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量（L）あたり7HC-Sの生成量は，25％（w/v）までの細胞量の増加とともに増加した（Fig.
3A）．細胞量をさらに増やすと，反応溶液の粘度が高くなり，7HC-Sの収率が低くなった．
その結果，その後のすべての代謝反応は，以下の条件下で行われた．8％（w/v）グルコー
スと1％（w/v）硫酸アンモニウムを含む100 mMリン酸カリウム緩衝液（pH7.4）中に25％
（w/v）の酵母細胞．インキュベーションは，振とうしながら30℃で6時間行った．
2.3.3 生体異物からの硫酸抱合体の調製
次に，いくつかの生体異物に対する代謝活性を調べた． SULTの基質の1つであるミノ キシジル（MX）は，すべてのSULT分子種によって親水性の硫酸抱合化（MX-S）された
（Fig. 4）．特に，SULT1E1（6.2±0.4mg / L）とSULT2A1（6.9±0.4mg / L）は高い生産性を 示した． MX-Sは，7HC（Fig. 4A-C）と同様に高基質濃度（1 mM）で効率的に生成され ました．硫酸抱合の生産性をさらに調べたところ，1リットルあたりの収量が 100ミリグ ラムを超える硫酸抱合体の生成に成功したことが明らかになった．（Table. 1）．鎮痛薬およ び解熱薬として一般的に使用されているアセトアミノフェン（N-Acetyl-p-Aminophenol，
APAP）は，SULT1A3および1E1によって硫酸抱合体（APAP-S）に変換されるのに対し，
SULT2A1には活性がなかった．環境汚染物質として知られている化合物．ビスフェノール
A（Bisphenol A；BPA），その誘導体であるビスフェノールAF（Bisphenol AF；BPAF），お
よび1-ヒドロキシピレン（1-OHP）は，SULT1A1，1B1，および1E1によって十分に変換
された．各SULT分子種は，BPAおよびBPAFに対して同様の代謝活性を示した． 1-OHP は，100ミリグラムを超える生産性でSULT1A3 および1B1 によって変換されました．こ れらの生体異物化合物とは対照的に，内因性のテストステロン（TES）の硫酸抱合は，ス テロイド代謝において重要な役割を果たすことが知られている SULT2A1 によって主に代 謝された．
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2.3.4 SULTによるポリフェノールの位置選択的抱合
代謝物の位置選択的合成は，化学合成と比較した生合成の最大の特徴の1つである．し たがって，複数のヒドロキシル基を持ついくつかのポリフェノールに対するSULT形質転 換体の位置選択性を調べた． 3-，5-，および4'-位置に3つのヒドロキシル基を持つレスベ ラトロール（RES）は，SULT1A1，1A3，1B1，および1C4によって主に3-硫酸抱合体（3S）
に変換され，全体RES-S（3Sと4S）に対する3Sの比率は90％を超えた．一方，SULT2A1 により，生成量が低い，3Sおよび4'-硫酸抱合体（4'S）に変換された（RES-S全体に対す
る4'Sの比率95.2％）．対照的に，硫酸抱合体1E1は，3-および4'-ヒドロキシ基の両方に対
してほぼ同等の選択性を示し，3Sの比率は46.8％，4'Sの比率は53.2％だった（Fig. 5A，
5B）．タマネギやリンゴなどの野菜や果物が豊富な主要なフラボノールの 1 つであるケル
セチン（QUE）も，2つの硫酸塩型7Sと3’Sに変換された． SULT1A1，1A3，および1B1
は，QUE-S全体（7S＋3’S）に対するS2の比率が99.0％を超えて選択的に3’S変換された．
一方でSULT1C1と1E1は，7Sと3’Sに対してほぼ同等の選択性を示し，比率はそれぞれ
51.3％と51.4％だった（Fig. 5C，D）．ヘスペレチン（HES）は，SULT1A1，1A3，1B1，お
よび1E1によって3'-スルホコンジュゲート（3'S）に変換され，HES-S全体（3'S + 7S）に
対する3'S の比率は95.6％，88.8％，80.1％，および93.6％だった．一方で，SULT1C4 と
2A1は96.5％を超えた比率で7-ヒドロキシグループに選択性を示した（Fig. 4E, 4F）．これ
は細菌で発現した組換えヒトSULT酵素によるヘスペレチン硫酸抱合に関与するSULT分 子種を決定した以前の報告と同様だった[23]．したがって，これらのポリフェノールにお ける硫酸抱合の位置選択的調製は，最も適切なSULTアイソフォームを選択することによ って可能である．
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