日本型イネ品種における穂いもち抵抗性遺伝子Pb1を識別する分子マーカーの新たな反応とPb1保有の判別方法

短 報

日

本 型

イ

ネ

品

種

にお け る

穂

い

_も

ち

抵 抗性 遺伝

子

Pb

　

l

を識別 す

る

　　　　

分

子

マ

ー

カ

ー

の

新 た な反 応 と

Pb

　

1

保

有

の

判

別方法

　　　　　　　

日 野

耕 作

1〕

・

片 山寿

人

2〕

・

川

村 容 子

1｝

・

北

村

治 滋

D

l）

滋

賀 県農業技

術 振

興

セ ンタ

ー

（

〒

521 −

1301

滋 賀 県 近 江

八

幡 市 安

土

町 大 中

516

番 地 ）

　

2）

現 滋

賀

県

高島農業

農

村

振 興 事 務 所 （

〒

520 − 1621

高 島 市 今 津 町 今 津

1758

番 地 ）

要 旨 ：日本 型イネ

品種 「

秋の詩 」に穂い も ち 抵 抗 性 遺 伝 子

Pbl

を 付 与 した

「

秋の

詩

同

質 遺伝 子 系統 」 を作 出

す

るため

，

「秋の詩 」に

Pbl

遺

伝

子 を 間

接 的

に 識 別

す

る

分

子マ

ー

カ

ー

（

Bl

，

　

B2

，

　

B4

）

を

使 用

し た

．

し かし

，

「

秋

の詩 」の 遣 伝 子 型は

「

Modan

型

（

Pbl

保 有

型

）

」

と

判 別

さ れ

，

遺

伝

子 型 と

表

現 型 は

一

致 し な かっ た

．

本 研 究 で は

，

「

秋

の

詩 」

と

Pbl

保 有 品種 「

コ シヒカ リ愛 知

SBL

」の本 分 子マ

ー

カ

ー

領

域

（

Pb

．

1

近 傍 領

域

）

の

塩基

配

列

を

解 析

した

．

その 結 果

，

「秋の詩 」 に 対 する本 分 子マ

ー

カ

ー

の 反 応は

，

両 品

種

の塩 基 配

列

の相 同

性

に

起

因 してい るこ とが 明 らかになっ た

．

さら に

，

Pbl

遺 伝

』

f

と

0

，

0cM

で

密接

連

鎖

し てい る分 子マ

ー

カ

ー

（

N3

−

2

）

を使 用

し た

遺 伝 子

型

解析

に よ

り

，

「

秋の詩

」

は

Pbl

遺

伝

子 を 保 有 してい ない ことが 判 明 し た

．

これ らのマ

ー

カ

ー

反 応は

，

日本 型 イ ネ 品 種にお ける新 た な 反 応 事 例であ る

，

今 後

，

日 本 型 イ ネ 品

種

に

BLB2

およ び

B4

マ

ー

カ

ー

を 適

用

し

，

遣 伝 子

型 が 「

Modan

型

」

であっ た場

合

は

，

　

N3

−

2

な どの

他

の

分子

マ

ー

カ

ー

を

併用

し て

再確 認 す

る 必 要が ある と

考

えら れ た

．

キ

ー

ワ

ー

ド ：イ

_ネ

，

_穂

い

_も

ち

，

PbJ

，

分子

マ

ー

カ

ー，

マ

ー

カ

ー

選

抜

緒　　

言

材 料 お よ び 方 法

　

イ

ン ド

型 イ ネ 品

種

「

Modan 」

に

_由

来

す

る

穂

い

も ち

抵 抗性

遺 伝 子

Pbl

を

マ

ー

カ

ー

選 抜 育 種

に よ

り付 与

し

，

穂

い も ち

抵 抗

性

品

種

を

育

成 す

る

試

み が

全 国

で

行

わ れ ている

_（

早 野

・

藤

井

2003，

藤 井

2008

）

．

滋賀 県

で は

2008

年

よ

り

，

愛 知 県

農 業 総 合 試 験 場

お よ び

（

独

）

農研 機 構 北 海

道

農 業 研 究

セン タ

ー

で

開発 さ

れ た

P

醒

選 抜

マ

ー

カ

ー

（

Bl

，

　

B2

お よ び

B4

マ

ー

カ

ー，

遠 山

ら

1998

，

特 許 第

3153889

号 ）

を

利 用

して

，

「秋

の

詩 」 を

は じ め

，

本 県 育 成 品 種

に

Pbl

を付 与 し

た

準 同 質

遺 伝 子

系

統

の

作 出 を始

めた

．

その

過 程

に おいて

Bl

，

　

B2

お よ び

B4

マ

ー

カ

ー

を

「

秋

の

_詩

_」

に

適

用

す

る と

，

遺

伝

子 型 が

「

Modan

型

（

Pbl 保有

型

）」

を

示 す 結 果

を

得

た

，

しか し

，

「

秋

の

詩 」

はい

も

ち

病 （

葉

い

もち

お よ び

穂

い

も

ち

）

に

弱 く

，

そ の

来 歴 か ら も

Pbl

を保 有 し

てい る

可 能 性

は

極

めて

低

い

（

寺

本

ら

1999

）

．

ま

た

，

これ

ま

でに

，

日

本 型

イ

ネ品 種

にこれ ら の 分 子マ

ー

カ

ー

を

適

用 し

，

遺 伝

子 型 が

「

Modan

型 」 を 示

し た とい

う報

_告

は ない

．

　

そ こで

，

「

秋

の

詩 」

に

対 す

る

B1

，

　

B2

お よ び

B4

マ

ー

カ

ー

の

反 応 機 構

につ い て

明

ら か に

す

る た め

，

こ れ らの

分 子

マ

ー

カ

ー

で

「

秋

の

詩 」

の

ゲ

ノ ム

DNA

を増 幅 し

た

領 域

の

塩 基 配

列 を解 析 し た

．

さ ら

に

，

「秋

の

詩 」

の

Pbl

保 有

の

有 無 を明

供試植 物

　

塩 基 配

列

お よ び 遺

伝

子 型の

解 析

に はt

「

秋の

詩 」 （

「

滋

系

54

号 」 （

後

の

「

吟

お

う

み

」

）

×

_「

コ シ ヒ カリ

」） お

よ び

「吟

お

う

み

」 を供 試 した

．

ま た

，

Pbl

を保 有

し てい る

品種 （

Modan

型 品

種 ）

と し て

「

コシヒカ リ

愛

知

SBL 」

，

　

Pb1

を

保 有

し て い

な

い

品種 （

非 Modan

型 品

種 ）

と し て

「

コ シ ヒ カ リ

」

お よ び

「

日

本 晴 」

を

供 試

し た

，

塩 基 配列

の

解 析

　

ゲノ ム

DNA

は

，

各 品 種

の

_{葉 身}

か ら

DNeasy

　

Plant

　

Mini

　

Kit

（

QIAGEN

社

）

を用

い

抽 出

した

．

　

Bl

，

　

B2

お よ び

B4

マ

ー

カ

ー

を プライマ

ー

_{と し}

，

PCR

_法

_{に よ}

_{り遺 伝 子 増 幅}

_を

_行

っ た

．

サ

ー

マ ル

サ イ

ク

ラ

ー

は

，

GeneAmp

　

PCR

　

System

　

9700

（

Applied

Biosystems

社 ） を用

いた

．

　PCR

反 応

お よ

び

PCR

産

物

の

確

認 は 遠 山 ら

（

1998

）

の

方

法

を

改

編 し て

行

っ た

．

PCR

反 応 液

の

組 成

は

，

鋳

型

DNA50ng

，

フ オワ

ー

ド

プ ラ

イ

マ

ー

　

O．

16

_μ

M

，

_リバ

ー

ス プ ラ

イ

マ

ー0．

16

_μ

M

，

dNTPs

　

O．

2mM

，

　

MgC122

．

5mM ，

　

AmpliTaq

Gold

　

O．

5U

（

Applied

　

Biosystems

社 ）

，1

×

AmpliTaq

　

Gold

バ ッ フ ァ

ー

（

Applied

　

Biosystems

社

）

と

_し

，

反 応 液 量

_は

20

_μ

1

と

The Society of Crop Science and Breeding in Kinki, Japan

NII-Electronic Library Service

The 　Sooiety 　of _{Crop 　Soienoe}and 　Breeding _{in 　Kinki}

厂

_Japan

作物 研 究 　

56

号 （

2011

）

物

は

，

High

　

Pure

　

PCR

．

　

Product

　

Purification

　

Kit

（

Roche

社 ） を

用

い

精 製 し

た

．

精 製

DNA

の シ

ー

ケン ス

反 応

に は

BigDye

Terminator

　_v3

．

1

　

Cycle

　

Sequencing

　

Kit （

ApPLied

　

Biosystems社）

を

使 用

し

，

塩 基

配 列

は

Applied

　

Biesystems

　

3130

　

Genetic

Analyzer （

App

］

ied

　

Biosystems

社 ）

お よ び

Genetyx

−

Windows

を 用

いて

解 析 し

た

．

B1

，

　

B2

_お

よ び

B4

マ

ー

カ

ー

の

開 発

の

元

と

なっ た

RFLP

マ

ー

カ

ー

　

S723

座

_{の 「日 本}

_{晴 」}

BAC

_クロ

ー

ン の 塩 基 配 列 は

，

DDBJ

（

DNA

　

Data

　

Barik

　of　

Japan

）

の

DNA

デ

ー

タバ ンク よ

り引 用

し た

．

N3 − 2

マ

ー

カ

ー

に

よ

る

遺 伝 子 型

の

解 析

　

ゲ ノム

_DNA

の

抽 出

は 上 述の と お

り

行

っ た

．

反

応

液

の

組

成 は

，

鋳

型

DNA50ng

，

フオワ

ー

ド プライマ

ー

O

．

2

μ

M

，

リ バ

ー

ス プ ラ

イ

マ

ー

0

．

2

_μ

MdNTPsO2mM

，

　

Blend

　

Taq

　

plus

　

O3U

（

TOYOBO

社

）

，1

×

PCR

バ ッ フ ァ

ー

（

TOYOBO

社

）

と し

．

反 応

液

量

は

25

μ

1

と し た

．

反 応

条件

は

，94

℃

で

2

分 間 熱 変

性

後

94

℃ で

30

秒 間

，60

℃で

30

秒 間

，

72

℃で

1

分

30

秒

間

の

3

ステッ プ

を

35

サ イ

クル

繰 り返 し

た

．

　

各

PCR

．

産 物

の

確 認

は

t

各

10

μ

1

を

2

％ア ガロ

ー

スゲル で 電

気 泳 動

し た

後

エ チ ジ ウムブ

m

マ イ ド で

染色

し て

行

っ た

．

結 果

お よ び

考 察

　 各 品 種

の

ゲ

ノ ム

DNA

を

B1

，

　

B2

_お

_よ

_び

B4

マ

ー

カ

ー

に よ

り遺

伝

子

増

幅

し

た 領 域

の

塩 基 配

列解析結 果

を

第

1

図

に

示

す

，

遣 伝 子

型の

判 定

に

関

わ る

BI

・

B2

マ

ー

カ

ー

の リバ

ー

ス プラ

イ

マ

ー

の

位 置

で は

，

「秋

の

詩

・

吟

お

う

み

・

コ シ ヒ カ リ

愛 知

SBL

」 と 「

コ シ ヒ カリ

・

日

本 晴

・S723

」 と

の

間

で

3

塩 基

が

置 換

し てい た

．

さ ら に

，

CAPS

マ

ー

カ

ー

で

あ

る

B4

マ

ー

カ

ー

のフォワ

ー

ドプ ラ イマ

ー

の

位

置

で は

，

供 試

し た

全

て の品

種

と

S723

で

塩

基 配

列

が

一

一

致

してい た が

，

　

EcoR

　

I

サ イ ト は

，

「

秋

の

詩

・

吟

お

う

み

・

コ シ ヒカ リ

愛知 SBL 」

と

「

コ シ ヒ カ リ

・

日

本 晴

・

S723

」

の

間

では

2

か

所

で塩 基 が

置 換

し てい た

，

ま

た

，

その

内 部

配

列

か ら

も

，

「

秋

の

詩

・

吟

お

う

み

」

は

，

Modan

型 で あ る

「

コ シヒカ リ

愛 知

SBL

」

と

相

同

性

が

非 常

に

高

い

．

　 以

上 よ

り

，

「

秋

の

詩 」

に

Bl

，

　

B2

_{お よ び}

B4

_マ

ー

_カ

ー

_を適

用

す

る と

遺 伝

子 型 が

「

コ シ ヒ カ リ

愛 知

SBL

」

と同 じ

「

Modan

型

」

を 示

す

反

応 機 構

が

塩 基

配

列

か ら

明

ら か

とな

っ た

．

また

，

r

秋

の

詩 」

の この マ

ー

カ

ー

反

応

性

は

，

親

品

種 「吟

お

う

み

」

に

由 来 し

て いること

が 明

ら

か

と

な

っ た

．

　

B1

，

　

B2

お よ び

B4

マ

ー

カ

ー

は イ ネ

第

ll

染

色

体 長

腕

中

央

部

の

Modan

由 来 領 域

に座

乗

してい る イ ネ

縞 葉 枯 病 抵

抗

性

遺 伝

子

Stvb

−

i

お よ び 穂い も ち 抵 抗 性 遺 伝 子

Pbl

と 連

鎖 す

る

RFLP

マ

ー

カ

ー

S723

が

PCR

マ

ー

カ

ー

化

，

　

CAPS

マ

ー

カ

ー

化 さ

れ た

も

の で

あ

る

（

遠 山

ら

1998

）

．Pbl

と

S723

は

1．

2cM

の

地 図距 離

に

位 置 し （

Fujii

　et　al

．

2000

）

，

　

B1

，

　

B2

お よ

び

B4

マ

ー

カ

ー

は 間接 的

に

Pbl

保 有

の

有 無 を 識 別

して いるこ

と

に

な

る

．

し

た

が っ て

，

本

解 析

結 果

か ら は

，

「秋

の

詩

」

が

Pbl

を 保 有

し てい る か

ど う

か ま で は

不

明 で あ る

．

そ こ で

，

Pbi

と

0．

OcM

で

密 接

に 連 鎖 す る

N3

−2

マ

ー

カ

ー

を 用い

，

遺

伝 子 型

の

解 析 を 行

っ

た

．

そ

の

結 果

，

N3

−2

に よ る

遺

伝

子 型

はt

「

コシヒカ リ

愛 知

SBL

」

以

外

は

全

て

「

非

Modan

型

」

で あっ た

（

第

2

図

）

．

　

以 上 よ

り

，

「秋

の

詩

」

お よ び

「吟

お

う

み

」

に

Bl

．

　

B2

お よ び

B4

マ

ー

カ

ー

を適 用 す

る と

遺 伝 子 型

は

「

Modan

型 」 を

示

す

が

Pbl

は

保有

し ていない こ と が

明

ら か と なっ た

．

　

遠 山 ら

（

1998

）

お よ び

杉 浦

ら

（

2004

）

は

，

日本 型 イ

ネ

品

種

に

B1

，

　

B2

お よ び

B4

マ

ー

カ

ー

が

広 く適 用 す

るこ と

，

　

Pbl

遣 伝 子

の

選 抜 効 率

の

高 さ

につ い て

報 告 し

ている

．

ま た

，

本

マ

ー

カ

ー

は

2008

年 現 在 全 国

20

箇 所

の

イ ネ育 種 組 織

で

利 用

さ れて いる が

（

藤

井

2008

）

，

これ ま で にこ の よ

う

な 問 題 は

報

告 さ れ ていない

（

城 田

・

林 私 信

）

．

し た がっ て

，

「秋の詩

」

お よ び

「

吟

お

う

み

」

に

認

め ら れ る

本

マ

ー

カ

ー

に

対 す

る

反 応

性

は

，

新

た

な事 例

に

あ

た る と

考 え

ら

れ

た

．

　

一

方

，

独 立 行 政 法 人 農 業 生 物 資 源 研 究 所 ジ

ー

ンバ ンク

が

選 定

し

配 布 し

てい る 日

本 在 来

イ

ネ

・

コ アコ レクシ ョ ン

50

品

種 （

Ebana

　et　al

．

2008

_）

につ い て

，

　

B1

・

B2

・

B4

マ

ー

カ

ー

お よ び

N3

−2

マ

ー

カ

ー

を 用いて

遣 伝 子

型 を

調

査 し た とこ ろ

，

「

赤 米 （

高 知

・

JRC21

）

⊥ 「

赤 米 （

徳 島

・

亅

RC41

）⊥ 「

唐 干 （

鹿

児 島

・JRC42

）」

，

「赤 米 （

関 東 東 山

・

JRC43

）」 お

よ び

「唐

法 師 （

鹿 児 島

・

JRC43

）」 以 上

5

品 種 が 「秋

の

詩 」 と 同 様

のマ

ー

カ

ー

反 応 性 を示 した （

デ

ー

タ

省 略

）

．

す な わ ち

，

日

本 在

来 イ ネ

・

コ ア コ レク ショ ン

50

品 種 中

に

Pbi

保 有 品 種

は ない が

，

「

秋

の

詩

」

の

類

例

と

考

え ら れ る

5

品

種

の

存 在

が

明

らか と なっ た

．

こ の こ と は

，

他

の 日

本

型 イ ネ 晶

種

に も

「

秋 の

詩 」

と

同 様

の

事 例

が

広

がる

可 能性

を

示 唆 し

て いる

．

な

お

，

DNA

マ

ー

カ

ー

の

多 型

に よ る

分 類

で は

，

「赤 米 （高 知

・

JRC21 ）

」

は

Japonica

，

他

の

4

品

種

は

Indica

に 分 類 さ れ てい る

（

独

立

行

政 法 人

農

業 生

物資

源 研

究所

ジ

ー

ン バ ン ク ホ

ー

ム ペ

ー

ジ

出 典

デ

ー

タ よ

り引 用 ）

、

今 後

．

来

歴や い

_も

ち

病 抵

抗

性 程 度

か

ら

Pbl

は

保 有 し

て い

な

い と

推

定

さ

れる 日

本

型 イ

ネ 品 種

に

B1

_，

　

B2

お よび

B4

マ

ー

カ

ー

を

適 用

し

，

遣 伝 子

型 が

「

Modan

型

」

で

あ

っ

た

場合

は

，

N3

−2

な

どの

他

の

分 子

マ

ー

カ

ー

を 併 用 して再

確

認 す る 必 要 が あ る と

考

え ら れ た

．

74

N工 工

一

Eleotronio _Library

K,NiS723SBLA,G d 11 21 31 4fi 51 61

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K,NiST23SBLA,G 71 81 91 101 tll 121 131

NgYkas}SljkCATTTTT)CCATGCCAGTGTTATTGATACTGAAATT:,.gsti,kCTTATTGAACCAGGTGTGGGATT

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"

71 K,NiS723SBLA,G d4d d5d 161 ITI dBl 191 201 TAGGAGGACAAGAGAGTCTACGGACTTCGTGGGCAACATACTACAGAGGAACCCATGCTGTCATCGTTGT TAGGAGGACAAGAGAGTCTACGGACTTCGTGGGCAACATACTACAGAGGAACCCATGCTGTCATCGTTGT TAGGAGGACAAGAGAGTCTACGGACTTCGTGGGCAACATACTACAGAGGAACCCATGCTGTCATCGTTGT TAGGAGGACAAGAGAGTCTACGGACTTCGTGGGCAACATACTACAGAGGAACCCATGCTGTCATCGTTGT K,NiS723SBLA,G 21d 22ri 231 241 251 261 2Tri AATTGACAGCACAGACCGTGCTCGGATCAACATepATCAAGGATGAGCTCTTCeGGCTGCTTCAGCATGGG AATTGACAGCACAGACCGTGCTCGGATCAACATXATCAAGGATGAGCTCTTCCGGCTGCTTCAGCATGGG AATTGACAGCACAGACCGTGCTCGGATCAACAT"ATCAAeGATGAGCTCTTCCGGCTGCTTCAGCATGGG AATTGACAGCACAGACCGTGCTCGGATCAACAT"ATCAAGGATGAGCTCTTCCGGCTGCTTCAGCATGGG K,NiS723SBLA,G

281 291 30a 311 32ri 33ri

34-GACCTCGAGGGCGCAGTAGTCCTCGTGTTCGC"AACAAGCAGGATCTCAAGGACGCCATGTCGCCAGCTG GACCTCGAGGGCGCAGT"GTCCTCGIGTTCGCAAACAAGCAGGATCTCAAGGACGCCATGTCGCCAGCTG GACCTCGAGGGCGCAGTVGTCCTCGTGTTCGCGAACAAGCAGGATCTCAAGGACGCCATGTCGCCAGCTG GACCTCGAGGGCGCAGTtGTCCTCGTGTTCGCtsAACAAGCAGGATCTCAAGGACGCCATGTCGCCAGCTG K,NiS723SBLA,G 351 3Sl 3Tl 38t 391 401 411 AGATCACCGACGCTCTCTCCCTCCACAGcATAAAGAACCACGATTGGCACATACAGGCCTCATGCGCGAT AGATCACCGACGCTCTCTCCCTCCACAGCATAAAGAACCACGATTGGCACATACAGGCCTCATGCGCGAT AGATCACCGACGCTCTCTCCCTCCACAGCATAAAGAACCACGATTGGCACATACAGGCCTCATGCGCGAT AGATCACCGACGCTCTCTCCCTCCACAGCATAAAGAACCACGATTGGCACATACAGGCCTCATGCGCGAT

K,NiS723SBLA,G42d

:::}

GGTGAGGGCCTCTACGAeGGeCTCGGCTGGATAGCTCAGAAAGTCGCCGGCAAGGCCACAACAAGC43d "a 451 461 471 4Bt

GG\GAGGGCCTCTACGAeGGtsCTCGGCTGGATAGCTCAGAAAGTCGCCGGCAAGGCCACAACAAGC CACVGGqGAGGGCCTCTACGA?GGVCTCGGCTGGATAGCTCAGAAAGTCGCCGGCAAGGCCACAACAAGC CACit.GGseGAGGGCCTCTACGAatrGGtCTCGGCTGGATAGCTCAGAAAGTCGCCGGCAAGGCCACAACAAGC K,NiSTZ3SBLA,G 49t 5et 5" 52a 531 541 551 TGACCCATAdiCGCCTGTATTTCCATGGATTTGTTGGAGCTGGCAGGTTGTGTTTGTT'X'E"TGCTGCTGCTG TGACCCATAGCGCCTGTATTTCCATGGATTTGTTGGAGCTGGCAGGTTGTGTTTGTTAX･TGCTGCTGCTG TGACCCATAtCGCCTGTATTTCCATGGATTTGTTGGAGCTGGCAGGTTGTGTTTGTT tsTGCTGCTGCTG TGACCCATAtCGCCTGTATTTCCATGGATTTGTTGGAGCTGGCAGGTTGTGTTTGTT TGCTGCTGCTG K,NiS723SBLA,G 561 571 581 591 601 611 621

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ft:::ft:::gftlglglgl:u::gl::::

CTGCTACCACTTCAGTGTTaATTTqTGTCTCACATGTCTGeXAAAAAAACCATGTCTGTATTCCCTACCA CTGCTACCACTTCAGTGTTigATTTgTGTCTCACATGTCTGg.AAAAAAAACCATGTCTGTATTCCCTACCA K,NiS723SBLA,G 63f 64d 651 661 671 68ri 691 ATCTGAAATATAAAAGATCAAATTTGTGCGCAATCAACTACAAGTTGCTCCATTTTTTTtC TCATATT ATCTGAAATATAAAAGATCAAArTTGTGCGCAATCAACTACAAGTTGCTCCATTTTTTT?C TCATATT ATCTGAAATATAAAAGATCAAATTTGTGCGCAATCAACTACAAGTTGCTCCATTTTTTT _{¢ C':}¢ TCATATT ATCTGAAATATAAAAGATCAAATTTGTGCGeAATCAACTACAAGTTGCTCCATTTTTTTSC･qsuTCATATT K,NiS723SBLA,G 701 7ri1 721 T31 741 751 T61 CTCTG"TGATATACACACATCATTTTCSt.tsTGCGCAATTCTTGAAATTCAGAGTTTTGATATTTCTGCAT CTCTGATGATATACACACATCATTTTC/SVIe.TGCGCAATTCTTGAAATTCAGAGTTTTGATATTTCTGCAT CTCTGeTGATATACACACATCATTTTCtnyATGCGCAATTCTTGAAATTCAGAGTTTTGATATTTCTGCAT CTCTGig.TGATATACACACATCATTTTCrn"TGCGCAATTCTTGAAATTCAGAGTTTTGATATTTCTGCAT K,NIS723SBLA,G K,Ni$723SBLPLG

771 7Sl 791 SOI ell a21 ee1

ft･･Xgl:gUg:::g1'\･Yl:UftT:ggg:".T,T:Ugft:ftlTgA.g::llIlgQlftlIltrT,gC,XIA.C.I::l::

A CTeCTTkAAAGAIATTCTTATGCGCAATTCTTGAAATTCAGAGTTTTGATalTTTkTptCATACTCCTCA A CTCCTTAAAA2EttsL:9ATTCTTATGCGCAATTCTTGAAATTCAGAGTTTTGATe.TTTSTNCATACTCCTCA

EcoRI(GlAATC)

841 85d a61 865 AAAeCTTTTTATAAAGTGARCTGCA AAA CTTT TATAAAGTGAACTGCA AAA,･CTTT TATAAAGTGA CTGCA AAA CTTTmuTATAAAGTGA CTGCA

Bt,B2-RV7.r

r-ee1

pa

Bl,

B2,

B4f7{y-TrpGLkthbiOtsgeeiULtwt

Bl,

B2-F

f7(7-,

B4-F77(7-tsSifdeoR

IV(

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-

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K:

-iithi),

Ni

:

_Hptwa,

_S723

:

S723

ts

rNtsas1

BAC

7M-;.,

SBL]

ZiihUesan

SBL,

The Society of Crop Science and Breeding in Kinki, Japan

NII-Electronic Library Service

The 　Sooiety 　of _{Crop 　Soienoe}and 　Breeding _{in 　Kinki}

厂

_Japan

作物 研 究 　

56

号 （

2011

）

kb

1

．

5

1

．

0

0

．

5

M

　 　

1

　 　

2

　 　

3

　 　

4

　 　

5

第

2

図 　

N3

−

2

マ

ー

カ

ー

に よ る解 析 結 果 　 　 　 レ

ー

ン

M

：

1QObP

　

DNA

 

dder

、

　

t

：コシ

　 　 　 ヒ カ リ 愛 知

SB

」

21

コ シ ヒ カ リ

，

3

：日本 　 　 　 晴

，

4

：秋の詩

，

5

：_吟お うみ

引 用

文 献

愛 知 県 農 業 総 合 試

験

場

・

北

海 道 農業 研 究

セ ンタ

ー

イ

ネ病 害

　

抵

抗性

育

種

グル

ー

プ

（

代 表 藤 井 潔

）（

2008）

イ ネ

縞

葉

枯病

・

　

穂い も ち

抵

抗

性

に

関

す る

DNA

マ

ー

カ

ー

選 抜

育

種の

体

系

　 化

．

育 種 学 研 究

10

：

151

−

155

．

Eban

亀

K ．

，　

Y．

　

Kojima

，　

S．

　

Fukuoka

，　

T．

　

Nagamine

　

and

　

M ．

　

Kawase

　

（

2008

）

Development

　

of

　

mini

　

core

　collection 　of　

Japanese

　rice

　

landrace

．

　

Breeding

　

Science

　

58

：

281− 291．

Fujii

，

　

K

，

，

　

Y

．

　

Hay

ε皿e

−

Saito

，

　

K

．

　

Saito

，

　

N

．

　

Sugiura

，

　

N

．

　

Hayashi

，　

T

．

　Tsuji

，

尸

「

Izawa

　and　

M

．

　

lwasaki

（

2000

）

Identification

　of　a

　

RFLP

　

Marker

　

Tightly

　

Linked

　

to

　the　

Panicle

　

Blast

　

Resistance

　

Gene

，

　

PbJ

，

　

in

　

Rice

．

　

Breeding

　

Science

　

50

：

183− 188．

早 野 由 里 子

・

藤

井

潔

（

2003

）

特

許

DNA

マ

ー

カ

ー

の利 用 と

　

許

諾

の実

際

一

イ ネ縞

葉 枯 病

お よ び 穂い も ち

抵 抗 性 識 別 用

　

マ

ー

カ

ー

の

場 合

一．

育種 学 研 究

5

；

121− 125．

林 長 生

・

加 藤 恭 宏

・

早 野 由 里 子 （

2004

＞

DNA

マ

ー

カ

ー

に

　

よ る

イ ネ穂

い

もち 圃 場 抵 抗 性 遺 伝 子

Pbl

の

座 乗 領 域

の

絞

　 り込

み

．

日

植 病 報

70

（

3

）

：

193．

林 長 生

・

加 藤 恭 宏

・

船 生

岳

人

・

早 野

由

里

子

（

2005

）

イ ネ

　

穂い も ち

圃場 抵 抗

性 遺

伝 子

Pbl

の

詳細 物

理 地

図

の

作 製

，

　

日

植 病 報

71

（

3

）

：

197

．

林 長 生

・

加 藤 恭 宏

・

船 生 岳 人

・

早 野 由 里 子

（

2006

）

「

St．

　

No

．

1

」 と 「

日

本 晴 」

に お

け

る イ

ネ 穂

い

もち 圃 場 抵 抗 性 遺

　 伝 子

P

厨

領 域

の

比 較

に よ る

座 乗 領 域

の

絞 り込

み

．

日

植 病

　

報

　

72

（

4

）

　

：

222．

杉 浦

直

樹

・

辻

孝

子

・

藤

井

潔

・

加 藤 恭

宏

・

坂

紀

邦

・

遠 山

　 孝

通

・

早

野

由 里 子

・

井

澤 敏 彦

（

2004

） 水

稲

病 害

抵 抗 性

付

　 与

の た めの連

続 戻

し 交

雑 育 種

にお

け

る

DNA

マ

ー

_カ

ー

_選

　 抜

の

有 効 性

の

実証

．

育 種 学 研 究

6

：

143

　

一

　

148

．

寺 本 薫

・

野

田

秀 樹

・

河村 久 紀

・

谷

口

真

一・

小 原 安 雄 （

1999

）

　 水 稲 新 品 種 「秋

の

詩 」

の

育 成

．

滋 賀 農 試 研 報

40

　：

13

　

一

一

　

23．

遠 山

孝

通

・

早

野

由

里 子

・

杉 浦

直

樹

・

藤 井 潔

・

岩

崎

真

人

・

　 井 澤 敏 彦

・

中 前 均 （

1998

） 水 稲 穂い も ち 抵 抗 性 遣 伝 子

　

Pbl

（

t

）

と

連 鎖 す

る

PCR

マ

ー

カ

ー

の開

発

愛 知 農 総 試 研

　 報 　

30

：

27 − 34．

76

N工 工

一

Eleotronio _Library

ANovel

　

Reaction

　

_of

　

Molecu

_藍

_ar

　

Markers

董

br

　

Selection

　

_of

　

the

　

Panide

　

Blast

Resistance

　

Gene

　

P

わ

1

　

in

　

Japonica

　

Rice

　

Cultivar

　

and

　

the

　

Method

　

for

Analyzing

　

P

わ

1

　

Gene

　

Harbor

Kosaku

　

Hino

］〕

_，

　

Hisato

　

Katayama2

〕

_，

　

Yoko

　

Kawamurai

）

_and



Harushige



Kitamura1

）

］）

　

Shig

・　

Prefectune

　

Agric

”

ltural

　

Te

・翩 ・

gy

　

Promoti

・ ・

C

・吻

（

516Dainaka

，

　

Azuchi

，

　

Ohmihachiman

，

　

Shig

_亀

521 − 1301，

Japan

）

2）

_{PresentAddress}

’

：

TakashimaAgriculturat

　and 尺“ral　

Devel

_{叩 ment} 　

Prvmotion

（

_〜

_撰

ce

（

1758

匸mazu

，

　

Imazu

−

cho

_，

　

Takasima

，

　

Shiga

，

520

− 1621

，　

Japan

）

Summary

：

Arice

　cultivar

’

Akino

−

uta

’

bred

　

hl

　

Shiga

　

Prefecture

　

Agricultura1

］「echnoiogy 　

Promotion

Center

，

　

is

　sensitive 　

to

　

panicle

　

blast

．

　

Ib

　

devekop

　an　

Akino

−

uta　near

−

isogenic

　

line

　

harboring

　

the

　

panicle

　

blast

P

わ

1

，

we 　

investigated

血 e　appliGabnity 　ofthree 　molecular 　markers

，

　

B1

，

　

B2

　and　

B4

，

　whic 紅 are　

linked

　

to

　

Pb

_ノ

，

to

‘

Akino

−

uta

’

．

　

As

　

a

　

result

，

　

the

　

genotype

　of

‘

Akino

−

uta

’

using 　

these

　molecular 　markers 　was 血 e　

Modan

−

type

（

Pbl

　

harboring

−

type

_）

，

　whiGh 　

did

　 not 　correspond 　 with 　

the

　

panicle

　

blast

−

susceptive 　

phenotype

　 of

‘

Akino

−

uta

「

．

　

In

　

th

三s　study

，

　we 　sequenced 　a　neighboring 　region 　of　

P

ゐ

1

　

from

‘

Akino

−

uta

’

and

‘

Koshihikari

　　　　　　り

Aichi

　

SBL



harboring

　

P

わ

1

　

gene

．

　

Comparison

　of　

the

　sequences 　revealed 　

that

　

dle

　reactivity 　of　

these

　　　　　　　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

’

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

ロ

molecular 　

markers

　

to

　

Akino

−

uta　was 　caused 　

by

　

the

　sequence 　

homology

　

in

　

both

　cultlvars

．

　

Moreove

_らwe analyzed 　

gonotype

　of

画

Akino

−

uta

’

with 　

PCR

−

marker

，

　

N3

−

2

，

　which 　

is

　

linked

　

by

　

O

，

OcM

　

to

　

Pbl

　

_gene

．

Consequently

，

‘

Aki

皿

o

−

uta

’

did

　not　

harbor

　

P

わ

1

　

_gene

．

　

This

　

case

　

is

　

the

　

first

　report 　of　molecular 　markers 　

fbr

selection 　

of

　

the

　

Pbl

　

gene

　

injal

_〕

onica

　

rice

　

cultivar

．

　

When

　

the

　

genotype

　

is

　

of

_出

e

　

Modan

−

type

　

using

　molecular markers

，

　

B1

，

B2

　and 　

B4

，

　

in

　

japonica

　rice　cultivar

，

　we 　should 　consider 　using 　other　markers

，

　

N3

・

2

　and　so　on

，

with 　

them

．

Key

　words ：

0

_乳

yz

α 卿 ’yα

，

　

panicle

　

blast

，

　

P

わ

1

，

　molecular 　marker

，

　marker

−

assisted 　selection

　　　　　　　　

Journal

　ofCrop 　

Research

　

56

：　

73

−

77

（

2011

）