かん水養殖に関する指導研究事業
朝井隆元・山本義博
事業の目的
海面魚類養殖業の持続的生産の確保に寄与するた め、飼料、魚病、漁場環境、経営等の問題点を抽出 して技術開発試験等を行い、得られた結果を新技術 として普及し、本業界の安定的な発展と経営の合理 化を促進する。本年度は、以下の 5 項目について試 験・検討した。 １．イシガキダイにおけるイリドウイルス不活化ワ クチンの有効性 大分県におけるイシガキダイの養殖は、以前から 養殖現場で試みられてきたが、マダイイリドウイル ス病 1）が頻繁に発生し、生残率も 割以下となるた 1 め生産が困難となっている。一方、近年イリドウイ ルス不活化ワクチン 2）が開発され、マダイ、ブリお よびシマアジにおいて、その防除に効果を挙げてお り、イシガキダイについても室内において、ワクチ ン接種10日後の攻撃試験で有効性が確認されている 。しかし、野外試験では必ずしも効果は得られてい 3） ない。そこで、室内試験と野外試験の双方からワク チンの効果について検討を行った。併せて、アユの 冷水病において効果が認められているワクチンへの オイルアジュバント添加 4）の有効性について検討を 行った。 ２．高水温期のマサバ当歳魚の飼育成績に及ぼす飼 料のカロリー・タンパク質比の影響 大分県におけるマサバ養殖は、以前から天然種苗 を用いて短期間飼育する方法で行われてきたが、種 苗として天然魚を用いた場合、ゴマサバの混入 5）や アニサキスの寄生 6）の可能性があるため、人工種苗 の養成技術の確立が求められている。 昨年度、本事業において人工種苗の適正飼料を把 握する目的で配合飼料と生餌を用い飼育を行った結 果、成長や生残率に差がみられたが、その原因の１ C/P つとして飼料のカロリー・タンパク質比（以下 比） の違いが考えられた。そこで、高水温期にお7） けるマサバ当歳魚の飼料の適正 C/P 比について検討 を行った。 ３．ヒラメのエクストルーダー飼料の実用性 養殖業において配合飼料化を進めることは、飼料 中の成分を把握できることによって効率的な生産が 可能であることや、環境負荷の低減を図れるなど様 々なメリットがある。1990 年代初頭に開発された海 産魚用完全配合飼料のエクストルーダー飼料（以下 ） は、生餌主体の給餌から配合飼料化への転換 EP 8） に最も期待される飼料と考えられている。しかし、 大分県のヒラメ生産現場においては、従来から用い てきた生餌やモイストペレットと比較して、EPを用 、 、 いた場合 成長や飼料効率が劣るという意見もあり 種苗導入直後は EP 主体の給餌が行われるものの、 出荷まで EP を給餌する生産者はほとんどいない。 そこで、ヒラメに EP および生餌を給餌し、両者の 飼育成績を比較することで、ヒラメ用 EP の実用性 について検討を行った。 ４．養魚用飼餌料の分析・指導 養殖業者からの依頼に応じて、飼料の一般成分や 鮮度に関する分析を行い、その結果を基に飼料の適 正な使用方法について指導した。 ５．養魚情報の発行 養殖技術の改善・普及を目的として、当事業にお ける研究成果の紹介、最新トピックスや基礎的知見 の解説等の記事を掲載した養魚情報紙を発行した。事業の方法
１．イシガキダイにおけるイリドウイルス不活化ワ クチンの有効性 ）室内試験 1 試験区として、アジュバント添加ワクチン接種区 （VA 区 、ワクチン接種区（） V 区 、アジュバント） 対照液接種区（A 区）および対照液接種区（C 区） を設定した。アジュバント添加ワクチンは、不活化 したウイルスを市販の 4倍量含むワクチンに 3倍量 のオイルアジュバント ISA763A を 混合して作成し た。ワクチンは市販と同様のものを用いた。アジュ Basal Meduim バント対照液は、牛胎児血清を含む（ ）を用いて培養した 細胞 の上清 Eagle BME GF 9, 10） に3倍量のISA763Aを混合して作成した。対照液に はGF細胞培養上清を用いた。 平均体重18gの供試魚を各区80尾ずつ用いて、ワ 。 クチンおよび対照液を腹腔内に0.1mlずつ接種した 試験区設定の 2週間後および5週間後に、103.4 およ び 10 TCID /0.1ml/fish3.6 で 各区 25 尾の腹腔内に攻撃 50 し、水温25℃の条件下で2週間の観察を行った。 ）野外試験 2 3 3 2.5m 3 当センター地先の海面小割生簀（ × × ） 面を用い、上記のアジュバント添加ワクチン接種区 (va 区)、ワクチン接種区（v 区）および無処理の対 照区（ 区）を設定した。平成c 15年6月10日に、 平均体重15gの供試魚を各区90尾ずつ収容した。飼 EP 1 1 料として市販のブリ用 を用い、原則として 日 6 / 11 19 回、 日 週の頻度で飽食給餌した。飼育は 月 20.3 25.2 日に終了した なお 飼育期間中の水温は。 、 ∼ ℃で推移した。 ２．高水温期のマサバ当歳魚の飼育成績に及ぼす飼 料のカロリー・タンパク質比の影響 試験用飼料として、脂肪含量の少ない市販のアジ 0% 3% 用配合飼料を用い 市販のタラ肝油を外割で、 、 および6%添加して、 ∼1 3区の飼料を作成した。供 試飼料の一般成分および C/P比は表1に示したとお りである。なお、一般成分の分析法および C/P 比の 算出法は既報11, 12）に準じた。 供試魚として当センター栽培漁業部で種苗生産さ れた人工種苗を用い、試験開始時までイカナゴのミ ンチを給餌して予備飼育した。平成15年7月24日 に当センターの海面小割生簀（ ×3 3× 2.5m）3 面 に、平均体重 33.4g の供試魚を各区 400 尾ずつ収容 した。給餌は原則として午前中に 1日1回、 日 週6 / の頻度で飽食給餌した。飼育は9月26日に終了し、 測定結果および総給餌量から、日間増重率、日間給 餌率および飼料効率を算出した。なお、飼育期間中 の水温は22.3∼25.2℃で推移した。 ３．ヒラメのエクストルーダー飼料の実用性 試験用飼料として、市販のヒラメ用 EP を用い、 （ ） 生餌には冷凍イカナゴ 総合ビタミン剤を0.5%添着 C/P 2 を用いた。供試飼料の一般成分および 比は表 に示したとおりである。なお、一般成分の分析法お よびC/P比の算出法は既報11, 12）に準じた。 供試魚として大分県漁業公社国東事業場で種苗生 産され、当センターで市販のヒラメ用 EP を用いて 予備飼育されたヒラメを用いた。2003年4月3日に （ 、 、 当センターの陸上円形水槽 半径0.95m 水深0.4m 1.0t 24 / 2 60 EP 水量約 、 回転 日） 基に 尾ずつ収容し、 EP 区および生餌区を設定した 設定時の平均体重は。 、 区が 250g、生餌区が 241g であった。給餌は原則と して6日 週の頻度で、 回 日、午前中に手撒きによ/ 1 / 。 。 り飽食するまで行った 飼育は７月9日まで行った 飼育期間の水温は、飼育開始時が 14.3℃で、その後 は序々に上昇し、飼育終了時には 21.7℃となった。 試験終了時に総魚体重を測定し、生残尾数から平 均体重を算出した。さらに、総魚体重の増重量、死 亡魚の総重量および総給餌量の乾物換算値から、日 間増重率、日間給餌率および飼料効率を算出した。 ４．養魚用飼餌料の分析・指導 生餌は一般成分（水分、粗タンパク質、粗脂肪、 粗灰分、炭水化物 、粗脂肪性状の指標） POV（過酸 化物価 、タンパク質性状の指標） VBN（揮発性塩基 窒素）等について分析した。配合飼料は一般成分等 について分析した。フィードオイルは脂質性状の指 標AV（酸価）とPOVについて分析した。その結果 を基に飼料の適正な使用方法について指導した。な VBN POV お 一般成分は既報、 11, 12）、 は微量拡散法13）、 はLea法、AVはマクロ法14）に準じて分析した。 表1. マサバの供試飼料 表2. ヒラメの供試飼料 供試飼料 一般成分 (%) 水分 8.7 75.9 粗タンパク質 55.2 13.4 粗脂肪 10.7 8.4 粗糖質 12.5 0.0 粗灰分 12.9 2.3 可消化エネルギー(kcal/kg) 3690.0 1275.0 C/P比 66.8 95.1 EP 生餌 飼料組成(%) 配合飼料 100 100 100 フィードオイル 0 3 6 一般成分(%) 水分 8.1 7.9 7.6 粗タンパク質 48.4 47.0 45.7 粗脂肪 9.1 11.7 14.2 粗糖質 21.4 20.8 20.2 粗灰分 10.6 10.3 10.0 可消化エネルギー(kcal/kg) 3505.2 3636.1 3759.6 C/P比 72.4 77.4 82.3 1区 2区 3区
事業の結果
１．イシガキダイにおけるイリドウイルス不活化ワ クチンの有効性 室内での感染試験の結果は図1, 2に示したとおり A C 2 である。 区および 区の死亡率は 試験区設定の、 5 100% 週間後および 週間後の攻撃試験において共に となったのに対し、V 区の死亡率は 2週間後の攻撃 4% 5 試験では となり有効性が認められた。しかし、 週間後の攻撃試験では、V 区の死亡率は 100%と な り有効性が認められなかった。したがって、過去の 野外試験でワクチン接種の有効性が認められないの は、その持続性に問題があるためであると考えられ た。一方、VA区の死亡率は、 週間後の攻撃試験で2 は100%、 週間後の攻撃試験では5 88%となり、ワク チンへのアジュバント添加の有効性は認められなか った。 また、今回の野外試験では、どの区にもマダイイ リドウイルス病は発病しなかった。 図1. ワクチン接種2週間後に攻撃したイシガキダ イの生残率 図2. ワクチン接種5週間後に攻撃したイシガキダ イの生残率 0 20 40 60 80 100 0 2 4 6 8 10 12 14 攻撃後日数 累積 死亡率 (% ) VA区 V区 A区 C区 0 20 40 60 80 100 0 2 4 6 8 10 12 14 攻撃後日数 累積 死亡率 (% ) VA区 V区 A区 C区 表3. マサバの飼育成績 ２．高水温期のマサバ当歳魚の飼育成績に及ぼす飼 料のカロリー・タンパク質比の影響 3 2 マサバの飼育成績は表 に示したとおりである。 1 3 区の成長、飼料効率および生残率が、 区および 区と比較してやや優れていた。このため、高水温期 におけるマサバ当歳魚の飼料の適正C/P比は77、も しくはその前後にあると推察された。 ３．ヒラメのエクストルーダー飼料の実用性 供試魚の摂餌は、飼育初期に生餌区で不活発であ ったが、次第に活発になり、飼育開始約20日後には 区と同様の摂餌状況となった。また、飼育期間中 EP の死亡魚は全て流水水槽から飛び出て死亡したもの である。 両区の飼育成績は表 4 に示したとおりである。飼 育終了時における供試魚の平均体重は、生餌区と比 較して EP 区の方が大きく、日間給餌率、日間増重 率とも EP 区が優れていた。ただし、飼育初期の生 餌区の摂餌が不活発であったため、このことが、生 餌区の成長が劣る原因となった可能性が高い。 一方、飼料効率は EP 区の方が劣っていた。供試 ） 飼料のC/P比はEPの方が低かったが、Kikuchiet al.15 は、タンパク質および脂質含量が異なる配合飼料を 用いてヒラメを飼育し、飼料へ脂肪添加は効果的で ないことを報告している。したがって、EPの飼料効 率が劣っていた原因として、EPの飼料組成よりも、 の消化性に問題がある可能性が考えられた。 EP ４．養魚用飼餌料の分析・指導 本年度は、表5に示したように生餌が14件、配合 飼料（EP飼料等）が3件、フィードオイル3件の分 析依頼があり、述べ 105 項目の分析を行った。その 中には鮮度低下したものがいくつか含まれており、 その結果をもとに飼餌料の適正な使用方法について 指導した。 平均体重 開始時 (g) 33.4 33.4 33.4 終了時 (g) 60.9 63.1 60.5 日間増重率 (%/日) 0.85 0.92 0.86 日間給餌率* (%/日) 1.99 2.00 2.14 飼料効率* (%) 42.7 46.1 40.1 生残率 (%) 91.0 95.5 94.5 ＊給餌量を乾物換算して算出 1区 2区 3区表4. ヒラメの飼育成績 表5. 養魚用飼餌料の依頼分析 ５．養魚情報の発行 育成技術、飼餌料、魚病、ワクチン、赤潮等に関 する研究成果の紹介、最新のトピックスや基礎的知 見の解説等の記事を掲載した養魚情報紙を 5 回発行 した。
今後の問題点
イシガキダイについては、イリドウイルス不活化 ワクチンの有効性について検討したが、その効果の 持続性に問題があると考えられた。したがって、養 殖現場でのマダイイリドウイルス病によるイシガキ ダイの被害をワクチンによって防除するためには、 ワクチンの多回接種および他のアジュバントを用い ることでワクチンの効果の持続性が向上するかどう か検討すべきと思われる。なお、今回の野外試験で はマダイイリドウイルス病の発病がみられなかった が、この原因は低密度で飼育したことにあるのかも しれない。また、養殖現場ではイシガキダイをブリ などと混養すると、マダイイリドウイルス病によっ て死亡しにくいという意見がある。さらに、イシダ イでは飼料へのアオサ粉末添加の有効性が報告 16）さ れていることから、飼育技術の改良についても検討 すべきかもしれない。 マサバについては、当歳魚を用いて高水温期の飼 料の適正 C/P 比について検討したが、その結果適正 平均体重 開始時 (g) 251 240 終了時 (g) 483 424 日間増重率 (%/日) 0.63 0.56 日間給餌率* (%/日) 0.58 0.41 飼料効率* (%) 108 135 生残率 (%) 93.3 95.0 ＊給餌量を乾物換算して算出 EP区 生餌区 生餌 13 79 一般成分, VBN, POV等 配合飼料 4 20 一般成分, AV, POV等 フィードオイル 3 6 AV, POV 計 20 105 依頼件数 分析項目数 分析内容 、 。 C/P比は77 もしくはその前後にあると推察された しかし、本事業で昨年度実施したマサバの飼育成績 と比較すると、どの区も飼料効率はやや悪く、飽食 給餌（給餌量）や給餌頻度に問題がある可能性があ る。また、C/P 比が低い（77 前後の）生餌を用いる ことで飼育成績を改善できる可能性もあるため、マ サバの飼料については、今後も検討が必要と思われ る。 ヒラメについては、EPの実用性について検討した が、その結果 EP の消化性に問題があると考えられ EP た。ブリ17）では水温の低下に伴い、生餌と比べて の消化性が悪化するとの報告があるため、ヒラメに おける EP 消化性の温度依存性についても今後検討 。 、 、 すべきと思われる また ヒラメ養殖業者の中には を用いない理由として、生餌主体の飼料と比較し EP て、増肉コストが高いことを挙げている生産者もい る。コストが高くなる要因としては、飼料効率の問 題の他に、ブリやマダイ用の EP と比較して、ヒラ メ用 EP の単価が高いことが挙げられる。これは、 一般的なヒラメ用 EP には魚粉含量が多いためであ ると思われるが、 Saitohet al.18）は、魚粉の一部につ いて大豆粕を代替として作成した EP を用いてヒラ メを飼育し、ヒラメ用 EP の魚粉含量を削減できる 可能性を示唆している。このため、ヒラメ養殖の給 餌スタイルが完全配合飼料化をめざすためには、今 回明らかにできなかった EP の成長面についての検 討のみならず、 EP の消化性や適正給餌方法の検討 を進めるとともに、増肉コストの評価を行う必要が ある。文献
1）井上 潔 山野恵祐 前野幸男 中島員洋 松岡 学, , , , , 和田有二, 反町 稔. 養殖マダイのイリドウイルス感 . 1992; 1 : 19-27. 染症 魚病研究 27( )2）Nakajima K, Maeno Y, Kurita J, Inui Y.Vaccination against red sea bream iridoviral disease in red sea bream.
1997; 4 : 205-209.
Fish Pathol. 32( )
3）Nakajima K, Ito T, Kurita J, Kawakami H, Itano T, Fukuda Y, Aoi Y, Tooriyama T, Manabe S.Effectiveness of a Vaccine against red sea bream iridoviral disease in various cultured marine fish under laborarory conditions.
2002; 2 : 90-91.
Fish Pathol. 37( )
4）Rahman M H, Ototake M, Iida Y, Yokomizo Y, Nakanishi T. Efficacy of oil-adjuvanted vaccine for
Plecoglossus altivelis Fish
coldwater disease in ayu . 2000; 4 : 199-203.
Pathol. 35( )
）石井光廣 清水利厚 房総沿岸に出現したサバ属
. 1991; : 13-16. 幼魚 千葉水試研報 49 6）長沢和也 魚介類に寄生する生物 成山堂 東京. . , . 2001: 171-173. ）竹田正彦 示野貞夫 細川秀毅 梶山秀俊 会所建 7 , , , , 志 ハマチの成長 飼料効率および体成分に及ぼす飼. , . 1975; 4 : 料のカロリー・蛋白質比の影響 日水誌 41( ) 443-447.
8 Watanabe T, Sakamoto H, Abiru M, and Yamashita J.） Development of a new type of dry pellet for yellowtail.
. 1991; 5 : 891-897.
Nippon Suisan Gakkaishi 57( )
9 Clem L W, Moewus L, Sigel M M. Studies with cells） from marine fish in tissue culture. Proc. Soc. Med. 1961;
: 762-766.
108
10）Nakajima K, Maeno Y, Kurita J, Inui Y. Vaccination against red sea bream iridoviral disease in red sea bream.
. 1997; 4 : 205-209. Fish Pathol 32( ) ）木本圭輔 佐藤公一 モイストペレット エクス 11 , . , トルーダー飼料および生餌を給餌したホシガレイの . 2003; : 1-8. 成長 大分海水研調研報 4 12）小原哲二郎 改訂食品分析ハンドブック 建帛社. . , 1982: 21-260. 東京 ）厚生省 衛生検査指針Ⅲ[Ⅰ]総論 協同医書出版 13 . , , 1959: 8-16. 社 東京 14）宮崎陽夫 藤野泰郎 脂質・酸化脂質分析法入門. . . , 2000: 52-62. 学会出版センター 東京
15）Kikuchi K, Sugita H, Watanabe T. Effect of dietary protein and lipid levels on growth and body composition of japanese flounder. Suisanzoshoku. 2000; 48( )3 : 537-543. 16）高木修作. イシダイの養殖技術について（上）. , . 1992; 11 : 109-113. 緑書房 東京 養殖 29( ) ）佐藤公一 低水温期のブリ当歳魚におけるエク 17 . ストルーダー処理固形配合飼料と生餌主体飼料の成 長 飼料効率および栄養素蓄積率 大分海水研調研報, . 2001; : 9-12.3
18）Saitoh S, Koshio S, Harada H, Watanabe K, Yoshida T, Teshima S, Ishikawa M. Utilization of extruded soybean meal for japanese flounder Paralichyhys olivaceus juveniles.Fish. Sci. 2003;69( )5 : 1075-1077.
詳細な研究内容は平成 年度養殖漁場環境保全推進委託事業報告書に報告した。 * 15 *
養殖漁場環境保全推進委託事業
（国庫委託）
山本義博・徳光俊二・朝井隆元
事業の目的
海面養殖漁業の発展に伴い、養殖漁場の自家汚染 が進行しつつある。そこで、養殖魚から排泄される 窒素 Ｎ やリン Ｐ 量の低減を目的とした環境負荷( ) ( ) 低減型飼料の開発、および海藻の浄化力･生産力を 利用して漁場の回復を図り、継続的に漁場改善活動 を実践することができる漁場利用システムの実証試 験を行う。事業の概要
環境負荷低減型飼料開発 Ⅰ． １．ブリ用EPへのリン適正添加量の解明 魚粉主体および代替タンパク添加EP飼料に をP 添加してブリ当歳魚の飼育試験を行い、飼育成績に 及ぼす 添加量の影響を検討した。その結果、代替P タンパク区の成長は魚粉主体区より劣り、代替タン パク区間では成長・飼料効率ともに 添加の効果はP 認めらなかった。少なくとも設定した飼育期間内に おいては、代替タンパク添加のEP Pに 添加の必要 はないと推察された。消化試験でも、 添加によるP 差異は認められなかった。 吸収 量がブリの 要求を満たしているのか、追P P 試を重ねることや他機関の消化率等から総合的に 判断する必要がある。 ２．ブリ成魚におけるEPの適正給餌方法の解明 ブリ成魚に脂肪(CL)量の異なるEPを給餌頻度を 変えて給与し、それぞれの飼育成績を比較した。昇 温期では成長は 回 日以上の給餌頻度区が優れて1 /2 いたが、飼料効率では明確な差はでなかった。こ れは、 月上旬からの類結節症の発生による摂餌不7 調によるものと思われる。高温期では 回 日以上1 /2 の給餌頻度区が成長、飼料効率、タンパク質蓄積 率いずれも優れていた。降温期ではCL28%以上区、 給餌頻度では 回 日区が優れていた。1 /3 ３．低水温期における消化性の良いブリ用飼料の開 発 トルラ酵母の添加効果および至適添加量について 飼育試験および消化試験から検討した。その結果、 飼育 ｹ月目までは3 2.5%酵母添加区が無添加区と比 較してやや成績が優れている傾向がみられたが、終 了時には明確な差はなかった。消化試験でも明確な 差は現れなかったことから、酵母の添加効果はない と推察された。 複合養殖実証試験 Ⅱ． 大分県南部 湾をモデル漁場とし、ヒラメ養殖者N アワビ養殖施設 でモジャコ筏 海藻養殖施設 を有 ( ) ( ) する人 名をモデル漁家として以下のことを検討し5 た。 １．藻類養殖試験 不稔性アナアオサ養殖方法改良試験では、30分 間干出区の増重率が最も良く、干出によるアオサ の活力向上と付着生物の増殖抑制効果と推察され た。 ワカメ、ヒロメおよびコンブ養殖では、種糸の張 り込みが通常より ヶ月ほど遅れたが、生長は順調1 であった。 ２．アワビ養殖試験 月までの飼育成績は良好で、前年からの継続飼 5 育群を一部出荷した。しかし、 月以降にビブリオ6 病による死亡が発生し、飼育成績は劣悪なものとな 。 、 った ビブリオ病は水温20∼23℃をピークに発生し 春および秋の年 回発生すると考えられた。特に本2 年は冷夏であったため発生が長引き、大きな被害を 引き起こしたと推測された。アワビの健康管理手法の開発と飼育管理方法の改良について検討する必要 がある。 ３．メジナ養殖試験 区 と比 較 し てア オ サ 区の 成長 は明 らか に劣 MP 、 。 り アオサによるメジナ養殖は不可能と考えられた ４．複合養殖による窒素・リン収支 モデル漁場における1981年から2002年の水質環 境調査結果から、DIN PO -Pと 4 値の経年変化を一次 回帰分析により解析し、 ･ 回収の目標値を試算しN P た。また養殖した海藻およびアワビの成分分析値か 、 。 ら モデル漁場での複合養殖の実践規模を試算した その結果、当漁場で回収すべき 量はN 760kg/年と想 定され、アワビの 蓄積率からアワビ養殖量はN 58ｔ 必要と算出された。当漁場内でヒラメ陸上養殖者は 経営体程あるので、 経営体当たり 万個 年の養 40 1 2 / 殖量となる。この値は決して不可能な数値でないと 思われた。 一方 は、モデル漁場内では減少傾向にあると推P 察された。 今回の試算では、複合養殖の実践は漁場改善の現 実的な手法となり得ることが推測された。しかし、 あくまでも計算値であり、より具体的な ・ 収支N P について次年度以降の検討により明らかにしていく 必要がある。特に、回収すべき ・ の目標値は、N P 今回の試算では過去の環境測定の経年変化値から導 いたものであり、今後より正確な目標値を定める手 法についての検討が必要と思われた。
持続的養殖生産確保推進事業
(
)
海面防疫対策 養殖衛生管理体制整備事業
（国庫補助）
福田
穣・朝井隆元・徳光俊二・山本義博・佐藤公一・日高悦久・安部和智
事業の目的
食品の安全性に対する消費者の要求が高まってお り、特に養殖水産物に関しては、養殖現場で使用さ れている医薬品の使用状況や養魚用飼料の給餌状 、 、 。 況 養殖漁場環境について 関心が寄せられている 、 、 したがって 養殖生産物の安全性の確保の観点から 養殖現場の巡回指導、医薬品の適正使用の指導、医 薬品や養魚用飼料等の購入量や使用量の記録等につ いての、養殖生産者に対する指導、食品衛生や環境 保全にも対応した幅広い養殖衛生管理技術の普及、 養殖場の調査・監視、医薬品残留検査の実施、薬剤 。 、 耐性菌の実態調査等を行っていく必要がある また 持続的養殖生産確保法に基づく国内魚類防疫制度に おいて、従来から魚類防疫体制の整備に努めてきた が、日和見感染症の出現等、様々に態様が変化する 魚病に対応し、さらには消費者の視点に立った健全 で安全な養殖魚の生産のために、疾病監視対策等を 実施し、現場の養殖実態を把握して、疾病対策を効 率的かつ効果的に推進していく必要がある。 、 、 本事業は このような状況に適切に対処するため 養殖生産物の安全性を確保し、健全で安全な養殖魚 の生産に寄与するため、疾病対策のみならず食品衛 生や環境保全にも対応した養殖衛生管理体制の整備 を推進することを目的とする。事業の内容および結果
Ⅰ 総合推進対策 ( 1) １ 全国会議 表 ( 2) ２ 地域検討会 表 ( 3) ３ 県内会議 表 Ⅱ 養殖衛生管理指導 ( 4) １ 医薬品の適正使用の指導 表 ( 5) ２ 適正な養殖管理･ワクチン使用の指導 表 ３ 養殖衛生管理技術対策 1) 養殖衛生管理技術講習会 表( 6) Ⅲ 養殖場の調査･監視 ( 7) １ 養殖資機材の使用状況調査 表 ( 8) ２ 医薬品残留検査 表 ( 9) ３ 薬剤耐性菌の実態調査 表 Ⅳ 疾病対策 ( 10) １ 疾病監視対策 表 ( 11) ２ 疾病発生対策 表 表1 全国会議 実施時期 実施場所 構成員 内容 2003年 6月20日 東京都 農林水産省 薬事法等の一部改正にかかる指導の徹底について 都道府県養殖衛生管理担当者 11月7日 東京都 農林水産省 1. コイヘルペスウイルス病とその対応について (社)水産資源保護協会 2. その他養殖衛生管理体制整備に関すること 都道府県養殖衛生管理担当者 2004年 3月18日 東京都 〃 1. コイヘルペスウイルス病について 2. その他養殖衛生管理体制整備に関すること表2 地域検討会 表3 県内会議 表4 医薬品の適正使用の指導 実施時期 実施場所 構成員 内容 2003年 10月2∼3日 山口県 福岡県, 大分県, 山口県, 広島県, 1. 瀬戸内海・四国ブロック各県の魚病発生状況と対応 岡山県, 兵庫県, 大阪府, 和歌山県, 2. 魚病症状データベースの構築について 香川県, 愛媛県, 徳島県, 高知県 4. その他 10月23∼ 24日 長崎県 山口県, 福岡県, 佐賀県, 長崎県, 1. 九州・山口ブロック各県の魚病発生状況と対応 熊本県, 大分県, 宮崎県, 鹿児島県, 2. その他 沖縄県 2004年 3月1∼2日 大分県 大分県, 宮崎県, 熊本県, 鹿児島県, 1. 南中九州・西四国各県の魚病発生状況と対応 愛媛県, 高知県 2. 魚類養殖における防疫体制の問題点について 3. その他 3. 薬事法等の一部改正に伴う防疫対策の問題点の抽 出･整理 実施時期 実施場所 対象者（人数） 内容 2003年 5月28日 蒲江町 水産用医薬品の適正使用について 5月28日 蒲江町 〃 6月4日 蒲江町 〃 6月4日 蒲江町 〃 6月6日 津久見市 〃 6月25日 佐伯市 〃 6月26日 上浦町 水産用医薬品およびワクチンの適正使用について 上入津地区海産魚類養殖漁家およ び関係者(9名) 下入津地区海産魚類養殖漁家およ び関係者(43名) 名護屋地区海産魚類養殖漁家およ び関係者(10名) 海産魚類養殖関係漁業協同組合支 店, 関係市町村, 関係地方振興局(21 名) 蒲江地区海産魚類養殖漁家および 関係者(4名) 臼杵･津久見地区海産魚類養殖漁家 および関係者(8名) 海産魚類養殖漁家および関係者(79 名) 実施時期 実施場所 構成員 内容 2003年 9月9日 大分市 大分県漁業協同組合 (大分県魚類防疫会議) 大分県かん水養殖協議会 1. 平成14年度魚類防疫体制整備実績 大分県内水面漁業協同組合連合会 2. 平成15年度養殖衛生管理体制整備実施計画 大分県内水面養殖漁業協同組合 3. その他防疫推進上必要な事項の審議 大分県漁政課 大分県水産振興課 大分県消費生活センター 大分県海洋水産研究センター 大分県漁業公社 9月9日 大分市 大分県水産振興課 (大分県水産用ワクチン防疫協議会) 大分県畜産課 大分県関係地方振興局 大分県代表家畜保健衛生所 2. その他ワクチン使用推進上必要な事項の審議 大分県海洋水産研究センター 1. 水産用ワクチン使用実績および注射ワクチン接 種技術講習の実施状況説明
表5 適正な養殖管理･ワクチン使用の指導 表6 養殖衛生管理技術講習会 表7 養殖資機材の使用状況調査 実施時期 実施場所 対象者（人数） 内容 2003年 5月23日 蒲江町 1. 免疫およびアレルギーに関する基礎知識 2. 水産用ワクチン使用上の諸注意 3. 注射ワクチン接種技術実習 6月10日 蒲江町 〃 6月18日 佐伯市 ブリ養殖漁家及び関係者(12名) 〃 7月1日 蒲江町 マダイ養殖漁家及び関係者(4名) 〃 7月28日 蒲江町 〃 2004年 3月18日 鶴見町 マダイ種苗生産業者及び関係者(7名) 〃 ブリ種苗採捕蓄養業者及び関係者(9 名) ブリ類、シマアジ養殖漁家及び関係 者(11名) ブリ種苗採捕蓄養業者及び関係者(20 名) 実施時期 実施場所 対象資機材 内容 2003年 8月28日 米水津村 水産用医薬品 水産用医薬品使用記録および在庫の確認 9月18日 佐伯市 〃 〃 9月18日 上浦町 〃 〃 10月9日 蒲江町 〃 〃 10月28日 蒲江町 〃 〃 12月16日 蒲江町 〃 〃 12月18日 臼杵市 〃 〃 12月18日 津久見市 〃 〃 2004年 2月9日 鶴見町 〃 〃 2月9日 米水津村 〃 〃
表8 医薬品残留検査 表9 薬剤耐性菌の実態調査 表10 疾病監視対策 2003年 簡易検査法 10月6日 臼杵市 ブリ 抗菌性物質一般 全て陰性(筋肉) 1 〃 10月6日 佐伯市 〃 〃 〃 2 〃 10月6日 米水津村 〃 〃 〃 1 〃 10月6日 蒲江町 〃 〃 〃 2 〃 12月9日 臼杵市 マダイ 抗菌性物質一般 〃 1 〃 12月15日 佐伯市 〃 〃 〃 1 〃 12月15日 米水津村 〃 〃 〃 1 〃 12月19日 鶴見町 〃 〃 〃 1 〃 12月26日 蒲江町 〃 〃 〃 2 〃 10月28日 蒲江町 ヒラメ 抗菌性物質一般 〃 2 〃 12月17日 蒲江町 〃 〃 〃 2 〃 12月18日 津久見市 〃 〃 〃 2 〃 12月24日 国見町 クルマエビ 〃 〃 6 検体数合計 24 検査方法 実施時期 実施場所 対象魚 対象医薬品（成分） 内容 検体数 実施時期 実施場所 対象魚 内容 2003年 4月1日∼ 上浦町 ブリ類 細菌分離とディスク法による感受性測定
2004年 (豊後水道沿岸域) Photobacterium damselae subsp. piscicida (80株)
3月31日 Lactococcus garviae (40株) 2003年 4月1日∼ 上浦町 ヒラメ 細菌分離とディスク法による感受性測定 2004年 (豊後水道沿岸域) Edwardsiella tarda (95株) 3月31日 Streptococcus iniae (23株) 実施時期 実施場所 対象魚 内容 2003年 4月 28日 蒲江町 ブリ類, マダイ, ヒラメ他 5月12日 佐伯市 〃 〃 5月23日 蒲江町 〃 〃 6月6日 蒲江町 〃 〃 6月10日 蒲江町 〃 〃 6月18日 佐伯市 〃 〃 6月25日 佐伯市 〃 〃 6月26日 臼杵市 〃 〃 6月27日 佐伯市 〃 〃 7月1日 蒲江町 〃 〃 7月16日 国見町 クルマエビ 〃 7月16日 姫島村 〃 〃 7月17日 蒲江町 ブリ類, マダイ, ヒラメ他 〃 7月22日 佐伯市 〃 〃 7月22日 佐伯市 〃 〃 7月28日 蒲江町 〃 〃 7月30日 佐伯市 〃 〃 8月4日 臼杵市 〃 〃 8月5日 佐伯市 〃 〃 養殖場の疾病調 査および魚病被 害状況の把握 実施時期 実施場所 対象魚 内容 2003年 9月2日 蒲江町 ブリ類, マダイ, ヒラメ他 9月29日 佐伯市 〃 〃 10月7日 佐伯市 〃 〃 10月23日 蒲江町 〃 〃 11月20日 国見町 クルマエビ 〃 11月20日 姫島村 〃 〃 11月20日 日出町 〃 〃 11月21日 佐伯市 ブリ類, マダイ, ヒラメ他 〃 12月26日 佐伯市 〃 〃 2004年 1月20日 佐伯市 〃 〃 1月20日 佐伯市 〃 〃 3月1日 佐伯市 〃 〃 3月1日 佐伯市 〃 〃 3月1日 佐伯市 〃 〃 3月1日 佐伯市 〃 〃 3月2日 蒲江町 〃 〃 3月18日 鶴見町 〃 〃 養殖場の疾病調 査および魚病被 害状況の把握
表11 疾病発生対策 Ⅴ 疾病診断状況 １ 病害相談および診断件数 年度における病害相談件数は 件 対前年 2003 1,490 ( 129.3%) 629 ( 97.4%) 比 、疾病診断件数は 件 対前年比 であった 表( 12)。疾病原因別にみると、ウイルス性 疾 病 が56件 全 体 の( 8.9%)、 細 菌 性 疾 病 が259件 、寄生虫性疾病が 件 、その他の疾 (41.2%) 106 (16.9%) 病が179 (28.5%)件 、健康診断が29 (4.6%)件 である。 ２ 種別疾病診断件数 疾病診断件数を種別にみると 表( 13 20)∼ 、ヒラメ の190 (件 全体の30.2%)、ブリの92 (14.6%)件 、トラフ グの90 (14.3%)件 、ヒラマサの63 (10.0%)件 、カンパ チの34 (5.4%)件 、マダイの27 (4.3%)件 、エゾアワビ の21 (3.3%)件 、シマアジの19 (3.0%)件 、イシガキダ イの16 (2.5%)件 、クルマエビの15 (2.4%)件 の順で上 位が形成されている。 年度の疾病発生状況等のうち、特徴的な事項 2003 . は次のとおりである ブリ類の診断件数は、ブリが減少 し、カ 1) (77%) ンパチが増加(162%)した。全体としてはやや減少し 。 、 て前年の94%となった ブリで減少が著しい疾病は イリドウイルス病、細菌性溶血性黄疸および α溶( 血性 レンサ球菌症である。これに対して、増加し) た疾病は類結節症およびノカルジア症である。類結 節症の診断件数の増加の一因として、1999年以降に Photobacterium damselae ほ と ん ど み ら れ な か っ た アンピシリン耐性株の増加したこと subsp. piscicida が考えられる。ブリ以外では、ヒラマサにおける不 明症例の増加と α溶血性 レンサ球菌症の減少、カ( ) ンパチにおけるイリドウイルス病、ビブリオ病、類 結節症および血管内吸虫症の件数増加がめだつ。 マダイの診断件数は、前年増加したイリドウイ 2) ルス病やパスツレラ症等の件数が激減したため、前 年の38%となった。 3)ヒラメの診断件数はやや増加して、前年の114% になった。エドワジエラ症、滑走細菌症およびスク ーチカ症が増加して、 β溶血性 レンサ球菌症がや( ) や減少した。 トラフグの診断件数は、イリドウイルス病およ 4) びヘテロボツリウム症の増加よって前年の217%ま で増加した。 シマアジの診断件数は、 α溶血性 レンサ球菌 5) ( ) 症の減少によって前年の79%となった。 マサバの診断件数は、 α溶血性 レンサ球菌症 6) ( ) がやや増加したが、全体としては前年の37%まで激 減した。 。 7)カワハギの診断件数も前年の71%まで減少した イシガキダイではイリドウイルス病等の件数増加に よって、前年の167%となった。 クルマエビの診断件数は、前年の に減少し 8) 59% た。前年に問題となった感染症が疑われる脱皮異常 を伴う異常死は確認されなかったが、急性ウイルス 血症(PAV)の診断件数は増加(150%)した。 養殖海産魚類における水産用ワクチンの使用等 9) 状況については、ブリのレンサ球菌症不活化経口ワ クチンで、指導書発行件数が 、使用経営体数が 、4 2 投与尾数が130,000尾、使用量が47.0Lであった。ブ リ類のレンサ球菌症不活化注射ワクチンは、指導書 発行件数が35、使用経営体数が28(ブリ21、カンパ チ 、 ヒ ラ マ サ5 2)、 投 与 尾 数 が1,226,366尾 ブ リ( 、カンパチ 、ヒラマサ 、使 1,052,866 122,500 51,000) 用量が122.6L、ブリのレンサ球菌症及びビブリオ病 不活化注射ワクチンは、指導書発行件数が15、使用 経営体数が14、投与尾数が1,605,000尾、使用量が であった。 160.5L また、イリドウイルス病不活化注射ワクチンは、 ブリで指導書発行件数が 、使用経営体数が 、投与3 1 尾数が72,000尾、使用量が7.2L、シマアジで指導書 発 行 件 数 が14、 使 用 経 営 体 数 が13、 投 与 尾 数 が 尾、使用量が である。ブリ類のイリ 415,000 41.56L ドウイルス病及びレンサ球菌症不活化注射ワクチン は、ブリで指導書発行件数が 、使用経営体数が 、6 4 投与尾数が158,000尾、使用量が15.8L、カンパチで 指導書発行件数が 、使用経営体数が 、投与尾数が4 4 尾、使用量が となっている。 62,460 6.25L 実施時期 実施場所 対象魚 内容 2003年 4月1日∼ 上浦町 ブリ類, マダイ, ヒラメ他 疾病検査及び対策指導 2004年 (豊後水道沿岸域) 3月31日 2003年 4月1日∼ 上浦町 クルマエビ 疾病検査及び対策指導(15件) 2004年 (国東半島周辺域) 1月31日 ブリ類(195件), マダイ(27件), ヒラメ(190件), トラフグ (90件), シマアジ(19件)
* 表12 病害相談件数および診断件数 内は前年度 * ( ) 表13 ブリ類診断状況 03 4 5 6 7 8 9 10 11 12 04 1 2 3 計 96 113 169 220 115 171 120 116 113 96 95 66 1,490 (35) (91) (95) (176) (134) (160) (125) (80) (53) (75) (65) (63) (1,152) 35 47 71 93 46 75 51 58 49 46 34 24 629 (22) (54) (53) (99) (86) (84) (80) (42) (31) (35) (32) (28) (646) 相談件数 診断件数 03 4 5 6 7 8 9 10 11 12 04 1 2 3 計 ブリ イリドウイルス病 1 2 3 ウイルス性腹水症 2 1 3 ビブリオ病 1 3 1 5 類結節症 4 10 7 11 3 35 細菌性溶血性黄疸 1 3 1 1 1 7 レンサ球菌症(α) 1 5 2 8 ノカルジア症 1 1 3 4 1 10 白点病 1 1 トリコジナ症 1 1 ヘテラキシネ症 1 1 2 血管内吸虫症 1 1 不明 1 2 2 1 5 1 2 1 15 健康診断 1 1 ブリ小計 2 7 10 19 9 22 7 9 3 2 1 1 92 ヒラマサ イリドウイルス病 3 3 エピテリオシスチス病 1 1 ビブリオ病 2 2 類結節症 4 2 6 滑走細菌症 1 1 2 レンサ球菌症(α) 3 4 4 1 1 1 1 15 筋肉微胞子虫症 1 1 2 ヘテラキシネ症 1 1 ゼウクサプタ症 1 1 1 2 1 1 7 血管内吸虫症 1 1 2 鰓カリグス症 1 1 不明 2 2 1 1 1 5 2 1 3 2 20 健康診断 1 1 ヒラマサ小計 2 0 4 12 7 2 3 12 9 3 6 3 63 カンパチ イリドウイルス病 2 1 4 7 ビブリオ病 4 1 5 類結節症 1 2 3 6 レンサ球菌症(α) 1 1 ノカルジア症 1 1 ゼウクサプタ症 1 1 血管内吸虫症 1 1 3 1 6 不明 2 1 1 1 2 7 カンパチ小計 6 8 7 0 0 8 0 0 0 2 1 2 34 ブリヒラ (ブリ×ヒラマサ) 滑走細菌症 1 1 レンサ球菌症(α) 1 1 ノカルジア症 1 1 鰓カリグス症 1 1 不明 1 1 2 ブリ類計 10 15 22 31 16 34 11 22 12 8 8 6 195
表14 タイ類診断状況 表15 ヒラメ診断状況 表16 トラフグ診断状況 表17 シマアジ診断状況 03 4 5 6 7 8 9 10 11 12 04 1 2 3 計 マダイ イリドウイルス病 1 1 パスツレラ症 1 1 エドワジエラ症 1 1 1 1 4 スクーチカ症 1 1 2 ビバギナ症 1 1 ラメロディスカス症 1 1 クビナガ鉤頭虫症 2 2 不明 2 2 2 1 3 1 11 健康診断 1 3 4 マダイ計 3 2 3 2 0 3 7 1 0 1 4 1 27 03 4 5 6 7 8 9 10 11 12 04 1 2 3 計 ヒラメ リンホシスチス病 1 1 2 ウイルス性出血性敗血症 3 1 2 1 7 ビブリオ病 1 1 エドワジエラ症 2 5 10 8 3 3 3 9 9 3 3 1 59 滑走細菌症 1 1 3 1 2 1 1 4 5 1 20 レンサ球菌症(β) 1 1 2 3 2 1 1 3 14 イクチオボド症 2 1 1 1 3 1 9 トリコジナ症 1 1 2 スク−チカ症 1 4 5 1 2 2 4 1 1 21 ネオベネデニア症 1 1 不明 6 5 6 4 2 2 5 3 3 4 2 3 45 健康診断 1 1 1 2 3 1 9 ヒラメ計 15 15 25 21 9 8 15 18 21 18 15 10 190 03 4 5 6 7 8 9 10 11 12 04 1 2 3 計 トラフグ イリドウイルス病 1 8 1 3 2 1 2 1 19 滑走細菌症 1 1 白点病 1 1 トリコジナ症 1 2 1 4 腸管粘液胞子虫症 1 1 1 1 3 7 ネオベネデニア症 1 1 1 3 ヘテロボツリウム症 1 4 1 1 3 2 1 13 ウドネラ症 1 1 2 シュードカリグス症 1 1 1 3 不明 3 4 5 4 5 1 8 3 1 34 健康診断 1 1 1 3 トラフグ計 0 3 9 20 5 14 5 6 7 15 4 2 90 03 4 5 6 7 8 9 10 11 12 04 1 2 3 計 シマアジ パスツレラ症 1 1 1 3 シュ−ドモナス症 1 1 1 3 レンサ球菌症(α) 1 1 ノカルジア症 1 1 不明 1 3 1 1 2 1 1 1 11 シマアジ計 1 4 1 2 0 3 2 1 2 0 1 2 19
表18 その他の魚類診断状況 03 4 5 6 7 8 9 10 11 12 04 1 2 3 計 ウルメイワシ 不明 1 1 アカマツカサ 不明 1 1 マアジ ビブリオ病 1 1 レンサ球菌症(α) 1 1 マサバ イリドウイルス病 1 1 レンサ球菌症(α) 1 2 1 1 1 6 不明 3 2 1 6 ゴマサバ 不明 1 1 メジナ レンサ球菌症(β) 1 1 クロメジナ レンサ球菌症(β) 1 1 イシダイ 健康診断 1 1 イシガキダイ イリドウイルス病 4 2 6 ビブリオ病 1 1 パスツレラ症 1 1 シュードモナス症 1 1 2 スクーチカ症 1 1 ベネデニア症 2 2 不明 2 2 健康診断 1 1 メバル レンサ球菌症(β) 1 1 不明 4 2 6 健康診断 1 1 カサゴ 健康診断 1 1 オニオコゼ 未同定真菌症 1 1 不明 1 1 2 健康診断 1 1 マコガレイ 不明 1 1 ホシガレイ エドワジエラ症 1 1 メイタガレイ 滑走細菌症 1 1 カワハギ パスツレラ症 1 1 2 レンサ球菌症(α) 1 1 レンサ球菌症(β) 1 1 1 3 白点病 1 1 ペニクルス症 1 1 1 3 不明 1 1 健康診断 1 1 ウマヅラハギ ビブリオ病 1 1 その他の魚類計 5 7 7 9 4 12 5 4 7 1 2 3 66
表19 その他の海産無脊椎動物診断状況 表20 淡水魚類診断状況 03 4 5 6 7 8 9 10 11 12 04 1 2 3 計 フクトコブシ ビブリオ病 1 1 不明 1 1 2 エゾアワビ ビブリオ病 5 1 5 6 1 18 不明 1 2 3 メガイアワビ 不明 1 1 マガキ 卵巣肥大症 1 1 クルマエビ 急性ウイルス血症 3 1 4 不明 3 3 6 健康診断 1 1 3 5 海産無脊椎動物計 1 1 4 8 12 1 6 6 0 2 0 0 41 03 4 5 6 7 8 9 10 11 12 04 1 2 3 計 アユ 不明 1 1 淡水魚類計 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1
放流用種苗防疫対策事業
朝井 隆元・福田 穣
事業の目的
放流用種苗のウイルス検査を行うことにより、栽 培漁業の健全な発展と、ウイルス性疾病の天然資源 への拡散防止を図る。本年度は、以下の 3 種のウイ ルスについて検査を行った。事業の方法
１．クルマエビのPRDV検査 10 （社）大分県漁業公社国東事業場の稚エビは、P 以上経過した個体について検査した 1）。親エビは種 苗生産時に瀕死あるいは衰弱した個体を検査し、検 査部位は受精嚢とした 2）。大分県漁協および民間種 苗生産業者の種苗についても公社産種苗の検査方法 に準じたが、種苗が大きい場合には、検査部位を胃 上皮とした。なお、配合飼料中に含まれる PRDV の 遺伝子が検出されることを避けるため、2 日間の餌 DNA Isogen 止めを実施した 3）。 の抽出は核酸抽出剤 （ニッポンジーン）を用い、養殖研究所のマニュア ル4）に準じて行った。 法による 遺伝子の PCR PRDV 増幅は、養殖研究所が平成10年に示した DNAポリ メラーゼAmplitaq Gold（PERKIN ELMER） を用い る Time release PCR 法 （ Hot-start-PCR 法 、 ） に準じ 、プレヒートを 分で行っ 1step,45cycle 5） 12 P3 5'-TCTTCATCA た 6）。 な お 、 プ ラ イ マ ー に は （ GATGCTACTGC-3'） お よ び P4（5'-TAACGCTATCC ） を用いた。低電気浸透用アガロー AGTATCACG-3' ス（ナカライテスク）1.5%ゲルとTAEバッファーを 用いて増幅産物を電気泳動し、泳動後にエチジウム ブロマイドで核酸染色して、紫外線照射下で増幅産 物を確認した。 ２．トラフグのSJNNV検査 （社）大分県漁業公社上浦事業場で放流用に種苗 。 生産されたトラフグのうち斃死した4尾を検査した RNA Isogen 検査部位には眼球 を用いた7） 。 の抽出には を用い、付属のマニュアルに準じて行った。抽出さ れたRNAは、70℃で15分間加熱して構造変性させ MuLV Reverse Transcriptase た 後 、 逆 転 写 酵 素（PERKIN ELMER） を用い、付属のマニュアルに準 じて RT 反応を行った。逆転写された cDNAをテン Amplitaq Gold PCR 1step,
プレートとして、 を 用い （ ） を行った。なお、プレヒートを 分間で 30cycle 12 行った以外は、PCR条件はNishizawa et al.8）に準じ R3 5'-CGAGT て 行 い 、 プ ラ イ マ ー に は （ CAACACGGGTGAAGA-3'）およびF2 5'-CGTGTCAG（ ） を用いた。増幅産物の確認は TCATGTGTCGCT-3' PRDV 検査に準じて行ったが、泳動用のゲルは 2.5% アガロースを用いた。 ３．マダイのRSIV検査 （社）大分県漁業公社上浦事業場で放流用に種苗 生産されたマダイ60尾について検査した。それぞれ の検体から検査部位とした脾臓 9）を摘出し、 倍量 50 のBasal Meduim Eagle（BME）とともにホモジナイ ズし、 ℃4 , 800g, 10分 間の遠心分離を行った。上清 をシリンジで採取し、0.45μmのフィルターで濾過 した。10%の牛胎児血清を含むBMEを用いて培養さ れたGF細胞10, 11）に濾液を接種し、25℃の条件下で の培養を試みた。 週間後、 細胞の上清を RSIV 2 GF マイクロチューブに採取し、 ℃4 , 12000g, 45分 間の 遠心分離を行った。上清を除去したのち、Isogen を PRDV DNA PCR 用いて 検査に準じて を抽出した。 法によるRSIV遺伝子の増幅は、Kurita et al.12）に準 1-F 5'-CTCAA じ て 行 い 、 プ ラ イ マ ー に は （ ACACTCTGGCTCATC-3'） および1-R（5'-GCACCAA ） を用いたが、 検査と同 CACATCTCCTATC-3' PRDV
様に DNA ポリメラーゼとしてAmplitaq Gold を 用 い、プレヒート12分間, 1step, 45cycleのPCRを行っ た。増幅産物の確認についても、PRDV 検査に準じ て行った。
事業の結果
１．クルマエビのPRDV検査 漁業公社の種苗 360 尾は全て陰性であったが、検 査した親エビ22尾のうち2尾が陽性であった。さら に、放流用種苗の中間育成場である大分県漁協 B 支 店の1池でクルマエビが全滅し、そのうち10尾表. ウイルス検査結果 依頼日 依頼者 検体 検体数 検査部位 検査ウイルス 結果 4/30 漁業公社（国東） クルマエビ種苗 120尾 全体 PRDV 陰性 〃 〃 クルマエビ親 10尾 受精嚢 PRDV 陽性(1/10) 5/28 A民間種苗生産業者 クルマエビ種苗 74尾 全体 PRDV 陰性 6/9 漁業公社（国東） クルマエビ種苗 120尾 全体 PRDV 陰性 〃 〃 クルマエビ親 5尾 受精嚢 PRDV 陰性 6/10 漁業公社（上浦） マダイ種苗 60尾 脾臓 RSIV 陰性 6/24 〃 トラフグ種苗 4尾 眼球 SJNNV 陰性 7/15 漁業公社（国東） クルマエビ種苗 60尾 全体 PRDV 陰性 〃 〃 クルマエビ親 4尾 受精嚢 PRDV 陰性 8/18 大分県漁協B支店 クルマエビ種苗 10尾 胃上皮 PRDV 陽性(10/10) 8/21 漁業公社（国東） クルマエビ種苗 60尾 全体 PRDV 陰性 〃 〃 クルマエビ親 3尾 受精嚢 PRDV 陽性(1/3) を検査したところ全て陽性であったため、クルマエ ビが全滅した原因はPAVと判断された。 なお、A民間種苗生産業者の74尾は全て陰性であ った。 ２．トラフグのSJNNV検査 。 、 検査したトラフグ4尾は全て陰性であった なお 斃死魚には寄生虫は観察されず、トリプトソーヤ寒 天培地を用いて腎臓から菌分離を試みたが、病原体 と思われる菌は分離できず、斃死原因は不明であっ た。 ３．マダイのRSIV検査 細胞を用いてマダイ 尾の脾臓から の GF 60 RSIV 分離を試みたが、GF 細胞に細胞変性効果（CPE）は GF PCR RSIV 観察されなかった。 細胞上清から で の遺伝子の検出を試みたが、全て陰性であった。
今後の問題点
PRDV 漁業公社が生産したクルマエビの種苗から 陽性個体は検出されなかった。しかし、その種苗の 中間育成場である大分県漁協B支店の 1池でクルマ エビは全滅し、この原因はPAVと考えられた。この 中間育成場では、昨年度もクルマエビがPAVで全滅 し、それ以前も PRDV 陽性個体が検出されたことが あり、この中間育成場には感染源となる生物 13）が棲 息している可能性が高い。また、親エビの検査部位 は受精嚢としたが、筑紫ら 14）は受精嚢内の精子の量 によって PRDV の検出率が低くなる可能性や、親エ ビの検査部位としては胸脚や触覚が適当であること を指摘しており、今後の親エビの検査部位は再検討 すべきかもしれない。 SJNNV PCR ところで、 に ついては細胞培養法と 法を組み合わせることで検出率が向上するという報 告があるため 15）、今回 の検査は細胞培養法と RSIV 法を組み合わせた方法で実施したが、細胞培養 PCR 法を用いると検査結果がでるまで 2 週間以上の時間 を要する。蛍光抗体法 16）や 法単独の手法と比 PCR べて検出感度が高くなるのかどうか、さらにプライ マーの違いによって検出感度に違いがあるのかどう か今後検討すべきであろう。文献
）佐藤 純 虫明敬一 森広一郎 有元 操 今泉圭之 1 , , , , 輔 西澤豊彦 室賀清邦 クルマエビの種苗生産過程, , . PAV . 1999; 1 : における の発生状況 魚病研究 34( ) 33-38. ）虫明敬一 有元 操 佐藤 純 森広一郎 天然クル 2 , , , . 33 マエビ成体からのPRDVの検出. 魚病研究 1998; 5 : 503-509. ( ) ）濱田豊市 片山幸恵 筑紫康博 診断におけ 3 , , . PAV PCR . 1996; : 81-86. る 検査の問題点 福岡水技研報 8 ）水産庁養殖研究所病理部 熊本県水産研究セン 4 , ター. PCRによるPRDVの検出法（平成8年度魚病 技術者研修魚病専修コース研修用資料）. 日本水産 , , 1996; 1-8. 資源保護協会 東京 ）濱田豊市 検査における と 5 . PRDV Hot-Start-PCR Cool-Start-PCR の 感度比較. 福岡水技研報 1996; 8: 87-89. 6）真木寿治. PCR Tips,.秀 潤社 東京, 1997; 158-162. ）中井敏博 西 澤豊彦 室賀清邦 有元 7 , Dung N H, , , 操 大槻観三 クエおよびトラフグにおけるウイルス, . . 1994; 3 : 211-212. 性神経壊死症の発生 魚病研究 29( )8) Nishizawa T, Mori K, Nakai T, Furusawa I, Muroga K. Polyperage chain reaction PCR( ) amplification of
Dis. Aquat.
RNA of striped jack necrosis virus SJNNV .( ) 1994; : 103-107.
Org. 18
和田有二, 反町 稔. 養殖マダイのイリドウイルス感 . 1992; 1 : 19-27.
染症 魚病研究 27( )
10）Clem L W, Moewus L, Sigel M M. Studies with cells from marine fish in tissue culture. Proc. Soc. Med. 1961;
: 762-766.
108
11）Nakajima K, Maeno Y, Kurita J, Inui Y. Vaccination against red sea bream iridoviral disease in red sea bream.
. 1997; 4 : 205-209.
Fish Pathol 32( )
12）Kurita J, Nakajima K, Hirono I, Aoki T. Polimerase chain reaction (PCR) amplification of DNA of red sea bream iridovirus RSIV .( ) Fish Pathol. 1998; 33( )1 : 17-23.
13）Fukuda Y. Detection of white spot syndrome virus from the ghost shrimp Nihonotrypaea japonicainhabiting the sand bottom of Kuruma prawn culture ponds.
Proceedings of the symposium on "ecology of large bioturbators in tidal flats and shallow sublittoral sediments-from individual behavior to their role as ecosystem engineers". Nagasaki university, 2003: 63-66. ）筑紫康博 岩渕光伸 行武 敦 親クルマエビの効 14 , , . PRDV . 2000; : 率的な 検査部位 福岡水海技セ研報 10 41-43. ）渡辺研一 吉水 守 細胞培養法と 法を 15 , . RT-PCR 組み合わせた神経壊死症ウイルスの検出. 日水誌 2002;68( )2 : 197-200.
16）Nakajima K, Maeno Y, Fukudome M, Fukuda Y, Tanaka S, Sorimachi S. Immunofluorescence test for the rapid diagnosis of red sea bream iridovirus infection using monoclonal antibody. Fish Pathol.1 995;30( )2 : 115-119 .
宮崎大学農学部生物環境科学科 *1 東京大学大学院農学生命科学研究科 *2
地域特産養殖種の難病対策に関する研究
*1 *2福田
穣・伊丹利明・横山
博
事業の目的
近年の海面養殖漁業は対象種の拡大傾向が著しい 、 、 が 養殖対象種の多様化と養殖環境の変化等に伴い 。 、 次々と新疾病が発生している このような疾病には 原因未究明のもの、対策研究の遅れから被害防止不 能な難病が含まれている。本事業は、ヒラメ、シマ アジ、ハタ類等の魚類に、クルマエビを加えた大分 県の特産養殖種について、生産の障壁になる難病、 特にウイルス性疾病の対策研究を行うものである。 これまでの本研究で、クルマエビ養殖池に生息す るニホンスナモグリがPRDVの感染源として重要で あることを明らかにした。しかしながら、PCR法に よってPRDV陽性動物を確認できない養殖池におい てもその後PAVが発生する事例がおこっており、感 染源を特定し、防疫対策を講じるためには、さらに 検出感度を高める必要性があると考えられる。本年 度は増幅効率が高く、極めて高い特異性を有する新 LAMP(Loop-mediated し い 遺 伝 子 増 幅 技 術 で あ る 法を用いて、 の検出感 isothermal amplification) PRDV 度の比較検討を行った。 2002 ( ) また、 年秋季に養殖マサバに体形異常 変形 Myxobolus acanthogobii M. が発生し、粘液胞子虫 1)(= の脳内寄生が確認されたことから、ブリの粘液 buri) 胞子虫性側弯症 と同様に2) M. acanthogobiiがマサバ 変形の原因であると推定された。そこで、養殖マサ バにおけるM. acanthogobiiの寄生状況を把握するた めに、M. acanthogobii分布海域で養成されているマ サバについて追跡調査を行った。事業の方法
クルマエビ養殖池で採集されたコメツキガニか Ⅰ らのPRDV遺伝子の検出 年に 発生後池干し中の姫島村のクルマエ 2003 PAV ビ養殖池から、11月にコメツキガニ48個体を採集し PRDV ISOGEN て 検査に供した。供試カニの胃から (ニッポンジーン を用いて鋳型) DNAを抽出し、PCR 法およびLAMP法を行った。PCR法は常法にしたが 、 、 い P3およびP4のプライマーセット で3) 45サイクル 1ステップ で実施した。4) LAMP法はLoopamp DNA 増幅試薬キット 栄研 を用い、( ) Konoらの方法 にし5) たがい行った。 養殖マサバ脳からの の検出 Ⅱ M. acanthogobii 年以降、粘液胞子虫 によると 2002 M. acanthogobii 考えられる体形異常が発生している佐伯市のマサバ 養殖場 寄生虫分布域 において、( ) 2003年 月∼5 11月 の間に養殖マサバ 才魚を約 か月ごとに1 1 10尾ずつ採 集して脳粘液胞子中検査に供した。供試群は2002年 の導入種苗が継続飼育されていたものである。 供試魚から摘出した脳について、第 脳室付近の4 塗抹を作製し、Diff-Quik(国際試薬 で染色して顕微) 鏡観察を行うとともに、PCR法による検査のために M. 脳組織をエタノールで固定した。PCR法による 1) acanthogobii遺伝子の検出は、Yokoyamaらの方法 にしたがって実施した。 また、2003年に大分県海洋水産研究センターで生 産されたマサバ人工種苗(2003年 月 日検査時平均7 2 体重6.2g)を2003年 月7 16日に寄生虫分布域へ移動し て養成しながら 移動群 、 月∼( ) 8 12月の間約 か月ご1 とに10尾ずつ、さらに2004年 月3 25日に10尾を採集 して脳粘液胞子中検査に供した。脳粘液胞子虫検査 は 才魚と同様の方法で行った。対照群として大分1 県海洋水産研究センター地先 寄生虫未分布域 の小( ) 割生簀でマサバ人工種苗の養成を継続し、寄生虫分 布海域の群と同様の検査を行った。表1. 寄生虫分布域で養殖されていたマサバ 才魚脳1 におけるM. acanthogobii陽性率の推移 表2. 寄生虫分布域へ移動したマサバ 才魚脳におけ0 るM. acanthogobii陽性率の推移
事業の結果および考察
クルマエビ養殖池で採集されたコメツキガニか Ⅰ らのPRDV遺伝子の検出 法ではコメツキガニ 平均体重 個体中 PCR ( 0.36g)48 個体 が 陽性であったが、 法では 1 (2.1%) PRDV LAMP 個体 が陽性となった。 検査における 29 (60.4%) PRDV 法の高い検出感度が確認されたが、検出され LAMP たPRDVの 感 染 能 に つ い て は 不 明 で あ る 。 今 後 、 陽性コメツキガニからクルマエビへの感染の PRDV 可能性について検討する必要がある。 養殖マサバ脳からの の検出 Ⅱ M. acanthogobii 年から寄生虫分布域で養殖されていたマサバ 2002 才魚の脳における、 陽性率の推移 1 M. acanthogobii は表 に示したとおりである。顕微鏡観察と1 PCR法 で同等の結果が得られ、検出感度に差は認められな かった。 月および6 11月には陽性個体はみられなか M. っ た が 、 そ の 他 の 月 に は10~40%の 個 体 に の寄生が認められた。 acanthogobii 大分県海洋水産研究センターで種苗生産されたマ サバを2003年 月7 16日に寄生虫分布域へ移動して、 脳におけるM. acanthogobii寄生の有無を検討した が、顕微鏡観察およびPCR法のいずれの方法におい M. ても対照群、移動群ともに2004年 月3 25日までに の寄生は確認できなかった。移動群に acanthogobii ついてM. acanthogobiiが検出されなかった原因とし て、マサバ種苗の移動時期や移動サイズが寄生虫の 感染のタイミングに合わなかったことも考えられる が、PCR法の検出感度についても再検討する必要が あると考えられる。文
献
1) Yokoyama, H, M. A. Freeman, T. Yoshinaga and K. Ogawa: Myxobolus buri, the myxosporean parasite causing scoliosis of yellowtail, is a synonym of infecting the brain of the
Myxobolus acanthogobii
yellowfin goby,Fisheries Science, (in press)
阪口清次 原 武史 松里寿彦 柴原敬生 山形陽 2) , , , , 一 河合 博 前野幸男 養殖ハマチの粘液胞子虫寄, , : . , (12), 79 - 86 (1987). 生による側弯症 養殖研報 木村武志 山野恵祐 中野平二 桃山和夫 平岡三 3) , , , , 登里, 井上 潔: PCR法によるPRDVの検出. 魚病研 , 31(2), 93 - 98 (1996). 究 濱田豊市 検査における と 4) : PRDV Hot-Start-PCR Cool-Start-PCRの感度比較 福岡水技研報, , (8), 87-89 (1996)
5) Kono, T, R. Savan, M. Sakai and T. Itami: Detection of white spot syndrome virus in shrimp by
J. Virol.
loop-mediated isothermal amplification. . 115(1), 59-65 (2004). Methods 平均体重(g) ± S.D. 陽性率 平均体重(g) ± S.D. 陽性率 2003年7月2日 6.2 ± 2.07 0/20 8月5日 17.2 ± 5.00 0/10 22.0 ± 1.94 0/10 9月4日 38.4 ± 4.12 0/10 33.1 ± 3.52 0/10 10月14日 49.7 ± 6.88 0/10 70.9 ± 18.87 0/10 11月18日 70.6 ± 10.69 0/10 95.8 ± 15.17 0/10 12月22日 79.0 ± 14.96 0/10 135.3 ± 34.22 0/10 2004年3月25日 139.2 ± 23.70 0/10 259.8 ± 35.05 0/10 調査日 対照群(寄生虫未分布域) 移動群(寄生虫分布域) 調査日 平均体重(g) ± S.D. 陽性率 2003年5月7日 353 ± 64.7 1/10 6月5日 335 ± 27.0 0/10 7月18日 258 ± 70.7 4/10 8月5日 325 ± 30.3 2/10 9月4日 320 ± 20.8 1/10 10月14日 367 ± 56.6 2/10 11月18日 381 ± 31.5 0/10
詳細な研究内容は平成 年度養殖衛生対策技術開発研究報告書に報告した。 * 15 *
技術開発等対策委託事業
（日本水産資源保護協会委託）
徳光俊二・福田 穣
事業の目的
養殖魚種の多様化、薬事法の改正、ワクチンの普 及などにより、水産養殖業は大きな転機を迎えてい 。 、 、 、 る このため 魚病被害の低減 新しい疾病の防除 適正な薬剤使用などの魚病対策技術を開発し、水産 養殖業の健全な発展に資することを目的とする。 今年度はブリのノカルジア症の早期診断技術、細 菌性溶血性黄疸のワクチンの開発および酸素濃度の 違いによるヒラメの塩酸オキシテトラサイクリン （OTC）の吸収・排泄速度について検討を行った。事業の概要
ワクチンの普及に伴うブリ養殖の再興疾病対策 Ⅰ に関する研究 ノカルジア症に関する研究では、実験感染ブリの 血液中Nocardia seriolaeの検出をPCR法を用いて検 討したが、検出感度が低く、早期診断技術として利 用するためには核酸抽出法を含めてさらに改良検討 が必要であると思われた。また、7H11 寒天を用い たディスク法によるN. seriolaeの薬剤感受性の簡易 測定法を提示することができた。 細菌性溶血性黄疸に関する研究では、PCR 法に よる診断技術がほぼ完成し、魚病診断における補助 検査としての有用性が確認された。PCR 法を用い ることによってブリ以外の魚種ではじめてヒラマサ から原因細菌が検出された。また、不活化ワクチン による予防を試みた結果、有効性は認められなかっ たが、感染耐過魚血清が原因細菌の増殖を抑制する 、 。 ことが明らかとなり 予防免疫の可能性が残された 養殖魚の薬剤吸収・排泄に及ぼす飼育管理技術 Ⅱ の影響 溶存酸素量がヒラメの薬剤吸収・排泄に及ぼす影 響を調べるため、高酸素区、低酸素区および高酸素 で投薬後に低酸素に移行した区の 3 区を設定し、 濃度を肝臓、腎臓および筋肉の 部位につい OTC 3 て、 、 、1 5 10、20、30、40 日後の計 6 回調べた。 各区ともに有意差は見られず、溶存酸素量がヒラメ 。 のOTC吸収・排泄に及ぼす影響はないと思われた ヒラメは他魚種に比べて平常時の酸素消費量が少な く低酸素に強いことによると考えられた。 また、ホシガレイの1日後の肝臓のOTC 濃度は ヒラメと変わらないが、筋肉の OTC 濃度はヒラメ に比べて低いことから吸収が遅く、また、5 日後に は残留基準値（0.2ppm）以下になっていたことから 排泄は早いと推測された。このことからホシガレイ は OTC が残留する心配はないが、薬効が低くなる 恐れがあることが考えられた。真珠養殖業再生対策事業
アコヤ貝へい死防除対策
徳光 俊二・東馬場 大
事業の目的
平成8年に蒲江町で発生したアコヤガイの閉殻筋 の赤変化を伴う大量死は、後に感染症であることが 確かめられ、その蔓延防止が急務となった。真珠養 殖業者と一部の真珠母貝養殖業者は、漁場を感染症 の発症のない海域に移動し、外国産種苗の持ち込み を禁止したため一時的に危機を免れた。しかし、そ の経営状態は厳しい。 本調査は感染症の蔓延を抑止し、過渡期にある真 珠養殖経営の安定に資することを目的として行っ た。事業の方法
感染症の拡散防止 年 月から 年 月に月 回の 調査期間：2003 6 2004 1 1 割合で計8回の調査を行った。 調査は臼杵市鳴川地先および蒲江町越田 調査地区： 尾地先の2地区で行った。なお、鶴見町島江地先 では水温のみ測定した（図1）。 大分県漁業公社で生産され、臼杵市鳴川地 調査貝： 先で養成されたアコヤガイ1年貝を用いた。 月 日に臼杵 個体、蒲江 個 調査内容：6 18 100 200 体のアコヤガイを提灯篭に収容して垂下した。各 月毎に 10 個体ずつ海洋水産研究センターに持ち 帰り、閉殻筋の赤変度、血リンパ内の非血球不明 物の出現状況等を調査した。また、別の提灯篭に それぞれ 40 個体ずつ入れて垂下し、生残率を調 査した。 図1 調査地点の概要 聞き取り調査 大分県の海域で真珠養殖を営む真珠養殖業者のう ち、大分県に住所を在する 20 経営体について調査 を行った。調査は聞き取りにより 2003 年の作業人 員、持ち貝数、筏数、経営者の年齢、後継者の有無 。 、 などを調査するとともに下記の質問を行った なお 過去5ヶ年の品評会の結果も解析に用いた。 ① 経営状態は？ （ 赤字 ← とんとん → 黒字 ） ② 今後の経営規模は？ （ 縮小 ← 現状維持 → 拡大 ） ③ 現在の作業状況は？ （ きつい ← 普通 → 楽 ） ④ 試験的に貝を剥く頻度は？ （ 多い ← 年3回 → 少ない ） ⑤ 水温を測る頻度は？ （ 多い ← 週1回 → 少ない ） ※5段階で評価した。図2 2003年6月∼2004年3月の水温の変動 図3 アコヤガイの生残率の推移
