検出下限 - Analytical procedure for CV and MB in feeds

Scheme 1 Analytical procedure for CV and MB in feeds

3.7 検出下限

本法の検出下限（

CV

及び

MB

は，飼料に含まれてはならない抗菌性物質であるため，定量下限相当の精度を有する濃度をもって検出下限と表す．）を確認するため，添加回収試験により得られるピークの

SN

比が

10

となる濃度を求めた．

その結果，ピークの

SN

比が

10

となる濃度は，5 µg/kgであった．

確認のため，成鶏飼育用配合飼料及び国産魚粉に

CV

及び

MB

として

5 µg/kg

相当量を添加した試料について，本法により

3

点併行で定量を行った．その結果は，

Table 8

のとおり，

CV

の平均回収率は

109~116 %，繰返し精度は相対標準偏差（RSD）として 2.4 %以下，MB

の平均回収

率は

112~114 %，繰返し精度は RSD

として

5.5 %以下であった．

以上の結果から，本法による

CV

及び

MB

の検出下限は，試料中

5 µg/kg

であった．

Table 8 Recoveries and limit of detection of CV and MB in feeds Spiked

level

(µg/kg) Recovery

^a)

RSD

^b)

Recovery

^a)

RSD

^b)

(%) (%) (%) (%)

CV 5 109 2.4 116 1.1

MB 5 114 5.5 112 2.0

Feed types Formula feed

for layer

Fish meal (Domestic)

a) Mean (n=3)

b) Relative standard deviation of repeatability 3.8 共同試験

本法の再現精度を調査するため，成鶏飼育用配合飼料に

CV

及び

MB

としてそれぞれ

20 µg/kg

相当量，まだい育成用配合飼料に

CV

及び

MB

としてそれぞれ

40 µg/kg

相当量，輸入魚粉に

CV

及び

MB

としてそれぞれ

80 µg/kg

相当量を添加した試料を用いて，財団法人日本食品分析センター多摩研究所，協同飼料株式会社，日本ウォーターズ株式会社，独立行政法人農林水産消費安全技術センター肥飼料安全検査部，同仙台センター，同名古屋センター，同神戸センター及び同福岡センター（計

8

試験室）において，本法に従い共同試験を実施した．

CV

の結果を

Table 9

に示した．成鶏飼育用配合飼料では，平均回収率は

94.5 %

，その室内繰

返し精度及び室間再現精度はそれぞれ相対標準偏差（

RSD

r及び

RSD

R）として

3.4 %

及び

7.5 %

であり，HorRat は

0.34

であった．まだい育成用配合飼料では，平均回収率は

101 %，その室内

繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ

RSD

r及び

RSD

Rとして

2.1 %及び 3.1 %であり，HorRat

は

0.14

であった．魚粉では，平均回収率は

99.1 %

，その室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ

RSD

r及び

RSD

Rとして

0.83 %

及び

3.2 %

であり，

HorRat

は

0.15

であった．

MB

の結果を

Table 10

に示した．成鶏飼育用配合飼料では，平均回収率は

83.5 %，その室内繰

返し精度及び室間再現精度はそれぞれ

RSD

r及び

RSD

Rとして

2.2 %及び 13 %であり，HorRat

は

0.59

であった．まだい育成用配合飼料では，平均回収率は

93.3 %

，その室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ

RSD

r及び

RSD

Rとして

2.6 %

及び

15 %

であり，

HorRat

は

0.70

であった．

魚粉では，平均回収率は

97.7 %，その室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ RSD

r 及び

RSD

_Rとして

2.9 %及び 14 %であり，HorRat

は

0.62

であった．

なお，

MB

の結果において，

Grubbs

検定で外れ値とされるデータが認められた．そのデータを除外しなくても前述のとおり良好な成績であったが，参考までにそのデータを除外して室内繰返し精度，室間再現精度及び

HorRat

についても算出した．その結果は，成鶏飼育用配合飼料では，

室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ

RSD

r及び

RSD

Rとして

2.3 %及び 3.9 %，HorRat

は

0.18

であった．まだい育成用配合飼料では，室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ

RSD

及び

RSD

Rとして

2.9 %

及び

7.1 %

であり，

HorRat

は

0.32

であった．魚粉では，その室内繰返し精度及び室間再現精度はそれぞれ

RSD

r及び

RSD

Rとして

3.3 %及び 5.3 %であり，HorRat

は

0.24

であった．

参考のため，各試験室で使用した液体クロマトグラフタンデム型質量分析計の機種等を

Table

11

に示した．

Table 9 Collaborative study for CV

1 19.6 19.5 40.8 41.1 81.4 80.0

2 20.0 19.5 40.5 40.0 79.2 79.2

3 18.1 18.5 40.0 40.4 79.6 79.5

4 18.9 16.8 39.6 39.8 77.5 77.8

5 18.4 17.8 38.9 40.3 78.7 79.5

6 17.7 17.5 39.3 39.1 76.1 77.5

7 18.3 18.6 41.8 38.9 77.2 76.6

8 21.1 22.2 43.0 42.4 83.8 85.2

Spiked level (µg/kg) Mean value

^a)

(µg/kg)

Recovery

^a)

(%) RSD

_r^b)

(%) RSD

_R^c)

(%) PRSD

_R^d)

(%)

HorRat Lab.No.

(µg/kg) (µg/kg) (µg/kg)

Fish meal (Ecuadorian) Formula feed

for red sea bream Formula feed

for layer

20 40

18.9 94.5 3.4 7.5 22

0.34 40.4 101

2.1 3.1 22

0.14 3.2 22

0.15 80 79.3 99.1 0.83

a) n=16

b) Relative standard deviations of repeatability within laboratory c) Relative standard deviations of reproducibility between laboratories d) Predicted relative standard deviations of reproducibility between

laboratories calculated from the modified Horwitz equation

Table 10 Collaborative study for MB

1 16.3 16.2 36.4 37.2 82.6 81.8

2 16.7 16.1 36.3 35.8 73.0 72.7

3 16.5 16.4 36.2 36.3 74.9 75.3

4 16.6 16.2 34.8 34.1 75.7 72.4

5 14.9 15.5 32.2 28.6 75.6 67.2

6 16.3 15.5 37.1 37.4 74.5 73.6

7 14.9 15.5 37.1 36.9 71.7 73.0

8 21.6

^e)

22.1

^e)

50.4

^e)

50.1

^e)

103

^e)

103

^e)

Spiked level (µg/kg)

Mean value

^a)

(µg/kg) Recovery

^a)

(%)

RSD

_r^b)

(%) RSD

_R^c)

(%) PRSD

_R^d)

(%)

HorRat RSD

rb')

(%) RSD

Rc')

(%) HorRat

^f)