培養血管内皮細胞存在下での cyclooxygenase 阻害薬と thromboxane A2 合成酵素阻害薬の血小板凝集能に及ぼす影響

1

原

著

〔東女医大誌 第64巻 第3号頁183∼191平成6年3月〕

培養血管内皮細胞存在下での

cyclooxygenase阻害薬とthromboxane A2合成酵素阻害薬の

血小板凝集能に及ぼす影響

東京女子医科大学 脳神経センター神経内科学（主任 丸山勝一教授）

      ワ     ダ      チ     ヅ       和  田  千  鶴 （受付 平成5年10，月26日目

Effect of Cyclooxygenase and Thromboxane A2 Synthetase Inhibitors On

       Platelet Aggregation in the Presence ofHuman

      Umbilical Vein Endothelial Ce皿s        Chizu WADA Department of Neurology（Director：Prof． Shoichi MARUYAMA＞， Neurological Institute，       Tokyo Women’s Medical College    The present study investigated the effects of cyclooxygenase inhibitors（aspirin and 4−indobufen） and a throhlboxane A2 synthetase inhibitor（ozagrel）on platelet aggregation in the presence or absence ．of human umbilical vein endothelial cells（HUVECs）．    HUVECs（104−105）were placed into cuvettes and slope−cultured for several days at 37。C in a 5％ CO2 incubator． ADP−induced platelet aggregation was．measured after platelet−rich plasma（PRP） and／or HUVECs were pretreated with 10−7−10−4 M aspirin，4・indobufen， or ozagrel alone， or with both aspirin and ozagrel for 30 min．    Platelet aggregation was inhibited by HUVECs．in a density−dependent manner。 In the absence of HUVECs， platelet aggregation was inhibited by aspirin or 4−indobufen but not ozagrel in dose・ dependent manner． The combination of aspirin and ozagrel enhanced the inhibition of platelet aggregation in the absence of HUVECs when compared with either drug alone． Inhibition of platelet aggregation was decreased in a dose・dependent manner by pretreatm．ent of HUVECs with aspirin or 4・indobufen but not ozagrel． Platelet aggregation was inhibited in the presence of 10−6 M aspirin and HUVECs pretreated with the same dose of aspirin， while it was enhanced in the presence of 10−7 M 4−indobufen and HUVECs pretreated with this dose． On the other hand， pretreatment of PRP and HUVECs with ozagrel did not have any effect on platelet aggregation．    These results suggest that the measurement of platelet aggregation in the presence HUVECs， which more closely reflects in vivo conditions than conventional methods， is useful for evaluating the effects of antiplatelet agents． This method is also appropriate to clarify the so−called‘‘aspirin dilemma”．        緒  言

 Cyclooxygenase（COX）阻害薬であるアスピリ

ンはatherothrombotic diseaseの再発予防を目

的と．

_{ｵて，現在広く使用されているが，高濃度の}

場合，血小板のCOXを阻害して血小板凝集を促

進する、thromboxane A2（TXA2）の合成を抑制す

るのみならず，血管内皮細胞のCOX．をも． j害し，

血小板凝集抑制作用のあるprostacyclin（PGI2）

の産生をも抑制する，いわゆるアスピリンジレン

マが問題となっている1）∼6）．しかし，従来の血小板

一183一

vitroにおいてアスピリンジレンマ現象を評価す

ることができなかった．そこで今回，二二静脈培

養血管内皮細胞（HUVEC）でコーティングした

キュベヅトを使用して血小板凝集能を測定する系

を確立し，この系を用いて7＞，in vitroにおいて，

アスピリンジレンマを検討した．また4一インドブ

フェンはアスピリンよりも強力なCOX阻害作用

を有する薬剤として開発されたが8）9），同じくこの

系を用いてアスピリンとの比較検討を行った．さ

らに最近，TXA2合成酵素阻害薬がアスピリンジ

レンマを解消する薬剤として開発され，脳梗塞急

性期の治療薬としても使用されるようになった

が1。）11），今回TXA2合成酵素阻害薬オザグレルの

影響についても検討した．

       対象および方法

 1．HUVECの分離培養法

 正常産婦から得た新鮮な二三静脈内腔をCa2＋

とMg2＋を含まないリン酸緩衝生食液（PBS，免疫

生物研究所，藤岡，群馬）20∼50mlで洗浄後，

0．25％トリプシン液（Gibco Inc，， Grand Island，

NY， USA）20∼50mlを注入し，37℃，30分イン

キュベートした．あらかじめ50mlの遠心管を用意

しておき，切断した膀帯静脈から内皮細胞を含む

トリプシン液を完全に回収し，次いで，20％ウシ

胎児血清（Gibco），10，000U／mlペニシリン

（Gibco），10，000μg／mlストレプトマイシン

（Gibco），25μg／mlアンホテリシンB（Gibco），

1，000U〃ヘパリン（ノボ・ノルディスクA／S，デ

ンマーク），30mg／1内皮細胞成長因子（Sigma，

St Louis， MO， USA）を含む血管内皮細胞増殖

用培地MCDB131（pH 7．4，クロレラ工業，東京）

20mlを膀帯静脈に通して上述の同じ遠心管に回

収した．同遠心管を800回転／分，5分間遠心して，

内皮細胞を分離し，上清を吸引除去後，増殖用培

地5∼10mlでよく拡散してからコラーゲンをコー

ティングした25cm2のフラスコ（Falcon Inc．， Lin−

coln Park， USA）に播種した．内皮細胞は37℃，

5％CO2インキュベーターで3∼5日間培養し，

コンフルエントになった時点でPBSで静かに洗

浄し，0．05％トリプシン／0．02％EDTA（Gibco）

図1 HUVECを蒔いたキュベットを軽くアルミホ

 イルでキャップをし，傾斜をさせ37℃，5％CO2のイ  ンキュベーター内で数日間培養した．

溶液を用いて剥離した．培養細胞は第2代目まで

を使用し，増殖用培地で希釈した104∼105個の内

皮細胞をあらかじめフィブロネクチン（100μg／

m1， Sigma）でコーティングしておいたキュベッ

ト（二光バイオサイエンス，東京）に播種し，軽

くアルミホイルでキャップをして細胞が付着しや

すいように斜めに傾斜させ，数日間培養した（図

1）．

 2．血小板凝集能の測定

 1／10容の3．8％クエ・ソ酸ナトリウムを用いて21

G針によりinformed concentを得た健常成人よ

り採取した静脈血を1，000回転／分，10分間室温に

て遠心し，多血小板血漿（PRP）を分離し，さら

に残りの血漿を3，000回転／分，15分間遠心して乏

血少板血漿（PPP）を作製した．自動血球計数装

置Sysmex F800（東亜医用電子1東京）を用いて

血小板数を測定し，30×104／μ1になるようにPRP

を調製した．PRPのみ， HUVECのみ，および，

PRPとHUVECの3群について，それぞれを0．2

Mリン酸緩衝液で希釈した終濃度10−7∼10−4M

のアスピリン（日本化薬，東京），6一インドブフェ

ン（ファルミタリア・カルロエルバ，ミラノ，イ

タリア），オザグレル（キッセイ薬品，松本），お

よび，アスピリンとオザグレルの4種の薬剤で

37℃，30分間前処理した．但し，アスピリンとオ

ザグレルの併用効果の検討に際しては，各々単独

添加時に有意な凝集抑制をおこす閾値以下の濃度

3 100 藝 昼 ．墾 霧 § 昼 」 A 薬剤（一）  HUVEC （一） B薬剤（＋）HUVEC（＋） C薬斉1」（一）HUVEC（＋）

_{図3 Dil−Ac−LDLを取り込んだHuvEc}

  牛   一

         1min

  ADP

図2 薬剤前処理時のHUVECによる凝集抑制の減

     B−C

 少率（％）＝

        ×100

     A−C

（10−5Mあるいは10−6M）を用いた．その後，それ

ぞれをstirrerを用いて37℃，1，000回転／分，3分

間撹絆し，透光度凝集計（NKK Hematracer I，

二光バイオサイエンス）を用いて，終濃度1∼4μM

のADP（Sigma）刺激による血小板凝集能を測定

し，80％以上の二次凝集を惹起するADPの閾値

濃度を使用した．また，HUVECのみを前処理し

た場合にはそれぞれの薬剤で前処理後，薬剤溶解

液を除去しPBSで数回洗浄した後，未処理の

PRPを注入し，血小板凝集能を測定した．

HUVECは，二次凝集を完全に抑制する細胞数

15，000個以上を用い，同一条件下で評価をした．

薬剤で前処理した際のHUVECによる凝集抑制

の減少率の算定法を図2に示した．

 統計は，一次配置分散分析法を用いた．

         結  果

 キュベット内壁に付着した細胞は多角形で敷石

状の形態をとっていること，また，Dil−Ac−LDL

（acetylated low density lipoprotein labeled with 1，1’一dioctadecyl−1，3，3’，3’・tetramethyl−

indocarbocyanine perchiorate，フナコシ薬品，東

京）の血管内皮細胞への特異的な取り組みを利用

し12），ローダミンフィルターを用いて蛍光顕微鏡

で確認することにより血管内皮細胞の同定を行っ

た（図3）． 10（， § ．萎 ．塗 湧 § 量 』 〔｝ 3，750cens 7，500cclls 15，〔XX｝cells

   千   一

      lmin

   ADP2μM

図4 HUVECによる血小板凝集抑制作用

 細胞数0∼15，000個のHUVECを各々キュ

ベットに培養して血小板凝集能を測定すると，

HUVECは細胞密度依存性に血小板凝集を抑制

した（図4）．

 1．HUVEC非存在下の血小板凝集に及ぼす各

種薬剤の影響

 PRPのみを前処理した場合，アスピリンと4一

インドブフェンは用量依存性に血小板凝集を抑制

し，薬剤で前処理しなかった対照群に比較して

10−5M以上で有意であった．一方，オザグレルは

用量依存性に抑制する傾向があったが，有意な抑

制ではなかった（図5）．

 アスピリンとオザグレルの両者で前処理した場

 100 §：： 墨・・ 21       100        100 ムアスピリン       ロd一イ≧ドブフェン        Oオザグレル       ＊     80       ＊     80

        レll： f｛lll

       晶      薫

     ⊥  駕．｛⊥  碧  

 Ir7 10−6 10−5 10−4     10−7 10−6 10−5 エ0−4     10一7 10 6 10−5 10−4      濃度（M／L）      濃度（M／L）       濃度（M／L）   図5 アスピリン，6・イソドブフェソ，オザグレルのADP刺激による血小板凝集能の抑制率    平均値±SI），＊p＜0．05：一元配置分散分析．        表1 アスピリン，オザグレル単独あるいは併用による血小板凝集能に及ぼ         す影響 薬剤 闘値濃度 抑制率（％）    アスピリン @  オザグレル Aスピリン十オザグレル    1または10μM

@  1または10μM

Pまたは10μM十1または10μM

慧コ］・

      ＊p＜0．05，全ての値は平均値±SD．

合，血小板凝集能は各々の単独処理の場合に比較    2．HUVECの血小板凝集抑制に及ぼす各種座

し，抑制効果の有意な増強がみられた（表1）．   剤の影響

       HUVECのみを前処理した場合， HUVECによ

    ムアスピリン      ロd一インドブフェン         ○オザグレル              10−710−6 10−5 10−4      10−7 10−6 10−5 10−5      10−7 10−6 iO−5 10−4         濃度（M／L）       濃度（M／L）．      濃度（M／L）

     図6 HUVECによる血小板凝集抑制効果に対するアスピリン，4・イソドブフェソ，オザグレルの

      影響

      平均値±SD，“p＜0．05：一元配置分散分析．

      表2 アスピリン，オザグレル単独または両剤でHUVECのみを前処理した

       際の血小板凝集に及ぼす影響 薬剤 闘値濃度 抑制率（％）    アスピリン @  オザグレル Aスピリン十オザグレル    1または10μM

@  1または10μM

Pまたは10μM十1または10μM

羅iコ「・

零p＜0．05，全ての値は平均値±SD．

一186一

5

表3 アスピリン，4一インドブフェンおよびオザグレルでPRPとHUVEC

 の両者を前処理した際の血小板凝集抑制率（対照を0％とする） アスピリン 4一インドブフェン オザグレル 濃度

ﾊM

％

N

％

N

％

N

0．1 P10100 一19．9±17．9 @24．5±27．2＊ 黷S．9±12．3 ￨0．4±7．7 5455 一87，9±10．8＊ 黷P7．2±26．4 @6．9±17．1 @3．3±23．7 4465 一5．2±8．1 ￨10．2±22．1 @1．5±11，6 ￨1，7±5．5 6666 ＊p＜0．05vs control，全ての値は平均値±SD．

る血小板凝集抑制はアスピリンと4一インドブ

フェンを加えることにより用量依存性に減弱し，

薬剤で前処理しなかった対照群に比較してアスピ

リンでは1『6M以上，4一インドブフェンでは10−7

M以上で有意な減弱が示された，オザグレルの場

合は，10−5Mでむしろ抑制の増強傾向があった

が，有意ではなかった（図6）．

 また，アスピリンとオザグレルの両薬剤で前処

理した場合には，アスピリンのみでHUVECを前

処理した場合より凝集抑制の減弱効果は有意に少

なかった（表2）．

 3．血小板とHUVECの両者に及ぼす各種薬

剤の影響

 PRPとHUVECの両者を前処理した場合，薬

剤で前処理しなかった対照群に比較して，アスピ

リンは10−6Mで有意な凝集抑制を認めたが，4一イ

ンドブフェンは10−7Mでむしろ凝集を有意に促

進した．また，オザグレルでは有意な変化は認め

なかった（表3）．

         考  察

 COX阻害薬であるアスピリンでは脳梗塞や一

過性脳虚血発作の再発予防に現在広く使用されて

いるが，高濃度の場合，血小板のCOXを阻害して

血小板凝集を促進するTXA2の合成を抑制する

のみならず，血管内皮細胞のCOXをも阻害し，血

小板凝集を抑制するPGI2の産生をも抑制する，い

わゆるアスピリンジレンマが問題となるが，アス

ピリンジレンマを惹起しない閾値用量に関しては

いまだ統一見解が得られていない．本研究では，

in vitroでアスピリンジレンマについて検討する

ために，HUVECとPRPを各濃度のアスピリン

でそれぞれ前処理し，ADP刺激による血小板凝集

能を測定した．その結果，in vitroでは血小板と血

管内皮細胞の両者ともCOX阻害は用量依存性に

起こりうることが確認された．

 今回の検討では，HUVEC存在下ではアスピリ

ン10一5Mで有意な凝集抑制が認められたが，これ

は，低濃度では血管内皮細胞のCOX阻害による

PGI2産生抑制の程度が比較的少ないので，血小板

のCOX阻害によるTXA2産生抑制と血管内皮細

胞から産生されるPGI2の協同的な抑制効果が

あったためと考えた．近年，内山ら13）の報告も含め

て100mg／日以下の低用量でTXA2代謝物の減少

を認め，PGI2の代謝物にはほとんど影響を与えな

かったとの報告14）∼17）や，アスピリンの低用量と高

用量の比較では脳梗塞の発生頻度，再発予防効果

に有意差を認めなかったとの報告が多くみら

れ18）∼20），最近では100mg／日以下の微量投与が推

奨されている2）13）21）∼23）．アスピリン50∼100mgを

経口投与した場合の最高血中濃：度は7．8×10−6

∼4．4×10−5M程度であるといわれているが，

300∼1，000mg／日の高用量の場合，血中濃：度が，

10−4M以上になる可能性があり24），今回の実験結

果からはこの条件下では血管内皮細胞のPGI2産

生が有意に抑制されてしまうことが考えられた．

 COX阻害薬であるインドブフェン（41一インド

ブフェン）はイタリアでは1985年より動脈血栓症

の予防薬として広く用いられている．近年，その

抗血小板作用発現の本体が4一イソドブフェンで

あることが明らかにされ，1・インドブフェンを除

くことによって有効性，安全性が高まることが期

待されている．本実験系で4一インドブフェンは，

HUVEC存在下では，10−7Mでむしろ血小板凝集

を促進したが，これは，この濃度では血小板凝集

一187一

抑制効果が充分でないのに，HUVECによる凝集

抑制効果を減弱してしまうためと考えられた．臨

床的に25∼100mgを1回のみ投与した時の最高

血中濃度は服薬後2∼4時間で1．5∼4。3×10−5M

に達し，濃度依存性に血小板凝集，血清TXA2産

生に抑制作用を示すとされている25）．今回の実験

ではHUVEC存在下では10−5M，10−4Mで凝集抑

制傾向があったが，対照群に比し有意ではなかっ

た．図6に示したように，4・インドブフェンはア

スピリンよりも低濃度でHUVECの血小板凝集

抑制効果を抑制する傾向があったが，用量依存的

な抑制の増強はなかったので，内皮の存在する生

体内で血小板凝集を確実に抑制するためには血小

板のTXA2産生を有意に抑制し得る量を投与す

る必要があると思われる．

 アスピリンジレンマの解決策として，選択的に

TXA2産生のみを阻害するTXA2合成酵素阻害薬

の臨床応用が期待されている．TXA2合成酵素阻

害薬のうちオザグレルが最近脳血栓症急性期の治

療薬として使用されるようになった10）11）26）∼34）．し

かし，一方ではこの薬剤によってTXA2依存性の

血小板凝集が抑制されないnon−responderの存

在が知られており，その機i序として，TXA2合成酵

素阻害薬によって蓄積したprostaglandin（PG）

endoperoxideが血小板のTXA2／PGH2受容体に

作用して血小板凝集を引き起こしてしまうのに対

して，血小板凝集抑制作用のあるPGD2， PGI2へ

の変換が充分に行われないためと考えられてい

る35）36）．今回の実験系ではPRPのみをオザグレル

で前処理した場合は有意な抑制効果が得られな

かったが，’その原因としては，前述したnon・

responderの検体であった可能性と，本実験では

内皮細胞への傷害を考慮し凝集惹起剤としてアラ

キドン酸ではなく，TXA2依存性が低いADPを

用いたことが考えられる37）．HUVECのみをオザ

グレルで前処理した場合は，HUVECによる血小

板凝集抑制作用に及ぼす影響はなく，この薬剤は

少なくともPGI2産生を抑制していないと考えら

れる．さらに，TXA，合成酵素阻害薬によって蓄積

したPG endoperoxideが血管内皮細胞や白血球

に取り込まれてPGI2へと変換され（いわゆる

redirection），このPGI2が血小板凝集抑制に重要

な役割を果たしていることが以前より報告されて

おり38）∼50），臨床的にもTXA2合成酵素阻害薬投与

後，TXA2と， PGI2の代謝物を測定すると，TXA2

の代謝物に対しては用量依存的に抑制し，PGI2の

代謝物は増加したとの報告がある51）．本実二二で

もPRPとHUVECの二心をオザグレルで前処

理することによって凝集抑制の増強効果を期待し

たが，結果は有意ではなかった．この原因として，

前述したように凝集惹起剤としてADPを使用し

たため血小板での十分なPG endoperoxideの産

生がなされな：かったためredirection効果が十分

に発揮されなかったか，蓄積したPG endoperox−

ideが内皮細胞に取り込まれる前にTXA2／PGH2

受容体に使用した可能性などが考えられる．また，

一方でnon−responderをresponderに変えるた

めに超低用量のアスピリンを併用することによっ

てPG endoperoxideの蓄積を阻害する方法が検

討されている52）53）．今回の実験系では，PRPのみ

をオザグレルとアスピリンの両者で前処理した場

合，各々の単独投与に比較して有意な凝集抑制増

強効果を認めているが，これは両者の協同的な

TXA2産生阻害（いわゆるTXA2のoverkill）によ

るものと考えた．また，HUVECのみを両薬剤で

前処理した場合にはアスピリンで前処理した場合

よりHUVECによる凝集抑制の減弱効果は有意

に低かった．この場合，用いたPRP中にはオザグ

レルは存在しないため，PG endoperoxideの

redirectionは起こらずPGI2産生増加は生じ得な

いので原因は不明といわざるをえない．しかし，

この薬剤にはCa2＋の流入抑制など内皮に対する

何らかの保護作用を有する可能性があり，今後の

検討が必要と考えられた．

 PRPとHUVECの両者を前処理した場合はア

スピリンとオザグレルの併用による凝集抑制増強

効果は認められなかった．本実験で使用したアス

ピリンの濃度は単独投与した時に血小板凝集能を

20％以上抑制しない閾値濃度（10−6Mあるいは

10−5M）を使用したが，この濃度でも，内皮由来の

PGI2産生は有意に抑制されてしまうため内皮に

よる凝集抑制効果が減弱してしまい期待通りの七

一188一

7

果が得られなかった可能性がある．Nagatsuka

ら53）はアラキドン酸とコラーゲンの刺激による血

小板凝集能に対するアスピリン0．1∼025mg／

kg／日とオザグレル1001ng／日の併用効果の検討

を行っているが，このような微量のアスピリンの

併用でさえ単独投与に比し血小板凝集能は有意に

抑制されたという．以前よりアスピリンのCOX

阻害は内皮細胞よりも血小板の方が感受性が高い

といわれており，本実験においても今後さらに低

用量のアスピリンとの併用効果を検討する必要が

あると思われた54）．

 本研究では，従来利用されてきた血小板凝集能

測定法に血管内皮細胞の因子を加えた実験系を考

案し，抗血小板薬の評価を行った．従来の方法で

は血小板のみに対する抗血小板薬の評価しかでき

ず，内皮が存在する生体内での抗血小板薬の効果

を反映しているとはいえなかった．また，血管内

皮細胞に対する抗血小板薬の評価を血小板凝集能

を使用して行った報告も少ない．しかし，一方で

は血管内皮細胞は生体内では血小板凝集に多大な

影響を及ぼすことが知られている．従って，in

vitroでのPRPに対する抗血小板薬の効果が生

体内の抗血小板効果をどれだけ反映しているかは

疑問が多い．本研究ではキュベットに内皮細胞104

∼105個を播種し数日間培養したが，この場合，

キュベットの内壁の約50％に細胞が付着してお

り，この細胞数で十分な」血小板凝集抑制効果が得

られた．正常な血管壁の条件に近づけるためには，

キュベットの全壁面に内皮細胞が付着するまで培

養すべきであるが，そのためには，1週間以上の

日数を要し，この間，培養液の交換を頻回に行う

必要があり，培養液吸引時の物理的な細胞への影

響，コンタミネーションなどを考えると，この細

胞数で行うことが妥当と考えた．血管内皮細胞の

有無によって血小板凝集能の結果に相違が生じる

ことは前述した実験結果の通りであり，従来の方

法より生体内の条件に近い本測定系は抗血小板薬

の評価に極めて有用と考えられた．

         結  語

 1）HUVEC存在下で血小板凝集能を測定する

系においてアスピリン，4一インドブフェンおよび

一189

オザグレルの各々が，ADP刺激による血小板凝集

に及ぼすin vitroでの影響を検討した．

 2）血小板凝集能はHUVEC非存在下でアスピ

リンと4一インドブフェンによって用量依存性に

抑制された．

 3）HUVECによる1血小板凝集抑制効果はアス

ピリンとゴーインドブフェンにより用量依存性に

減弱した．また，アスピリンとオザグレルの併用

によりHUVECによる血小板凝集抑制の減弱効

果は有意に低下した．

 4）HUVEC存在下ではアスピリンは10 6Mで

有意に血小板凝集を抑制したが，4一インドブフェ

ンは10−7Mで血小板凝集をむしろ促進した．

 5）HUVEC非存在下ではアスピリンとオザグ

レルの併用によりADP凝集の抑制増強効果が認

められた．

 6）従来の方法よりも生体内の条件により近い

と思われるHUVEC存在下での血小板凝集能の

測定は抗血小板薬の評価に極めて有用と考え．られ

た．

 稿を終えるに当たり，御校閲を賜りました：丸山勝一

教授，御助言を頂いた竹宮敏子教授．直接御指導頂い

た内山真一郎講師に深謝致します．また，膀帯を提供

して頂いた母子総合医療センターの中林正雄教授を

はじめとするスタッフの方々，HUVECの培養法につ

き御助言頂いたエーザイ筑波研究所の新井 徹氏，大

塚製薬徳島研究所の井川武洋氏，オザグレルを提供し

て頂いたキッセイ薬品，4一インドブフェンを提供をし

て頂いたファルミタリア・カルロエルバ社に深謝致し

ます．

 本論文の要旨は第18回日本脳：卒中学会総会（1993

年）において報告した．

         文  献

 1）FitzGerald GA， Oates JA， Hawiger J et al：   Endogenous biosynthesis of prostacyclin and

  thromboxane and platelet function during

  chronic administration of aspirin in man． J CIin   Invest 71：676−688， 1983  2）田上憲次郎：抗血栓療法の最近の話題．アスピリ   ンとその問題点．カレントテラピー 9：828−831，

  1991

 3）Kelton JG， Hirsh J， Carter C：Throm一

   bogenic 6ffect of highdose aspirin in rabbits． J    Clin Invest 62：892−895， 1978

4）Marcus AJ：Aspirin and thromboembolism

   −Apossible dilemma． N Engl J Med 297：    1284−1285， 1977 5）Hormes JT， Anstin JH， James G et aL    Toward an optima1“antiplatelet”dose of aspi−    rin：Preliminary observations． J Stroke Cere−    brovasc Dis 1：27−35，1991 6）Dyken］ML， Bamett HJM， Easton JD et al：    Low−dose aspirin and stroke“．lt ain’t necessar−    ily so”． Stroke 23：1395−1399， 1992 7）Igawa T， Tani T， Chijiwa T et al： Potentia−    tion of anti・platelet aggregating activity of    cilostazol with vascular endothelial cells．    Thromb Res 57：617−623，1990

8）Mamiya S， Hagiwara M， IsMkawa T：

   Specific inhiやition of 40K protein phosphoryla−    tion in platelet by a new antith士ombotic agent，    d・lndobufen． Thromb．Res 54：447−456，1989

9）Sumi M， Hagiwara M， Hidaka H：d・

   Indobufen ． inhibits collagen−induced intracel・    1ular calcium mobilization and inositol phos・    phates formation in human platelets． Thromb    Res 59：319−326，1990 10）Fredriksson K， Rosen I， Johansson BB et a1：    Cerebral platelet thromboembolism and throm−    boxane synthetase inhibition． Stroke 16：    800−805， 1985 11）Fisher M， Weiner B， Ockene IS et al：Selec−    tlve thromboxane inhibition：Anew approach    to antiplatelet therapy． Stroke 15：813−816，    1984 12）Voyta JC， Via DP， Butterfield CE et al：    Identi丘cation and isolation of endothelial cells    based on their increased uptake of acetylated−    low density lipoprotein． J Cell Biol 99：    2034−2040， 1984 13．）Uchiyama S， Sone R， Nagayama T et al：    Combination． therapy with low−dose aspirin and    tidopidine in cerebral ischemia． Stroke 2．0：    1643−1647， 1989 14）FitzGerald GA， Oates JA： Selective and non一    ．selective inhibition of thromboxane formation．    Clin Pha㎜acol Ther 35：633−640，1984 15）Pa‡rignani P， Filabozzi P， Patrono C；    Selective cumulative inhibition of platelet    thromboxane production by low−dose aspirin．in    healthy subjects， J Clin Invest 69：1366−1372，    1982 16）内山真一郎：抗血小板薬一周後の展望．現代医療    25：113−119， 1993 17）「rohgi H， Kolmo S， Tamura K et al： Effect of    low・to・high doses of aspirin on platelet ag−    gregability and metabolites of thromboxane A2    and prostacyclin． Stroke 23：1400−1403， 1992 18）Steering Committee．of the PLysicians Health    Study・Researc迦Group：Preliminary report：    Findings from the aspirin component of on−    going physicians health study． N Engl J Med    318：262−264， 1988 19）1）eto R， Gray R， Collins R et al： Rando血ized    trial of prophylactic daily aspirin in British    male doctors． Br Med J 296：313−316，1988． 20）The Dutcb TIA Trial Study Group：Acom−    parison of two doses of aspirin（30mg vs 286mg    aday）圭n patients after a．transient ischemic    attack or minor stroke． N Engl J Med 325：    1261−1266， 1991

21）Patrom．C：Aspirin and human platelets

   from clinical trials to acetylation of．cyclooxy・    genase and back． Trends Phar卑acol Sci 10：    453−458， 1989 22）Harter HR， Burcb JW．， Majerus PW et al：    Prevention of thrombosis．in patients on    hemodialysis by low−dose aspirin． N Engl J    Med 301：577−579，1979． 23）小西 修，植村公美英，橋本和久ほか：血栓症予    防に対する低用量アスピリン．療法一ADP二濃度    血小板凝集能検査による検討一．JJpn Soc Hosp    Pha㎜26：871−875，1990 24）JaEe EA， Weklsler BB＝Recovery of endoth一    ・el三al cell prostabyclin production after inhibi・    tion by low doses of aspirin． J CIin Invest 63：    532−535， 1979 25）山崎昌子，内山真一郎，丸山勝一：虚血性脳血管    障害におけるd一イソドブフェン（INB）の抗血小    板作用．第18回脳卒中学会総会抄録集：89，！993 26）市川 潔，斎藤 浩，浜野修一郎：脳虚血一再開    通障害に対する選択的トロンボキサン合成酵素阻    害剤OKY・046・Naの効果．基礎と臨床 25：    193−200， 1991 27）石川敏．三，前川剛志，坂．部武史：実験的脳虚血に    及ぼすTXA2合成酵素阻害剤OKY−046の影響．    基礎と臨床 25；20｝211，1991 28）佐渡島省三，石束隆男，藤井健一郎：実験的脳虚    血に及ぼすトロソボキサン合成阻害剤（OKY−    046）の効果一環血流と脳組織代謝一．脳卒中    11 ：373−380， 1989 29）大友英一，沓沢尚之，小暮久也：脳血栓症急性期    におけるOKY・046り臨床的有用性一フ．ラセボを    対照とした多施設二重盲検試験一．臨床医薬 7：    353−388， 1991 30）越前谷幸平，佐藤正治：脳血栓症急性期患者に対

一190一

9     するトロンボキサン．合成阻害剤OKY−046の臨床     的検討．診療と新薬 28：163−169，．1991 31）神谷武正，打田昌夫，岩瀬 環：OKY−046の使用    経験．現代医療 23：1043−1046，1991 32）安井敏裕，矢倉久嗣，小宮山雅樹：脳血栓症急性

   期に対するOKY−046の臨床評価．新薬と臨床

   40：336−343， 1991 33）安永暁生，森 和夫，馬場啓至ほか：脳血栓症急    性期におけるトロンボキサン合成阻害剤オザグレ     ルナトリウム（OKY・046・Na）の有用性の検討．    基礎と臨床 25：319−328，1991 34）三森研自，磯部正則，中川端午ほか：急性期虚血    性脳血管障害患老におけるトロンボキサン合成酵    素阻害剤．OKY−046の脳血流に及ぼす影響につい    て．薬理と治療 19：399−408，1991 35）内山真一郎，村上博彦，會根玲子ほか：血栓・止    血におけるthromboxane A2の役割一thrombo−    xane A2受容体阻害剤の抗血小板・抗血栓作用一．    血液と脈管 18：414−420，1987 36）Hepstimotall S， Bients N， Cockbill RS：    DifFerent effects of thromboxane synthetase    inhibitors on platelets frorn different individu・    als． Lancet藍：1156， エ982 37）Naito HJ， Komatsu H， Ujiie． A：Effects of    thromboxane synthetase inhibitors on aggrega・    tion of platelets， Eur J Pharmaco191：41−48，    1983． 38）Dale J＝ The efピect of a thromboxane    synthetase inhibitor， daz．oxiben， and acetyl−    salicyclic acid on platelet functin and prosta−    glandin metabolism． Thromb Haemostas 50：    703， 1984 39）Patrignani P， Filabozzi P， Catella F et al：    Differential effects of dazoxiben， a selective    thromboxane−synthetase inhibitor， on platelet    and renal prostagrapdin−endoperoxide metabo・    lism． J Pharmacol Exp Ther 228：472，1984 40）Patrono C：Acomparison．of lowdos6 aspirin    and dazoxiben as selective inhibitors of throm−    boxane（TX）A2 prostaglandin in man． Acta    Pharmacol Toxico153：37，1983 41）FitzGerand GA： Endogenous かrostacyclin    bibsynthesis and platelet function dur三ng se垂ec−    tive inhibition of thromboxane synthetase in    man． J CIin Invest 71：．1336，1983 42）MacNab MW：The e仔ects of a new throm・    boxane synt｝1etase inhibitor， CGS−1308D， in    man． J CIin Pharmaco124：76，1984 43）Gresele P， Deckmyn H， Nenci GG et al：    Thromboxane synthesis inhibitors， thrombo−    xane receptor antagonists and dual blockers jn    thrombotic disorders， Trends Pharmacol Sci    12：158−163， 1991 44）Fisher M， Weiner B， Ockene IS：Selective    thromboxane inhibition：Anew approach to    antiplate茎et therapy． Stroke 15：813−816， 1984

45）Defreyn G， Deekmyn H， Vermylen J：A

   thromboxane synthetase inhibitor reorients    endoperoxide metabolism in whole blood    towards prostacyclin and prostag豆andin．E2．    Thromb Res 26：389−400，1982 46）Parry MJ， Randal韮MJ，Ty監er HM：Selective    inhibition of thromboxane synthetase by    dazoxiben increased prostacyclin production    by leucocytes in angina patients and healthy    volunteers． Lancet ii：164−167， 1982 47）Maguire EJ， Wallis RB：In vivo redirection    of prostaglandin endoperoxide into 6−keto−    PGF1αformation by thromboxane synthetase    inhibition in the rat． Thromb Res 32：15−27，    1983 48）Randall MJ， P．arry MJ， Hawkeswood E：    UK−37，248， a novel， selective thromboxane    synthetase inhibitor with platelet antiag・       ゆ       act1Vlty．    gregatory  and  antithrombotic    Thromb Res 23：145−162，1981 49）Busb LR， Campbe韮l WB， Bnja正M：    selective thromboxane synthetase Effects of inhibitor    dazoxiben on variations in cyclic blood fiow in    stenosed canine coronary arteries， Circulation    69：1161−1170， 1984 50）Marcus AJ， Weksler BB， Ja鉦e EA：Synthe−    sis of 韮）rostacyclin from platelet−derived en・    doperoxides by cultured human endQthelial    cells． J CIin Invest 66：979−986， 1980 51）Dale J， Tkaulow E， Myhre E et al： The    e鉦ect of a thromboxane synthetase inhibitor，    dazoxiben， and．acetylsalicylic acid on platelet    function and prostaglandin metabolism．    Thromb Haemostas 50：703−706，1983 52）Bertele V， Fa】anga A， Tomasiak M et a1：    Platelet thromboxane synthetase inhibitiors    with low doses of aspirin：Possible resolution    of the“aspirin dilemma，’． Science 220：    5ユ7−5ユ9， ユ983 53）Nagatsuka K， Uyama O， Nakabayashi S et

   al：A new approach to antithrombotic

   therapy・evaluation of cornbined therapy of    thromboxane synthetase i曲ibitor and very low    dose of aspirin． Stroke 16：806−809， 1985 54）Kaplan S， Sauvage LR， Marcoe KF eもal＝ A    new combination therapy for select三ve and    prolonged antiplatelet effect：Results in the    ．do9． Stroke 17：450−454， 1986

一191一