代謝

体内を循環している又は経時的に排泄される放射性成分を評価するため、F9-KO マウス及びラット における試験から選択した血漿、尿及び糞試料中の放射性代謝物プロファイルを、HPLC及びゲル電気 泳動によって分析した。

2.6.4.6.1 In vivo代謝‐[³H-PEG]-ノナコグ ベータ ペゴルを投与したF9-KOマウスの血漿、尿 及び糞中代謝物プロファイル（Module 2.6.5.9.A、試験番号214438及びModule 2.6.5.9.B、試験番号214456）

マウスから得られたデータで、[³H-PEG]-ノナコグ ベータ ペゴルは経時的に40 kDa以下のPEGに分 解されることが明らかとなった（図 2.6.4-12）。HPLC（試験番号 214438）及びゲル電気泳動（試験番

号214456）による評価結果から、同一の概括的結論が得られた。40 kDa以下のPEGは尿及び糞中に排

泄されることが認められた。血漿中ではトリチウム水は検出されないかごく少量であり、一方、尿及 び糞中ではトリチウム水は経時的に増加した。この結果から、トレーサーは、循環血中では安定であ り、腎臓及び肝臓もしくは尿糞中で分解されると考えられる。

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図2.6.4-12 F9-KOマウスにおける[³H-PEG]-ノナコグ ベータ ペゴルの経時的なin vivo血漿中代 謝物プロファイル

Plasma profiles 15 min, 8 hours, 1 week and 4 weeks after a single bolus i.v. administration of 2.8 mg/kg [³H-PEG]-nonacog beta pegol (~PEG-dose: 1.2 mg/kg) to F9-KO mice (HPLC data, Module 2.6.5.9.A, 214438). The relative high amount of [³H-PEG] present in the first plasma sample was likely due to a combination of an impure dosing formulation and in vivodegradation of [³H-PEG]-nonacog beta pegol.

2.6.4.6.2 In vivo代謝‐[³H-PEG]-ノナコグ ベータ ペゴルを投与したラットの尿及び糞中代謝 物プロファイル（Module 2.6.5.9.C、試験番号215080及びModule 2.6.5.9.D、試験 番号215081）

HPLC（試験番号 215080）及びゲル電気泳動（試験番号 215081）によるラットでの in vivo代謝の評

価から、マウスと同様の概括的結論が得られた。[³H-PEG]-ノナコグ ベータ ペゴルは血漿中で 40 kDa PEG に分解され（図 2.6.4-13）、さらに腎臓及び肝臓あるいは尿糞中でより小さな PEG に分解される

（図2.6.4-14）ことが示された。

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図2.6.4-13 ラットにおける[³H-PEG]-ノナコグ ベータ ペゴルの経時的なin vivo血漿中代謝物プ ロファイル

Plasma profiles 5 min, 8 hours, 1 week and 4 weeks post-dose a single bolus i.v. administration of 1.5 mg/kg [³H-PEG]-nonacog beta pegol (~PEG-dose: 0.6 mg/kg) to rats (HPLC data, Module 2.6.5.9.C, 215080). The relative high amount of [³H-PEG] present in the first plasma sample was likely due to a combination of an impure dosing formulation and in vivodegradation of [³ H-PEG]-nonacog beta pegol.

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図2.6.4-14 ラットに投与した[³H-PEG]-ノナコグ ベータ ペゴルの経時的な in vivoでの尿中（左）

及び糞中（右）代謝物プロファイル

Urine and faeces profile 0-24 h, 24-48 h and 48-72 h post-dose a single bolus i.v. administration of 1.5 mg/kg [³H-PEG]-nonacog beta pegol (~PEG-dose:0.6 mg/kg) to rats. The fronting PEG peak (at 14.25 in urine and 13.50-14.25 in faeces) indicate detection of 40 kDa PEG as well as smaller sized PEGs in both urine and faeces. The small peak detected ~21 min in both urine and faeces is unknown and not expected to be nonacog beta pegol (HPLC data, Module 2.6.5.9.C, 215080).

2.6.4.6.3 In vivo代謝‐[³H-PEG]投与ラットにおける尿及び糞中の代謝物プロファイル

（Module 2.6.5.9.E、試験番号215078）

HPLCによる 40 kDa PEG（[³H-PEG]）のラットにおけるin vivo代謝の評価から、40 kDa PEGは血漿

中を循環し、40 kDa以下のPEGとして肝臓及び腎臓を介して経時的に排泄されるという、ノナコグ ベ ータ ペゴルと同様の概括的結論が得られた。

2.6.4.6.4 In vitro‐[³H-PEG]-ノナコグ ベータ ペゴルのラット血球分配（Module 2.6.5.10.A、

試験番号214152）

抗凝固薬として K2 EDTA、3.8%クエン酸又はヘパリンリチウムを用いて採取したラット血液で、

[³H-PEG]-ノナコグ ベータ ペゴルの in vitro 分配を検討した。ラットからそれぞれ血液試料を、K2

EDTA、3.8%クエン酸あるいはヘパリンリチウムでコーティングしたチューブに採取し、抗凝固剤ごと にプールした。被験物質を4 μg/mL及び100 μg/mLの理論濃度で添加した血液試料を37℃で、0、15、 30、60及び 120分間反応させた後、血球分配を測定した。4及び 100 µg/mLの濃度では、[³H-PEG]-ノ ナコグ ベータ ペゴルは赤血球中への顕著な取り込みは認められなかった。また、用いた抗凝固薬は、

検討した濃度範囲での取り込みに影響を及ぼさなかった。本結果は、この[³H-PEG]ノナコグ ベータ ペ ゴルトレーサーを用いたラットでの in vivo 試験で報告された結果と一致している（Module 2.6.5.5.C、

試験番号214076）。

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