一 匿咀曝響巳冒■鱒繭冒■■邑薗
1‡0 ＃5 120 窪1 ＃4 130
；トリプシン消化したTFBから検出されたポリペプチド鎖
図7．．単離されたT：F：BのcDNA塩基配列およびアミノ酸配列
実線下線部は、ペプチドマッピングで検出されたポリペプチド、下線番号はピークの番号を示す。
破線下部はペプチドマッピングで検出されなかった部分を示す。最：後の ＊ はストップコドン
（TAA）を示す。
5 並びに3層RACE PCR反応はメーカーの説明書に従った。 RACEの増幅産物はアガロース ゲル電気泳動により精製し、皿クローニングキットにより単離した。 プラスミドDNAは陽 性コロニーから抽出し、犠クローニングベ．クター内の特異的塩基配列（M13RV primeち
caggaaacagctatgac；T7 primer， taatacgactcactataggg）を持つプライマーを用いて自動シークエンサー
により塩基配列を解読した。cDNAの塩基配列を上段に示し、オープンリーディングフレーム を大文宇で示した。ORF塩基配列から推定されるアミノ酸配列を下段に示した。 アミノ酸配 列の実線下線部は図6のペプチドマッピングで得られたポリペプチドを示す。破線下線部はペプ チドマッピングで確認できなかったアミノ酸配列を示す。○印はN型糖鎖の結合が推定される アスパラギンを示す。 本塩基配列はジーンバンク・データベースに登録した（accession no．
AB266058）。
一88・
cDNAの塩基数は390bpsであり、シグナルペプチド部分を除いた成熟ポリペプチド 部分の塩基数は、318bpsであった。 また、全アミノ酸残基数は130個であり、成熟ポ
リペプチドのアミノ酸残基数は106個であった。
また、SLPI分子のジスルフィド結合の配置から推定したTF B分子の構造を図9に示す。
一89・
a) TF B
Human
Rat
Mouse Sheep
TFB
Human
Rat
Mouse Sheep
TF BHuman
Rat
Mouse
Sheep TF B2 SLPI (7) pt ee 7' :̀;", / watse 5itJ S Iz nj
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51 61 71 81 91 100
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101 111 121 131
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‑90‑
b）TF B、ヒトSLPI、およびヒトEla∬nのアミノ酸配列比較
SLPl
日a価n 1 FB
1 11 21 31 41 51 60
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悶・娼・fliw・司i細・1・届愚P・kg qd湿kg・vf・西dp・kgqvs−vkgqdk．k。q 囲q国・1囹1・11レ闘一園欄・・w團1譲潤・vpP d・測・gf・kf。慧・国懸濁，
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■■■隔 一
ユ ユ ユヨユ
SLPI；曖懸遡國聖
日・偏・；・§握痴話q
TFB；塵翅胆魂・
図8．TF Bおよびヒト低分子タンパク性プロテアーゼ阻害因子、 SLPIと
Elafinとのアミノ酸配列比較
a）各種SLPI（Secretory Leukocyte Protease hlhibitor）分子のアミノ酸配列比較
b）ヒト由来SLPI、 Ela5nと新規プロテアーゼ阻害因子TF Bのアミノ酸配列比較を示す。ヒト SLPI分子のアミノ酸配列に対して相同な配列は黒背景にハイライトで示した。また保存された システイン残基は灰色背景にハイライトで示した。太線下線部はC末端に位置するエラスター ゼ阻害ドメイン（WAPIWFDC domain）を示した。破線下線部はSLPIのN末端トリプシン阻害
ドメインの位置を示す。
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