GAGCAAATGTCAGTCτAAC TAAATAAGTCAAGCCCAτGCTATAAAGAACAτGGAT7「CA
E Q M S V 倉
AATAAAAGGCττ丁TAAAACCAAAAAAAAAAAAAAAAAA
60
1
120
21
歪80 41
240
6−
300
8望
360 86 398
Flg．2−6，Nucleotide sequeRce of tわe cDNA encoding gigantoxln l．覇e complete gene sequence of gigantoxin l and lts trans蓬atl◎口product are蒔1りstrated。The deduced amino acid sequence ls s舞ow startlng重rorn tわe捕rst ATG codon o葦撫e open readlpg frame．丁わe asterlsks iハdlcate ln−frame st◎ρcodons（TAA〉．Nucleotlde and amlη◎acld nロmbers are sbown at撫e rlg熱t．The putatlve slgnal sequence and polyadenylatlon signal are underlined．
The propart ls do纏bly underlined．Tわe prlmers for3管RACE are shaded．The prlmers for 5 RACE are boxed．
E
C:O
C¥l C¥i CU
O O
CU L:L
O
Cl)JQ
<
/ /
l I ‑C‑ 1
/ / / / / /
l I‑c‑2
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/ /
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60
40
> OOo
L
c o
1.
o o
20 <
o 20 40 60 80
o
Retention time (min)
Fig. 2‑7.
Reverse‑phase HPLC of the peptides produced by digestion of PE‑gigantoxin ll with Chymotrypsin.
Column, TSKgel ODS‑120T (0.46 X 25cm); elution,
gradient of acetonitrile in O. I o/o TFA; flow rate, I ml/min.
Two peptides (ll‑C‑1 and ll‑C‑2) were subjected to sequencing.
‑34‑
と決定された。1量一C−2断片は31Wのカルボキシル側で切断を受けて生じたペプチドで、32H から4℃までの断片と判断された。一方、 一C−1断片には重複する配列がなかったが、暫 定的に42Cから嘱QまでのC末端断片と仮定した。こうして44残基から成るgigantoxin ll の全アミノ酸配列をFig．2−8のように決定した。アミノ酸配列から算出した分子量 （4663．3）は、MALDl／TOFMS分析で得られた値（4673．2）とよく一致するので、決定し
た配列は正しいことが支持された。Gigantoxin llは、既知のイソギンチャク毒と比べてタ イプ1のNaチャネル毒に属すると判断された。
Gigantoxin llをコードするcDNAの全塩基配列（432bp）は、3 Race法と5 Race法に よってFig、2−9のように決定した。開始メチオニンの手前の5 非翻訳領域には停止コドン （TAA）が、3 非翻訳領域にはポリA付加シグナル（AA■AAA）がそれぞれ確認できた。
Gigantoxin IIの演繹アミノ酸配列（74残基）中には、N末端アミノ酸配列分析とキモトリ プシン分解によって得られたC末端部ペプチド断片のアミノ酸配列分析から決定した配 列が含まれていた。Gigantoxin のシグナル配列をSignalPV3．0で解析したところ、開始 メチオニン以降19残基目までがシグナルペプチドであると推定された。シグナルペプチ
ドと成熟ペプチドの間には11残基からなるプロパート部が存在していた。
Gi antoxln lllのアミノ酸配列と塩基配列
Glgantoxin lllのN末端部アミノ酸配列は、次の通り45残基目まで決定することができ
た。
1 10 20 30
Gigantoxinl AACKCDDDGPDI RSATLTGTVDLGSCNEGW EKCASFYTILADCCR
そこでGigantoxin l のC末端部分のアミノ酸配列を明らかにするために、PE−gigantoxin 1をv8プロテアーゼ分解に供した。v8プロテアーゼ分解物から逆相HPLc（Fig．2−10）
で単離した醇V8と命名したペプチド断片の全アミノ酸配列は、シークエンサーにより
lll−V84 GWEKCASFYT l LADCCRRPR
と決定された。このペプチド断片は32K以降のペプチドに相当し、そのC末端がEではな くRであることから、gigantoxin mのC末端ペプチドであると判断された。こうして48 残基から成るgigantoxln 1の全アミノ酸配列をFig．2−11のように決定した。アミノ酸配 列から算出した分子量（5179．8）は、MALDl／TOFMS分析で得られた値（5180．4）とほぼ 一致するので、決定した配列は正しいことが支持された。なおgigantoxin 1は、既知のイ
ソギンチャク毒と比べてタイプ2のNaチャネル毒に属すると判断された。
Gigantoxin l をコードするcDNAの全塩基配列（540bp）は、3 Race法と5 Race法に よってFig．2−12のように決定した。開始メチオニンの手前の5 非翻訳領域には停止コド ン（TGA）が、3 非翻訳領域にはポリA付加シグナル（AATAAA）がそれぞれ確認できた。
Gigantoxin lllの演繹アミノ酸配列（84残基）中には、N末端アミノ酸配列分析とV8プロ テアーゼ分解によって得られたC末端部ペプチド断片のアミノ酸配列分析から決定した 配列が含まれていたが、翻訳領域のc末端にアミノ酸配列中にはなかったGly残基が存在
していた。生理活性ペプチドの前駆体構造の解析から、翻訳後修飾の過程でアミド化され る残基のc末端側には常にGly残基が存在していることが知られている（水野，松尾、
ぞ 圖。
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