機能性成分の特定と生体調整機能の解 明

３－５ タデ由来機能性成分の免疫系に及ぼす作用の解析

九 州 大 学 大 学 院 医 学 研 究 院 病 態 修 復 内 科 学 分 野 教 授 原 田 実 根 助 手 塚 本 浩

３ － ５ － １ タ デ 機 能 性 成 分 の 免 疫 系 に 及 ぼ す 作 用 の 解 析 タ デ 機 能 性 成 分 に つ き 免 疫 学 的 な 視 点 か ら の 解 析 を 行 う 。

３ － ５ － ２ プ ロ ジ ェ ク ト 全 体 に お け る 本 研 究 の 位 置 づ け

本 プ ロ ジ ェ ク ト は 伝 統 野 菜 で あ る タ デ 由 来 の 食 品 の 開 発 が 目 的 で あ る が 、 開 発 さ れ た 食 品 に ど の よ う な 効 能 が あ る の か を 解 析 す る 必 要 が あ る 。 開 発 さ れ た 食 品 は い ろ い ろ な 効 能 を 有 す る と 予 想 さ れ る が 、 本 研 究 は 、 開 発 さ れ た 食 品 の 免 疫 学 的 作 用 に つ き 評 価 す る こ と が 、 プ ロ ジ ェ ク ト 内 で の 役 割 で あ る 。

３ － ５ － ３ 目 的 と 目 標

タ デ 由 来 機 能 性 成 分 の 免 疫 系 に 及 ぼ す 作 用 を 明 ら か に す る こ と が 目 的 で あ る 。 具 体 的 に は タ デ 由 来 機 能 性 成 分 の in vitro に お け る 免 疫 担 当 細 胞 へ の 作 用 を 明 ら か に す る こ と を 目 標 と し た 。

３ － ５ － ４ 実 験 方 法 お よ び 実 験 条 件

（ １ ） 芽 タ デ の 免 疫 担 当 細 胞 に 及 ぼ す 作 用 の 検 討

免 疫 学 的 解 析 は 当 施 設 で こ れ ま で 行 っ て き た フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー 法 を 用 い た^{( 1 ～ 6 )}。 ヒ ト 末 梢 血 よ り 単 核 球 を 比 重 遠 心 法 に て 分 離 し 、サ イ ト カ イ ン 等 の 刺 激 下 に 24 時 間 ま た は 48 時 間 ま た は 72 時 間 培 養 し

た 。 培 養 後 、 CD4 陽 性 T リ ン パ 球 、CD19 陽 性 B リ ン パ 球 上 の 活 性 化 表 面 マ ー カ ー の 発 現 に つ き フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー に て 検 討 し た 。 検 討 す る 表 面 マ ー カ ー は CD4 陽 性 T 細 胞 で は CD69、 CD25、

CD154、 B 細 胞 で は CD69、 CD86、

HLA-DR と し た 。こ の 系 に 1g/ml、

10g/ml、 100g/ml の 芽 タ デ を 添 加 し 上 記 リ ン パ 球 上 の 活 性 化 マ ー カ ー 発 現 に 与 え る 影 響 を 検

討 し た （ 図 1） 図 1 リ ン パ 球 の 活 性 化 と

表 面 マ ー カ ー の 変 化

（ ２ ） タ デ 抽 出 物 の 免 疫 担 当 細 胞 に 及 ぼ す 作 用 の 検 討

ヒ ト 末 梢 血 よ り 単 核 球 を 比 重 遠 心 法 に て 分 離 し 、 48 時 間 培 養 す る 。 培 養 後 、 CD4 陽 性 T リ ン パ 球 、CD19 陽 性 B リ ン パ 球 上 の 活 性 化 表 面 マ ー カ ー の 発 現 に つ き フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー に て 検 討 し た 。検 討 す る 表 面 マ ー カ ー は CD4 陽 性 T 細 胞 で は CD69、CD25、CD154、B 細 胞 で は CD69、CD86、HLA-DR と し た 。こ の 系 に 1g/ml、10g/ml、100g/ml の タ デ 抽 出 物（ ル テ イ ン 、a1、a2、b）を 添 加 し 上 記 リ ン パ 球 上 の 活 性 化 マ ー カ ー 発 現 に 与 え る 影 響 を 検 討 し た 。

３ － ５ － ５ 実 験 結 果

（ １ ） 芽 タ デ の 免 疫 担 当 細 胞 に 及 ぼ す 作 用 の 検 討

無 刺 激 の 状 態 で は 、 CD4 陽 性 T 細 胞 上 で 、 CD69、 CD25 は 軽 度 に 発 現 、 CD154 は ほ と ん ど 発 現 し て い な か っ た 。 CD19 陽 性 B 細 胞 上 で 、 CD69、 CD86 は 軽 度 発 現 、 HLA-DR は 中 等 度 発 現 し て い た 。 芽 タ デ 刺 激 に お い て 、 CD4 陽 性 T 細 胞 で は 芽 タ デ 1、 10 g/ml 投 与 時 に は 活 性 化 マ ー カ ー の 変 化 は 明 ら か で な か っ た が 、100g/ml 添 加 時 に CD69、CD25、CD154 と も 発 現 が 増 強 す る 傾 向 が 認 め ら れ た（ 図 ２ ）。CD19 陽 性 B 細 胞 で は 芽 タ デ 添 加 時 に CD69 の 発 現 が 増 強 す る 傾 向 が 認 め ら れ た 。 一 方 、 HLA-DR の 発 現 は 低 下 す る 傾 向 が 認 め ら れ た 。

（ ２ ） タ デ 抽 出 物 の 免 疫 担 当 細 胞 に 及 ぼ す 作 用 の 検 討

① 無 刺 激

CD4 陽 性 T 細 胞 上 で 、 CD69、 CD25 は 軽 度 に 発 現 、 CD154 は ほ と ん ど 発 現 し て い な か っ た 。CD19 陽 性 B 細 胞 上 で 、CD69、CD86 は 軽 度 発 現 、HLA-DR は 中 等 度 発 現 し て い た 。

② ル テ イ ン 刺 激

100g/ml で は 細 胞 毒 性 が 強 い た め 1、 10 g/ml に て 検 討 し た 。 CD4 陽 性 T 細 胞 で は ル テ イ ン 1、 10 g/ml 投 与 時 に は CD25 の 発 現 が 低 下 す る 傾 向 が み ら れ た 。 T 細 胞 の 他 の 活 性 化 マ ー カ ー 、 CD19 陽 性 B 細 胞 の 変 化 は 明 ら か で な か っ た （ 図 ３ ）。

図 ２ CD4 陽 性 T 細 胞 の CD69 の 発 現 に 及 ぼ す 芽 タ デ の 影 響

③ a1、 a2 刺 激

CD4 陽 性 T 細 胞 の 活 性 化 マ ー カ ー に は 変 化 な し 。 CD19 陽 性 B 細 胞 で は CD69、 HLA-DR の 発 現 が 増 強 す る 傾 向 が み ら れ た 。

④ b 刺 激

CD4 陽 性 T 細 胞 の 活 性 化 マ ー カ ー に は 変 化 な し 。CD19 陽 性 B 細 胞 で は HLA-DR の 発 現 が 低 下 す る 傾 向 が み ら れ た 。

３ － ５ － ６ 研 究 成 果

芽 タ デ に は ヒ ト T 細 胞 を 活 性 化 さ せ る 可 能 性 の あ る こ と が 示 唆 さ れ た 。 芽 タ デ と そ の 抽 出 物 で は ヒ ト 免 疫 担 当 細 胞 に 対 す る 作 用 が 異 な っ て お り 、 全 般 的 に は 抽 出 物 で は 作 用 が 減 弱 し て い た 。

３ － ５ － ７ 今 後 の 課 題 と 取 組

開 発 さ れ た タ デ 由 来 の 食 品 で の 検 討 が な さ れ て い な い 。今 後 、開 発 さ れ た 食 品 の in vitro で の 免 疫 担 当 細 胞 へ の 影 響 を 検 討 す る と と も に 、 被 験 者 を 募 り 、 開 発 さ れ た 食 品 の 摂 取 前 後 で の 、 免 疫 能 を 検 討 す る 必 要 が あ る 。

参 考 文 献

1. Mitoma,H., Horiuchi,T., Hatta,N., Tsukamoto,H., Harashima,S., Kikuchi,Y., Otsuka,J., Okamura,S., Fujita S., Harada,M. Infliximab induces potent

anti-inflammatory responses by outside-to-inside signals through transmembrane TNF-α . Gastroenterology 128 376-392. 2005

2. Okamura,J., Utsunomiya,A., Tanosaki,R., Uike,N., Sonoda.S., Kannagi.M., Tomonaga.M., Harada.M., Kimura,N., Masuda,M., Kawano,F., Yufu,Y., Hattori,H., Kikuchi,H., Saburi,Y. Allogeneic stem-cell transplantation with reduced

conditioning T-cell leukemia/lymphoma. Blood 105 4143-4145. 2005

3. Ishikawa,F., Yasukawa,M., Lyons,B., Yoshida,S., Miyamoto,T., Yoshimoto,G., Watanabe,T., Akashi,K., Shultz,LD., Harada,M. Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor γ hain^{n u U} mice. Blood 106 1565 - 1573. 2005

図 ３ CD4 陽 性 T 細 胞 の CD69 の 発 現 に 及 ぼ す ル テ イ ン の 影 響

4. Numata,A., Shiomoda,K., Kamezaki,K., Haro,T., Kakumitsu,H., Shide,K., Kato,K., Miyamoto,T., Yamashita,Y., Oshima,Y., Nakajima,H., Iwama,A., Aoki,K., Takase,K., Gondo,H., Mano,H., Harada,M. Signal transducers and activators of transcription 3 augments the transcriptional activity of CCAAT/Enhancer -binding protein α in granulocyte colony-stimulating factor signaling pathway. J Biol Chem 280

12621-12629. 2005

5. Kawano,N., Ishikawa,F., Shimoda,K., Yasukawa,M., Nagafuji,K., M iyamoto,T., Baba,E., Tanaka,T., Yamasaki,S., Gondo,H., Otsuka,T., Ohsima,K., Shultz,LD., Akashi,K., Harada,M. Efficient engraftment of primary adult T-cell leukemia cells in newborn NOD/SC1D/β 2-microglobulin^{n u l l} mice. Leukemia 19 1384-1390. 2005 6. Imamura,R., Miyamoto,T., Yoshimioto,G., Kamezaki,K., Ishikawa,F., Henzan,H.,

Kato,K., Takase,K., Numata,A., Nagafuji,K., Okamura,T., Sata,M., Harada,M., Inaba,S. Mobilization of human lymphoid progenitors after treatment with granulocyte clolony-stimulating factor. J Immunol 175 2647-2654. 2005