治療薬 対象疾患 バイオマーカー検査 検査の意義
グリベック
（イマチニブ）
CML
ザーコリ（クリゾチニブ）
非小細胞肺癌
ＡＬＫ検査
添付文書
EML4-ALK融合遺伝子の発見
2007年自治医科大学の間野博行教授らが、肺腺がんの臨床検体から 新規の肺がん原因遺伝子を発見。
Nature
448, 561-566, 20072番染色体の特定領域が逆位で再結合した遺伝子。
ALK遺伝子は細胞増殖の際に利用される酵素の遺伝子。
逆位再結合によりつくられた融合蛋白は恒常的に増殖シグナルを 核に伝達して細胞が増殖、癌化する。
本融合遺伝子は非小細胞性肺がん患者のおよそ4～7％程度に 認められるとされている。
融合遺伝子の発生
EML4-ALK融合遺伝子のパターン
Nature 448, 561-566, 2007
EML4-ALK融合遺伝子陽性患者における ALK阻害剤の治療効果
海外第Ⅰ相試験
標的病変の最大腫瘍縮小率
EGFR
チロシンキナーゼ阻害剤イレッサ（ゲフィチニブ）；アストラゼネカ タルセバ（エルロチニブ）；中外製薬
肺がんの分子標的薬 （保険診療）
EGFR遺伝子変異陽性 EGFR遺伝子変異陰性
ALK融合遺伝子陽性
イレッサ
または
タルセバ
ザーコリ
ALK
阻害剤ザーコリ（クリゾチニブ）；ファイザー
EGFR 遺伝子変異解析
ALK遺伝子検査の手引き
2011年12月1日付
日本肺癌学会ホームページ
にて開示
手引きに示された診断アルゴリズム
「一つの検査が陽性であっても、２つ 以上の方法により融合遺伝子の存在 を確認することが望まれる。」
検査方法の違い、特徴
それぞれの方法に一長一短あり
免疫染色結果の比較
当社採用5A4/iAEP の組み合わせ
検出法 →
抗体
→
ALK-IHC染色例（陽性）
IHC x1.25
H.E. x1.25
ALK-IHC染色例（陰性）
コントロールスライド
Negative Control x400
Positive Control x400
FISH法検出様式
Abbott社 Break apart rearrangement probeを採用
ALK遺伝子の切断領域両端を赤と緑の蛍光色素で標識。
正常な場合は赤と緑のシグナルが近接するため、黄色のシグナルが検出される。
転座が生じるとシグナルが分離し、赤と緑のシグナルが検出される。
脱パラ
組織FISH検体の処理
酵素処理
抗原賦活化（加熱）
コーティングスライド APS（アミノシラン）
プラチナ
PLL（ポリリジン）
MAS
組織FISH検体の処理
プローブ滴下
封入
ハイブリ
アボットジャパンALK-FISHプローブキット
陰性 陽性
ALK-FISH検出例
プローブキット添付文書の内容（抜粋）
検査所見
キットの判定基準に準拠した 結果を表記
報告書見本（ALK-FISH）
写真付き
代表的な間期核の写真と シグナルを表記します
「ALK融合遺伝子標本作製は、ALK阻害剤の投与の適応を判断することを目的と して、FISH法により遺伝子増幅標本作製を行った場合に、当該薬剤の投与方針の 決定までの間に1回を限度として算定する。」
中医協 総-３ 資料（２４．３．２８）
検体品質管理マニュアル推奨条件
遺伝子関連検査を 病原体遺伝子検査 体細胞遺伝子検査 遺伝学的検査
（生殖細胞系列遺伝子検査）
に大別し、それぞれ 検体保存と運搬 検体取扱い
検体採取
を詳細に解説したマニュアル
検体品質管理マニュアル推奨条件（抜粋）
ホルマリン固定パラフィン包埋組織ブロック
推奨固定液 10％中性緩衝ホルマリン（核酸断片化の進行が遅延する）
固定時間の目安 手術材料 ： 室温で18～36時間 生検材料 ： 室温で3～6時間程度
参考情報 10％ホルマリンは室温で1時間に1mm程度浸透するとの報告あり。
薄切後10日間までRNAの質的劣化は認められないとの報告あり。
検体品質管理マニュアル推奨条件（抜粋）
胸水、腹水、心嚢液、膵液、気管支肺胞洗浄液（BALF）、尿（沈渣）、喀痰
採取後の保管 冷蔵（2～8℃）
処理時間 遺伝子発現定量 ： 検体採取後直ち（2時間以内）にRNAを抽出。
遺伝子変異解析 ： 高分子DNAが必要な場合 ⇒ 24時間以内 必要としない場合 ⇒ 3日以内にDNA抽出 長期保管方法 胸水、腹水、心嚢液、膵液、気管支肺胞洗浄液（BALF）
遠心分離（760G、室温、10分間）後、沈渣をPBSにて洗浄する。
再度遠心分離し上清廃棄、沈渣のみを超低温（-70℃）で保存。
尿（沈渣）
遠心分離（6,000G、室温、2分間）後、上清廃棄、沈渣のみ超低温で保存。
喀痰
超低温（-70℃）で保存。