岡 山 医 学 会 雑 誌 第90巻9, 10合 併 号(第1006, 1007号) 昭 和53年10月30日 発 行
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(2) 1074. 藤. 芽 球 様 細 胞16)を. 用 い て,本. 幸. 司 てF‑E用. ウ イ ル ス の 出 芽 お よ び出. 芽 に 伴 う細 胞 膜 の 変 化 を 主 と し てF‑E法 討 し た.そ. 尾. 試 料 と し た.. ウ イ ル ス の 場 合 は 精 製 ウ イ ル ス ペ レ ッ トに 氷 冷 し. に よ り検. た2.5%glutaraldehydeを. の 結 果 に 就 い て 報 告 す る.. PBSで Ⅱ. 実 験材 料 お よび方 法. 1). 置 換 し,. 細胞. passage. Aウ. イ ル ス)で. D. T.. Imagawa博. 士(カ. 1×10‑5. た細. 本 電 子)を. 金 パ ラ ジ ウ ム 線(Pt‑Pd, 0.1㎜. φ)で. 児 血 清 加Baluda. &. Goetzの. 変 法MEM培. 5). 2.5%. 10分 間 遠 心 して ペ レ ッ トに し,. glutaraldehydeで. を 新 し い デ ィ シ ュ に 分 注 す る と い う方 法 に よ り行 わ. 洗 浄 し,. れ た.な. 後,エ. タ ノ ー ル 系 列 で 脱 水 し,エ. 37℃,. 5%CO2存. 在下 で. ウイ ル スの 精 製 10分 間 低 速 遠 心 して 細 胞. の 上 清 を10,000rpm,. 10分 間 冷 凍 遠 心 し. の 上 清 を 半 透 膜 チ ュ ー ブ に つ め,. ポ リエ チ レ ン グ リ コ ー ル6,000. (PEG‑6,000)で. の 濃 縮 液 を100,000×g,. 40ロ ー タ ー)し,ペ 0.0lMTris. 電 子)で 6). ネ ガ テ ィ ブ染色 用 試 料 作 製. 培 養 液 を65%シ. 60分 間 遠 心(RPS‑50ロ. い. 勾 配 遠 心(RPS‑50ロ. ー タ ー)し,再. 料 を ネ ガ テ ィ ブ 用 試 料 と し た.ホ. 続 シ ョ糖 密 度 勾 配(RPS‑ 180分 間 遠 心 し て 得 ら. り,カ. の 濃 縮 ウ イ ル ス 液 に つ い て 以 上 の 操 作 を 再 度 繰 り返. た.そ. し て 行 い,精. ズ ド ラ イ 法15)を. し く は デ ィ シ ュの 壁. 面 に 付着 した単 層 細 胞 を剥 離 して新 し い培 養 液 中 に 浮 遊 さ せ た 後 に 使 用 し た.即. ち これ らの細 胞 含 有培. 10分 間 遠 心 し,得. ッ トに 氷 冷 し た2.5%glutaraldehydeを. 回 洗 浄:次 %グ. られ た細 胞 ペ レ 加 え て, 30〜. 酸 緩 衝 食 塩 水(PBS)で20分,. い で 生 理 的 食 塩 水 で2〜3回. リセ リ ン 食 塩 水 に 置 換 し て,. 4℃. 洗 浄 後,. 3 40. に一夜 放 置 し. 7). び透 析後 の材. ル ムパ ー ル 膜 を張. ン タ ン グ ス テ ン酸(PTA,. の 後EE‑FED. 本 電 子)で. 試 料 作製. 培 養 液 中 に 浮 遊 し た 細 胞,も. 1%リ. 秒 間 ネ ガ テ ィ ブ 染 色 し,直. 製 ウ イ ル ス と し以 下 の 実 験 に 供 し た.. の材料. ョ糖 密 度. ー ボ ン 補 強 し た グ リ ッ ド上 に 上 記 の 材 料 を 乗. せ,. 60分 間 固 定 し,燐. ー タ ー)し,. れ を 透 析 し た.こ. れ を 粗 製 ウ イ ル ス と し た.次. れ た ウ イ ル ス バ ン ド を100,000×g, 90分 間 遠 心(RP ‑40ロ ー タ ー)し て 濃 縮 ウ イル ス 液 を作 製 し た .こ. 養 液 を1,500rpm,. 上 に 重 層 し,. 180分 間15〜65%シ. 40ロ ー タ ー)で100,000×g,. F‑E用. ョ糖 溶 液(0.5ml)の. を さ らに100.000×g,. で こ の 材 料 を15〜65%連. 製). 電 子 顕 微 鏡(日 本. 少. 0.001MEDTA,. 包 埋 した.. Blum社. 片 は酢 酸 ウ ラ ン と酢 酸. pH 7.4)の. HCl,. で 固定. 観 察 し た.. ウ ィ ル ス パ ン ドを 作 り,そ. 衝 液(0.1MNaCl,. 間隔. box中. ポ ン812に. 鉛 の 二 重 染 色 を 施 し, JEM‑7型. 100,000×g,. 90分 間 超 遠 心(RP. レ ッ トをNTE緩. 量 に 再 浮 遊 さ せ,こ. 濃. PBSで20分. 間ice. (Porter. で ブ ロ ッ ク の 薄 切 を 行 い,切. 細 胞 培 養 液 を1,500rpm,. 4). OsO4で30分. ガ ラ ス ナ イ フ を 用 い てMT‑1. 行 っ た.. 縮,こ. 1%. 前 固 定 し,. で3回. お 細 胞 の 培 養 は,. 亜. 超薄切片用試料作製. 細 胞 を1,500rpm,. の 培 養 ペ ト リ デ ィ シ ュ(Fal. 増 殖 し た 単 層 細 胞 か ら浮 遊 し て き た 細 胞. 細 胞 残 渣 を 除 く.こ. 0.2mmφ)ま. シ ャ ド ウ イ ン グ し,さ. 塩 素 酸 系 漂 白 剤 で 処 理 し た.. 培 養 液 と し て 使 用 し た.. を除 き,そ. 空度. 90秒 以 上 エ ッ チ ン グ. ら に カ ー ボ ン を 蒸 着 し て レ プ リカ 膜 を 作 製 し,次. 細 胞 の 継 代 は,φ90㎜. 3). リ. 用 いて行 った 。. イ フ温 度‑150℃,真. 下 で 割 断 後,. た は 白 金 線(Pt,. 細 胞 の培 養. con社)に. Torr以. を 行 い,白. 成 す る.18). 2%胎. 行 う 試 料 とし. 方 法6)に 準 じ, EE‑FEDブ. 即 ち 試 料 温 度‑100℃,ナ. 胞 表 面 か ら 出 芽 し た ウ イ ル ス は 細 胞 外 で 凝 集 塊 を形. 地19)を. (DMSO)に の 後F‑Eを. 加 え, F‑E用. ー ズ エ ッ チ ン グ 装 置(日 り分 与 さ れ た も の で あ. の 細 胞 は マ ウ ス θ抗 原 陽 性 で あ り17),ま. DMSOを. F‑EはMoorの. 誘 発 され た マ ウス胸腺腫 由. リ フ ォ ル ニ ア 大 学 医 学 部)よ. 2). に 一 夜 放 置 し た.そ. た.. 血 病 ウ イ ル ス(Gross. 来 の 白 血 病 細 胞H‑111で,. る.こ. 4℃. 間 固定 し ラ. dimethylsulfoxide. 30分 前 さ ら に10%. 使 用 し た 細 胞 はGross白. 加 え て30分. 洗 浄 後5%. pH 7.2)で10. ちに液 体 窒 素 中 で凍 結 し. (日 本 電 子)で30分 行 い, JEM‑7型. 間 フ リー. 電 子 顕 微 鏡(日. 観 察 し た.. 走 査 電 子 顕 微 鏡(SEM)用. 試 料作製. カ バ ー グ ラス を入 れ た培 養 用 ペ トリデ ィ シ ュで 白 血 病 細 胞 を2〜3日 取 り出 し て,氷 し,. PBSで3回. 間 培 養 し た 後,カ. 冷 し た2.5% 洗 浄 後,. 1%. い で エ タ ノ ー ル 系 列 で 脱 水,酢 し て,臨. 界 点 乾 燥 し た.こ. バー グラスを. glutaraldehydeで OsO4で. 固定. 固 定 し た.次. 酸 イ ソ ア ミル で置 換. の 試 料 にPt‑Pdの. イオ. ン コ ー テ ィン グを行 っ て 高 分 解 能 走 査 電 子 顕 微 鏡.
(3) マ ウス 白血 病 細 胞 に おけ る細 胞 表 面構 造 と出 芽 ウ イ ル スの電 子 顕 微 鏡 的研 究 HFS‑9. (日 立)で 観 察 し た. Ⅲ. 結. 胞 は,直 径4〜5μmで はmicrovilli,. 果. 1075. あ り,F‑E像(写. 真‑7)で. ruffled membrane等. の 横断 面 は ほ. とん どな く,表 面 は 平 滑 で あ った.ま た,こ れ らの マ ウ ス 白血 病 細 胞 は,無 的 に 割 断 さ れ,細. 構 造 の 氷 の 中 で,三. 胞 表 面 を 示 す 像,細. 次元. 胞 質 と核 の 割. 断 面 を示 す 像 お よ び 細 胞 質 は 割 断 され て い る が 核 は 割 断 さ れ ず に 残 っ て い る像 な ど が 観 察 され た.細 表 面 お よ び 細 胞 外 に は,約100nmの. 胞. 形 質 を 背 に す る 面 をFractured F.)外. (E.. protoplasmic. 界 に 接 す る面 をextracellular. face surface. で割 断 され露 出 した細 胞 は 巨 大 な核 を有. し,細. 胞 質 内 に は 小 胞 体(endoplasmic. E. R.)と ‑1. ,. reticulum. 多 くの 空 胞 様 の 構 造 物 が 観 察 さ れ た(写 3お. よ び11).核. 膜 の 横 断 面 で は,核. 膜 が 一 部 分 割 断 さ れ て お り,さ. 真. の 核 孔 が 存 在 し,そ. の 分 布 は 不 均 一 で あ つ た.外. の 核 孔 に 対 応 し て,内. 核,. E. R.お. 薄 切 片 像(写. 真‑2)に. 核. おいて も. 数 の ミ トコ ン ド リ ア と 空 胞 と. た 細 胞 外 に は,多. くの ウ ィ ル ス 粒 子. 2). 中 央 部 は,割. P. F.が. P. F.上. 断 に よ りE. S.が. praticle,. 150nm,長. 染色 像 お よ びF‑E像(写. 真‑9‑b)の. 何 れ にお い. て も観 察 され な か っ た,こ の こ とは,ウ イル ス粒 子 構 造 が,か な り不 安 定 な もの で あ り,濃. 縮,精 製 の過 程 お よ び試 料 作 製 の過 程 で容 易 に脱 落 4). 遊 離 ウ イル ス粒 子 の微 細 構 造. 細 胞 と同 時 に 凍 結 した ウ イル ス粒 子 のF‑E像. に. お い て, Pt‑Pd線. で シ ャ ドウ イ ング を 行 っ た場 合. (写真‑9‑c),多. 少不 明瞭 で は あ っ た が ウ イル ス. 粒 子 表 面 に直 径 約10㎜ の球 状 のknob様. 構造が観察. ャ ドウ イ ン グを行 った写. は,ウ イル ス粒 子 の 凸面 と凹面 像 が よ. り明 瞭 に 観 察 され,表 面 の 微 細 構造 も観 察 され た. 凸 面 ウ イル ス粒 子 の周辺 に は約10‑12nmのknob様. に 見 え る もの もあ った(矢 印‑1). 存 在 し,ま. た細胞 おP.. F.. つ は,直. 円 形 の 構 造 物,他. の. 径 約70〜150nmの の 一 つ は,幅100〜. の 細 長 い 構 造 物 で あ り,. 両 者 と も細 胞 質 と 同 一 の 内 部 構 造 を示 し て い た.写 真 一5の. 白 血 病 細 胞 の 走 査 電 子 顕 微 鏡 像 と比 較 検 討. し て,前. 者 はmicrovilliの. ruffled. membraneの. 横 断 面 で あ り,後 者 は. 割 断 面 で あ る と考 え られ た.. で は 走 査 電 子 顕 微 鏡 に み られ たblebs. の 割 断 面 と考 え ら れ る も の は,観 ま た,白. 濃 縮 後,数 回 の遠 心 操 作 で 精 製 し た. 構 造 が 認 め られ,周 辺 を一 様 に取 り巻 い て い る よ う. さ1400〜2000㎜. し か しF‑E像. ま た, PEGで. の 細 胞 膜 内 粒 子(intra. れ ら と は 明 ら か に 区 別 出 来 る2つ. 構 造 物 が 認 め ら れ た.一 球 形 ま た は,楕. おいて. 構造 物 が観 察 され た.. I. P.)が. 外 ウ イ ル ス 粒 子 の 凝 集 像 が 観 察 さ れ た.な の 表 面 に は,こ. 取 り除. 露 出 し て い る 白 血 病 細 胞 の 像 を 示 す.. に は,約10nm径. membranous. ネガ テ ィブ染 色 を行 っ た もの(写 真‑9a)に は,一 部 に長 さ約8nmのknob様. 真(9‑d)で. 細 胞 表 面 に 存 在 す る構 造 物 の 形 態. か れ,. 材料 を使 用 し,̀フ リー ズ ・ドラ イ ング法 を応 用 して. され た.他 方, Pt線 で,シ. と細 胞 残 渣 の 凝 集 像 が 観 察 さ れ た.. 写 真‑4の. ブ染 色 に よ る観 察. す るこ とを意 味 す る もの と考 え た. 側. 側 の 核 膜 に も直 径100nmの. よ び,多. が 観 察 さ れ,ま. 真‑8).. お よび ネ ガテ ィ. 超 遠 心 操 作 を一 回 だ け に と どめ た粗 精 製 ウ イル ス. のknob様. 真‑3. らに 明瞭 な. 核 膜 の 二 重 構 造 が 観 察 さ れ 核 膜 上 に は 直 径 約100㎜. 孔 が 存 在 し た.超. で観 察 出来 た,(写. 精 製 ウ イル ス粒 子 のF‑E法. ウ イル ス材 料 で は, knob様 構 造 は 粒 子 の ネ ガ テ ィ. 膜 が二 重. 構 造 を 持 つ こ と が は っ き り と観 察 さ れ た.写 で は,核. 3). た もの に お い て は, knob様 構 造 は観 察 され なか っ た.. 細 胞 質 内 の 小器 官 の形 態. F‑E法. 子 の凝 集 像 もF‑E法. しか し,同 一 の材 料 に通 常 の ネガ テ ィブ染 色 を行 っ. S.)と 称 す る. 1). さ らに 白血 病 細 胞 間 に存 在 す る多 数 の ウイ ル ス粒. 球 形 粒 子 も同 様 に. 観 察 さ れ た.な おFreeze‑Etching Nomenclature 20)に 基 き , F‑E法 に よ り割 断 さ れ た原 形 質 膜 の 原. (P.. 所 見 は,走 査 電 子 顕 微鏡 に よつて も同様 に確 認 され た.. 察 さ れ な か っ た.. 血 病 細 胞 の 直 径 は,約8〜10μmで. 表 面 構 造 を 持 っ て い た が,対. 種 々 の.. 照 の正 常 マ ウス胸 腺 細. .また凹 面 の ウ イ. ル ス粒 子 の周 辺 に もknob様 構 造 が認 め られ(矢 印‑ 2),さ らに 凹 面 の 中 に も約10nmの 同 様 構 造 の残存 が 認 め られ た(矢 印‑3). な お凍結 防止 剤 としてDMSOを 真‑9‑b)と. 用 い た 場 合(写. グ リセ リンを用 い た場 合 とで は,ウ イ. ル ス粒 子 の 表面 構 造 の 差 は観 察 され な か った . 5). 細 胞 表 面 に おけ る出芽 ウ イ ル ス粒 子 の 構 造. 写 真‑10は,細. 胞 表 面 膜 よ りの ウ イ ル ス粒 子 の 出. 芽 を示 す超 薄 切 片 像 で あ る.出 芽 し た ウ ィ ル ス粒 子 の 中 に はelectron. denseなcoreを. ル ス 粒 子(矢 印‑a)や,リ. 持 った 成 熟 ウイ. ング状 のcoreを. 未 熟 ウ イル ス粒 子(矢 印‑6)が. 持 った. 観 察 され,こ. れら. の 粒 子 が小 さな凝 集 塊 を形成 して い る(矢 印‑1). ..
(4) 1076. 藤. 尾. さ ら に 出 芽 途 中 の ウ イ ル ス 粒 子 も観 察 さ れ(矢 2,. 3,. 4),. coreを. (R. N. P)の. 2,. 3)の. 印‑4),さ. 状 か ら,よ. 7). り進 ん だ. ら に は 馬 蹄 状(矢. もの が 観 察 さ れ る.ま. た,細. 印‑. F‑E像. で もmicrovilliか. 出 芽 が 観 察 され た(写. 印‑. 入,矢. 印).走. お い て は 観 察 さ れ な か っ た.. 写 真‑15は. 正 常 胸 腺 細 胞,写 で あ る. AはE.. P. F.上. のI. P.がE.. ついて 白血 病 細 胞. B.はP.. F.を. 示 す.. の 粒 子 よ り多 く, I. P.は. 血 病 細 胞 と 単 層 を形 成 す る 白. 血 病 細 胞 で のI. P.の. 査電子. 真‑16は. S.,. S.上. 正 常 胸 腺 細 胞 よ り,白. らの ウ ィ ル ス 粒 子 の. 真‑10挿. F.に. 正 常 胸 腺 細 胞 と悪 性 細 胞 のI. P.に. のF‑E像. 胞 膜 に付 着. し た 成 熟 ウ イ ル ス 粒 子 も同 時 に 観 察 さ れ た(矢 5).. 司. 白 血 病 細 胞 のP.. 構 成 す るribonucleoprotein. 形 態 に 応 じ て,弓. 状 態 の 半 円 状.(矢. 印‑. 幸. 差 は 認 め ら れ な か っ た. IV. 考. 按. 顕 微 鏡 に よ っ て も ウ イ ル ス 粒 子 の 出 芽 が 認 め られ, 細 胞 表面 で の ウ イ ルス粒 子 の 凝集 が明 瞭 に観 察 され た(写. 真‑6).. 水 分 を 含 有 し た ま ま の 生 物 試 料 を,本. 能 な 限 り近 い 状 態 で 観 察 す る ζ と を 目 的 と し て 研 究,. 出 芽 に 伴 う細 胞 表 面 の 変 化 お よ び細 胞 膜 間 の 変 化 を さ ら に 詳 細 に 観 察 す る為 に,細. 胞表 面 に お け るウ. 開 発 さ れ た の が,フ. リー ズ.エ. etching. よ び フ リー ズ ・フ ラ ク チ ャー 法. methods)お. イ ル ス 粒 子 の 凝 集 像 と 出 芽 像 を よ り 多 く示 す 単 層 の. (Freeze‑fracture. 白 血 病 細 胞 を 浮 遊 させ てF‑E処. 法 に よ っ て,従. 胞 膜 の2つ. 理 を 行 っ た 後,細. の 割 断 面 即 ち, E.. れ に つ い て 電 顕 観 察 し た.写. S.とP.. F.の. 真‑11は,細. それぞ 胞 のE.. を示 し,表 面 に は 出 芽 粒 子 に相 当 す る80〜100nm径 小 降 起(写 印)が 多 数 観 察 され,そ 10nm径. のknob様. a点 線 矢 印)。. S の. の 辺 縁 に は 約8‑. 構 造 物 が 認 め られ た(写 さ ら に,細. の 小 粒 子(写. 真‑14‑. 真‑14‑a点. 線 矢 印)が. あ る.こ. れ らの 方. 来 の 手 段 で は不 可 能 で あ っ た細 胞 膜. 断 は 膜 の 疎 水 性 の2分. ち割. 子 層 の 中 間 に お き る の で,細. 胞 形 質 膜 の 中 層 を 露 出 し,そ. の 部 位 の 所見 を読 み と. る こ と が 出 来 る の で あ る21) ウ ス 白血 病 ウ イ ル ス を産 出 して い る白 薄 切 片 法 に よ る 透 過 電 顕 観 察,. な ら び に 同 細 胞 の 走 査 電 顕 観 察 を 行 い,出. 芽 粒子 と. 細 胞 表 面 膜 を 中 心 に 形 態 学 的 観 察22)を 行 う と共 に,. 6). P. F.に. お け る 出 芽 ウ イ ル ス 粒 子 の 構 造 と細 胞. 膜 内 粒 子(intramembranous. particle,. I. P.). 写 真‑12,. 13はP.. F.を. 示 し,一 様 に 約8.5〜12nm. 径 のI. P.が 観 察 さ れ る がI. P.が 認 め られ な か っ た.矢 存 し て い るE. S.を 10nm径. 印‑1はP.. 示 し,そ. 表 面 が 平 滑 な80〜100nm径. F.上. の 表 面(E.. よ びmicrovilliの. は コ ア(core)が は,. には. の 研 究 に よ っ て 明 ら か と な っ た14).23),24).し. 観 察 さ れ る.ま. 印‑4)が. た 細 胞 外 に は 出 芽 を完 了 し た ウ イ ル. c, dは,. の ウ イ ル ス粒 子 と. 考 え られ る 構 造 物 の 強 拡 大 で あ る.写 の 凸 面 を 示 す 円 形 の 構 造 物(細 で 表 面 平 滑 で あ る.写. 直 径80nmでbの. 真‑bの. 長 矢 印)は,直. 真‑cの. 径約. 凸 面 の構 造 物 は,. 像 と 同 様 で あ る が,写. よ り少 し強 く隆 起 し て い る.こ. 中 央. 真‑bの. もの. の隆起 の周 辺 には. I. P.は 存 在 す る が,隆 起 上 に は 観 察 さ れ な い.写 真‑ お い て は,凹. 面 の 構 造 が み られ,そ. ㎜ 径 の 小 粒 子 が 存 在 す る.こ. の 辺 縁 に 約10. の 凹面 の構造物 は 浮遊. ンベ ロー プ の 周囲 に. か. し な が らこの ウ イル ス粒 子 の 精 製 は容 易 で は な い こ と,ま. た こ の 粒 子 は 形 態 学 的 に も物 理 的 影 響 を 受 け 子 の 微 細 構 造 を 正 し く把 握 す. る上 で の 障 害 と な っ て い る.し 造 物 を 解 析 す る に は,フ. P. F.上. 心 に. 呼 ば れ る 突 起 物 が存 在 す る こ と が 最 近. 易 い と い う事 実 が,粒. ス 粒 子 が 観 察 さ れ る. 写 真‑14‑b,. 存 在 す る.エ. 有 し,中. も約. knobと. ウ. ほ ぼ球 形 粒 子 であ っ. S.)に. 構 造 物(矢. 割 断 面(矢. 径 約100nmの. て 最 外 側 に エ ン ベ ロ ー プ(envelope)を. に 一 部 分 を残. の 出 芽 ウ イ ル ス 粒 子(矢. 面 を 形 成 し 平 滑 で60〜100nmの. 印‑3)お. を試 み たの であ る .. イ ル ス に 属 し,直. 凝 集 を 形 成 す る像 は. の 粒 子 が わ ず か に 観 察 さ れ る. P. F.上. 印‑2),凹. さ ら に 細 胞 膜 中 間 層 の 形 態 学 的 観 察 を 目 的 と し てF ‑E法. 一 般 に マ ウ ス 白 血 病 ウ イ ル ス は 形 態 学 的 にC型. の 分布. dに. methods)で. 血 病 細 胞 に つ い て,超. 散 在 性 に存 在. ッ チ ン グ 法(Freeze.. 間 の 情 報 を 得 る こ と が 出 来 る よ う に な っ た.即. 著 者 は,マ. 胞 表 面 全 体 に8〜10nmの. し た.. 70㎜. 来 の姿 に可. 法 が 有 利 で あ り,特. た が っ てknob様. 構. リー ズ ・ ドラ イ 法 やF‑E. にDemsey等25)はC型. ウ イ ル. ス 粒 子 産 生 細 胞 を フ リ ー ズ ・ ド ラ イ 法 で 観 察 し,明 らか なknob様 法 でC型. 構 造 を 認 め た.し. か し な が らF‑E. 粒 子 を 解 析 し た 報 告 も比 較 的 乏 し く15),26),. し た が っ て 著 者 も こ の 方 法 でknobの. 有無 を確認 し. た い と考 え た. 通 常C型 断 さ れ, れ,. ウ イ ル ス粒 子 で は エ ンベ ロー プ の み が割 core. detergent処. membraneま. で は 割 断 で きな い と さ. 理 に よ りエ ンベ ロ ー プ を溶 解 しな.
(5) マ ウ ス 白血 病細 胞 に お け る細 胞 表 面 構 造 と出芽 ウ イル ス の電 子 顕 微鏡 的 研 究. 図I. 1077. ブ リー ズ ・エ ッ チ ン グ 法 に よ る ウ イ ル ス 粒 子 の 割 断 模 式 図. B. A. F,P,; fractured plane け れ ばcore. membraneは. 観察 出来 な い と考 え ら. れ て い る.ウ イ ル ス粒 子 の 割 断 様 式 に つ い て, Bachi 27)は イ ン フ ル エ ン ザ ウ イ ル ス を 用 い た 実 験 で,エ. ン. ベ ロ ー プ の 二 重 膜 の 間 で 行 な わ れ る と 述 べ て い る が,. 真‑12,. 13,. Gross白. 血 病 ウ イ ル スの 出 芽 様式 を次 の 様 に考 え た. 14)と. を 対 比 し て,. 1). 写 真14‑bに. 示 さ れ て い る よ う に,. わ ず か な 隆 起 が あ り,し. 等15)は,割. I. P.が 認 め ら れ な い 像 は,切. brane上. のsubunitも. mem. 観 察 さ れ る と報 告 し て い る が,. 著 者 はC型. ウ イ ル ス 粒 子 の 割 断 が,図Iに. 示 され お い ては エ. P.が. ンベ ロ ー プ の 二 重 膜 の 間 で 割 断 さ れ,そ. の後 エ ッチ. 真10‑2,. (写 真‑9‑d,矢. 露 出 して観 察 さ れ る場 合. 印‑2)が. 示 さ れ,. Bは. エンベロ. か も そ の 表 面 は 滑 ら か で, 片 像 のR.. 隆 起 の 高 さ が 約50〜60nmで. て い る 像(写. る様 式 で お こ る も の と 考 え て い る. Aに. ン グ に よ り周 囲 のknobが. P. F.に. N.. P.が. 真13‑5,. ほ ぼ半 球 状 を示 し. 14‑c)は,切. 片 像 で はR. N.. 半 円 状 ま た は 馬 蹄 状 を 示 す と考 え られ,即 10‑4に. 写 真14‑aが 3). 相 当 す る もの で,. E.. S,上. 径 の 構 造 物(写. み が 取 り除 か れ た 状 態(写. 真12‑3,. 真‑9‑d,矢. 示 す.. 子 が な お 細 胞 表 面 に 付 着 し て 存 在 す る 為 に,細. Demsey等25)は,モ. ロニ ー 白血病 ウイ ル ス感 染 細. 胞 を フ リー ズ ・ ドラ イ ン グ 処 理 を行 っ た 後 電 顕 観 察 し,細. 胞 表 面 の ウ イ ル ス 出 芽 部 位 に 相 当 し て, knob. の 集 積 が あ る こ と を 報 告 し て い る.し っ た 観 察 で は, に は,少. E. S.上. 数 のknobが. こ の 理 由 は,. F‑E法. か し著 者 の 行. の 出芽 ウ イル ス粒 子 の 表 面 観 察 さ れ た に す ぎな か っ た. を行 な う こ と に よ り, E,. 上 の 出 芽 ウ イ ル ス 粒 子 のknobが. S.. 剥 離 す る為 と考 え. 14‑d)は,出. Yuen等23)は,温 ル ス を 用 い て,超. 度感 受 性 の モ ロ ニ ー白血 病 ウ イ 薄 切 片 法 に よ り細 胞 膜 上 の 出 芽 ウ. イ ルス 粒子 の形 態 形 成 に関 す る詳 細 な研 究 を行 い細 胞 膜 か ら 出 芽 す る ウ イ ル ス のribonucleprotein N. P.)の 配 置 が,最. 初 は 弓 状(arc)と. 円 形(semi‑circle),つ. づ い て 馬 蹄 状(hor. 後 に 輪 状(ring)と. 著 者 は,超 薄 切 片 像(写. (R.. な り,次 に 半 seshoe). な る と 述 べ て い る.. 真‑10)と,. F‑E像(写. 芽 後 の ウイルス粒. 接 関 連 し た 構 造 か も し れ な い.い. ず れ に せ よ現 在 の. の 詳 細 は 不 明 で あ る.. Sheffield28)は,マ villiか. ウ ス 乳 癌 ウ イ ル ス のmicro. ら の 出 芽 をF‑E法. ィ ル ス 粒 子 が 接 す るP. P.の. 胞膜. るい は 出芽 そ の もの に直. を 用 い て 観 察 し,出 芽 ウ F.上. の 部 分 は 滑 ら か で,. I.. 消 失 が お こ る こ と を 報 告 し て い る.今 回 著 者 は. マ ウ ス 白 血 病 ウ ィ ル ス に お い て も同 様 に,ウ 出 芽 部 位 に お い てI. P.が. られ る.. に な り,最. 13‑3,. 面 に 生 じ た もの な の か,あ. 所,そ. ち写 では. 対 応 す る 像 と 考 え ら れ る.. 凹 面 で 表 面 が 滑 ら か な 約100㎜. ー プ 上 に 存 在 す るknobの 印‑3)を. 弓. 状 を 示 し て い る もの と 対 応 す る と考 え ら れ る. 2). 著 者 は 観 察 出 来 な か っ た.. における. (図‑Ⅱ).. ス パ イ ク の 剥 離 に つ い て は 言 及 し て い な い. Nermut 断 さ れ た ウ イ ル ス粒 子 で はcore. P.F.上. イル ス. 消 失 す る こ と を 観 察 し た.. ウ イ ル ス の 出 芽 部 位 のP.. F.上. にI. P.が. 存在 し. な い 理 由 と し て は,こ の 部 位 でI. P.の 移 動 が お こ り, I. P.の. 存 在 し な い 面 を形 成 す る か,あ Pが 形 成 さ れ る に 従 っ てP.. る い はP. F.. 下 でR.. N.. I. P.が. 排 除 さ れ た 状 態 に な る と い う2種. あ り う る が,そ. Fが. 伸 展 し, の 考 え方 が. の何 れ で あ るか につ いて は現 段 階 で. は 明 らか で な い. な おI. P.の. 分 布 に つ い て は,試. 料 作 製 の条 件 に よ.
(6) 1078. 藤. 図 Ⅱ. 尾. 幸. 司. フ リー ズ ・エ ッチ ン グ 像 に よ る 出 芽 ウ イ ル ス 粒 子 の 模 式 図. 1). 2). 3). 4). F. P.: fractured plane E, S,: extracelullar surface P, F,: fractured protoplasmic face I. P.: intramembranous particle R. N.P.: ribonucleoprotein. って変 化 す る とい う報 告29)や,こ. の 条件 が同一 であ. 導 下 さ っ た 市 川 弘 幸 博 士 に 感 謝 の 意 を 表 し ま す,ま た,. って もマ ウスのT細 胞 とB細 胞 とではI. P.の 分布 の. 種 々 の 御 援 助 を 下 さ っ た ウ イル ス 学 教 室,細 菌 学 教 室. 上 に 差 が あ り,こ れ に よ って両 細 胞 を 区別 し よ うと. 及 び,電 子 顕 微 鏡 室 の 方 々 に心 か ら感 謝 い た し ま す.. した 試 み30,さ らに悪 性 細 胞 と正 常 細 胞 との間 に I. P,分 布 の差 が あ る とい う報 告31)な どが あ る.後 者. 尚,本. 論 文 の 要 旨 は,昭. 和52年6月12日,第33回. 日 本 電 子 顕 微 鏡 学 会 で 発 表 し た.. に 関連 して著 者 の 用 い たマ ウ ス胸 腺 白 血病 細 胞 は,. V. 結. 語. 正 常胸 腺 細 胞 に比 して, I.P.の 分 布 密 度 が 幾 分高 い よ うに思 わ れ た.そ の他 植 物 レクチ ンの作 用 にお け る. Gross. passage. Aウ. ィ ル ス に よ り誘 発 さ れ た マ. I.P.の 分布 の 変 化32).33),や,各 種 薬 剤 作 用 下 に お. ウ ス 胸 腺 白 血 病 細 胞 の 形 態 な ら び に,そ. け るI. P.の 凝 集 性変 化34)を追 究 した報 告 な どが ある.. 在 す る ウ ィ ル ス 粒 子 の 構 造 を フ リ ー ズ ・エ ッ チ ン グ. 著 者 の 研 究 に 関連 して,ウ イ ルス 出芽 部 位 に お け る膜 の抗 原 性 変 化 が どの よ うな 機 構 で起 こ るの で あ. の 表面 に存. 法 に よ り研 究 し た. 細 胞 表 面 に は,. microvilli,. ろ うか.即 ち特 に エ ンベ ロー プ蛋 白の 細胞 表 面膜 へ. の 割 断 面 が 認 め ら れ,ま. の組 み込 み の 様 式 と,こ れ のI.P.の 分 布 に及 ぼ す影. 観 察 され た.ウ. 響 と を 明 らか に す るこ とが 今後 必 要 に な る もの と考. knob様. え る.. が,細. ruffled. menbrane. た出 芽 中 の ウ イ ル ス粒 子 も. イ ル ス 粒 子 の 表 面 に は,. 10nm径. の. 構 造 物 が 存 在 して お り,そ れ に 類 似 し た 構 造 胞 外 に 存 在 す る100nm径. の 球 形 ウイルス粒 子. の 表 面 に も認 め られ た.. Ⅳ. 謝. 辞 Fractured. 稿 を終 るに 臨 み 御 指 導,御 校 閲 を賜 っ た恩 師俵 寿 太郎 教 授 に 深 甚 の 謝 意 を捧 げ ま す と共 に,直 接 御 指. 8.5〜12nm径. protoplasmic. face. のintramembranous. が 一 様 に 存 在 し て お り,ま. (P.. F.)に. particle. たI. P.の. は, (I. P.). 数は 正常 胸 腺.
(7) マ ウ ス 白血 病 細 胞 に お け る細胞 表面 構 造 と出 芽 ウ イル ス の電 子 顕 微鏡 的研 究. 細 胞 に比 べ,幾 分 増 加 して いた. P. F.上 には出芽 中. そ の 表 面 は 滑 らか で,そ. の ウ イル ス 粒子 と思 わ れ る球形 状 の隆 起 も存 在 し,. い の が 特 徴 で あ っ た.. 文 1) Bernhard,. W.:. 491-509, 2) Gross,. Electron. microscopy. 1079. こ に は,. I. P.が. 認 め られ な. 献. of tumor cell. and tumor viruses.. Cancer. Res.,. 18,. 1958. L.:. 3) Luftig,. Oncogenic. R. B.,. type virion 4) Porter,. viruses.. McMillan,. assembly. K. R.,. 2nd,. P. N.. in mouse cells.. Todaro,. Dergamon,. Oxford,. and Bolognesi, Cancer. G. J. and Fonte,. Res.,. V.:. 286-469,. D. P.:. 1970.. An ultrastructural. 34, 3303-3310,. A scanning. study of C. 1974.. electron. microscope. study of sur. face feature of viral and spontaneous transformants of mouse BALB 3T3 cells. J. Cell Biol., 59, 633-642, 1973. 5) Wong, P. K. Y. and MacLeod, R.: Studies on the budding process of a temperature-sensitive mutant of murine leukemia virus 1975.. with a scanning. 6) Moor, H.: Freeze-etching.. Int. Rev. Cytol.,. 7) Marchesi,. T. W., Jackson,. V. T.,. Tillack,. cal characterization brane.. and orientation K.:. 17, 609-628, 1963. 9) Remsen, C. C. and Watson,. microscope.. 25, 391-412, R. L.,. 16,434-442,. Segrest,. J. P. and Scott,. R. E.:. Chemi. of the human erythrocyte. mem. 1972.. Fine structure. S. W.:. J. Virol.,. 1969.. of the major glycoprotein. Proc. Nat. Acad. Sci., 69, 1445-1449,. 8) Moor, H. and Muhlethaler,. electron. of the frozen-etched. Freeze-etching. of bacteria.. yeast. cells. J. Cell Biol,. Int. Rev. Cytol.,. 33, 253. -296, 1972. 10) Singer,. S. J.. ranes.. and Nicolson,. Science.,. 11) Brown, D. T. and Riedel, scope observations 12) Brown, D. T., virus. G. L.:. 175, 720-731,. The fluid mosaic model of the structure. B.: Morphogenesis. with. freeze. fracture. of vesicular techniques.. Waite, M. R. F. and Pfefferkorn,. as seen with freeze-etching. 13) Virtanen,. I. and Wartiovaara,. with semliki forest. virus. of cell. mem. 1972.. J.:. J. Virol.,. Virus-induced. virus:. micro. 1977.. and morphogenesis. 10, 524-536,. cytoplasmic. Electron. 21, 601-609,. E. R.: Morphology. techniques.. infection. stomatitis. J. Virol.,. membrane. studied by the freeze-etching. of sindbis. 1972. structures. associated. method. J. Virol.,. 13, 222. -225, 1974. 14) Sheffield, fracture. J. B.: Envelope of mouse mammary tumor virus techniques.. J. Virol.,. 15) Nermut, M. V., Frank, microscopic freeze drying. appearance. 616-624,. H. and Schafer, as revealed. and freeze-etching.. Virology.,. 16) Imagawa, D, T., Issa, H. and Nakai, M.: lymphoma cells in vitro. 17) Marra,. M. and Imagawa,. Cancer. Res.,. D. T.:. I. In vitro and in vivo properties. 18) Marra, II.. M. and Imagawa,. Oncornavirus. D. T.:. production.. and freeze. 1973.. W.: Properties. after. studied by freeze-etching. conventional. of mouse leukemia viruses. preparation. 49, 345-358, Cultivation. Characteristics Characteristics. J. Natl. Cancer. virus-induced. virus-induced. Inst.,. 57, 1127-1131,. leukemia. thymic. 57, 1133-1138,. cell. clone .. 1976.. of Gross virus-induced Inst.,. murine. 1968.. of Gross. J. Natl. Cancer. III. Electron. as well as. 1972.. of Gross. 28, 2017-2026,. techniques. 1976.. leukemia. cell. clone ..
(8) 1080. 藤. 19) Baluda,. M. and Goetz,. blastosis 20) Branton,. virus. Virology., D., Bullivant, S.,. cote, D. H.,. Packer,. Weinstein, R. S. 21) Miihlethaler, K.:. I. E.:. 尾. 幸. Morphological. 司. conversion. 15, 185-199, 1961. Gilula, N. B., Karnovsky,. L., Satir,. B.,. Satir,. of cell. cultures. by avian. M. J., Moor, H., Muhlethaler,. P., Speth, V., Staehlin,. L. A.,. myelo K., North. Steere,. R. L. and. Freeze-etching nomenclature. Science., 190, 54-56, 1975. Studies on freeze-etching of cell membrane. Int. Rev. Cytol.,. 31,. 1-. 19, 1971. 22) Ichikawa, H., Uno, F. Fuj io, K., Tsutsui, virus-induced -101, 1977.. lymphoblasts. 23) Yuen, P. H. and Wong, P. K. Y.: of murine logy.,. leukemia virus. 80, 260-274,. 24) Schafer,. M.:. K. and Tawara,. by scanning. electron. A morphological. using a temperature. J.:. Morphological. microscopy.. Acta Med.. studies. Okayama.,. study on the ultrastructure. sensitive. mutant restricted. of Gross 31, 95. and assembly. in assembly.. Viro. 1977.. Oncorna viruses. I:. Virus-cell. interactions. Bibl. Haemat., 43, 88-96, Comparative leukemia reserch, 25) Demsey, A,, Kawka, D. and Stackpole, C. W.: Application. and virus. structure. 1975. of freeze-drying. analyses.. intact. cells. to. studies of murine oncornavirus morphogenesis. J. Virol., 21, 358-365, 1977. 26) Schwarz, H., Hunsmann, G., Moenning, V. and Schafer, W.: Properties of leukemia viruses. XI Immunoelectron logy.,. microscopic. 69, 169-178,. 27) Bachi, T., A virus. Gerhard,. in Ehrlich. J. Virol.,. 4,. on viral. structural. antigens. on the cell surface.. Lindenmann, J. and Mahlethaler,. ascites. tumor cells. as revealed. K.:. Morphogenesis. by thin-sectioning. 30) Mandel, T. E.:. of influenza. and freeze-etching.. 1969.. Membrane. alteration. which accompany. MuMTV maturation.. I. Studies. freeze-cleave techniques. Virology., 57, 287-290, 1974. 29) Mclntyre, J. A., Gilula, N. B. and Karnovsky, M. J.: Cryoprotectant-induced of intramembranous. Viro. 1976. W.,. 769-776,. 28) Sheffield, J. B.:. studies. particles. in mouse lymphocytes.. Intramembranous. marker. J. Cell Biol.,. in T lymphocytes.. redistribution. 60, 192-203,. Nature. by. 1974.. New Biol.,. 239, 112-114,. 1972. 31) Torpier,. G., Montagnier,. L., Biquard, J. M. and Vigier, P.:. A structural. plasma membrane induced by oncogenic viruses: Quantitative technique. Proc. Nat. Acad. Sci., 72, 1695-1698, 1975. 32) Pinto. da Silva, P. and Martinez-Palomo,. junctions in normal and transformed ed with concanavalin A. Proc. Nat. 33) Guerin, E.L.:. C., Zachowski, Correlation. between. nation by concanavalin Acad. Sci., 34) Frucht,. A., Prigent,. the mobility. 1974.. L. T. and Scott,. R. E.:. cine on membrane. organization. Distribution cells Sic.,. B., Paraf,. A in two cell. 71, 114-117,. - 282, 1975.. A.:. 3T3 Acad.. Effect. of membrane particles. and gap and treat. Diawara,. plasma membrane. M. and Benedetti,. structure. of MOPC 173 plasmocytoma. of vinblastin. of normal. withe freeze-fracture. studied in situ, in suspension, 72, 572-576, 1975.. A., Dunia, I.,. of inner. lines. studies. change of the. sulfate,. and transformed. cells.. and aggluti. cells.. colchicine Exp. cell. Proc.. Nat.. and lumicolchi Res.,. 96, 271.
(9) マ ウス 白血 病 細 胞 に お け る細 胞 表 面構 造 と出芽 ウ イ ル スの電 子 顕 微 鏡 的研 究. 写. 真. フ リ ー ズ ・エ ッ チ ン グ 像 で の 太 く短 か い 黒 矢 印 は, シ ャ ドウ イ グ の 方 向 を 示 す.ま. た,. Pt‑Pd,. Pt. 説. 1081. 明. で あ る.:. Pt. (c)細 胞 間 の ウ イ ル ス 粒 子 の フ リー ズ ・エ ッチ ング 像.. は シ ャ ド ウ イ ン グ の 金 属 を 示 す.. ウ イ ル ス 粒 子 の 周 辺 にknob構. 造 が 存 在 す る.. 写 真‑1. Pt‑Pd. 白 血 病 細 胞 の フ リ ー ズ ・エ ッ チ ン グ 像 で,割. 断 は. 種 々 の 面 で 行 な わ れ て い る. シ ャ ド ウ イ ン グ 金 属:. (d)細 胞 間 の ウ イ ル ス 粒 子 の フ リー ズ ・エ ッ チ ン グ 像.. Pt‑Pd. ウ イ ル ス 粒 子 の 周 辺 に 明 瞭 なknob構. 写 真‑2. れ,一. 白血 病 細 胞 の 超 薄 切 片 像 で,核 に 多 数 の ミ トコ ン ド リ ア,細. の 一 部 と細 胞 質 内. 胞外 に ウ イル ス の凝 集. 像 が 認 め られ る.. 造 が認 め ら. 様 に 周 囲 を 取 り巻 い て い る.(矢. き る像.(矢. 凹 面 の 中 に,. knobが. 存 在 す る像.(矢 :. 白 血 病 細 胞 の フ リ ー ズ ・エ ッ チ ン グ 像 で,巨 核 を残 し て 割 断 さ れ て お り,そ. 大な. の核 膜 が 二重 構 造 で. あ る の が 観 察 さ れ る. 矢 印:小. Pt‑Pd. 白 血 病 細 胞 の 超 薄 切 片 像:. dense. 写 真‑4. ruffled. 断 面 が 認 め られ る.. 胞表. membraneの. 矢 印‑b:. ring状. 横. Pt‑Pd. のcoreを. 持 っ た未 熟 ウ イ ル ス virion).. 蹄 状 のribonucleoprotein. (R. N. P.). を 持 つ 出 芽 ウ イ ル ス 粒 子.. 白 血 病 細 胞 の 走 査 電 子 顕 微 鏡 写 真 で,細 はmicrovilli,. ruffled. membrane,ウ. 胞表面に. 矢 印‑3:. イ ルス粒. microvilliよ. R. N.. 写 真‑6. 矢 印‑4:半. 白 血 病 細 胞 表 面 の 高 倍 率 走 査 電 子 顕 微 鏡 像.白. 血. 病 細 胞 上 に ウ イ ル ス 粒 子 と そ の 凝 集 が 認 め られ,出. り 出 芽 さ れ る ウ ィ ル ス 粒 子.. microvilliの. 子 が 存 在 す る.. 中 に 次 の ウイ ル ス粒子 の. P.が. 形 成 され て い る.. 円 状 のR.. N.. P.を. 持 つ 出 芽 ウ イ ル ス粒. 子. 矢 印‑5:細. 芽 中 の ウ ィ ル ス 粒 子 も認 め られ る.. 胞 表面 に付 着 して い る成 熟 ウ イ ル ス粒 子.. 写 真‑7. 写 真‑11. 正 常 胸 腺 細 胞 の フ リー ズ ・エ ッ チ ン グ 像 表 面 は 平 滑 でmicrovilliは. 少 な い.:. pt. 白 血 病 細 胞 の フ リー ズ ・エ ッ チ ン グ 像 Outer. membraneが. 観 察 され,出. ス に 相 対 応 す る80〜100㎜. 写 真‑8 白血 病細 胞 間 の ウ イ ル ス凝 集 像. (矢 印),隆. 種 々 の 大 き さ の 構 造 物 が 存 在 す る.. が 認 め られ る.:. 右 上 の 写 真 は 高 倍 率 で あ る.ウ. イル ス粒 子 の 表面 は. 写 真‑12,. 芽途 上 の ウ イ ル. 径 の小 隆 起 が み られ る. 起 表 面 に は8〜10㎜. 径 のkn0b様. 構造物. Pt. 13. 白 血 病 細 胞 の フ リー ズ ・エ ッ チ ン グ像. 平 滑 で あ る.. protoplasmic. Bar=0,1μm. (a)フ リ ー ズ ・ ド ラ イ ン グ 法 を用 い た ネ ガ テ ィ ブ 染. 面 に 一 部knob構. 造 が 認 め ら れ る.. (b)精 製 ウ イ ル ス 粒 子 の フ リ ー ズ ・エ ッ チ ン グ像. 凍 結 防 止 剤 と し て,. DMSOを. ド ウ ィ ン グ を 行 な っ た.ウ. 使 用 しPt線. で シャ. イル ス粒 子 の表 面 は平 滑. faceを. 示 す.:. Pt. 矢 印‑1 extracellular. 色 像. 矢 印‑表. 持 っ た成 熟 ウ イ ル ス粒 virion).. 粒 子(immature 矢 印‑2:馬. 写 真‑5. 写 真‑9. coreを. 子(mature. microvilli,. Pt‑Pd. イル ス粒 子 の 凝集 像. 矢 印‑a:. 白 血 病 細 胞 の フ リ ー ズ ・エ ッ チ ン グ 像 で,細. 印‑3) Pt. 写 真‑10. 矢 印‑1:ウ. 胞 体 を 示 す.:. 観察 で. 印‑2). 写 真‑3. 面 を 示 す.. 印‑1). 凹 面 を示 す ウ イ ル ス 粒 子 の 周 辺 にknobが. surfaceの. 小 片 を示 し10nm径. 粒 子 が 存 在 す る. 矢 印‑2 出 芽 中 の ウ イ ル ス 粒 子,表 矢 印‑3. 面 は 平 滑 で あ る.. の.
(10) 1082. 藤. 凹 面 を 示 す60〜80㎜. 尾. 径 の 構 造 物.. 幸. 司 (c)同 上 の 構 造 物,. 表 面 は 平 滑 で あ る.. bよ. (d)凹 面 を 形 成 し,周. 矢 印‑4. り も少 し 隆 起 し て い る. 囲 に 約10nmの. 小 粒 子 が存在す. る.. microvilliの. 割 断面. 写 真‑15. 矢 印‑5. 正 常 マ ウ ス の 膜 表 面 の フ リ ー ズ ・エ ッ チ ン グ 像.. 半 球 状 を 示 す 出 芽 ウ イ ル ス 粒 子.. : Pt. 写 真‑14. A=extracellular. 細 胞 膜 上 の微 細 構 造 (a)extracellular 隆 起 表 面 に8〜10㎜. Bar=0.1μm. surface上 径 のknob構. 印).ま. た 細 胞 表 面 全 体 に8〜10㎜. 印)が. 認 め ら れ る.. (b) protoplasmic. B=protoplasmic. の 出 芽 ウ イ ル ス粒 子 造 が 存 在 す る(矢 の 小 粒 子(点. face上. 示 す. 白 血 病 細 胞 の 膜 表 面 の フ リー ズ ・エ ッ チ ン グ 像.. 線矢. の 出 芽 ウ イ ル ス 粒 子.. で あ る(矢 印).. faceを. 示す. 写 真‑16. : A=extracellularsur. 表 面 は 平 滑 で 直 径70㎜. surfaceを. B=protoplasmic. faceを faceを. 示 す. 示 す.. Pt.
(11) マ ウ ス 白血病 細 胞 に お け る細 胞 表 面構 造 と出芽 ウ イ ルス の電 子 顕 微 鏡 的研 究. 藤 尾. 幸 司 論 文 附. 図. 1083.
(12) 1084. 藤. 藤 尾 幸. 尾. 幸. 司. 司 論 文 附. 図.
(13) マ ウス 白血病 細 胞 に お け る細 胞 表 面 構造 と出芽 ウ イル スの 電 子顕 微 鏡 的 研 究. 藤 尾. 幸 司 論 文 附. 図. 1085.
(14) 1086. 藤. 藤. 尾. 尾. 幸. 司. 幸. 論. 司. 文. 附. 図.
(15) マ ウ ス 白血病 細 胞 に お け る細 胞 表 面 構 造 と出芽 ウ イ ルス の電 子 顕 微 鏡 的 研 究 藤. 尾. 幸. 司. 論. 文. 附. 図. 1087.
(16) 1088. 藤 藤. 尾. 尾 幸. 司. 幸 論. 司 文. 附. 図.
(17) マ ウス 白血 病 細 胞 に お け る細 胞 表 面 構 造 と出芽 ウ ィル ス の電 子 顕 微 鏡 的 研 究 藤. 尾. 幸. 司. 論. 文. 附. 図. 1089.
(18) 1090. 藤 藤. 尾. 尾 幸. 司. 幸 論. 司 文. 附. 図.
(19) マ ウス 白血 病 細 胞 に お け る細 胞 表 面 構造 と出芽 ウ イル ス の電 子 顕 微鏡 的研 究. Electron. microscopic. of Gross virus-induced. murine. study leukemia. 1091. on the surfaces cells and budding. virions. by Kouji FUJIO Department. of Virology, Okayama University Medical School, Okayama (Director:. Prof. Jutaro Tawara). A study was made on alterations in the surface structures of Gross virus-induced murine thymic leukemia cells and budding virions with freeze-etching technique. The budding virions were clearly observed on the fractured faces of cell surface as well as microvilli and ruffled membranes. Knobs, approximately 10nm in diameter, were demon strated on the surfaces of budding virions. Extracellular virions had also the similar structure on their surfaces. On the fractured protoplasmic face (P. F.), 8.5-10nm typical intramembranous particles (I. P.) were arranged smooth semispherical Comparison was thymocytes, showing. randomly without detectable aggregated particles. There also appeared protrusions which could be regarded as budding virions. carried out between numbers of I. P. in leukemia cells and those in normal that I.P. slightly increased in leukemia cells..
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