Òèõîíîâà Î. Â., Åðøîâà Å. Þ., Ëóðüå Ë. Ì., Êóëÿåâà Â. Â., Êàòðóõà Ã. Ñ., Êàìçîëêèíà Î. Â., Åôðåìåíêîâà Î. Â., Äóäíèê Þ. Â.
Èíñòèòóò ïî èçûñêàíèþ íîâûõ àíòèáèîòèêîâ èìåíè Ã. Ô. Ãàóçå ÐÀÌÍ Ìîñêâà Ìîñêîâñêèé Ãîñóäàðñòâåííûé Óíèâåðñèòåò èìåíè Ì. Â. Ëîìîíîñîâà, Áèîëîãè÷åñêèé ôàêóëüòåò Ìîñêâà Îäíèì èç íàïðàâëåíèé ïîèñêà íîâûõ ïðèðîäíûõ àíòèáèîòèêîâ ÿâëÿåòñÿ èçó÷åíèå âèäîâ, ðàíåå íå ðàññìàòðèâàâøèõñÿ êàê âîçìîæíûå ïðîäóöåíòû àíòèáèîòèêîâ. Ê òàêèìâèäàì ìîæíî îòíåñòè áàçèäèàëüíûé ãðèáLaeti porus sulphureus (Fr.) Bond et Sing(ñåðíî-æåëòûé òðóòîâèê).
Èçâåñòíî, ÷òî L. sulphureus ÿâëÿåòñÿ ïðîäóöåíòîì ðÿäà áèîëîãè÷åñêèàê-òèâíûõ âåùåñòâ: ôåðìåíòîâ, ðàçðóøàþùèõ äðåâåñèíó, ãàëëþöèíîãåíîâ, èì-ìóíîñòèìóëÿòîðîâ, öèòîòîêñèíîâ. Èìåþòñÿäàííûå îá àíòèìèêðîáíûõ ñâîé-ñòâàõ ïëîäîâûõ òåë L. sulphureus, îäíàêî ïîäðîáíî ýòîò âîïðîñ íå èçó÷àëñÿ.
 õîäå ïîèñêà ïðîäóöåíòîâ íîâûõ àíòèáèîòèêîâ íàìè áûëà îáíàðóæåíà àíòèáèîòè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü ó ïÿòè øòàììîâ L. sulphureus.: 4 øòàììà áûëè âûäåëåíûòêàíåâûì ìåòîäîì èç ïëîäîâûõ òåë L. sulphureus, âçÿòûõ ñ îòìåð-øèõ äóáîââ ëåòíèé ïåðèîä 1999 è 2001 ãã. â Ìîñêâå è Ìîñêîâñêîé îáëàñòè (¹¹ 2990, 2991, 3375, 3461); ïÿòûé øòàìì ïîëó÷åí èç êîëëåêöèè(¹ ÂÊÌ F-1456).
Àíòèìèêðîáíóþ àêòèâíîñòü êóëüòóðàëüíîé æèäêîñòè è àãàðîâûõ áëî-êîâ, âûðåçàííûõ èç àãàðîâîé ñðåäû ñ ðàñòóùèì ìèöåëèåì, îïðåäåëÿëè ìåòî-äîì äèôôóçèè â àãàð.  êà÷åñòâå òåñò-îðãàíèçìîâèñïîëüçîâàëè 12 êóëüòóð áàêòåðèé è ãðèáîâ.
Ïîâåðõíîñòíîå êóëüòèâèðîâàíèå òåñò-îðãàíèçìîâ ïðîâîäèëè íà ìîäè-ôèöèðîâàííîé ñðåäå ¹ 2 Ãàóçå; äëÿ ãpèáîâ òàêæå èñïîëüçîâàëèñðåäó ×à-ïåêà è ñîåâóþñðåäó.  êà÷åñòâå ñóáñòðàòîâ äëÿ ïîâåðõíîñòíîãî êóëüòèâèðî-âàíèÿ è îáðàçîêóëüòèâèðî-âàíèÿ ïëîäîâûõ òåëáûëî ïðîàíàëèçèðîâàíî ìíîãî ðàçëè÷-íûõ îðãàíè÷åñêèõ ñóáñòðàòîâ, íî ïëîäîâûå òåëà óäàëîñü ïîëó÷èòü òîëüêî íà ðæàíîì õëåáå. Ïî 150- 200ã õëåáà ïîìåùàëè â êîëáû îáúåìîì 750 ìë è äîáàâëÿëè 100 ìë âîäîïðîâîäíîé âîäû. Êîëáû ñòåðèëèçîâàëè 1÷ ïðè èçáû-òî÷íîì äàâëåíèè â 1 àòì.  êà÷åñòâå ïîñåâíîãî ìàòåðèàëà èñïîëüçîâàëèáëî-êè àãàðîâîé ñðåäûñïîâåðõíîñòíûì ðîñòîì ãðèáíîé êóëüòóðû ïëîùàäüþ 1-2 ñì2. Êóëüòèâèðîâàíèå ïðîâîäèëè ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå íà ñâåòó. Ãëó-áèííîå êóëüòèâèpîâàíèå ãðèáîâ ïpîâîäèëè â êîëáàõ îáúåìîì 750 ìë íà êà÷àëêå ñî ñêîðîñòüþ âðàùåíèÿ 200 îáîpîòîâ/ìèí. Îáúåìïèòàòåëüíîé ñðå-äû ñîñòàâëÿë 100-150 ìë. Èíêóáèpîâàíèå ïpîâîäèëèîò 7 äî 35 ñóòîê ïpè òåìïåpàòópå 28°Ñ. Ïðèðàçðàáîòêå ïðîïèñè ñðåäû äëÿ îáðàçîâàíèÿ àíòè-ìèêðîáíûõ ñðåäñòâ â êà÷åñòâå èñõîäíûõ èñïîëüçîâàëè ñëåäóþùèå äâå ñðå-äû(%): Ñðåäà ¹ 1: ãëèöåðèí — 3, ñîåâàÿ ìóêà — 1, 5, NaCl — 0, 3, ìåë — 0, 3;
âîäà âîäîïpîâîäíàÿ; pH7, 0 — 7, 2. Ñðåäà ¹ 2: ñóñëî ïèâíîå 20° ïî Áàëëèíãó
— 10%; âîäà âîäîïðîâîäíàÿ.
Âñåïÿòü øòàììîâ ñåðíî-æåëòîãî òðóòîâèêà ñõîäíû ïî êóëüòóðàëüíî-ìîðôîëîãè÷åñêèì õàðàêòåðèñòèêàì è ëèøü íåçíà÷èòåëüíî îòëè÷àþòñÿïî èíòåíñèâíîñòè ïèãìåíòàöèè è ñêîðîñòè ðîñòà. Èç òðåõ àãàðîâûõ ñðåä íàè-ëó÷øåé áûëàïðèçíàíà ñîåâàÿ àãàðîâàÿ ñðåäà, íà êîòîðîé ïðè âûñåâå óêîëîì â öåíòð ÷àøåê Ïåòðè ê 14-ì ñóòêàì ðîñòà íàáëþäàåòñÿ ñïëîøíîå îáðàñòà-íèå ñðåäû. Ìèöåëèé ñòåëþùèéñÿ, ïëîòíûé, ïîðîøêîîáðàçíûé, ðîçîâî-îðàí-æåâîãî öâåòà, ýêçîïèãìåíòîðàíðîçîâî-îðàí-æåâîãî öâåòà. Øòàììû 3375è F-1456 èìåþò áîëåå ÿðêóþ îðàíæåâóþ îêðàñêó è íåñêîëüêî áîëüøóþ ñêîðîñòü ðîñòà. Íà-áëþäàåòñÿ îáèëüíîå ôîðìèðîâàíèå âåãåòàòèâíûõ ñïîð ó âñåõ ïÿòè øòàììîâ.
Äëÿ îïðåäåëåíèÿ íàèáîëåå áëàãîïðèÿòíîé òåìïåðàòóðû ðîñòà øòàììû èí-êóáèðîâàëè íà ñîåâîì àãàðå ïðè 20°, 28°Ñ è 37°Ñ. Â ðåçóëüòàòå áûëî óñòàíîâ-ëåíî, ÷òî îïòèìàëüíîéäëÿ ñêîðîñòè ðîñòà áûëà òåìïåðàòóðà 28°Ñ.
Ïðè ïîëó÷åíèèïëîäîâûõ òåë â èñêóññòâåííûõ óñëîâèÿõ íà âñåõ èñïîëü-çîâàííûõ ñóáñòðàòàõ, çà èñêëþ÷åíèåì ðæàíîãî õëåáà, íàáëþäàëñÿ ñêóäíûé ðîñò ìèöåëèÿ, ïèãìåíòàöèÿ îòñóòñòâîâàëà.  êîëáàõ ñ ðæàíûì õëåáîì ïîëíîå îáðàñòàíèå ñóáñòðàòàäîñòèãàëîñü çà 14 ñóòîê êóëüòèâèðîâàíèÿ: âîçäóøíûé ìèöåëèé ïîðîøêîîáðàçíîãî òèïà, îêðàøåííûé â ðîçîâî-îðàíæåâûé öâåò, âîçâûøàþùèéñÿ íàä ïîâåðõíîñòüþ ñóáñòðàòà íà 3-4 ñì. ×åðåç 1, 5 ìåñÿöà íàáëþäàëè îáðàçîâàíèå çà÷àòêîâ ïëîäîâûõ òåë, êîòîðûå âûãëÿäåëè êàê ÿðêî-îðàíæåâûå óïëîòíåíèÿ äèàìåòðîì 3-5 ìì, ïëîòíî ïðèëåãàþùèå ê ñòåêëó êîëáû. ×åðåç 3 ìåñÿöà äèàìåòð îáðàçîâàíèé äîñòèãàë5-8 ñì. Ïî óëüòðà-ñòðóêòóðå ïëîäîâûå òåëà, ïîëó÷åííûå â êóëüòóðå, íå îòëè÷àëèñü îò ïëîäîâûõ òåë ïðèðîäíîãî ïðîèñõîæäåíèÿ.
Ñïîñîáíîñòü øòàììîâ L. sulphureus ïðîÿâëÿòü àíòèìèêðîáíûå ñâîéñòâà èçó÷àëè ïðè ïîâåðõíîñòíîì è ãëóáèííîì ñïîñîáàõêóëüòèâèðîâàíèÿ. Íà 14 ñóòêè ðîñòà ïîñëå ïîëíîãî îáðàñòàíèÿ â ÷àøêàõ ïîâåðõíîñòè ñîåâîé àãàðî-âîé ñðåäû èç íåå âûðåçàëè áëîêè è ïîìåùàëè íà ãàçîíû ñ òåñò-îðãàíèçìà-ìè. Áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ïðè ïîâåðõíîñòíîì ðîñòå âñå ïÿòü øòàììîâ ïðîÿâ-ëÿþò àíòèáèîòè÷åñêóþ àêòèâíîñòü â îòíîøåíèè ãðàìïîëîæèòåëüíûõ è ãðà-ìîòðèöàòåëüíûõ áàêòåðèé, íî íå îêàçûâàþò âîçäåéñòâèÿ íà ãðèáû. Ïðè ãëó-áèííîì êóëüòèâèðîâàíèè íàáëþäàëè àíàëîãè÷íûé ñïåêòð àíòèìèêðîáíîé àêòèâíîñòè äëÿ âñåõ èññëåäîâàííûõ øòàììîâ.
Ñ öåëüþ óâåëè÷åíèÿ àíòèìèêðîáíîé àêòèâíîñòè â ïðîöåññå ðàáîòû èñ-ïîëüçîâàëè ðàçëè÷íûå èñòî÷íèêè àçîòà, óãëåðîäà, äîáàâëÿëè òâåðäûå ÷àñòè-öû äëÿ èììîáèëèçàöèè ìèöåëèÿ. Âíåñåíèå â ñóñëî-ñðåäó áåðåçîâûõ è äóáî-âûõîïèëîê, à òàêæå îïèëîê õâîéíûõ ïîðîä äåðåâüåâ, ïîêàçàëî, ÷òî íàèëó÷-øèé óðîâåíü àíòèáèîòè÷åñêîé àêòèâíîñòè íàáëþäàëñÿíà ñðåäå ñ äóáîâû-ìè îïèëêàäóáîâû-ìè, ÷òî, âîçìîæíî, îáúÿñíÿåòñÿ òåì, ÷òî â ïðèðîäåL. sulphureusðàñòåò â îñíîâíîì íà äóáàõ, ÿâëÿÿñü äðåâîðàçðóøèòåëåì. Îïèëêè, ïî-âèäèìîìó, ñëóæàò â äàííîì ñëó÷àåíå òîëüêî èììîáèëèçóþùèì ôàêòîðîì, íî è èñòî÷íèêîì ïèòàíèÿ.
Äàëåå â êà÷åñòâå äîïîëíèòåëüíûõ èñòî÷íèêîâ îðãàíè÷åñêîãî àçîòà è óãëåðîäà èñïîëüçîâàëè ñîåâóþ ìóêó, ôàðìàìåäèþ, õëîïêîâóþ ìóêó, êóêóðóç-íûé ýêñòðàêò, ò. å. ñûðüå, ÿâëÿþùååñÿ òðàäèöèîííûì â áèîòåõíîëîãè÷åñêîé
ïðîìûøëåííîñòè.  ðåçóëüòàòå ïîêàçàíî, ÷òî íà âñåõ ìîäèôèêàöèÿõ ñðåäû çíà÷èòåëüíî óâåëè÷èâàëèñü êàê áèîìàññà ìèöåëèÿ, òàê è óðîâåíü áèîñèíòå-çà àíòèìèêðîáíûõ âåùåñòâ, ò. å. íàáëþäàëîñü êîððåëÿòèâíîå èçìåíåíèå äâóõ ïîêàçàòåëåé. Òàêèì îáðàçîì, ââåäåíèå â ñðåäó, ñîñòîÿùóþ èç îäíîãî òîëüêî ñóñëà, äîïîëíèòåëüíîãî êîìïîíåíòà, ÿâëÿþùåãîñÿ êàê èñòî÷íèêîì ïèòàíèÿ, òàê è ìàòåðèàëîì äëÿ ñîðáöèè ðàñòóùåãî ìèöåëèÿ, ïðèâîäèò ê ñòèìóëÿöèè áèîñèíòåçà àíòèìèêðîáíûõ âåùåñòâ.
Èç êóëüòóðàëüíîé æèäêîñòè øòàììà 2990 àíòèìèêðîáíûå âåùåñòâà âûäåëÿëè ïóòåì ýêñòðàêöèèýòèëàöåòàòîì. Ýêñòðàêò óïàðèâàëè èõðîìàòîã-ðàôèðîâàëè íà êîëîíêå ñ ñèëèêàãåëåìôèðìû «Merck»ñ ïîñëåäîâàòåëü-íûì èñïîëüçîâàíèåì äëÿ ðàçâèòèÿ êîëîíêè ðàñòâîðèòåëåé: ãåêñàíà, áåíçî-ëà, áåíçîëà ñ óâåëè÷èâàþùèìñÿ ïðîöåíòîì àöåòîíà. Ïðè äàííîì ñïîñîáå î÷èñòêè è êîíöåíòðèðîâàíèÿ èç 30 Ë óäàëîñü âûäåëèòü4 ìã ñûðöà. Àêòèâ-íûå âåùåñòâà, ýôôåêòèâÀêòèâ-íûå â îòíîøåíèè B. subtilis ÀÒÑÑ 6633 è S. aureus INA 00761 (MRSA), îáíàðóæèâàëè áèîàâòîãðàôè÷åñêèì ìåòîäîì ïîñëå ïðî-âåäåíèÿ òîíêîñëîéíîé õðîìàòîãðàôèè. Óñòàíîâëåíî, ÷òî àêòèâíàÿ ôðàê-öèÿ ñîñòîÿëà èç òðåõ âåùåñòâ, èç êîòîðûõ îäíî èìååòìîëåêóëÿðíóþ ìàññó 262-263 à. å. ì. è ïèê ïîãëîùåíèÿ â ÓÔ ïðè 254 íì;äâà äðóãèõ âåùåñòâà èìåþò ðàâíóþ ìîëåêóëÿðíóþ ìàññó (522-523 à. å. ì.)è íå èìåþò ïèêà ïî-ãëîùåíèÿ â ÓÔ-ñïåêòðå.
Èç êóëüòóðàëüíîé æèäêîñòè òàêæå áûëî âûäåëåíî áåëîå êðèñòàëëè÷åñ-êîå âåùåñòâî, îáëàäàþùåå àíòèáàêòåðèàëüíûìè ñâîéñòâàìè. Ïî ýëåêòðî-ôîðåòè÷åñêîé ïîäâèæíîñòè, õðîìàòîãðàôèðîâàíèþ â òîíêîì ñëîå è ïîëî-æèòåëüíîé ðåàêöèè ñ äèôåíèëàìèíîì îíî áûëî èäåíòèôèöèðîâàíî ñ ùà-âåëåâîé êèñëîòîé. Îáðàçîâàíèå ùàùà-âåëåâîé êèñëîòû óL. sulphureusðàíåå îïè-ñàíî íåáûëî, õîòÿõîðîøî èçâåñòíàÿ êèñëàÿ ïðèðîäà ïëîäîâûõ òåë, âåðîÿòíî, îáóñëîâëåíî èìåííî åþ.
ÂËÈßÍÈÅ ÍÀ ÐÎÑÒ È ÏÐÎÖÅÑÑÛ ËÈÏÎÃÅÍÅÇÀ PYTHIUM DEBARYANUM ÍÈÇÊÎÌÎËÅÊÓËßÐÍÛÕ
ÐÅÃÓËßÒÎÐΠÐÀÇËÈ×ÍÎÉ ÕÈÌÈ×ÅÑÊÎÉ ÑÒÐÓÊÒÓÐÛ
Òêà÷åâñêàÿ Å. Ï., Ñåðãååâà ß. Ý., Ãàëàíèíà Ë. À., Êîíîâà È. Â., Æóêîâà Å. Ý., Åâñòèãíååâà Ð. Ï.
Ìîñêîâñêàÿ ãîñóäàðñòâåííàÿ àêàäåìèÿ òîíêîé õèìè÷åñêîé òåõíîëîãèè èìåíè Ì. Â. Ëîìîíîñîâà Èíñòèòóò ìèêðîáèîëîãèè ÐÀÍ Ìîñêâà Ðåãóëÿöèÿ ïðîöåññîâ ðîñòà è ëèïîãåíåçà ìèêðîîðãàíèçìîâ èìååò òåî-ðåòè÷åñêîå è ïðàêòè÷åñêîå çíà÷åíèå. Ëèïèäû, ñîäåðæàùèå ïîëèíåíàñûùåí-íûå æèðïîëèíåíàñûùåí-íûå êèñëîòû (ÏÍÆÊ), ÿâëÿÿñü íåîòúåìëåìîé ÷àñòüþ áèîìåìáðàí, èãðàþò âàæíóþ ðîëü â ðàçâèòèè è íîðìàëüíîì ôóíêöèîíèðîâàíèè
îðãà-íèçìà. Íàðÿäó ñ ïëàñòè÷åñêîé ôóíêöèåé, îíè ïðîÿâëÿþò ñïåöèôè÷åñêèå ðåãóëÿòîðíûå ñâîéñòâà, îáåñïå÷èâàÿ íîðìàëüíóþ ðàáîòó ìíîãèõ ôåðìåíò-íûõ ñèñòåìè ó÷àñòâóÿ â ìåæêëåòî÷ôåðìåíò-íûõ êîíòàêòàõ, âûïîëíÿþò ýíåðãåòè÷åñ-êèå è òðàíñïîðòíûå ôóíêöèè. Êàê ñàìè ÏÍÆÊ, òàê è èõ ïðîèçâîäíûå îá-ëàäàþò øèðîêèì ñïåêòðîì áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè è ïðåïàðàòû íà èõ îñíîâå øèðîêî èñïîëüçóþòñÿ âî âñåì ìèðå äëÿ ïðîôèëàêòèêè è ëå÷åíèÿ çàáîëåâàíèé, ñâÿçàííûõ ñ ïàòîëîãè÷åñêèì ñîñòîÿíèåì ðàçëè÷íûõ ñèñòåì îðãà-íèçìà. Òåõíîëîãèÿ ïîëó÷åíèÿ áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûõ âåùåñòâ ñ èñïîëüçî-âàíèåì ìèêðîáèîëîãè÷åñêîãî ñèíòåçà èìååò áîëüøîå çíà÷åíèå äëÿ ïèùå-âîé è ôàðìàöåâòè÷åñêîé ïðîìûøëåííîñòè.
Èíòåðåñíûì ÿâëÿåòñÿ èçó÷åíèå âîçìîæíîñòè ïîâûøåíèÿ âûõîäà öåëå-âûõ ÏÍÆÊ â ïðîöåññå èõ áèîñèíòåçà. Äàííàÿ ðàáîòà ïîñâÿùåíà èññëåäîâà-íèþ âëèÿíèÿ ðàçëè÷íûõ ýêçîãåííûõ áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûõ íèçêîìîëåêó-ëÿðíûõ ñîåäèíåíèé, îáëàäàþùèõ àíòèîêñèäàíòíîé àêòèâíîñòüþ è ðàçëè÷-íîé ãèäðîôîáíîñòüþ, íà ðîñò è ëèïèäíûå õàðàêòåðèñòèêè ýóêàðèîòíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ, àêòèâíî ñèíòåçèðóþùèõ ÏÍÆÊ. Íà ìîäåëè îîìèöåòà Pythium debaryanum â ãëóáèííîé êóëüòóðå ïîêàçàí áèîëîãè÷åñêèé ýôôåêò íèçêîìîëåêóëÿðíûõ ðåãóëÿòîðîâ, äîáàâëÿåìûõ ê ïèòàòåëüíîé ñðåäå. Âûÿâ-ëåíà íåîäíîçíà÷íîñòü âëèÿíèÿ íà ðîñò, ëèïîãåííóþ àêòèâíîñòü è óðîâåíü ÏÍÆÊ âèòàìèíîâ Å, Ê1, èõ âîäîðàñòâîðèìûõ ïðîèçâîäíûõ è ñòðóêòóðíî îòëè÷íûõ ôóíêöèîíàëüíûõ àíàëîãîâ, ïðåäñòàâëåííûõ õðîìàíàìè è ìåíà-äèîíîì. Íàèáîëüøèé âûõîä ôàðìàêîëîãè÷åñêè àêòèâíûõ ÏÍÆÊ (442, 3 ìã/ë), ïðåâûñèâøèé êîíòðîëü â 3 ðàçà, îòìå÷åí ïðè äîáàâêå âèòàìèíà Ê1 (1,97õ10-3 Ì) ê ïèòàòåëüíîé ñðåäå â ôàçó àêòèâíîãî ðîñòà êóëüòóðû (20 ÷àñ ïîñëå çàñåâà), ÷òî îáóñëîâëåíî îäíîâðåìåííûì óâåëè÷åíèåì âåëè÷èí ëè-ïèäíîãî ïóëà è ñîäåðæàíèåì ýéêîçàïîëèåíîâûõ æèðíûõ êèñëîò â êëåòêàõ.