosphami
de a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 261.1 → 140.1 253.2 → 182.2
106
Compound Column Mobile phase A Mobile phase B Gradient Electrospray
interface
Analyte (Q1 → Q3)
Internal standardg (Q1 → Q3 )
Dofetilide a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 442.2 → 198.2 253.2 → 182.2
Enalaprilat b 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Positive 349.2 → 206.2 253.2 → 182.2
Flecainide a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 415.1 → 301.1 253.2 → 182.2
Folinic acid c 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH f Positive 474.2 → 327.2 253.2 → 182.2
Haloperidol a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 376.0 → 165.0 253.2 → 182.2
Ketanserin a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 396.2 → 189.2 253.2 → 182.2
Nateglinide a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 318.2 → 166.2 253.2 → 182.2
Nefazodone a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 470.3 → 274.2 253.2 → 182.2
107
Compound Column Mobile phase A Mobile phase B Gradient Electrospray
interface
Analyte (Q1 → Q3)
Internal standardg (Q1 → Q3 )
Nifedipine a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 347.2 → 315.1 253.2 → 182.2
Quinine a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 325.2 → 79.2 253.2 → 182.2
Ranitidine a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 315.2 → 176.2 253.2 → 182.2
Tegaserod a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Positive 302.3 → 173.1 253.2 → 182.2
Valproic acid a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH d Negative 143.0 → 143.0 251.1 → 101.9
LC-MS/MS system: Shimadzu 10A series HPLC system (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan) with API-4000 (Applied Biosystems, Foster City, CA) a: Unison UK-C18 column (20 × 2.0 mm, 3 μm; Imtakt Corporation, Kyoto, Japan)
b: YMC-Triart C18 column (30 × 2.0 mm, 1.9 μm; YMC Co., Ltd., Kyoto, Japan) c: Kinetex XB-C18 column (50 × 2.1 mm, 5 μm; Phenomenex Inc., Torrance, CA)
108 d: B (%)/time (min), 10%/0 min, 90%/3 min, and 90%/5 min
e: B (%)/time (min), 1%/0 min, 1%/0.5 min, 90%/1 min, and 90%/3.5 min
f: B (%)/time (min), 1%/0 min, 1%/0.5 min, 20%/1.5 min, 90%/2 min, and 90%/3.5 min g: 1 μM phenytoin
109 Analytical conditions for measurement of plasma concentrations in monkeys
Compound Column Mobile phase A Mobile phase B Gradient Electrospray
interface
Analyte (Q1 → Q3)
Internal standard (Q1 → Q3 )
Acebutolol a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Positive 337.2 → 116.0 i
Amitriptyline a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Positive 278.2 → 233.0 i
Azithromycin b 0.1% HCOOH MeCN containing 0.1%
HCOOH f Positive 750.3 → 591.4 j
Chlorambucil a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Positive 304.1 → 192.0 i
Chloroquine a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Positive 321.2 → 141.9 i
Chlorpromazine a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Positive 319.1 → 86.1 i
Cyclophosphamide a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Positive 261.0 → 134.0 i
110
Compound Column Mobile phase A Mobile phase B Gradient Electrospray
interface
Analyte (Q1 → Q3)
Internal standard (Q1 → Q3 )
Dofetilide b 0.1% HCOOH MeCN containing 0.1%
HCOOH f Positive 442.1 → 118.9 j
Enalaprilat a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Positive 348.9 → 205.5 i
Flecainide a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Positive 415.2 → 301.1 i
Folinic acid a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Positive 474.3 → 327.2 i
Haloperidol a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Positive 376.1 → 164.9 i
Ketanserin d 0.1% Formic acid MeOH g Positive 396.0 → 188.8 k
Nateglinide a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH h Positive 318.2 → 120.1 l
Nefazodone a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Positive 470.3 → 274.2 i
111
Compound Column Mobile phase A Mobile phase B Gradient Electrospray
interface
Analyte (Q1 → Q3)
Internal standard (Q1 → Q3 )
Nifedipine a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Positive 347.1 → 314.9 i
Quinine a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Positive 325.2 → 78.8 i
Ranitidine b 0.1% HCOOH MeCN containing 0.1%
HCOOH f Positive 315.0 → 101.5 j
Tegaserod a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH h Positive 302.2 → 173.0 l
Valproic acid a 10 mM ammonium acetate solution at
pH 4.0 MeOH e Negative 143.0 → 143.0 m
LC-MS/MS system: Nexera X2 series HPLC system (Shimadzu Corporation) with 6500 Qtrap (Applied Biosystems), or Shimadzu 20A series HPLC system (Shimadzu Corporation) with 5500 Qtrap (Applied Biosystems), or Shimadzu 20A series HPLC system (Shimadzu Corporation) with API-4000
a: Kinetex XB-C18 column (50 × 2.1 mm, 2.6 μm; Phenomenex Inc.)
b: XBridge C18 column (100 × 2.1 mm, 3.5μm; Waters Corporation, Milford, MA)
112 c: Unison UK-C18 column (20 × 2.0 mm, 3 μm; Imtakt Corporation)
d: Inertsil ODS-3 column (2.1 × 50 mm, 3 μm; GL Science, Tokyo, Japan) e: B (%)/time (min), 10%/0 min, 90%/3 min, and 90%/4min
f: B (%)/time (min), 10%/0 min, 10%/1 min, and 90%/4 min, 90%/5 min g: B (%)/time (min), 10%/0 min, 90%/2 min, and 90%/3 min
h: B (%)/time (min), 10%/0 min, 90%/3 min, and 90%/5 min i: 0.02 μM phenytoin (253.1 → 182.2)
j: 100 ng/mL fluvastatin (412.1 → 224.1) k: 200 nM flecainide (415.1→398.1) l: 0.1 μM phenytoin (253.1 → 182.2) m: 0.1 μM phenytoin (251.1 → 101.9)
113 2.4.3 PK解析
ラット、イヌ、サル及びヒトの血漿中濃度推移をWinNonlin Version 7.0で1もしくは
2-compartment model解析し、20化合物のPKパラメータを算出した。重みづけは1/Yhat2とし
た。1-Compartment modelはWinNonlin Version 7.0のlibrary PK model number 1 もしくは2を 用い、2-compartment modelはlibrary PK model number 7もしくは9を用いた。Akaike information criterion (Yamaoka et al., 1978) 及びfittingが視覚的に良好であることに基づき、最適なモデ ルを選択した。1-Compartment解析により、AUC、Cmax/C0、CL、t1/2、kel及びV1を算出した。
2-Compartment解析により、AUC、Cmax/C0、CL、t1/2α、hybrid rate constant for two-compartment model (α)、the elimination rate constant from the central compartment、t1/2β、hybrid rate constant for two-compartment model (β)、transfer rate constant of drug from central to peripheral compartment、 transfer rate constant of drug from peripheral to central compartment、V1、V2、Vdss及びVdβは、
下記の式に基づき算出した。
Vdβ = CL/β (2)
2.5 ヒトのV1、Vdss及びVdβの予測
ラット、イヌ及びサルのデータからヒトのV1、Vdss及びVdβを以下の五つの方法で予測 した。1-Compartment modelが最適なモデルであった場合、動物のV1はVdss及びVdβと等し いと仮定し、動物のV1をヒトのV1、Vdss及びVdβの予測に用いた。
114 2.5.1 Proportionality
動物のV1、Vdss及びVdβは、それぞれヒトのV1、Vdss及びVdβと等しいと仮定し、ヒト のV1、Vdss及びVdβを算出した。各Vdに対する3動物種の平均値についても算出した。
2.5.2 Proportionality fup
fupで補正したVdをproportionalityと同じ仮定で下記の式に基づき、ヒトのV1、Vdss及び Vdβの予測に用いた (Obach et al., 1997)。
Human Vd = animal Vd × human fup / animal fup (3)
2.5.3 Øie-Tozer
動物の定常状態におけるfutを下記の式に基づき算出した (Øie and Tozer, 1979; Obach et al., 1997)。
fut = Vr × fup/[Vdss − Vp − (fup × Ve)− (1− fup) × Re/i × Vp] (4)
Ve: the extracellular fluid volume Vp: the plasma volume
Vr: the remaining fluid volume
Re/i: the ratio of binding protein in extracellular fluid to that in plasma
Re/iは、1.4と仮定した。用いた生理学的パラメータをTable 25に示す (Obach et al., 1997)。
115 また、3動物種のfutの平均値を算出した。ヒトのfutは、動物のfutと等しいと仮定し、下記 の式に基づきヒトの定常状態におけるVdss (L/kg) を算出した。
Table 25 Physiological parameters in rats, dogs, monkeys, and humans.
Species Vp Ve Vr
(L/kg) (L/kg) (L/kg)
Rat 0.0313 0.265 0.364
Dog 0.0515 0.216 0.450
Monkey 0.0448 0.208 0.485 Human 0.0436 0.151 0.380 Values were from Obach et al. (1997).
Human Vdss = Vp × (1 + Re/i) + fup × Vp × (Ve/Vp − Re/i) + Vr × fup/animal fut (5)
生理学的パラメータ及びfupは、ヒトの数値を用いた。さらにVdβはVdssと等しいと仮定す ることで下記の式6で示される (Imawaka et al., 2009)。
Vdβ = Vp × (1 + Re/i) + fup × Vp × (Ve/Vp − Re/i) + Vr × fup/fut (6)
動物のβ相 (偽定常状態) におけるVr/futをØie Tozer modelに基づき算出し、ヒトのVdβを 下記の式に基づき算出した。
Human Vdβ = Vp × (1 + Re/i) + fup × Vp × (Ve/Vp − Re/i) + animal Vr/fut × fup (7)
116 2-Compartment modelでは、Vdssは下記の式で定義される。
Vdss = V1 + V2 (8)
Vp及びVeは、V1に含まれると仮定し、V1及びV2をØie-Tozer modelに基づき下記の式を導 いた。
Vr/fut × fup = (Vr1/fut1 + Vr2/fut2) × fup (9) V2 = Vr2/fut2 × fup (10)
V1 = Vp × (1 + Re/i) + fup × Vp × (Ve/Vp − Re/i) + Vr1/fut1 × fup (11) V2 = (Vr/fut − Vr1/fut1) ×fup (12)
Vr1: the remaining fluid volume in V1
fut1: the unbound fraction in tissues belonging to V1
Vr2: the remaining fluid volume in V2
fut2: the unbound fraction in tissues belonging to V2
動物のVr1/fut1は、下記の式に基づき算出した。
Vr1/fut1 = Vr/fut − V2/fup (13)
式11を用いてヒトのVr1/fut1は動物のVr1/fut1と等しいと仮定し、ヒトのV1を算出した。動 物のVr1/fut1、定常状態におけるfut及びβ相における Vr/futが定義から逸脱する値 (Vr1/fut1<
0、fut < 0、fut > 1、fut < 0) を示した値も予測の対象として用いた (Berry et al., 2011)。
117 2.5.4 SA
動物の Vd (L/kg) を体重に対して log-log scale でプロットし、下記の式に基づき回帰した
(Boxenbaum et al., 1982)。
Vd = a × body weightb (14)
a: coefficient value b: exponent
ヒトの体重は報告値もしくは標準的な値として70 kgを用いた (Table 13)。動物のVd及び 体重から得られたa及びbを用いてヒトのVdを算出した。
2.5.5 SA fup
fupで除したVdをSAと同じ原則でヒトのVdを算出した。
2.6 ヒトの血漿中濃度推移、Cmax/C0及び終末挿におけるt1/2の予測
WinNonlin Version 7.0の1-もしくは2-compartment modelをそれぞれ20化合物を静脈内投 与した後のヒトの血漿中濃度推移、Cmax/C0及び終末挿のt1/2の予測に用いた (dosage regimen
はTable 13に示す)。血漿中濃度推移の予測にVdの予測精度が及ぼす影響を検証するため、
118 予測したVd及び実測のCLを血漿中濃度推移の予測に用いた。WinNonlin Version 7.0.の 1-compartment model (library PK model number 1 or 2) での予測には、3動物種のfutの平均値及 び Øie-Tozer model を用いて予測したヒトの Vdss を用いた。WinNonlin Version 7.0.の 2-compartment model (library PK model number 7 or 9)での予測では、3動物種のfutの平均値及び Øie-Tozer modelを用いて予測したヒトのVdss及びVdβ、サルのVr1/fut1及びØie-Tozer model を用いて予測したヒトのV1を用いた。動物で1-compartment modelが血漿中濃度推移に良好 にフィッティングした場合、動物のV1はVdss及びVdβと等しいと仮定し、動物のV1をヒ トのVdss及びVdβの予測に用いた。
t1/2 = ln2/(CL/ Vdβ) (15)