Pseudomonas 属細菌によるエチレングリコールドデシルエーテルの生分解

鳥大農研報 (B■1l Fac.Agric.,Tottori Univ.)32 1∼ 7(1980)

Psヮ

クカ 物θ%盗 属細 菌 によるエチ レング リコール

ドデシルエー テルの生分解

市川吉夫

*・

森

祐次郎

ユ

・北本

豊

*・

細井

登

* 昭和54年 7月31日受付

Degradation of Ethylene Glycol DodecyI Ether by a

Pseudomonad

Yoshio lcHIKAWAキ

,YtliirO MoRI*,Yutaka KITAMOTO*

and Noboru HosoIキ

The enzyme activity for the degradation of rnono‐ ethylene glycol dodecyl ether was found in the resting cens of a pseudomonad gro、 vn on the inediuHi containing hepta‐ ethylene glycol dodecyl ether as a sole carbon source.A sirnultaneous disappearance of rnonO‐ethylene glycol dodecyl ether and liberation of ethylene glycol was observed from the results of the gas■ iquid chromatography of the reaction Hュ ixture. The cleavage of the ether linkage of the substrate was strongly suggested.

The formation of ethylene glycol liberating enzylne(s)might be inducible by poly‐ ethylene glycol alkyl ether type of detergents Lauryl alcohol,Iipophilic nloiety of the detergent and mOst favorable carbon source for the bacterial grolvth, strikingly repressed the formation of ethylene glyco卜 hbcrating enzyme(s)when it co‐ existed h/ith hepta‐ethylene glycol dodecyl ether in the culture medium The enzyme activity of the resting ce■ s IIas also investigated Optilnal ranges for the enzyme(s)ヽVere found to be at a temperature of 25-30°C and a pH of5-7 The cleavage ofthe etherlinkage might not be a hydrolytic reaction, because the remarkable liberation of ethylene glycol was observed only when a large amOunt of oxygen 、vas supphed into the reaction mixture が失 われ るのに対 して

,後

者の場合 は疎水基 または親水 緒

言 基末端 か らの分解 が除 々に進行す ることによるため とさ 酸化エチ レン重合体 を親水基 とす る非 イオ ン界面活性 れてい る3と しかしこれ らの研究は

,河

川水 あるいは活性 剤の生分解 に関す る検討 は

,ア

ルキルベ ンゼ ンスルホ ン 汚泥 を微生物源 として用 いた ものであ り

,基

質 と して使 酸型陰イオ ン界面活性剤の生分解性 の検討 と共 に古 くか 用 されている界面活性剤 も親 水基の鎖 長

,疎

水基 の構造 らおこなわれて きた1ど この種 の非 イオ ン界面活性剤中

,

等 を異 にす る混合物 で ある場合 が一般 で あつて

,界

面活 高級 アルコール を疎水基 とす るものは ノニルフェニルエ 性剤の構造 と微生物種 の分解特性 の関係 を明確 に指摘す ―テル型の ものに比べて

,は

るかに容易 に分解 され るこ ることは困難である。 とが指摘 されている2と その理 由は高級 アルコールのポ リ

われわれは単一構造 を示 す界面活性剤 を基質 とし

,分

エチ レングリコールエーテルにおいては

,疎

水基

,親

水 離菌株 による分解試験 をこころみ ることによって

,界

面 基間のエーテル結合 の加水分解 によって急速 に界面活性 活性剤 の生分解機構 の解明 をおこな うことを目的 として, 半鳥取大学農学部農芸化学科農産製造学研究室 D砂?ガ物￠″

rげ

4g々 θ″ルι紹どC/J♂脇んナ″男n2ι″′妙 げ4g万ひガサタ′牝 Tbサザο/i yttυ♂熔秒

市川吉夫・森祐次郎 ・】ヒ本 豊・細井 登 ペ ンタエチ レングリコール ドデ ンルエーテル(EO(5)do― decyl eher)を_{唯― の炭素源 として添加 した無機塩培地} 中で増殖 し得 るP3・9″ ,οttο″α

s属

菌株 を分離 した4と本菌 株 はエチ レングリコール鎖長1∼ 7の ドデ シルエーテル 類のいずれ をも単一炭素源 として利用 しうるが

,ポ

リエ チ レングリコールノエル フェノール類 は利用 し得 ない。 また,ラウリルアルコール, ラウ リン酸 は好適 な炭素源 とな り得 たが

,ポ

リエチ レングリコール

,エ

チ レングリ コールの資化能 は全 く認 め られず

,本

菌はEO(5)dodec― yl etherの 疎水基,親水基間のエ ーテル結合 を開裂す る ことによって界面活性 を急速 に低下 し

,遊

離す る疎水基 部分 を消費 して増殖す るもの と推論 した4と 本報では静止菌体 をモノエチ レングリコール ドデシル エーテル (EO(1)dodecyl ether)に作用 させて生成す るエチ レングリコール量 を測定 す ることによって

,本

菌 の もつ分解酵素系 の諸特性 ならびに酵素系の生成 に関す る検討 をおこなった結果 を報告す る。 実 験 方 法

1.供

試菌の増養 と静止菌体 の調製 実験 には さきに 分離 したEO(5)dodecyl eher資 化性 をもつPs9,Jοηο″― αs属菌株 を用 いた。

500V容

振 とうフラスコに

,炭

素源 0,2%,NH4C10・ 3%,K2HP04 0・

1%,KC10,025%,MgS04

・7H200・025%,FeS04・7H200・0002%,ペプ トン

01%

(pH 7.0)の培地100Nを分注 し,25℃で約30時 間振 とう 培養 した。種菌 には,EO(5)dodecyl etherを炭素源 と す る培地 で同様 の条件 で培養 した培養液 0.5Wを添加 し た。培養後, 4℃で遠心集 菌 し

,0,3%KCl溶

液で洗浄 し て菌体懸濁液 を調製 した。

2.菌

体量の測定

660nmに

おけ る菌液の濁度 を測 定 し

,別

に作成 した検量線 によって乾燥菌体重量 を求めた。

3.酵

素活性の測定

0.2Mり

ん酸塩緩衝液 (pH 6,7)

2V,0.2%EO(1)dodecyl ether l W,静

止菌体懸濁液

lM(乾

燥菌体重量 として2∼

4n9)を

混合 し,300rpm の往復式振 とう機上ではげ しく焼拌 しつつ30℃で反応 を 継続 した。30分間反応 をおこなった後

,反

応液 を適宜稀 枠 して0∼15μ

g/Mの

エチ レングリコール_{(EG)を含有す}

る試料

2Wを

採取 し

,Wes卜

Rapoport aの 方法 に従 って クロモ トロープ酸法 によるEGの定量 をおこない,その生 成量 をもって酵素活性 を比較 した。 ポ リエチ レングリコール ドデシルエーテル類 を基質 と した場合 は

,遊

離す るポ リエチ レングリコール (PEG) を定量 す る適当 な方法 を見出 し得 なかったため41同様 の 条件 で分解反応 をおこなったの ち

,残

存す る界面活性剤 量 を Greffら 働の方法 にしたがいコバル トチオシアン酸 ア ンモニウム複合体 として定量す ることによって酵素活 性 を測定す る方法 をとった。 4.EO(1)dOdecyl ether,EGの ガスクロマ トグラフィ ー

TenaxGCを

充填材 として,EO(1)dodecyl eherの 場合 はステンレスカラムによる200∼ 300℃ ,10℃/minの 昇 温,EGの場合 はガラスカラムによる150℃の定温 ガス ク ロマ トグラフィー をおこなった。 その他 の操作条件 は前 報りに記載 した とお りである。 結 果 と 考 察

1.分

離細菌 によるEO(1)dodecyl etherの分解 Table lに

E峨

長 を異 にする若干の ドデ シルエーテル 類 を炭素源 として分離菌の培養試験 をおこなった結果 を

Table l Cultivation Of the test bacterium on the variOus EO(n)dodecyl ether mediu14S

Substrate as carbon source Substrate consumed (%) EO(1)dodecyl ether EO(3)dodecyl ether EO(5)dodecyl ether EO(7)dodecyl ether

659

86.7 99.5 99.5 Culture medium consisted of O,1%EO(■)dodecyl ether,03% NH4Cl,0,17。 K2HP04,0・ 025% KCl, 0.025% MgS04・7H20,0.0002% FeS04・

7H20(pH

7.0).CultivatiOn was carried Out at 25℃ for 24 hOurs On a reciprOcal shaker EO(n)dodecyl ether in the culture filtrate 、vas measured colorimetri― caHy as the ammonium cobalt thiOcyanate complex')

示 した。本実験 に用 いた培地 はJIS非イオン界面活性剤 生分解度試験方法

(K 3364-1975)指

定 の基礎培地 中 よ り酵母エキスを除去 し41それぞれの ドデ ンルエ ーテル 類 を0.1%の割合 に添加 したものである。Pattersonら 9 は

,ポ

リエチ レングリコールアルキルエーテル類 の生分 解性 は親水基 を構成す るエチ レンオキサ イ ドの重合度 が 増大す るに伴 って低下す ることを報告 してい るが

,表

示 の結果 ではEO(1),EO(3)dodecyl etherの 分解率 がよ り 長鎖 の親水性基 をもつ もの に劣 る。良好 な分解率 を示 し たEO(7)dodecyl ether培 地 よ り分離 した菌体 を酵素源 としてEO(1)dodecyl eherの 接触分解 をこころみた と ころ

,Fig.1に

示 したよ うにEO(1)dodecyl eherの 分 解 は速 かに進行 し,その消失 に対応 して反応液中 に

EGが

生成蓄積す ることが認 め られた。上述 の培養試験 におい ては,Pattersonら の実験 に比較 して著 るしく高濃度の界 面活性斉Jを培地 中に添力Hしたため,EO(1】EO(3)dodec― yl eherの ごとき親水性 の弱 い界面活性剤添加培地 では, ミセル形成 その他 の理 由 によって,その消費 と菌の増殖 とが制約 された もの と思 われ る。

Fig lに示 したEO(1)dodecyl ether分 解のガス クロ マ トグラムに

,よ

り高温域 に新 しい未知物質が少量検出 された。過量の菌体 の使用による菌体成分の漏洩

,親

水 基転移のごとき副反応 の進行等の可能性 も考 えられるが, 培養試験 におけ るEO(5)dodecyl eherの分解パ ター ン・ との本 質的 な相違 は認 め られず, この場合 にも基質の疎 水基

,親

水基間のエーテル結合の開裂 が想定 され る。 EG生鵡 ヒの測定による本分解酵素系 の検討 はこの種 の界 面活性剤の生分解機構 の解 明 に有用 な知見 を与 え得 るも の と考 えた。

2.菌

体の調製 とEO(1)dodecメ ether分解酵素系の の諸性質 前報りに述べたように

,肉

汁培地 におけ る本菌の最適増殖温度 は35℃附近 に

,至

適pH域は7.5附 近 にあって

,二

れよ り高温側

,ア

ルカ リ側の条件 では培 養成績 は急激 に低下す る。Table lに示 した培養条件 で は界面活性剤濃度 を

1%と

しても生育は可能 であ り,ま たNH4CIの増量 あるいはア ミノ酸類の添加 によって増殖 が促進 されたので,本実験 に使用す る菌体 の調製 には

EO

Col■mn i Tenax GC

lm x 3mm,sst

lnitial temp 200℃ Final temp. 300℃

Temp.rate 10℃ /min

Carrier gas i nitrogen,

30μ1/min

0

Colnmn i Tenax GC lm x 3mm,glass Column temp 150℃ Carrier gas i nitrogen,

30μユ

/min

(7)dodecyl ether濃 度 を 0.2%と し, さらに 0.1%の ペ プ トンを添加 したpH7.0の 培地 を用いて25℃で培養 をお こなった。Fig.2に 培養の経過 を示 した。24∼48時間の 培養によって0.5叫/mV前後の乾燥菌体収量 を示 したが, 6 E

84

=2

卜

24 48 Culturing time(hours) Fig. 2 Time cOurses of the bacterial grOwth On

the medium containing EO(7)dodecyl ether or lauryl alcohol as carbon source. Culture medium cOnsisted of 0 2% carbon source,037。

NH4Cl,01%K2HP04,0・

025

%KCl,0,025%MgS04'7H20,0.0002%

FeS04・7H20 and O.1%peptone.Cultivation

was carried Out at 25Ч Э on a reciprocal shaker. ０ の 質 ０ 盛 め ０ ば PsctrEο切∽αs属細 菌 によるエチ レング リコール ドデ ンルエーテルの生分解 EO(1)Dodecyl ether 2 4 Retention Time(min)

Fig。 l Gas―hquid chromatograms for the decOmposition of EO(1)dodecyl ether and the formatiOn Of ethylene glycol by the resting cells.

Ethylene glycol

市川吉夫・森祐次郎・北本 豊・細井 登 図中に併示 したようにラウリルアルコールをEO(7)dod― ecyl eherに かえて用いると

,培

養経過は遥かに良好で あって

,EO(7)dodecyl eherを

炭素源 とした場合 には 疎水基

,親

水基間のエーテル結合の開裂反応が増殖の律 速因子 となっていることが考 えられる。なお, ラウリル アルコールを炭素源 とする培地で培養 した菌体では

EO

(1)dodecyl eherの 分解活性は きわめて微弱であった。 EO(7)dodecyl eher培 地 より得た菌体 から粗酵素液 を調製する目的で

,菌

体の磨砕

,凍

結融解

,乾

燥 などの 処理 をこころみたが

,何

れの方法 を用いても酵素活性が 失われたため

,洗

浄菌体の懸濁液 をそのまま酵素源 とし て用いることとした。Fig.3に 0.05%の EO(1)dodecyl etllerを含む 0.lMり ん酸塩緩衝液 (pH6.7)中 の

EG

生成量 を経時的に測定 した結果 を示 した。乾燥菌体l nlg 当りの

EG生

成量は反応開始後約30分間はほば直線的に 増大することが認め られた。

EG生

成量 を測定することに よって

,酵

素活性 に及ぼす反応条件の影響 を検討 した。 Flg。 3の 結果から反応の継続時間は30分とした。 Fig.3 30 60 90 120 1ncubatiOn time(min) Time cOurse of the liberatiOn of ethylene glycOl from EO(1)dodecyl ether by the resting cells.

Enzyme activity was determined under the standard assay conditions(Reaction mixture consisted of O.2M phosphate buffer(pH 6.7) 2ml,0,2% EO(1)dodecyl ether l ml and

cell suspension l ml. IncubatiOn was carried out at 30℃ for 30 min under shaking)The

incubation time was changed as indicated.

Fig.4

4 6 8 10

pH

Effect of pH on the enzyme activity of the resting cells.

Enzyme activity was determined under the standard assay conditiOns except that the pH of the phOsphate buffer (―○―),acetate buffer(― △―

)and

Tris―_{HCl buffer(― ◇―})were chang― ed as indicated.

20 30 40 Temperature(℃ )

Fig. 5 Effect of temperature on the enzyme activity.

Enzyme activity was determined under the standard assay cOnditiOns except that the temperature was changed as indicated. ︵ 望 葛 ｏ 、 ﹁ ↓ ｍ 日 ＼ ゆ ︼ ０ 日 ミ ︶ お ０ 台 ∞ ｏ Ｅ 聖 ぁ ‘ 日 翁 〓 Ｏ υ ふ 隣 Ｏ ｍ 日 ＼ の ｏ ︻_０ 日 ミ ︶ ︻_０ ０ 、 ︻_中 ｏ 目 ０ 出_、 Ｆ ゛ 回 ︵翌 ５ ｏ ネ Ｈ “ ∞ 日 ＼ の 世 ０ 日 ヽ ︶ お ０ う ¨ ｏ ｇ ！ ふ Ｆ ゛ 田 pHの 影響:酵素活性 とpHと の関係 をFig 4に 示 した。示 した。EC生 成量は25∼ 30℃の比較的低い温度域で最高 りん酸塩緩衝液中では

pH5∼

7の広い範囲で高い酵素活 の値が得 られた。 性が認 められた。至道 pHは6.7附近 にあった。

基質濃度の影響:酵素活性 と基質濃度 との関係 をFig 温度の影響:酵素活性 と反応温度 との関係 をFig 5に

6に

示 した。EG生 成量は0.5mg/W以 上の基質濃度ではほ

Ps9TJοηο,αS属細菌 によるエチ レングリコール ドデシルエーテルの生分解 ︵ 望 巧 ｏ ぁ Ｈ “ ∞ Ｅ ＼ り ｏ お 日 ミ ︶ ︼ Ｏ ψ ネ 転 ｏ Ｅ ｏ ︻ 、 ■ 回 の供給 を必要 とす ることを示 してお り,EO(1)dodecyl

eherの

エーテル結合 の開裂 にも酸素分子 が直接反応 に 関与す る可能性 を示唆 している。

Table 2 Effect oF shaking of the reaction mixture On the decomposition of EO(1)dodecyl

ether Shaking speed

(rpm)

Ethylene glycol formed

(μmoles/mg dry Cells)

0 50 100 300 300, under N2 0.15 0.18 0.23 1.47 0.16 05 Substrate concentration(mg/ml)

Fig, 6 Effect of the substrate concentration on the enzyme activity.

Enzyme activity was determined under the standard assay conditiOns except that the substrate concentration was changed as indicated. ぼ一定となり,Lineweaver― Burk7)の 方法 によって求めた見 力ヽ)上 の

Kmの

値は約0.5×

103M(0,12mO/M)で

あった。 酸素供給の影響:Table 2に反応 中 における振 とう速 度の影響 を検討 した結果 を示 した。気相 を室素置換 した 場合,高速で振 とうして もEG生成量 が微量 にとどまった ことは

,静

止菌体 による分解の進行 にも大量 の溶存酸素

3.増

殖の基質 と酵素生成の制御 Table 3に

,供

試界面活性剤 と類縁 の構造 をもつ若千 の炭素源 を用いて本菌の培養 をおこない

,そ

れぞれの培 地 か ら得 た菌体 の呈す るEO(1)dodecyl eher分 解活性 を測定 した結果 を示 した。EO(5)dodecyl eherは EO(7) dodecyl eher同様

,分

解酵素系 の産生 に好適 な炭素源 で ある。本菌 がEO(1)dodecyl ether培地 にも生育 が可 能 であることか ら,EO(n)dodecyl ether型 界面活性剤 に生育 した菌体 には等 しくEO(1)dodecyl eherか ら

E

Gを

遊離す る酵素系 が存在す るもの と考 えられ る。 Table 3 EO(1)dodecyl ether degradation activities of the resting ceHs cultivated in variOus

carbon sOurces

CarbOn sOurce for cultivation

Yield of the cells

(mg dry Weight/ml)

Specific activity*

(■moles/min/mg dry cells)

EO(5)dodecyl ether,0.2% EO(7)dodecyl ether,0.2% Lauryl alcOhol, 0.2% Lauric acid,0.2% Ethylene glycol,0.2%

PEG 400,01%

EO(7)dodecyl ether,0,1% +Lauryl alcohol,0.17。 EO(7)dodecyl ether,01% 十Ethyl alcohol, 0.1% EO(7)dodecyl ether,0.17。 十Acetic acid, 0.1% 0.54 0.48 1.15 1.26 0.10 0.08 1.26 0.63 0.45 44.6 46.9 6.2 8.5 0 38.8 36.6

* Specific activities were determined by measuring the amount Of ethylene glycO】 liberated.

市川吉夫 ・森祐 次郎・耳ヒ本 豊・細井 登

EO(3)dodecyl ether EO(5)dodecyl ether EO(7)dodecyl ether

Table 4 Degradation of the various polyethylene glycOl dOdecyl ethers by the resting cells cultivated in EO(7)dodecyl ether

Substrate Specific activity *

(nmoles/min/mg dry Cells)

素源 として共存 させ ることによって,EO(1)dodecyl et―

her分

解酵素系の生成 がつ よ く抑制 され る実験結果 が得 られた。Table 5に示 した静止菌体 によ るEO(5)dodec―

yl eherの分解試験 において も同様 の傾向 があ きらかに

認 め られた。

本菌はEO伍)dOdecyl etller型 界面活性剤 の疎水基,

親水基間の結合 を開裂 し

,遊

離す る疎水基成分 を急速 に 消費 して増殖す る性質 を有す るもの と考 えているが,4猿 水基成分 と類縁の構造 をもつ n_ド_{デカ ンは菌の生育 に} は利用 されず

,ラ

ウ リン酸 は好適 な炭素源 とな り得 るが, EO(1)dodecyl eher分 _{解酵素系 の産生 には寄与 し得 な} い。 また分子内 にフェニルエーテル結合 を有す るポ リエ チ レングリコールノニルフェニルエーテル類 も本菌の増 殖 に対す る炭素源 としての効果 が認 め られなかったす)こ れ らの事実 は本分解酵素系 がアルキルエーテル型非 イオ ン界面活性剤 を炭素源 とす る培地中で誘導的 に生成 され る可能性 を示す ものであ り,ラウ リルアル コールの添加 による酵素系の生成 に対す る抑制効果は, きわめて好適 な炭素源 であるこの物質 が

,菌

の増殖 に際 して選択的 に 消費 され ることに起囚す るcatabolc repression 8)に よ るもの と推論 され る。 要

約 さきにわれわれの分離 したアルコールエ トキ シレー ト 型非 イオン界面活性剤資化性細菌 を,EO(7)dodecyl et_

her培

地 に培 養 して得 られた静止菌体 によって

,EO(1)

dodecyl etherか らのEG生成 が認 め られた。EGの生成 は 基質のエーテル結合の開裂 によるものであって

,増

殖試 験 において炭素源 として用 いたEO(5)dodecyl eherの 消費 と同様 の反応形式 をとることが

,ガ

ス クロマ トグラ フィーの結果 を比較す ることによって推定 された。 本EO(1)dodecyl ether分 解酵素系は上記 の非 イオ ン 21,1 17.3 15。8

* Specific activities were determined by measur― ing the amount of EO(n)dodecyl ethers degrad_ ed under the standard assay conditions.

Table 4にはEO(7)dodecyl eher培 地 よ り得た菌体

1こよる_{,EO(3光 EO(5)な} らびにEO(7)dodecyl eher類に

対す る分解能 を検討 した結果 を示 した。表示 の比活性値 は基質の分解量 をチ オシアン酸 コバル ト法 で測定 した結 果 か ら算出 した もので あって,Table 3に示 した EO(1) dodecyl etller分 解活性 の測定値 とは直接対比 し難 いが EO(7)dodecyl etherを 炭素源 として得 られた静止 菌体 によってEO(1)∼EO(7)dodecyl etlaer類 が等 しく分解 さ れることが認 め られた。 これ らの結果 か ら

,本

菌は親水 基鎖長 に対す る特異性 の小 さいエーテル結合開裂酵素 を 産生 し

,こ

れ ら一連 の界面活性剤 を共通 の酵素系 によっ て分解す る特性 をもつ ことが推論 されるが,この点 に関 しては

,な

お酵素の単離 と精製酵素 による検討 が必要で ある。 一方

,供

試界面活性剤の疎水性基の構成成分 であるラ ウ リルアルコールは菌の増殖 には きわめて有効であるが, これ を炭素源 とす る培地 よ り得た菌体 にはEO(1)dodec_ yl eher分_{解活性 をほ とん ど指摘 し得 なかった。 さらに} EO(7)dodecyl eherと ともにラウリルアルコール を炭

Table 5 Effect Of additiOn of lauryl alcohO1 0n the inductiOn of the degradatiOn activity for EO(5)dodecyl ether by the resting cens

CarbOn source fOr cuitivation

Yield of the cells

(mg dry Cens/ml)

Specific activity *

(nmoles/min/mg dry Cells) EO(7)dodecyl ether,02% Lauryl alcOhol, 02% EO(7)dodecyl ether,0.1% 十Lauryl alcOhOl, 0,1% 0.44 1.31 1.26 11.6 0,1 0.8

率_{speCific activities were determined by measuring the amount of EO(5)dodecyl} ether degraded.

Ps?クJοηο,αS属細菌 によるエチ レング リコール ドデ ンルエーテルの生分解

7

界面活性剤 を炭素源 とす る培地 中で誘導的 に産生 され る

文

献

ものであって

,親

水基鎖 長 を異 にす るこの種の非 イオン

界面活性剤 に一様 に作用 して

,疎

水基

,親

水基間のエ ー

1)SWiSCher, R D :

助 ヮ肱勉ガ

Bん

プで,9カナわ″,

テル結合 を開裂す る性質 をもつ もの と思 われる。供試 し

Marchel Decker lnc,New York(1970)p496

た界面活性剤の疎水性部分 を構成す るラウ リルアルコー

2)Garrison,L」 and MatSOn,RD:テ

4″ 0ゲ′

ルは

_,本

菌の増殖 に好適 な炭素源 とな り得 るが

,EO(1)

働2''λん'膨♂,41799(1964)

dodecyl ether分解酵素系の産生 に寄与 し得ぬばか りで

3)PattersOn,SJ,Scott,C C and Tucker,KBE:

はな く,これを界面活性剤培地 に共存 させ ることによっ

工4'″ 0〃 働 ″房鈍'働θ,44407(1967) て顕著 な酵素生成阻害がおこることが認 め られた。

4)IChikawa,Y.,Kttamoto,Y and Hosoi,N:ユ

静止菌体 によるEO(1)dodecyl eher分 解の最適条件

乃 狩″?pPr駒じ力″οと,56503(1978)

は

,pH5∼

7,反

応温度25∼ 30℃附近 にあるが

,反

応 の 5)West,C D and Rapoport,S IPttσ ttσ Eψ ″″,

進行 には大量の空気 を反応液中 に継続的 に供給す る必要

70141(1949)

がある。 この ことか ら

,エ

ーテル結合の開裂 には酸素分

6)Greff,RA,Setzkorn,E A and Lettie,WD」

ri 子 が直接反応 に関与す る可能性 が考 えられ

,上

記の親水

チ

A"0〃

C/Pθttλん'働じ,42180(1965)

基鎖長の相違 に関す る基質特異性 の問題 とともに

,精

製

7)Lineweaver,H and Burk,D:ュ

4″ Cル物 働 σ,

酵素 による検討 が残 された課題 である。

56658(1934)

8)CIark,P H and Lilly,H D :勲

夕妙 Sοθ Gι″