1. 不規則抗体スクリーニング
不規則抗体検査とはABO血液型以外の赤血球抗原に対する抗体の検査のことを言う。不規則抗体 には主として輸血歴や妊娠歴などの既往のある人に見いだされる免疫抗体と、何ら明確な免疫刺激 がない人に見いだされる自然抗体とがある。不規則抗体の検出率は検査の対象および方法によって 異なる。不規則抗体の有無を事前に確認することは、安全な輸血や適合血液の確保、血液型不適合 による新生児溶血性疾患の予知と対策に重要な意義をもつ。
A ) 操作
【間接抗グロブリン試験】
① 検体を遠心し、血清を分離する。
血清検体を検査に用いている施設が血漿検体に切り替える場合、EDTA 加検体では弱反 応性を示す臨床的に意義のある抗体が検出できることを確認する。
② スクリーニング血球試薬の本数分の試験管を用意する。注1
③ 試験管に検体名（検体番号）、スクリーニング血球番号（1､2､3､Dia）、検査方法を記名する。
④ ③の試験管に被検血清を各2滴滴下する。
⑤ スクリーニング用赤血球試薬を転倒混和し、赤血球を均一に浮遊させた後、血球番号と対応す る番号の試験管に各1滴滴下し、よく混和する。
⑥ 反応増強剤を各試験管に各2滴滴下し、再度よく混和後37℃10～30分間加温する。注２
⑦ 生理食塩液にて3～4回洗浄する。注3
⑧ 洗浄した各試験管の赤血球沈渣に抗ヒトグロブリン抗体を各2滴滴下する。注4
⑨ よく混和後、900～1000G（3400rpm）/15秒遠心する。
⑩ 溶血・凝集の有無を観察し、判定結果を記録する。注5
⑪ 陰性結果の試験管に、IgG感作赤血球試薬を各１滴滴下後、よく混和して900～1000G
（3400rpm）/15秒遠心し、凝集することを確認する。注6
〈注釈〉
注 1 スクリーニング血球試薬には、Dia血球が組み込まれていなければならない。
注 2 反応増強剤（ウシアルブミン液、PEG、LISS など）の滴下数および反応時間、洗浄回数は 使用する試薬の添付文書に従う。
注 3 用手法で洗浄する場合は、4 頁 3. 血球洗浄方法；用手法（間接抗グロブリン試験の血球 洗浄法） を参照する。
不十分な洗浄により、被検血清が残っていると、その中の抗体と抗ヒトグロブリン抗体 が反応し、中和されてしまうので十分な洗浄を行う。
注 4 PEG の場合、用いる抗ヒトグロブリン抗体は抗 IgG が望ましい。
注 5 3 頁 2. 反応の見方 を参照する。
再度の遠心判定は、反応を減弱あるいは陰性化させることがあるため避ける。
注 6 凝集しない場合は再検査する。
<不規則抗体スク－ニングの注意点>
① 不規則抗体スクリーニングには間接抗グロブリン試験を必須とする。
② その他の検査方法は間接抗グロブリン試験と組み合わせて使用し、不規則抗体スクリーニング に単独で用いないようにする。
③ 不規則抗体スクリ－ニングに、自己対照を含める必要はない。ただし、自己対照を省略する 場合、以下の点に留意する。
(１) 自己抗体の検出や、輸血後の不規則抗体の産生初期に患者血液中に含まれるドナ－血球へ 患者由来の不規則抗体が感作されていることを検出できない。
(２) 抗体産生初期では、産生された不規則抗体の量が少ないため全てドナ－血球に感作してし まい、不規則抗体スクリ－ニングでは陰性と判定される可能性がある。
B ) 判定
不規則抗体スクリーニングの結果が陽性であれば、引き続き不規則抗体の同定検査を行う。
スクリーニング血球の何番の血球とどの方法でどの凝集の強さで反応していたか、記録に残し ておく。
【不規則抗体スクリーニング検査法 一例】
混和
混和 混和
3～４回血球洗浄
（血球洗浄機又は用手法）
抗ヒトグロブリン抗体各 2 滴滴下 直ちに洗浄操作（遠心判定しない）
Bro 各１滴滴下
混和 混和
900～1000G/15 秒 遠心
判定
判定
※ 陰性には IgG 感作赤血球 1 滴滴下
混和
判定
※ 凝集しない場合は再検査する
混和
※ 陰性には酵素コントロールを加え て遠心し、凝集することを確認するの が望ましい。
凝集しない場合は再検査する。
900～1000G/15 秒 遠心 37℃恒温槽
37℃ 10 分間 加温 37℃恒温槽
37℃ 15 分間 加温 PEG 各 2 滴滴下
PEG を用いた間接抗グロブリン試験 ク ム 法
ブロメリン１段法
IAT
３
IAT
１
IAT
２ Dia
IAT Br
１
Br
２
Br
３
900～1000G/15 秒 遠心
2. 不規則抗体同定
不規則抗体スクリーニングにおいて溶血、または凝集反応が認められた場合、抗体の特異性を同 定する。同定検査においては自己対照をおく。
不規則抗体同定において、不規則抗体スクリーニングで得られた情報と、患者の既往歴、輸血歴、
妊娠歴、投薬などの情報は抗体の特異性を決定するのに重要な手掛かりとなる。
A ) 操作
【間接抗グロブリン試験】
① 検体を遠心し、血清を分離する。
② 同定用パネル赤血球試薬と自己対照の本数の試験管を用意する。
③ 試験管に検体名（検体番号）、自己対照、同定血球番号、検査方法名を記名する。
④ 自己対照赤血球浮遊液用試験管に生理食塩液を約1～1.5ml分注し、赤血球沈層を1滴滴下し3
～5%赤血球浮遊液を調整する。
⑤ ③の試験管に被検血清を各２滴滴下する。
⑥ 同定用パネル赤血球試薬を転倒混和し血球を均一に浮遊させた後、血球番号と対応する番号の 試験管に各1滴、自己対照に④で調整した3～5%自己対照赤血球浮遊液を1滴滴下し、よく混 和する。
⑦ 反応増強剤を各試験管に各2滴滴下し、再度よく混和後37℃10～30分間加温する。注１
⑧ 生理食塩液にて3～４回洗浄する。注2
⑨ 洗浄した各試験管の赤血球沈渣に抗ヒトグロブリン抗体を各2滴滴下する。注3
⑩ よく混和後、900～1000G（3400rpm）/15秒遠心する。
⑪ 溶血・凝集の有無を観察し、判定結果を記録する。注4
⑫ 陰性結果の試験管に、IgG感作赤血球試薬を各１滴滴下後、よく混和して900～1000G
（3400rpm）/15秒遠心し、凝集することを確認する。注5
〈注釈〉
注 1 反応増強剤（ウシアルブミン液、PEG、LISS など）の滴下数および反応時間、洗浄回数は 使用する試薬の添付文書に従う。
注 2 用手法で洗浄する場合は、4 頁 3. 血球洗浄方法；用手法（間接抗グロブリン試験の血球 洗浄法） を参照する。
不十分な洗浄により、被検血清が残っていると、その中の抗体と抗グロブリン抗体が反 応し、中和されてしまうので十分な洗浄を行う。
注 3 PEG の場合、用いる抗ヒトグロブリン抗体は抗 IgG が望ましい。
注 4 3 頁 2. 反応の見方 を参照する。
再度の遠心判定は、反応を減弱あるいは陰性化させることがあるため避ける。
注 5 凝集しない場合は再検査する。
【不規則抗体同定検査法 一例】
混和
混和
判定
自己対照 血球 No.1～
900～1000G/15 秒 遠心 生食法直後判定（IS）
Bro 各１滴滴下
混和
PEG 各 2 滴滴下
3～４回血球洗浄
（血球洗浄機又は用手法）
抗ヒトグロブリン抗体各 2 滴滴下
判定
判定
※ 凝集しない場合は再検査する 直ちに洗浄操作（遠心判定しない）
※ 陰性には IgG 感作赤血球 1 滴滴下
900～1000G/15 秒 遠心
混和
37℃恒温槽
37℃恒温槽 37℃ 10 分間 加温
37℃ 15 分間 加温
混和
自己対照 血球 No.1～
22℃恒温槽
２２℃ １５分間 PEG を用いた間接抗グロブリン試験
ク ム 法
混和 混和
900～1000G/15 秒 遠心 生食法判定（Sa）
900～1000G/15秒 遠心 生食―ブロメリン一段法
･･･
Br
１
Br
２
Br
３
自己
Br
※ 陰性には酵素コントロールを加え て遠心し、凝集することを確認するの が望ましい。
凝集しない場合は再検査する。
900～1000G/15 秒 遠心
混和
･･･
IAT
１
IAT
２
IAT
３
自己 IAT
3. 結果の解釈
不規則抗体の同定は、同定用パネル血球に対する検査検体の反応パターンと同定用パネル血球に 発現している抗原パターンとを比較して特異性を推定する。一般的に消去法が用いられる。
A ) 患者情報を確認する
① 年齢
② 性別
③ 診断名
④ 輸血歴、妊娠歴、分娩歴
輸血歴、妊娠歴がある場合、抗原により感作された可能性があるため、免疫抗体を考える。
輸血歴、妊娠歴がない場合、免疫された可能性が低いことから、自然抗体を考える。
⑤ 移植歴
⑥ 病歴
⑦ 治療方法
⑧ 投与薬剤
B ) 抗体の特徴をつかむ
① 反応温度、各方法における凝集の強さ
(１) 低温域での反応は冷式抗体、37℃での反応は温式抗体を考える。
(２) 生理食塩液法での反応は自然抗体、間接抗グロブリン試験での反応は免疫抗体を考える。
(３) 酵素法での反応は、MNSs血液型、Duffy血液型、Xg血液型などの抗原は酵素により破壊 されるので、反応が減弱または検出できないことがある。
② 凝集の強弱
（1） 同じ反応相で凝集に強弱があれば、量的効果（32頁 C） 量的効果 を参照する）を 示す抗体か、複数抗体の存在を考える。
（2） 異なった反応相に多様な凝集の強弱があれば、複数の抗体の存在を考える。
複数の抗体の存在が考えられる場合、反応態度、抗原特性、抗体性状などを考慮し、追 加検査を実施して、抗体を絞り込む。
（3） 高力価であるにもかかわらず、凝集が弱く反応が見逃されやすい抗Jra抗体などがある。
③ 自己対照
（1） 被検血清が自己赤血球にどのように反応するかを判定する。これは、同種抗体か自己抗体 かあるいは両方存在するのかを判断するのに役立つ。同定用パネル血球試薬のみ凝集を示
せば、同種抗体だけ存在する。自己対照と同定用パネル血球ともに凝集を示せば、自己抗 体の存在あるいは同種抗体と自己抗体両方の存在を考える。
（2） 自己対照が間接抗グロブリン試験で凝集した場合、直接抗グロブリン試験を実施する。
直接抗グロブリン試験が陽性ならば、抗体解離試験を行う。