効力を裏付ける試験

表 2.6.3.2-1 効力を裏付ける試験

被験物質：サトラリズマブ

試験の種類 試験系 試験方法 主要な結果 資料番号

ヒト及びカニクイザルの

膜結合型 IL-6R に対する

結合活性

In vitro フローサイトメトリー サトラリズマブのヒト膜結合型IL-6Rに対する

EC50値は0.019 g/mL，カニクイザル膜結合型 IL-6Rに対するEC50値は0.019 g/mLであった。

4.2.1.1-1

ヒト及びカニクイザルの 可溶性IL-6Rに対する結 合活性

In vitro SPR 37°C，pH 7.4条件下でのサトラリズマブのヒト可

溶性IL-6Rに対するKD値は1.5 nmol/L，カニクイ ザル可溶性IL-6Rに対するKD値は2.0 nmol/Lで あった。

pH 5.8条件下でサトラリズマブは，pH 7.4条件下 に比べて速やかにヒト可溶性IL-6Rから解離し た。

4.2.1.1-2

ヒト可溶性IL-6Rに対す

るpH依存的な結合活性 In vitro SPR サトラリズマブはpH 7.4からpH 6.0の間でpHが 低くなるに従ってヒト可溶性IL-6Rから速やかに 解離した。

各pH条件下でのヒト可溶性IL-6Rに対するKD

値は，pH 7.4で1.89 nmol/L，pH 7.0で 2.64 nmol/L，pH 6.5で6.87 nmol/L，pH 6.0で 33.6 nmol/Lであった。

4.2.1.1-3

ヒト及びカニクイザル Fcレセプターに対する 結合活性

In vitro SPR サトラリズマブのヒトFcRnに対するKD値は

6.8  10^-7 mol/L（対照IgG2抗体では21  10^-7 mol/L），カニクイザルFcRnに対するKD値は 6.4  10^-7 mol/L（対照IgG2抗体では19  10^-7 mol/L）であった。

サトラリズマブのヒト及びカニクイザルFcRに 対する結合は対照IgG2に比べてほぼ同等又は弱 かった。

4.2.1.1-4

ADCC活性及びCDC活

性 In vitro ADCCにはU266細胞株と

PBMC，CDCにはU266細胞株 とヒト補体血清を用いたカル セインリリースアッセイ

サトラリズマブのU266細胞株に対するADCC活

性及びCDC活性は認められなかった。 4.2.1.1-5

表 2.6.3.2-1 効力を裏付ける試験（続）

被験物質：サトラリズマブ

試験の種類 試験系 試験方法 主要な結果 資料番号

膜結合型及び可溶性 IL-6Rを介したIL-6活性発 現に対する抑制作用

In vitro IL-6依存的な増殖を示す

BaF/hIL-6R，BaF/CyIL-6R（古 典的シグナリング）並びに可 溶性IL-6R存在下でIL-6依存 的な増殖を示すBaF/hgp130

（トランスシグナリング）を 用いた細胞増殖アッセイ

膜結合型IL-6Rを介した古典的シグナリングによ

る細胞増殖に対するサトラリズマブのIC50値は，

ヒトIL-6Rに対して11 g/mL，カニクイザル IL-6Rに対して3.9 g/mLであった。

可溶性IL-6Rを介したトランスシグナリングによ

る細胞増殖に対するサトラリズマブのIC50値は，

ヒトIL-6Rに対して0.038 g/mL，カニクイザル IL-6Rに対して0.046 g/mLであった。

4.2.1.1-6

IL-6ファミリーサイトカ インレセプターのシグナ ル伝達に対する影響

In vitro ヒトIL-6ファミリーサイトカ

イン（LIF，IL-11，CNTF及び

OSM）のレセプターとgp130を

発現させた，各リガンド依存 的な増殖を示すBa/F3組換え細 胞株を用いた細胞増殖アッセ イ

サトラリズマブは，いずれのBa/F3組換え細胞株

のリガンド依存的増殖にも影響を示さなかった。 4.2.1.1-7

IL-6によるヒトプラズマ ブラストのIgG1産生に 対する抑制作用

In vitro ヒトプラズマブラストを用い

たIL-6によるIgG1産生アッセ イ

サトラリズマブ（1 g/mL）はヒトプラズマブラ ストのIL-6によるIgG1産生を有意に抑制した

（P  0.05）。

4.2.1.1-8

IL-6によるヒトT細胞増

殖に対する抑制作用 In vitro ヒト末梢血T細胞を用いた IL-6による細胞増殖アッセイ

サトラリズマブは活性化されたT細胞のIL-6に

よる細胞増殖を抑制した（IC50値は4.4 g/mL）。 4.2.1.1-9

（参考資料）

IL-6及び可溶性IL-6Rに よるヒト滑膜細胞の MCP-1及びVEGF産生に 対する抑制作用

In vitro HFLS-RAを用いたIL-6及び可

溶性IL-6RによるMCP-1及び VEGF産生アッセイ

サトラリズマブはヒト滑膜細胞のIL-6及び可溶性 IL-6RによるMCP-1及びVEGF産生を抑制し，

IC50値はそれぞれ0.17 g/mL及び0.44 g/mLであ った。

4.2.1.1-10

表 2.6.3.2-1 効力を裏付ける試験（続）

被験物質：サトラリズマブ

試験の種類 試験系 試験方法 主要な結果 資料番号

カニクイザルにおける IL-6活性の抑制作用

サル／カニク イザル

カニクイザルにおけるIL-6に よるCRP産生に対するサトラ リズマブの皮下投与による作 用を調べた。

試験プロトコール1：

抗薬物抗体の影響を受けにく いと考えられる短期試験 試験プロトコール2：

月1回投与を想定した単回投与 4週間試験

試験プロトコール1：

サトラリズマブ（0.5 mg/kg）はIL-6によるCRP 産生を投与後11日間抑制した。血漿中のフリー可

溶性IL-6R濃度はサトラリズマブ投与後に減少し

た後，徐々に増加し，投与後11日目に投与前と同 レベルとなった。

試験プロトコール2：

サトラリズマブ（2 mg/kg）は，血漿サトラリズ マブ濃度が抗薬物抗体による影響を受けていない 個体において，IL-6によるCRP産生と血漿中の フリー可溶性IL-6R濃度を投与後28日間抑制し た。

4.2.1.1-11

PHM -0181試験で得ら れた血漿中のサトラリズ マブ，抗サトラリズマブ 抗体，トータル可溶性

IL-6R及びフリー可溶性

IL-6Rの濃度又は抗体価

測定

In vitro サトラリズマブ，トータル可

溶性IL-6R及びフリー可溶性

IL-6R濃度はELISAで，抗サ トラリズマブ抗体価はECLIA で測定した。

各測定値をPHM -0181試験に使用した。 4.2.1.1-12

ADCC：抗体依存性細胞傷害，CDC：補体依存性細胞傷害，CNTF：毛様体神経栄養因子，CRP：C反応性蛋白質，EC50：50%効果濃度，ELISA：酵素結合免疫吸着測定

法，ECLIA：電気化学発光免疫測定法，FcγR：Fcγレセプター，FcRn：胎児性Fcレセプター，HFLS-RA：関節リウマチ患者由来ヒト滑膜細胞，IC50：50%阻害濃度，

IgG：イムノグロブリンG，IL-6：インターロイキン6，IL-6R：インターロイキン6レセプター，IL-11：インターロイキン11，KD：解離定数，LIF：白血病抑制因子，

MCP-1：単球走化性蛋白質-1，OSM：オンコスタチンM，PBMC：末梢血単核球，SPR：表面プラズモン共鳴，VEGF：血管内皮増殖因子