時
・
v" ・ ・ ・
b圃圃圃圃a
，ー'旬‑
~-
‑ ‑
欄圃‑・
.
岨圃~
図 3‑6 H.A.‑Yellow含有アガロースゲルによる 2nd
PCR
産物の泳動N:正常マウス，
J : JVS
マウス.対照との発現量の差を保持したまま増幅す るために， 15・20サイクルで 2ndPCRを行い， H.A.‑Yellowを含む 3 %アガロ ースゲルで泳動して 各バンドをシングjレバンドへと分離した. これはその一部 を示したものである.DDでの泳動像と合わせて，バンド量の差が保持されてい るものだけを回収した (0).各サンプル名は本文中に示したプライマーの組み 合わせを表わす また同一のプライマーセットから複数のバンドが得られたもの については，長いものから順に番号を付け( )に示した.咽 圃 園 町 山 守望書 ・
相 場a
嶋 、...(‑と〉
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陣 圃 司 圃 ・
‑ 岡 田
317 293
262
特 一部について さらにバンドが分離 発 現 量 の 差 を 保 持 し た ま ま の
DNA
断片を，このうち，
は 3rd
PCR
後の H.A‑Yellow含有アガロースゲルでの泳動で，したものがあった.
異的発現遺伝子として最終的に
9
種回収した(図3 ‑ 7 ) .
‑ 4 1
・こうして分離した DNA断片中，
図 3‑5 蛍光 D i f f e r e n t i a lDisplay
法による遺伝子発現量の解析 正常マウス (N)とJVS
マウス(J)における mRNAの発現量を比較したもの の一部を示した.各サンプルは本文中に示したプライマーの組み合わせで名前を 付けた.例えば AC・2は、プライマーセット 日の Downstreamprimer ACと0.2の組み合わせを表わす.
‑ 4 0 ‑
Upstream primcr
N J N J 糊 蹄
4←
IV h柑柑・t.・2% Agarose
N J
(H.A‑Yellow containing)¥.:i:，.，i
トー V Y
N J
‑‑VIIIN J
111ー 歩 VI.ーで~，... . .，・".;~バご.'r ".・;・，・・ !;.!川3・4~ 司「ー VII
，斗 . . . . . . . ← I X
図 3‑7 正常マウスと JVSマウスの間で 発現量に差のみられた断片
N:正常マウス， J : JVSマウス. 対照との発現量の差が確認されたものを示 した 1 ~ VIIは， DD法での泳動像， VIIl， IXはH.A.‑Yellow含有アガロースに よる 2回目の泳動像で ある
AP 1 ‑ARP 3 JVS
マウスで発現量増加1 1 . AP 1 ‑ARP 3 ( 2 ) JVSマウスで発現量増加 I I I . AP 1 ‑ARP 4 JVS マウスで発現量減少 I V . AC‑13 JVS マウスで発現
量増加V. CG‑13(1) JVS マウスで発現
量増加V
I.CG ‑1 3 ( 2 ) JVS マウスで発現量減少 VI I . CG ‑ 1 3 ( 3 ) JVSマウスで発現量増加 V I I I . CG‑19(1) JVSマウスで発現量増加 I X . CG ‑1 9 ( 2 ) JVS マウスで発現
量増加また，一部については，抽出した
DNA をプローブとした N o r t h e r n b l o t 法により，
発現量に差のあることを再確認した
( d a t a n o t shown) .
3.2‑4 単離した特異的発現遺伝子断片のシークエンス決定
3.2‑3
で行なった2ndPCRは
3 正 確 に 断 片 を 増 幅 さ せ る た め に . 高いf i d e l i t yを
持つP y r o b e s t DNA Polymerase
(宝酒造)を用いて行なっているので.その末端は平 滑になっている.そこで， p B l u e s c r i p t I I KS+を EcoRV
で平滑化して，各断片を組込 みサブクロ‑ニングした反応は，DNA l i g a t i o n K i t Ve
r.l (宝酒造)を使って行なっ た.
これをCompetentC e l l JM109
(宝酒造)にトランスフェクトして.IPTG
ヲX ‑ g a l
を含む培地でカラーセレクションして，インサ‑トの入ったプラスミドを確認した.こうして得た各
DNA
断片を含むプラスミドから，蛍光ラベルを用いたジデオキシ 法 に よ るAuto Read Sequence
法 ( フ ァ ル マ シ ア ) で ， 各DNA
の 配 列 を 決 定 し た (図3 ‑ 8 )
. 得 ら れ た シ ー ク エ ン ス データは，IDEAS (b t t p : / / www.genome.ad.j
刊 に よりGenBank
，EST d a t a b a s e の 登 録 デ
ータを用いて，ホモロジーサーチを行なった( T a b l e 3 ‑ 1 ) .その結果， 3
つの遺伝子断片については既知の因子であり，その他 の6
種の遺伝子については，相向性を示すものは無くもしくは配列のみが登録され たものであり，新規の因子であるととが明らかとなったこれら新規の因子の中に， ミトコンドリアの分裂・
融合・
増 殖・
分配に重要な役割を果たす因子が含まれてい る可能性が十分考えられる.そこで，これらの因子の完全長 cDNA
クロ ‑ニングを 行なうとともに，これらの因子がミトコンドリアにどのような影響を及ぼすかを調 べるために， ミ ト コ ン ド リ ア 輸 送 ペ フ チ ド を 融 合 さ せ た 蛍 光 タ ン パ ク 発 現 ベ ク タ ーと共に，これらのDNA 断片を培
養細胞中にトランスフェクトして，生細胞中に おけるミトコンドリアの動態変化をタイムラプスデコンボリューションCCD
蛍光 顕微鏡下で直接観察することを考えた.1 .
CGACTCCAAGGTTGGCCTTGGCCGCTGTCCAGGACACCACGTTCCAGCAAAGCTGTCAGGGA ACTGTTCAGTTGTCCCATGTTTTCTGGAATGTGAGGTGTGGTCAATAAACCAGTGCTCACTT GGCCACCACGGCCATTTTTGTCTCCAGGGTCTCAGGCCCCCTTGCTGGCCCTTTAGGAACTC TTAGTTGCTTTTCATGCAAAGTTTCTTCTAGGGAGCTGCTGGCCCTGCTAGGGTGCGCCTTC CTCAGAGGCTGGACATCTTGGGGCACTGGTAACAGTAGCAGCACTGGACTAAGTTCCGGGTC TCTCTACCCTCCGCCCAGTGTAGAGGAGGCCGGTGTAGAGTTGGACTGACCTGACTATAGAC ACGGATTACCCACCAGCACTTCTGGCTTCACTAGGCCTGGAGAAGAGTGAGGCAAAACCAGT CAGGTTTCTGGGAACTGTGGGCTTCTGAACATTGAGCAAAGCCTGTCAAGCATCCAGACCAC AGGGGCAGGAATTCAGCCAAGAAGCAGCTTAAGTTATGGTCAGTGACCAAGTCAAGCTGCTT TTGGAGCTTCTTTCAGGCCAACAGGAGCCAGAGAATTGGAATTGGACTGCATTTTGCCCCAG GTCTTAGGATTCBTTCACCACTATAGTTACTGTTAGAGGTCCTTTCATTCTTGCATTATTAA A TC TC AGTTC T AGCCAAAAAAAAAAAA. . . (697 b p)
1
. 1
CGA C T C CAAG T T CGAA G C A TTCAG C AA G T G G T GG C AAGG CA G A GCC A CC A G AA GA G G G C A C C TAGTTTCCATGACAMATATGGGAATGCTATATTAGCAGGTGGAGCCATCTTCTGTGTTTCTA CATGGACATATACAGCCACACAAATTGGAATAGAATGGAACATGTCCCCTGTTGGCAGAGTC ACCCCAAAGGAATGGAGAGATCAGTAGTCGTGCCAGCTGGTACAATAATCAAGGAATTGTTT AAAACCAACTTATAAGTGAATGCCAAGTCAAAGAATCATGTACTCATTATACTATGGCAGAT TGAAGAACAAATAAAGAAATAAAGTACCTTAACCTCCAAAAAAAAAAAA... (347bp)
1 1 1 .
GCTAGCATGGAGAAGAGAACTTAGCTCTTTACATTGGATTCCTTTTTGGAAATATGCTTGGT TTAGAAGACTTTGAATGTTCTMGGGAGGTCTCTGATGCCTCACGTACCTGTACAGATTCCGG CACAAGCTTAAGGAATCCACCGAACTGTCTCTGTGTTGAGGGGAACCGGGTGCTCATGCTTT TCAGTAGCGTACATTCTTCTTTTTGGGTGACACACTTTGACAACAGCTTCTGAGCGCTCTTC CTTCGGTGATCGCTGGAGAAAACATGGGGAGCATGATGTACGTGTGGTGAAGCTGAGGGACA AGACAAGCCTGCTGTATTCTACTACTGTTTCCTGAGCCCCTGCTTTGTGAAAATCATCTGAC TCTAGAGTTCCTACCATACACATGTGCAaCGAGGGgAATTATGTCTATTTATATATAATTTA T AAACCC TGC T AGC T TCG TCA TGCAAAA T AAGACAAAACAAACACCAAAAAA. . . (480 b p)I V .
TGGATTGGTCCACACTTGGAAAGGAAGAAGCTATGATATCGGCGCTGCCACCGTCTCTGGAA GATGGATGGGAAGCCTGCTGAACTAAGGCCAGCCTGGCCTCAGGCACAGAACTGAGACCAGA GAGGACGGAGAGCCAGGCAGGACATGGTGCTTGGGCTTGCAGAACAGGCTGAAGTCTCTGGG AGCTGGGCTCACCCTTCCGGGCCCAGCCACCGAGGGTGACCAGCTTCCTGTGGGTTCCTGGG TTCTTTTAGTCTGTTTTTCCTCTCTAAACCCTCNCACCTATCCCTTCTGTGCCAAAGTTCAT TTTCCTTAAMTTAANAAMMGGMWTCAMGGGTAAAAAAAAAA， . . (351 bps)V .
TGGATTGGTCGACAGGCATTTGCAGAACATGAAGTATTTTTCTGGTGGGATGTCTGGATCCT GGGTGCCCAGGCAGCTGCTGGGTTTGGAGCCAGCTCAAGACAGCTTCCTCTGTAATATGTAA AAGCTCCCGTGGGCTCTGCCACCTCCAGCTGTGGTGTGCCCCTCCCTCCATGGCATGGGGGC CAGAGGCAGGTGCAGGAACTCTGGTCATTTCCAGGATTAGCGGTAGAGGCCTGTGGGGTATT TTATCTTGCATTAGTACTGCTTTGTGTTCTAGAGAGTTCTGGGGAAAGAGTCCCTCATTCTG TACCTGGTCTCCAAGCTGACCTTTTAAATCTCCGCTTCCAGCTAAAGCTGATCCCAGGTCCC TGAAACCCTCAGACACCCCTACCTTAGCAGTGGCGAGCATCCTATGGGCTTTGTTCCCCTTG GGCTAGGGACGGATGCAGCTGATACCTCCTTTGCCTACCACCTACCTTACCTGCTTTCTTCT TTCTTTCTTGTTTGTTTGTTTTGGTTTTTCGAGACAGAGTTTCTCTGTATAGCCCCGGCTGC CCTGAAACTCACTTTGTAGACCAGGCTGGCCTTAAACTCAGAAATCTGCCTGCCTCTGCCTC CCGAGTGCTGGGATTAAAGGTGAGCGCCACCGAAAAAAAAAAA. . . (663bps)V I
・TGGATTGGTCACTGAGAAAGACCTGGAGCTCCGCAGACTTGTCAGCCAGGTGGTAGAACTTT CCTCCCAGGCCAGTAAAGAAGCAGCTTTGATGAACCAGGAAGTCTGGGAAGAGGCAGAGGGT GCCCTCACCAGCAGCCAGTGGTACTTCAGTCCAGATGCCTGCAGGGATGATAGTCCCTCTTA GGACAGGATGAATTACAGCAGGCCTGACCCTTGATTGCCTCAGGCAGCCTGTCCTACCTGAG TATTTCCTAGCTGGCCTTTCTGCWCATTTATGTTTCCTCATGCCTCCTCCTTGTGGACCGAA GAAGTTTGGTGGTCCAGTATTCTGAAAGCTTGTACACTTTGGTTTTGGTTTGCTTTGGTTTT tGTCTTGAGGTGGGAAGAAACACCAGTCTTGGCCACACCATCTGCTGGGTTTNGgTCTAAAC HGAGTAAG... (442bps)V I . I
TGGATTGGTCCCTGATAGAAGAGTGACGGGAGAAGCTGATGTTGAGtTTGCTACTCATGAAG AAGCAGTGGCAGCTATGTCCAAGGACAGGGCCAACATGCAGCACAGATACATAGAACTCTTC CTGAATTCAACAACAGGGGCTAGCAATGGGGCTTATAGCAGCCAGGTGATGCAGGGCATGGG CGTGTCAGCTGCCCAGGCAACTTACAGTGGCCTGGAGAGCCAGTCAGTGAGTGGCTGTTACG GGGCCGGCTACAGCGGTCAGAACAGCATGGGCGGATATGATTAGTATTGTAGGAACATTTGA GTTATTTCAATCAGAAAATTTCACAGGCAGCCAATAAGCAGTCAAGAGCAGTTTATAACTCT AGAGGAAGCTgGGGGACCCACTTTGCACCATGAGTTTGTGAAATCTGGATTAAAAAATTACC TC TTC AGTGTT TC TCA TGCG AAAAAAAA AAAA. . . (466 b p s)V I I . I
TACAACGAGGGGGCCAACTACACCTTGCGCTATGTGTGCTCCACAGACCCGCTCTGAGTCCG GGAACTTCGGAACTTGGAAAGAGGTTGACCAGCTAGCAAGGGCTCCCCGGGGATCCTTAGCT GAGCAACGCATTGACAGAGCGTGGAGCGAWTAGGAGTAAAATGTTAAACCATACACTCTCAG CGCAGATTCACGGCAAGCTCTGGCAGTGTTCTCAGTGTTTTTCTCATCACTTCCACTGACCT TTCTACTCGCTTCTTAGAATTCTCAGCCTGCATCCAAATAAGGAACATCCTCGTTTCCCAGG GAGAGGCTCTCTCCAAGAAAGGGGCTCTGGGACCCTGAACCTTGGGGATTTGTTTCTAACTT GAGACTTGGTCcTTACACCTTGATGAAAACCTGCAGGAGAAAGACATGGCAGCCCACCTCCA CGTGGGAGAAGAAGGCCTTCACACGTGGAAGCTTCACAGCCAGGCTTGATTTTCAGAAGGCT AGGAGGGCGTCAGCTTGTCCTTTTAACTGGGCTCTGGAAACACCTCCCCAGATTCGATGTAT TTTCTTCCGTGATTGGATACAAATGTCTTTTAAGAAAGTAAAGGCCGCGTGAACATGCGAAA AAAAAAAAAA. . (630bps)I X
， TACAACGAGGGGAAACTGTGGAAACATATAAAGCACAAGTATGAGAACAAGGAGTAACACCC TGCCCCTGTGGGACCCGAAGGAACAGTCGCCGGTCAGCTGTTTGCCTGGAGTTGGGGCCTCA GCCTAAGGATGAGTTTCARAGTTGCCGTTCACCGACCGCCAGTGTGTGGGCAAGCTATGGCT CCACTGTACAAACAGACTCACTTCTGCTGTGTTTGAGTACAGCTGTCAGCAAATAAATGCAA AGTGCTCACGAAAAAAAAAAAA. . . (270bps)図 3 ‑ 8 蛍光 D i f f e r e n t i a lD i s p l a y 法より得られた遺伝子断片の塩基配列
Table 3 ‑ 1 . IDEAS
によるSequence S i m i l a r i t y Search
IDEASによる SimilaritySearchの結果を示した.それぞれの断片のサイ ズと相向性を示す因子の名称を示した.未知のものはunknownとした
s e q u e n c e bps s i m i l a r i t y s e a r c h 697 unknown
1 1 . 347 cytochrome c o x I d a s e p o l y p e p t i d e VIIB p r e c u r s o r l I I
.480 unknown
I V . 351 unknown V . 663 unknown V I . 442 unknown
YI I . 466 r i b o n u c l e o p r o t e i n F V I l I . 630 unknown
I X . 270 u b i q u i n o l ‑ c y t o c h r o m e c r e d u c t a s e s u b u n i t X
逆転写反応の際に
RNA
鋳型の末端まで達すると，その部分の1 s t s t r a n d cDNA
末端 に数塩基の( d C )
を付加する.この性質を利用して，3 '
末端にオリゴ( G )
配列を持つ SMART
オリゴヌクレオチドを同反応系に加えておくと，このcDNA
末端部に 付加された(dC)
部分とオリゴヌクレオチドが塩基対を形成し，逆転写酵素の鋳 型(RNA)
が延長した状態になる.P o w e r ‑ s c r I p t r e v e r s e t r a n s c r i p t a s e
は，この追加さポリA+RNA
5LぺJもUVl九.)pO~' A J'
f
一
GGG I ~SMARTフ「リゴヌクレオチド ￨ 改交情オリゴμT)プライマー I 1以ストランドイT成および
W RTによる (dC)テール{・IJJlllxル
れた
SMART
オリゴヌクレオチドに鋳型を切換えて，オリゴ、ヌクレオチド末端まT、
複製を続ける.SMART
の 由 来 は ， こ のRNA
鋳 型5 '
末 端 で の 切 換 機 構S w i t c h MechanismAt t h e 5 ' end o f RNA
主e m p l a t e
よりきている.得られた一本鎖cDNA
には.mRNA
鋳型の完全な5 '
末端とSMART
アンカーと呼ばれるSMART
オリゴヌクレ オチドが含まれているので，このアンカーと3 '
末端の改変型オリゴ( d T )
配列で の長距離(LD) PCR
によりライブラ リーの作製が可能となる.こうして得られた 完全長d s cDNA
を入T r i p l E x2
ファージのS f j I
サイトに組込み， 正常マウス:3 . 0 X 10
9p f u / ml
，JVS
マ ウ ス :3 . 6X10
9pfu/ml
のタイターのcDNA
ライブラリーを完成 させた.このcDNA
ライブラリーの挿入断片サイズは，形成されたプラークを適当
にピックアップして，PCR
でチェ ックした(図3 ‑ 10 ) .
3 . 2
・5 JVS
マウス・正常マウスの心筋細胞由来cDNA
ライブラリーの作製各種断片を発現ベクターに組込んで細 胞 内 で 発 現 さ せ る た め に は ， そ の
f u l l l eng t h cDNA
が必要である.DD
法で単離した遺伝子は，
3'
末端のみであるので，その
f u l ll c n g t h cDNA
を単離精製するた めに，lYS
マウスと正常マウスそれぞれ の心筋細胞から，cDNA
ライブラリーを
作製した.このc DNA
ライブラリー作製 にはCLONTECH社 の S MART
法 を 用 いた(図3 ‑ 9 ) . SMART
~去の cDNA合 成では、まず最初に改変型オリゴ( d T )
フ ラ イ マー
を 用 い て ， 逆 転 写 酵 素Pow e r ‑ s c r i p t r e v e r s e t r a n s c r i p t a s c
により，1 s t s t r a n d
合 成 反 応 を 行 な う が ，Pow e r ‑ s c r i p t r e v e r s e t r a n s c r i p t a s e
は、そのM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
fJ;I¥!'を切彼えて RTで{!I'].;，
宝田園GGG~ftfLflftfLfL久Jpol\'A
ーー・CCC 園 圃 圃
… …印 刷 i
↓
完全i主d
、
cDNAのi&'l縦i 3，2
，
SIi1A
↓
5め18主Trip1Ex2ア‑ b にライゲーション
グ︑ ノ
リ ン‑
¥ / ケ﹃‑J リ''﹄iI︐・eJ︐j
t :
/‑‑ フ
‑一プ一
￨l wv 一イ一‑
‑ y
‑FA‑‑N﹃FD﹃︐F目︑
図
3‑10 PCR
によるインサートサイズの確認サンプルは形成されたプラークから適当にピックアップして選んだ.プライマ ーはファージDNAのクローニングサイトを挟むようにデザインしたものを用いた.
図 3・9 SMART法による
cDNAライブラリー作製の原理
‑ 4 6 ‑ ‑ 4 7 ‑
3.2‑6
タイムラプスデコンボリューションCCD
蛍光顕微鏡を用いた ミトコンドリア観察系の確立蛍光
D i f f e r e n t i a l D i s p l a y
法により検出した因子がミトコンドリアに及ぼす影響を 調べるために，これら因子を組込んだ発現ベクターと，ミトコンドリアで蛍光タン パク質を特異的に発現するベクターを共にトランスフエクションし，蛍光顕微鏡下 でミトコンドリアの変化を直接観察する系を考えた.この実験系を確立させるため に まず，蛍光タンパク質発現ベクターのみをトランスフエクションして蛍光顕微 鏡 で 観 察 し た .蛍 光 タ ン パ ク 質 発 現 ベ ク タ ー と し て は ，CL O NTECH
社 のp
DsRed1‑Mito
を用いた. これは，Ds R e d ( D
βcosoma s p . r e d
f]u o r e c e n t p r o t e i n )
加)と 呼ばれるイソギンチャク由来の赤色蛍光タンパク質(励起極大558 nm
，蛍光極大5 8 3 nm)
にシトクロムc
オキシダ‑ゼサブユニット8
のミトコンドリア輸送シグナルを融合させたタンパク質を発現するベクターである.このベクターを，今回は，
筋芽細胞である
C2C 1 2
細胞にトランスフェクションした.検討の結果，C2C12
培 養細胞の最大70
%の細胞中のミトコンドリアを選択的に蛍光ラベルすることに成 功した これをタイムラプスデコンボリュ‑ションCCD
蛍光顕微鏡を用いて，極 めて鮮明に生細胞中の全てのミトコンドリアを観察し解析することが可能となった (図3 ‑ 1 1 )
.また，このトランスフェクションした細胞をタイムラプスデコンボ リューションCC D
蛍光顕微鏡下で培養しながら，時間経過を取り，細胞の分裂を とらえることにも成功した(図3 ‑ 1 2 ) .
図
3‑11 DsRed
発現により蛍光を発色するミトコンドリアミトコンドリア輸送シグナルと融合した赤色蛍光色素である DsRedを発現したC2C12 細胞.ミトコンドリアで特異的に発現していることが分かる 短く断片化したミトコン
ドリア(上)と，比較的長い網状構造をとるミトコンドリア(下)が確認できる
図
3
・12 DsRed
を発現したC2C12
細胞の分裂の様子pDsRedl‑Mitoをトランス
フェク卜したC2C12
細胞を顕微鏡下で培養した.写真は左上から右下に向かつて
1 5
分毎の様子を表わしている核が無くなり細胞が分裂していく様子がよくわかる
‑ 5 0 ‑
3
.3
考 察ミトコンドリアの増殖を支配する 分裂・融合・娘細胞への分配"のイベントに ついての研究は，ミトコンドリアのバイオジ、エネシスを考える上で欠かすことの出 来ない重要なポイントである.現段階では，原核生物の分裂増殖のキーを担うとさ
れる
F t s Z
2)と い う 因 子 を も と に 様 々 な 研 究 が 進 め ら れ て い る . そ し て 最 近 ， 藻 類 のMa
lJom o
刀a ss pJ e n d e n s
のミトコンドリアの分裂に関与している因子がF t s Z
ホモロ グであることが示され3)，また，F t s Z
とは異なるものであるが，より高等な真核生 物の，S . c e r ev i s i a e
で は 日lm1 p
4)，C.e J e g a n s
やHumanで は D r p I
5.o)と よ ば れ るd y namin‑ r e l a t e d p r o t e j n
が，ミトコンドリアの分裂に関わる因子として示された.こ れらの因子は，その局在に大きな違いが見られる.原核生物の分裂を支配すると考 えられるF t s Zは、細胞の内側に分裂リングと呼ばれるリング状のチュープリン様
物質を形成してその分裂を制御し3m
，高等な真核生物のミトコンドリアの分裂を 支 配 す る と 考 え ら れ る のna m m関連因子は，ミトコンドリアの外側に同様の分裂リ
ングを形成してその分裂を制御している。) こ の 違 い は ， 進 化 の 過 程 で ミ ト コ /ドリア遺伝子の一部が核に譲渡され，核にコードされたタンパクがミトコンドリア を 凶g
e t b a c kして機能を完成させる様になった仕組みを反映しているものであると
考えられる3，4.25，26) しかし，ミトコンドリアの分裂増殖は，融合と分裂がバランス よく起こって初めて完成するものである4)ととから，高等動物のミトコンドリアの 分裂増殖機構を現在わかっていることだけで説明するのは不可能である今回行なったドットブロットでの 日
+ ‑ATP
合成酵素サブユニットの転写発現室の 解析では，JVSマウスと正常マウスでの転写物の絶対量，転写パターンは共に見事
に一致しており変化はみられなかった.これより，H+‑AT P合成酵素サブユニット
遺伝子の発現調節がカルニチン欠乏状態においても正常に機能していることが明り かとなり，加齢やカルニチン欠乏といった影響を受けない，ホメオスターシスを維 持するための，転写レベルでの分子シンクロナイゼイション機構(第2
章)の存在 がますます強く示唆されてきた.このように，ミトコンドリアの増加にその繕成成 分( H + ‑ ATP
合 成 酵 素 ・c y t o c h r o m e
含量お))の増加は伴っていないことが明らかと‑ 5 1 ‑
ドキュメント内
哺乳動物ミトコンドリアのバイオジェネシスに関する基礎研究
(ページ 30-43)