37
38
生細胞測定における CYP1A1 誘導の モニタリング
GeneBLAzer® CYP1A1-bla LS-180細胞系を用いれば、β-ラクタマー ゼレポーター遺伝子を介してCYP1A1誘導の測定が可能です（図 25）。β-ラクタマーゼ（bla）遺伝子をCYP1A1プロモーター下流に 挿入し、CYP1A1トランス活性化の測定に用いています。TCDDおよ び3-メチルコラントレンなどのリガンドが細胞質のアリル炭化水素 受容体（AhR）に結合し、AhR-リガンド複合体は核へ移行し、ここで AhR核内輸送体（Arnt）とヘテロダイマーを形成します。次にこの 複合体はCYP1A1の生体異物応答配列（XRE）に結合し、CYP1A1発 現を亢進させます。さらに詳しく知りたい場合は、www.invitrogen.
com/cyp1a1cellsをご覧ください。
図25―CYP1A1-bla LS180アッセイにおけるCYP1A1誘導物質の用量反応 細胞を様々な濃度の3-メチルコラントレンまたは2,3,7,8-テトラクロロジベンゾ -p-ジオキシン（TCDD）で16時間処理したのちβ-ラクタマーゼ活性を測定しました。
-15 -14 -13 -12 -11 -10 -9 -8 -7 -6 -5 -4
10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0
TCDD EC50 = 0.2 nM
3-methylcholanthrene EC50 = 0.3 µM
log［CYP1A1誘導物質］（M）
反応比
CellzDirect̲J̲6th.indd 38
CellzDirect̲J̲6th.indd 38 10.6.18 10:51:23 AM10.6.18 10:51:23 AM
39
弊社の迅速かつ信頼性の
高い P450 プロファイリング サービスなら
ボトルネックを克服
InvitrogenのP450 Profi ling Serviceでは、リード化合物の阻害プロ ファイルを低コストかつタイムリーに決定することにより、創薬で 直面するボトルネックを克服します。弊社のサービスでは以下を実 現します。
→ データを2週間以内で提供
→ アッセイおよびデータ解析の厳格な品質管理
→ 競争力のある価格、信頼性、開かれたビジネスモデル
P 4 5 0 P r o f i l i n g S e r v i c eは 、 定 評 の あ る 弊 社 のP 4 5 0 BACULOSOMES®試薬および精度の高いVivid®アッセイ系を使用し ます。試験化合物のP450酵素群（1A2、2C9、2C19、2D6、3A4）に 対する化合物の阻害プロファイルを迅速に得ることができます。ま た、IC50の測定は、試験化合物の10点滴定法により、2回反復して行 います。
厳密なバリデーションプロセスにより、最高品質のデータを得るこ とが可能です。各データポイントで対照ウェルも測定し、自家蛍光 をもつ化合物による干渉を検出します。厳密な品質管理プロトコル により、仕様に適合しない結果があれば、自動的にアッセイがくり 返し行われます。各P450酵素のIC50値は、プレートごとに標準阻害 物質と比較して決定されるため、データの妥当性が実証されます。
図4は、サ ン プ ル 阻 害 物 質 で あ る ケ ト コ ナ ゾ ー ル がP450酵 素 群 を阻害する様子を示すデータです。表16は、CYP3A4に対する数 個 の リ ガ ン ド の 力 価 の 順 位 を 示 し て い ま す。InvitrogenがP450 BACULOSOMES®試薬を用いて実施したVivid®アッセイとテストス テロン6β-ヒドロキシル化アッセイとの間に優れた相関が認められ ることがこの表から示されます。
表17―CYP3A4のIC50値（μM）
化合物 Testosterone
6β-OH Assay
Vivid® BOMCC Assay
Vivid® DBOMF Assay
ケトコナゾール 0.04 0.1 0.02
ミフェプリストン 0.5 1.2 3
ニフェジピン 3 0.7 0.3
オメプラゾール 20 20 30
キニジン 11 20 30
サキナビル 2 2 3
スルファフェナゾール 500 200 400 テストステロン Km = 30 activation 45
ベラパミル 1.0 3 9
-4 -3 -2 -1 0 1 2 3
–20 0 40 80 120
20 60 100
1A2 EOMCC 65 22–49 2C9 BOMF 3.2 8–42 2C19 EOMCC 5.1 4–27 2D6 EOMCC 7.6 NA 3A4 BOMCC 0.13 0.02–0.3 3A4DBOMF 0.016 0.02–0.3
Isozyme/
substrate pair
IC50 (µM) Literature values (µM)
log［ケトコナゾール］（μM）
制御活性（%）
CellzDirect̲J̲6th.indd 39
CellzDirect̲J̲6th.indd 39 10.6.18 10:51:24 AM10.6.18 10:51:24 AM