0 5 10 15 20 25 30 35
0 5000 10000 15000 20000
RORγt (+) cells in Th17 cells (%)
CCR6 MFI
C
ρ=0.726 P < 0.05*
CCR6
count (% Max)
A B
RORγt (-) RORγt (+) RORγt (-)
RORγt (+)
図 7. HC、OA 患者、RA 患者の PBMC 中の Th 細胞サブセットのサイ トカイン
HC（N=7）、OA患者（N=5）、RA患者（N=7）のTh細胞サブセットのサイ トカイン（IFNγ、IL-4、IL-17）についてCBAで解析を行った。各Th細胞サ ブセットをFCMによりsorting後、2×104個の細胞を抗CD3/28抗体存在下で 96時間培養し、上清をCBAによりサイトカイン（IFNγ、IL-4、IL-17）を測定 した。（＊P < 0.05、平均 ± 標準偏差、Kruskal-Wallis検定）
0 1000 2000 3000 4000 5000
Th1 Th2 Th17 CXCR3+CCR6+
pg/ml
IFN γ
RA HC OA
0 100 200 300 400 500
Th1 Th2 Th17 CXCR3+CCR6+
pg/ml
IL-4
RA HC OA
0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
Th1 Th2 Th17 CXCR3+CCR6+
pg/ml
IL-17
RA HC OA
図 8. RA 患者の PBMC と SFMC の Th 細胞サブセット
RA患者（N=4）のPBMCとSFMC中のTh細胞サブセットについてFCMで 解析を行った。（A）Th細胞をCXCR3とCCR6により4つの細胞群に分けら れたTh細胞サブセット。（B）各Th 細胞サブセットの割合の平均の比較（＊
P < 0.05、平均 ± 標準偏差、Mann Whitney U検定）
0 10 20 30 40 50 60 70 80
Th1 Th2 Th17 CXCR3+CCR6+
Th subsets cells (%)
B
SFMCPBMCCXCR3
CCR6
PBMC SFMC
A
17.1 25.5
22.4 35.0 43.3 2.9
49 4.8
図 9. RA 患者の PBMC と SFMC の Th 細胞サブセットの転写因子 RA患者（N=4）のPBMCとSFMC中のTh細胞サブセットの転写因子につい てFCMで解析を行った。（A）Th細胞サブセットの転写因子（T-bet、GATA3、 RORγt）の代表的なヒストグラム。（B）Th細胞サブセットの転写因子（T-bet、
GATA3、RORγt）を発現する細胞の割合の平均の比較。（＊P < 0.05、平均 ± 標 準偏差、Mann Whitney U検定）
0 10 20 30 40 50 60 70 80
PBMC SFMC
T-bet (+) in Th1 cells (%)
0 5 10 15 20 25 30 35
PBMC SFMC
GATA3 (+) in Th2 cells (%)
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
PBMC SFMC
RORγt (+) in Th17 cells (%)
T-bet
GATA3
RORγt
PBMC SFMC
A B
T-betGATA3
RORγt
count (% Max)count (% Max)count (% Max)
Th1 Th2 Th17 CXCR3+CCR6+
Th1 Th2 Th17 CXCR3+CCR6+
Th1 Th2 Th17 CXCR3+CCR6+
Isotype Th1 Th2 Th17 CXCR3+CCR6+
Isotype Th1 Th2 Th17 CXCR3+CCR6+
Isotype Th1 Th2 Th17 CXCR3+CCR6+
図 10. HC、OA 患者、RA 患者の PBMC 中の Th 細胞サブセットの遊 走能
0 5 10 15 20 25 30
HC OA RA
migration index
CXCL9
B
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
HC OA RA
migration index
CCL20
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4
HC OA RA
migration index
CXCL10
0 100 200 300
ligand- ligand+
cell count
0 100 200 300
ligand- ligand+
cell count
0 100 200 300
ligand- ligand+
cell count
0 20 40 60 80
ligand- ligand+
cell count
0 20 40 60 80
ligand- ligand+
cell count
0 20 40 60 80
ligand- ligand+
cell count
0 100 200 300
ligand- ligand+
cell count
0 100 200 300
ligand- ligand+
cell count
0 100 200 300
ligand- ligand+
cell count
HCOARA
CXCL9 CXCL10 CCL20
A
C
0 20 40 60 80 100
before after
CCR6(+) cells (%)
0 50 100
before after
CCR6(+) cells (%)
0 20 40 60 80 100
before after
CCR6(+) cells (%)
0 20 40 60 80 100
before after
CXCR3(+) cells (%)
0 20 40 60 80 100
before after
CXCR3(+) cells (%)
0 20 40 60 80 100
before after
CXCR3(+) cells (%)
0 20 40 60 80
before after
CXCR3(+) cells (%)
0 20 40 60 80
before after
CXCR3(+) cells (%)
0 20 40 60 80
before after
CXCR3(+) cells (%)
HCOARA
CXCL9 CXCL10 CCL20
HC（N=11）、OA患者（N=9）、RA患者（N=5）のTh細胞サブセットの遊 走能ついてtranswell systemを用いてchemotaxis assayを行った。CD4陽性 T細胞（1×105）を上層のwellへ添加し、４時間37℃で培養し、下層のwell
（ケモカイン（CXCL9、CXCL10、CCL20（100ng/ml）を含まないものと含む もの）へ遊走したTh細胞をFCMによって細胞数をカウントした。遊走指数
（migration index）については、ケモカインを含んだwell中の細胞数とケモカ インを含んでいないwellの細胞数の比により算出した。CXCL9とCXCL10は Th1細胞、CCL20はTh17 細胞数を用いて算出した。（A）Ligandを含まな いものと含むもののwellにおけるFCMによってカウントしたTh細胞サブセ ットの細胞数。（B）（A）の結果から導き出された遊走指数の平均の比較。（C） chemotaxis assayの前後でのCXCR3陽性率及びCCR6陽性率の平均の比較（＊
P < 0.05、平均 ± 標準偏差、2群比較：Mann-Whitney U検定、3群比較：
Kruskal-Wallis検定）
図 11. HC、OA 患者、RA 患者の血清及び滑液中のケモカイン
HC血清（N=8）、OA患者血清（N=6）、RA患者血清（N=7）、OA患者滑 液（N=6）、RA患者滑液（N=3）のケモカイン（CXCL9、CXCL10、CCL20）
についてLEGENDplexで測定した。（＊P < 0.05、平均 ± 標準偏差、
Kruskal-Wallis検定）
0 2000 4000 6000 8000 10000 12000
HC Serum OA Serum
RA Serum OA SFs
RA SFs
CXCL10 (pg/ml)
0 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 16000 18000
HC Serum OA Serum
RA Serum OA SFs
RA SFs
CCL20 (pg/ml)
0 200 400 600 800 1000 1200
HC Serum OA Serum
RA Serum OA SFs
RA SFs
CXCL9 (pg/ml)
CXCL9 CXCL10 CCL20
図 12. RA 患者の治療前後の DAS28-CRP の変化
RA患者（N=7）について治療前と抗リウマチ治療24 週時について疾患活動性 スコアのDAS28-CRPの平均の推移を評価した。（＊P < 0.05、平均 ± 標準偏 差、Wilcoxon 符号順位検定）
0 1 2 3 4 5
before treatment after treatment
DAS28-CRP
4.08 ± 0.42
2.82 ± 0.35
図 13. RA 患者の治療前後の PBMC 中の Th 細胞サブセットの変化 RA 患者（N=7）について治療前と抗リウマチ治療 24 週時の Th 細胞サブセッ トについてFCM で解析を行った。（A）Th細胞をCXCR3と CCR6により4 つの細胞群に分けられたTh細胞サブセットの代表例。（B）各Th 細胞サブセ ットの割合の平均の比較（＊P < 0.05、平均 ± 標準偏差、Wilcoxon 符号順位 検定）