使⽤ ータ

3.2.1 コー ン

脊髄 標本 ，国⽴病院機構村⼭医療 ンター岡⽥泰昌医⻑ 提供 受 ．脊髄 標本 作 ⼿順 みさせめ 同様 あ ． 簡潔 述 ，

両性 幼少 ター，⽣後 じけず ⽇ い チ ー 吸⼊

深⿇酔 ⾏い，頸髄 素早 分離 ．後根 含 頸髄 横断

でじ，です び でず ベ た単⼀区分 厚 ；8ごご–さごごご



び 眼科⽤剪⼑ ⽤い ⼿作業 準備 ． ー ン

標本 ，膜電位感受性⾊素 よろけじけづNどPPSた Iをェろtィんるらを，

48

でaィ」イbaよ， でづ， べSづ ごげさけごげ2 mるこm」 含 ， そす % O2 こ す % でO2 しご 分間通気 ⼈⼯脳脊髄液 浸 染⾊ ⾏ ．

標本 ⽔平 ー ン チ ン ー Vん」ウmら 2m」 置 ，そす%

O2 す% でO2 混合 平衡 ⼈⼯脳脊髄液 mんc「 でSな ァH せげじ じm」こmろを 潅流 下 維持 ． ⼈⼯脳脊髄液 成分 ，さ2ずmM Naで」，

すmM はで」，2ずmM NaHでOし，さげ2すmM NaH2POじ，2mM MるSOじ，2mM でaで」2，

ささmM 糖 あ ．

電気刺激 誘発 後⾓ 活動 ，光記録 MろでづMごさ

てィaろをVろイろんを 使⽤ 分析 ． ー ン チ ン ー ，落射 蛍光顕微鏡 どc」ろァイら どずごごなNた Nろ「んを， へん「オん， のaァaを 倍対物 ン

P」aを づァん， Nづちごげ2， Nろ「んを 下 置 ．標本 安定 とで 電源 Pとしずけ2ごた はらをエんんよ，⽇本国東京 作動 ン電球 2すご Wた Oィろら」，

Stィatりんィよ， でへ， べSづ 励起 タ λちすしすレさご をm 通

照射 ． ン 落射蛍光 ，MろでづMごさけででと 空

間分解能 ずご×そご ⽤い 蛍光 タ ン λずさごをm

通 検出 ． 各々 最初 蛍光強度 な ⽐較 蛍光強

度 変化量 ^f さりィamらこ2mイ ー 記録 ．光計測 さご 秒間 隔 さご 回繰 返 ，信号 加算平均 ⾏ ．

49

図 3.1 膜電位 ー ン 法

a 脊髄 標本， b 膜電位感受性⾊素 染⾊ ン ， c 膜電位 ー ン 装置， よ 膜電位感受性⾊素 染⾊ ン 励起光 照射， ら 膜電位

ー ン 装置 概要説明図 ら 膜電位 ー ン ータ．膜電位感受性⾊素 ，染⾊

組織 膜電位 神経活動 応 変化 時， 吸光度や蛍光強度 ⽐例的 変化

いう特徴 持 い ．膜電位 ー ン ，膜電位感受性⾊素 ー

利⽤ ， 光量変化 ⾼速撮影素⼦ え ，神経活動 タ ー ン

可能 あ ．

50

3.2.2 神経活動 誘発と局所⿇酔薬 投与

本研究 ，局所⿇酔薬 効果 判定 ，局所⿇酔薬投与前 投与

後 条件 い ，脊髄 標本 後⾓ 神経活動 誘

発 際 電位変化 膜電位 ー ン 装置 ー

ン ⾏ ．

後⾓ 神経活動 後根 電気刺激 誘発 ． 脱分極性 矩形波電 流 振幅 さげすmづ，区間 すごµイらc ，電気刺激装置 SどNけせさごした ⽇本光電

⽤い ⽚側 後根 吸引電極 通 加え ［22，2す］． 本実験 い ，後根 電気刺激 擬似的 痛覚 誘発 ，づ 線維 で 線維 活性化

考慮 い ．

局所⿇酔薬 ン び ン ⽤意 ． 全 ン

い 局所⿇酔薬 投与前 cんをtィん」 条件 ー ン

⾏ ． ン び ン 2 種類 濃度 さご



さごご



分間隔 ー ン ⾏ ． ン 数 条件

対 〜 匹 あ ．

51

図 3.2 ッ 脊髄 Cじ に ける膜電位 ー ン ータ

脊髄 摘出画像 中段左図 でじ 部位 横断 膜電位 ー ン ータ 中段右図 び下段図 ⽰ ．膜電位 ー ン ータ 空間解像度 88×ずご あ

，ず8ご ー 周波数 すごごHカ 時系列 ータ 各 対応 ．